一株脱除镁离子、磷酸根离子和铵根离子的细菌及其用途

摘要

本发明公开了一株脱除镁离子、磷酸根离子和铵根离子的细菌及其用途。本发明所提供的脱除镁离子、磷酸根离子和铵根离子的细菌是非脱羧勒克菌(Leclercia？adecarboxylata)JLS2，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC？No.11782。利用本发明提供的非脱羧勒克菌(Leclercia？adecarboxylata)JLS2CGMCC？No.11782可以沉降镁离子和/或磷酸根离子和/或铵根离子，且在沉降过程中生成鸟粪石晶体，表明非脱羧勒克菌JLS2在硬水软化方面具有广阔的应用前景，不仅为废水治理节约成本，同时还能得到一种新型肥料，具有重要的应用价值。

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体涉及一株脱除镁离子、磷酸根离子和铵根离子的细 菌及其用途。

背景技术

目前对工业废水中Mg²⁺、NH₄⁺和PO₄^3-的去除方法以物理化学方法居多。使用物理化 学方法处理工业废水中的Mg²⁺、NH₄⁺和PO₄^3-，其中常见产物为鸟粪石。鸟粪石是一种矿 石，亦称鸟兽积粪，成分为MgNH₄PO₄·6H₂O，由于富含氮磷等元素，同时不易被水冲失， 可以用于河漫滩、盐碱地等环境，这些特点使其成为一种优质肥料。物理化学方法处 理工业废水中的Mg²⁺、NH₄⁺和PO₄^3-，需要调控温度、投加化学药剂或安装鸟粪石沉淀装 置，存在原料成本较高，操作复杂，对于大流量低浓度的有害污染难处理等缺点，因 此有必要探求一种高效廉价的生成鸟粪石的新方法，能够改变生成鸟粪石所需的条件， 从而降低生产成本。经过多年的探索和研究，利用微生物沉降Mg²⁺、NH₄⁺和PO₄^3-生成鸟 粪石的研究已经取得了巨大的进步。目前人们已经发现有些微生物能诱导形成鸟粪石 矿物晶体，如布鲁氏菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、棒状杆菌、耶尔森菌、矮小芽 孢杆菌、固氮菌和醋酸钙不动杆菌等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何获得鸟粪石以及如何脱除水中的镁离子、磷酸 根离子和铵根离子。

为解决上述技术问题，本发明提供了一株可以脱除水中镁离子、磷酸根离子和铵 根离子的细菌。

本发明所提供的细菌是非脱羧勒克菌(Leclerciaadecarboxylata)JLS2，该菌 株已于2015年12月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简 称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.11782。 非脱羧勒克菌(Leclerciaadecarboxylata)JLS2CGMCCNo.11782简称非脱羧勒克 菌JLS2。

本发明还提供一种菌剂，该菌剂的活性成分为非脱羧勒克菌JLS2。

所述菌剂的用途可为下述a1)、a2)、a3)或a4)：a1)脱除镁离子和/或磷酸根 离子和/或铵根离子；a2)脱除水中镁离子和/或磷酸根离子和/或铵根离子；a3)沉降 镁离子和/或磷酸根离子和/或铵根离子；a4)沉降水中镁离子和/或磷酸根离子和/或 铵根离子。

所述菌剂的制备方法包括如下步骤：将非脱羧勒克菌JLS2接种至细菌培养基并 进行培养，获得OD_600nm值为0.95的菌液，即为所述菌剂。

所述细菌培养基可为活化液体培养基。

所述活化液体培养基的制备方法可为：将酵母浸粉3g和KCl0.25g溶于1L蒸馏 水，调节pH至7.2。

所述菌剂的制备方法中，所述培养的条件可为：25℃～35℃、静置培养2天～6 天。

所述菌剂的制备方法中，所述培养的条件具体可为：30℃、静置培养4天。

除了活性成分，所述菌剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。 所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物。所述矿物材料可为粘土、滑 石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。所述植物材料可为 玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。所述高分子化合物可为聚乙烯醇。所述液体载体 可为有机溶剂、植物油、矿物油或水。所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述菌剂 中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细 胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬 浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。

根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、 稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。

非脱羧勒克菌JLS2或上述任一所述菌剂在脱除镁离子和/或磷酸根离子和/或铵 根离子中的应用也属于本发明的保护范围。

非脱羧勒克菌JLS2或上述任一所述菌剂在脱除水中镁离子和/或磷酸根离子和/ 或铵根离子中的应用也属于本发明的保护范围。

非脱羧勒克菌JLS2或上述任一所述菌剂在沉降镁离子和/或磷酸根离子和/或铵 根离子中的应用也属于本发明的保护范围。

非脱羧勒克菌JLS2或上述任一所述菌剂在沉降水中镁离子和/或磷酸根离子和/ 或铵根离子中的应用也属于本发明的保护范围。

所述镁离子的存在形式可为Mg²⁺。

所述铵根离子的存在形式可为NH₄⁺。

所述磷酸根离子的存在形式可为PO₄^3-。

所述水可为含有0.005～0.015mol/LCa²⁺、0.02～0.20mol/LMg²⁺、0.02～ 0.05mol/LPO₄^3-和0.02～0.05mol/LNH₄⁺的水。

所述水可为含有0.01mol/LCa²⁺、0.04～0.06mol/LMg²⁺、0.02mol/LPO₄^3-和 0.02mol/LNH₄⁺的水。

所述水具体可为含有0.01mol/LCa²⁺、0.04mol/LMg²⁺、0.02mol/LPO₄^3-和 0.02mol/LNH₄⁺的水。

所述水具体可为含有0.01mol/LCa²⁺、0.06mol/LMg²⁺、0.02mol/LPO₄^3-和 0.02mol/LNH₄⁺的水。

本发明还提供了一种获得鸟粪石的方法。

本发明所提供的获得鸟粪石的方法，包括如下步骤：向液相体系中加入非脱羧勒 克菌JLS2；所述液相体系中含有0.04～0.20mol/LMg²⁺、0.02～0.20mol/LNH₄⁺和 0.02～0.20mol/LPO₄^3-。

所述获得鸟粪石的方法中，还包括加入非脱羧勒克菌JLS2后进行培养的步骤。

所述获得鸟粪石的方法中，所述培养的条件可为25℃～30℃、培养10～25天。

所述获得鸟粪石的方法中，所述培养的条件具体可为30℃、静置培养24天。

所述液相体系中还可含有碳酸氢根离子。

所述液相体系中可含有0.01～0.06mol/L碳酸氢根离子，具体可含有0.03mol/L 碳酸氢根离子。

所述液相体系中可含有0.04～0.06mol/LMg²⁺、0.02～0.20mol/LNH₄⁺和0.02～ 0.20mol/LPO₄^3-。

所述液相体系中可含有0.04～0.06mol/LMg²⁺、0.02～0.05mol/LNH₄⁺和0.02～ 0.05mol/LPO₄^3-。

所述液相体系中具体可含有0.04mol/LMg²⁺、0.02mol/LNH₄⁺和0.02mol/LPO₄^3-。

所述液相体系中具体可含有0.06mol/LMg²⁺、0.02mol/LNH₄⁺和0.02mol/LPO₄^3-。

上述任一所述液相体系中可含有0.005～0.015mol/LCa²⁺。

上述任一所述液相体系中具体可含有0.01mol/LCa²⁺。

实验证明，本发明提供的非脱羧勒克菌JLS2可以沉降镁离子、磷酸根离子和铵 根离子，且沉降过程中生成鸟粪石晶体。可见非脱羧勒克菌JLS2在硬水软化方面具 有广阔的应用前景，不仅为废水治理节约成本，同时还能得到一种新型肥料，具有重 要的应用价值。

附图说明

图1为非脱羧勒克菌JLS2的高分辨率透射电镜图。

图2为非脱羧勒克菌JLS2的系统发育树图。

图3为非脱羧勒克菌JLS2作用下镁离子浓度、磷酸根离子浓度、铵根离子浓 度和pH值的变化趋势图。

图4为实验组矿物偏光显微镜图。

图5为实验组矿物X射线衍射图。

保藏说明

菌种名称：非脱羧勒克菌

拉丁名：(Leclerciaadecarboxylata)

菌株编号：JLS2

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

保藏机构简称：CGMCC

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏日期：2015年12月04日

保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.11782

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了 阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所用的培养基如下：

活化液体培养基：将酵母浸粉3g和KCl0.25g溶于1L蒸馏水，调节pH至7.2。

活化固体培养基：向上述活化液体培养基中加入琼脂，使其含量为15g/L得到的 培养基。

富集培养基溶质及其浓度为K₂HPO₄0.5g/L，NH₄Cl1.0g/L，CaCl₂0.1g/L，MgSO₄·7H₂O2.0g/L，酵母浸粉1.0g/L，Na₂SO₄0.5g/L，Fe(NH₄)₂(SO₄)₂0.5g/L，抗坏血 酸0.5g/L，L-Cys0.5g/L，60％的乳酸钠溶液6mL/L；溶剂为蒸馏水；pH7.2；其中 Fe(NH₄)₂(SO₄)₂、抗坏血酸和L-Cys需先用无菌蒸馏水配制成母液，再用0.22μm滤 膜过滤除菌，然后用于制备富集培养基；60％的乳酸钠溶液为国药集团化学试剂有 限公司产品，产品目录号为30168018。

培养基甲：向上述富集培养基中加入1.0mol/LCaCl₂水溶液，使体系中的Ca²⁺浓 度为0.01mol/L，得到培养基甲。培养基甲中镁钙离子摩尔比为0。

培养基乙：向上述培养基甲中加入2.0mol/L的MgCl₂水溶液，使体系中的Mg²⁺浓 度为0.02mol/L，得到培养基乙。培养基乙中镁钙离子摩尔比为2：1。

培养基丙：向上述培养基甲中加入2.0mol/L的MgCl₂水溶液，使体系中的Mg²⁺浓 度为0.04mol/L，得到培养基丙。培养基丙中镁钙离子摩尔比为4：1。

培养基丁：向上述培养基甲中加入2.0mol/L的MgCl₂水溶液，使体系中的Mg²⁺浓 度为0.06mol/L，得到培养基丁。培养基丁中镁钙离子摩尔比为6：1。

X射线衍射分析使用转靶X射线衍射仪，日本理学电器公司产品，产品型号为 D/Max-RC；偏光显微镜分析使用偏光显微镜，德国卡尔蔡司公司产品，产品型号为 AxioScopeA1pol；722s分光光度计为上海精密科学仪器有限公司产品；原子吸 收分光光度计为北京普析通用仪器有限责任公司产品，产品型号为TAS-986；高分 辨率透射电镜分析使用高分辨率透射电镜，日本电子株式会社公司产品，产品型号 为JEM-2100；pH计为上海仪电科学仪器股份有限公司产品，型号为PHS-3E。

SrCl₂·6H₂O水溶液：将30.4gSrCl₂·6H₂O溶解于100mL蒸馏水后得到的溶 液。

氧化液由100mL柠檬酸钠溶液和25mL1.5mol/L次氯酸钠水溶液混合组成；其 中柠檬酸钠溶液为含有20％(质量百分比)柠檬酸钠和1％(质量百分比)NaOH的水 溶液。

反应液：取250mL定容瓶，加入125mL5mol/L硫酸、37.5mL4％(质量百分比) 钼酸铵水溶液和75mL0.1mol/L抗坏血酸，然后用无菌水定容至250mL。

实施例1、非脱羧勒克菌(Leclerciaadecarboxylata)JLS2CGMCCNO.11782 的分离、鉴定和保藏

一、硫酸盐还原菌JLS2的分离

1、取采自中国青岛莱芜九龙山的白云石，研磨成粉末，作为样品。

2、在100mL无菌蒸馏水中加入10g步骤1制备的样品，搅拌均匀，静置10分钟， 然后取20mL上清液加入200mL富集培养基中，并用无菌液体石蜡封闭瓶内液面， 置于厌氧培养箱，30℃静置培养、观察。培养至第7天，富集培养基颜色变黑，可 见硫酸盐还原菌富集成功(富集培养基中的Fe(NH₄)₂(SO₄)₂中的亚铁离子能与富集培 养基中的S^2-反应生成黑色的硫化亚铁)。

3、完成步骤2后，取上清液接种至活化固体培养基上，30℃厌氧培养箱中培 养、观察。培养至第7天，产生单菌落。挑取单菌落，反复纯化3次以上。将筛选 到的一株硫酸盐还原菌菌株命名为硫酸盐还原菌JLS2。

二、硫酸盐还原菌JLS2的鉴定

1、形态学鉴定

将硫酸盐还原菌JLS2接种到活化固体培养基上，30℃培养，24小时后观察单 菌落的形态。结果表明，硫酸盐还原菌JLS2菌落圆形，直径2.0～3.0mm，表面光滑， 边缘整齐，菌落半透明。

硫酸盐还原菌JLS2经染色后，鉴定为革兰氏阴性菌。通过高分辨率透射电镜 分析硫酸盐还原菌JLS2，实验结果见图1。结果表明，硫酸盐还原菌JLS2的大小 为3.0μm×0.75μm，细菌为短杆形。

2、生理生化鉴定

参考《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册.北京: 科学出版社，2011.)和《微生物学实验》(沈萍，范秀容，李广武.微生物学实验(第 三版).北京:高等教育出版社，1999.)测定上述硫酸盐还原菌JLS2的生理生化特征。

所述硫酸盐还原菌JLS2的生理生化特征测定结果如表1所示。

表1.硫酸盐还原菌JLS2的生理生化特征测定结果

注：“-”表示阴性；“+”表示阳性

3、16SrDNA序列同源性分析

硫酸盐还原菌JLS2的16SrDNA如序列表中的序列1所示。

通过ClustalX软件将序列表中的序列1与GenBank中的序列进行比对，采用 邻接法(N-J法)构建系统发育树。系统发育树的实验结果见图2。

硫酸盐还原菌JLS2与非脱羧勒克菌(Leclerciaadecarboxylata)同源性最高， 达到97％。

综合上述各个鉴定结果，硫酸盐还原菌JLS2为非脱羧勒克菌(Leclercia adecarboxylata)。

三、硫酸盐还原菌JLS2的保藏

非脱羧勒克菌(Leclerciaadecarboxylata)JLS2已于2015年12月04日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝 阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.11782。硫酸盐还原菌JLS2的全称 为非脱羧勒克菌(Leclerciaadecarboxylata)JLS2CGMCCNO.11782，简称为非脱 羧勒克菌JLS2或JLS2。

实施例2、制备非脱羧勒克菌JLS2菌剂

将非脱羧勒克菌JLS2在活化固体培养基上活化，然后挑取单菌落接种于装有 100mL活化液体培养基的250mL锥形瓶中，30℃、静置培养4天，得到OD_600nm值约为 0.95的非脱羧勒克菌JLS2菌剂。非脱羧勒克菌JLS2菌剂在下文简称为JLS2菌剂。

实施例3、非脱羧勒克菌JLS2脱除镁离子、磷酸根离子和铵根离子能力的测定

一、标准曲线的制作

(1)Mg²⁺标准曲线

准确称取优级纯MgCl₂·6H₂O4.1814g于500mL容量瓶中，用无菌水溶解配成 Mg²⁺浓度为1000mg/L的MgCl₂母液。继续用无菌水稀释配制成Mg²⁺浓度为0、10、20、 30、40、50、75和100mg/L系列的MgCl₂溶液，向各种MgCl₂溶液中加入1mLSrCl₂·6H₂O水溶液。然后采用原子吸收分光光度计测定不同浓度MgCl₂溶液的吸光值，3 次重复。以Mg²⁺浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制Mg²⁺标准曲线。

(2)NH₄⁺标准曲线

①准确称取无水氯化铵3.819g于1000mL容量瓶中，用无菌水溶解配成NH₄⁺浓 度为1000μg/mL的铵标准储备液，使用前进一步用无菌水稀释成NH₄⁺浓度为100μ g/mL的铵标准使用液。

②取50mL定容瓶，加入3.5mL铵标准使用液、2mL10％苯酚水溶液(将10g苯 酚溶解到100mL蒸馏水)、2mL0.5％(质量百分比)硝普钠水溶液和5mL氧化液， 然后用无菌水定容至50mL，配制成NH₄⁺浓度为7μg/mL的混合溶液。

按照上述方法，将3.5mL铵标准使用液分别替换为0、0.5、1.0、1.5、2.0、 2.5和3.0mL铵标准使用液，其它步骤均不变，分别配制成NH₄⁺浓度为0、1.0、2.0、 3.0、4.0、5.0和6.0μg/mL的混合溶液。

③完成步骤②后，静置1h，然后采用722s分光光度计测定不同浓度混合溶液 在640nm处的吸光值(以水为参比溶液)，3次重复。以NH₄⁺浓度为横坐标，吸光值 为纵坐标，绘制NH₄⁺标准曲线。

(3)PO₄^3-标准曲线

①准确称取无水磷酸二氢钾0.7165g于1000mL容量瓶中，用无菌水溶解配成 PO₄^3-浓度为0.5mg/mL的磷酸盐标准储备液，使用前进一步用无菌水稀释成PO₄^3-浓度 为0.05mg/mL的磷酸盐标准使用液。

②取50mL定容瓶，加入14mL磷酸盐标准使用液和8mL反应液，然后用无菌水 定容至50mL，配制成PO₄^3-浓度为14μg/mL的混合溶液。

按照上述方法，将14mL磷酸盐标准使用液分别替换为0、2、4、6、8、10和 12mL磷酸盐标准使用液，其它步骤均不变，分别配制成PO₄^3-浓度为0、2、4、6、8、 10和12μg/mL的混合溶液。

③完成步骤②后，静置24h，然后采用722s分光光度计测定不同浓度混合溶液 在827nm处的吸光值(以水为参比溶液)，3次重复。以PO₄^3-浓度为横坐标，吸光值 为纵坐标，绘制PO₄^3-标准曲线。

2、分别采用培养基(培养基甲、培养基乙、培养基丙或培养基丁)进行如下操 作：

取6个250mL的锥形瓶，每个锥形瓶装入150mL的培养基，121℃高压灭菌20min。 待培养基冷却至室温后，每个锥形瓶中加入1.5mL的1mol/LNaHCO₃水溶液(1mol/L Na₂CO₃水溶液用孔径为0.22微米的滤膜过滤除菌后再用)，用NaOH调节pH至7.2。

3、完成步骤2后，将6个锥形瓶分为实验组和对照组，每组3个锥形瓶。向实 验组的每个锥形瓶中接种实施例2制备的非脱羧勒克菌JLS2菌剂1.5mL(接种比例 1:100)，向对照组的每个锥形瓶中接种1.5mL的无菌超纯水。接种完毕后，将所有 锥形瓶置于恒温培养箱，30℃、静置培养24天。

培养过程中，每72小时取样1.5mL，进行如下实验：第一步使用pH计测量pH值； 第二步先10000rpm离心5min，收集上清液，将收集的上清液用无菌蒸馏水稀释10倍， 然后用孔径为0.22微米的滤膜过滤，得到稀释液。第一次取样的时间为完成步骤2 后。

4、用原子吸收分光光度计和722s分光光度计测量稀释液的吸光值，根据步骤 1制作的Mg²⁺标准曲线、NH₄⁺标准曲线和PO₄^3-标准曲线，得到稀释液中Mg²⁺、NH₄⁺和PO₄^3-的浓度。

培养过程中，培养基丁的实验组中的Mg²⁺浓度、NH₄⁺浓度、PO₄^3-浓度和pH值的变 化趋势如图3(图3中，实心倒三角为Mg²⁺浓度，实心正三角为NH₄⁺浓度、实心圆形 为PO₄^3-浓度，实心正方形为pH值)所示。

实验结果如下：

(1)Mg²⁺的变化趋势

培养第0天至第3天，实验组中，培养基丁或培养基丙中的Mg²⁺浓度迅速下降，培 养基乙下降缓慢；对照组中，镁离子浓度虽有下降，但与实验组相比，其下降趋势不 如实验组明显。

培养第3天至第12天，实验组中，培养基丁或培养基丙中Mg²⁺浓度下降趋势渐缓， 培养基乙下降趋势不明显；对照组中，镁离子浓度虽有下降，但与实验组相比，其下 降趋势不如实验组明显。

培养第12天至第24天，实验组中，培养基乙、培养基丁或培养基丙中Mg²⁺浓度基 本不变；对照组中，镁离子浓度依旧处于缓慢下降阶段，但镁离子浓度却远高于实验 组。

上述结果表明，非脱羧勒克菌JLS2有促进镁离子沉降的作用。

(2)NH₄⁺的变化趋势

实验组中，培养第0天至第3天，培养基丁或培养基丙中NH₄⁺浓度基本不变，培养 第3天至第6天NH₄⁺浓度急剧下降，培养第6天至第9天NH₄⁺浓度基本不变，培养第9天至 第15天，NH₄⁺浓度不断下降，但下降趋势不如第3天至第6天的下降趋势那样急剧，培 养第15天之后，NH₄⁺浓度基本不变。

实验组中，培养基甲或乙中NH₄⁺浓度变化与培养基丁或培养基丙中NH₄⁺浓度的变化 趋势相同，但是不及培养基丁或培养基丙中NH₄⁺浓度变化那样明显。

对照组中，各培养基中NH₄⁺浓度也下降，但下降趋势不如实验组明显。

上述结果表明，非脱羧勒克菌JLS2在NH₄⁺浓度变化过程中起至关重要的作用。

(3)PO₄^3-的变化趋势

实验组中，培养第0天至第24天，培养基丁或培养基丙中PO₄^3-浓度不断下降。

实验组中，培养基甲或乙中PO₄^3-浓度的变化趋势相同，但是不及培养基丁或培养 基丙中PO₄^3-浓度变化那样明显。

对照组中，各培养基中PO₄^3-浓度也下降，但下降趋势不如实验组明显。

上述结果表明，非脱羧勒克菌JLS2在PO₄^3-浓度变化过程中也起着至关重要的作 用。

(4)pH值的变化趋势

实验组中，培养第0天至第12天，培养基丁或培养基丙中的pH值由7.75升高到 8.79；培养第12天至第24天，pH值缓慢下降至8.67。

实验组中，培养基甲或乙中pH值变化趋势相同，但pH值略低于培养基丁或培养基 丙，培养至第24天时pH值约8.4。

对照组中，培养第0天至第6天，各培养基中pH值由7.75升高到8.6左右；培养 第6天至第24天，各培养基中pH值缓慢下降至8.4左右。

上述结果表明，非脱羧勒克菌JLS2的存在导致了实验组的pH值略大于对照组。

实施例4、实施例3获得的矿物沉淀分析

由于实施例3中对照组在各个培养基中均没有获得矿物沉淀，所以仅对实施例 3中实验组中获得的矿物沉淀进行进一步分析。

一、偏光显微镜分析

实验步骤如下：

1、取实施例3步骤3中培养24天的各培养基底部沉淀，置于1.5mL离心管，静置 5min。

2、完成步骤1后，弃上清液，然后每个离心管中各加入1mL的蒸馏水进行洗涤，静 置5分钟。

3、完成步骤2后，弃上清，洗涤三次，以除去各种盐离子，然后向沉淀中加入100μL 的无水乙醇进行悬浮。取部分样品置于载玻片上，自然干燥后置于偏光显微镜下观察。

实验结果见图4(a为培养基甲，b为培养基乙，c为培养基丙，d为培养基丁)： 实验组在培养基甲中和实验组在培养基乙中均没有形成矿物晶体，实验组在培养基丙 中和实验组在培养基丁中则形成规则的矿物晶体。结果表明，非脱羧勒克菌JLS2会 促进矿物的沉降，同时培养基中的镁离子浓度的高低也影响矿物的形成。

二、X射线衍射(X-raydiffraction，XRD)分析

取实施例3步骤3中培养24天的各培养基底部沉淀，置于1.5mL离心管，静置5min， 弃上清液，然后每个离心管中各加入1mL的蒸馏水进行洗涤，静置5分钟，弃上清，洗 涤三次，以除去各种盐离子，沉淀自然干燥后进行XRD分析。XRD扫描角度为10°-90°， 步长为0.02，扫描速度8°/min。

实验结果见图5(Mg/Ca＝0、Mg/Ca＝2:1、Mg/Ca＝4:1和Mg/Ca＝6:1分别代表实验组 中培养基甲、培养基乙、培养基丙和培养基丁)。

结果表明，非脱羧勒克菌JLS2与产生鸟粪石矿物有密切联系，而且该菌还能诱导 鸟粪石晶体的择优取向生长。实验组在培养基甲中和实验组在培养基乙中均没有形成 矿物晶体，但实验组在培养基丙中和实验组在培养基丁中却产生了鸟粪石矿物沉淀。 标准鸟粪石的(111)晶面对应的衍射峰强度强于(011)晶面，但实验组在培养基丙 中和实验组在培养基丁中产生的鸟粪石矿物其(011)晶面的衍射峰强度却高于(111) 晶面，因此非脱羧勒克菌JLS2诱导产生的鸟粪石其(011)晶面发生了择优取向现象。