具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物及其制备方法，它由人参2-10份、桑白皮2-20份、地骨皮2-20份、甘草1-10份、知母2-20份、橘红2-20份、天冬2-20份和丹参2-20份制成。本发明根据中医药理论，采用辨证论治的理论，通过大量实验筛选进行中药配伍组方，实验结果表明，本发明提供的组合物具有显著减轻博来霉素引起的肺组织纤维化和其它肺部病变、改善肺功能的作用，显著降低与肺纤维化紧密相关的生物指标如肺中羟脯氨酸含量、肺泡灌洗液PDGF、NF-kB、TNF-α、IFNγ水平，降低肺组织TGFβ、Smad3mRNA和蛋白表达，可用于多种特发性及继发性肺纤维化治疗，具有重要的社会效益和经济效益。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，具体涉及一种具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物及其制备方法和应用，属于中医药技术领域。

背景技术

间质性肺疾病是以弥漫性肺实质、肺泡炎症和间质纤维化为病理基本病变。近年来随着空气污染问题日益严重，呼吸道疾病的患病率逐年增加，间质性肺疾病的发病率亦呈现明显增长的趋势，尤其是其中特发性肺间质纤维化是临床难治性疾病之一，大多数患者肺功能在数年内逐渐恶化，病情凶险，尤其是对老年人身体健康构成较大威胁，过去20年间肺纤维化的死亡率逐渐增加。肺纤维化作为一种严重的慢性疾病，已成为世界各国关注的重要公共卫生问题。在治疗上，临床常用糖皮质激素、免疫抑制剂/细胞毒药物和抗纤维化制剂治疗，但有明显的副作用，且疗效并不理想。此病不仅给患者带来极大的痛苦，生活质量受到很大影响，甚至威胁患者的生命，还给社会带来沉重的经济负担。中医药在两千多年与疾病做斗争的历程中，总结了系统的理论，积累了丰富的方剂和用药经验，但是目前对肺纤维化复方所具有的效应和机制，仍然报道较少，有待深入发掘和研究，与广大患者的实际需求存在较大差距。

本发明涉及的中药复方组合物，人参益气补肺，桑白皮、地骨皮清肺中伏热，天冬、知母滋阴润燥，橘红理气消痰，丹参通络化瘀，甘草和药，在临床应用中具有改善肺功能、明显减轻肺纤维化病人咳嗽、气急、紫绀等临床症状、控制病情发展、改善生活质量的作用，且未见有应用该复方组合物在开发治疗肺纤维化药物的报道。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，实现中医药复方开发与利用，利用现代制药技术、结合大量药学实验筛选，提供一种高效的防治肺纤维化药物及其制备方法与应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物，它由下列重量份数的原料制成：

人参2-10份、桑白皮2-20份、地骨皮2-20份、甘草1-10份、知母2-20份、橘红2-20份、天冬2-20份、丹参2-20份。

作为优选方案，以上所述的具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物，它由下列重量份数的原料制成：

人参3份、桑白皮6份、地骨皮6份、甘草3份、知母6份、橘红6份、天冬6份、丹参6份。

作为优选方案，以上所述的具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物，它由下列重量份数的原料制成：

人参4份、桑白皮4份、地骨皮5份、甘草3份、知母10份、橘红8份、天冬4份、丹参4份。

本发明所述的具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物的制备方法，包括以下步骤：

(a)取处方中人参、丹参加4-20倍量50％-95％乙醇，加热回流提取2-3次，每次1-3小时，合并提取液，滤过，60℃-90℃回收乙醇，浓缩至含生药量0.8-1.2g/mL，得浓缩液1；

(b)取处方中知母，加8-20倍量水，煎煮1-3次，每次0.5-2小时，合并建煎煮液，滤过，常压浓缩，浓缩至含生药量0.8-1.2g/mL，与步骤(a)浓缩液1合并，常压浓缩至含生药量1.2-1.8g/mL，得浓缩液2；

(c)取处方中桑白皮、地骨皮、甘草、橘红、天冬与步骤(a)中的人参和丹参药渣、步骤(b)中知母药渣合并，加8-20倍量水，加热煎煮2-3次，每次1-2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩至含生药量0.3-0.8g/mL，得浓缩液3；

(d)合并浓缩液2和浓缩液3，常压浓缩至含生药量0.8-1.5g/mL；

(e)取步骤(d)浓缩液，用辅料制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或糖浆剂等药物。

本发明提供的中药复方组合物制成片剂时把中药复方组合物提取物和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。本发明提供的中药复方组合物制成胶囊剂时，把中药复方组合物提取物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。本发明提供的中药复方组合物制成颗粒剂时，把中药复方组合物提取物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

本发明所述中药组合物具有防治肺纤维化的作用，可用于制备防治肺纤维化的药物。

为了更好地理解本发明的实质，下面用中药组合物的药效学实验及其结果来进一步说明其在制药领域中的新用途。

有益效果：本发明和现有技术相比具有以下优点：

1、本发明提供的中药复方组合物，根据中医药理论，采用辨证论治的理论，通过大量实验筛选进行中药配比组方，用药严谨科学，实验结果表明，本发明提供的中药复方组合物，可显著减轻博来霉素引起的肺组织纤维化和其它肺部病变、改善肺功能的作用，可显著降低与纤维化紧密相关的生物指标肺中羟脯氨酸含量、肺泡灌洗液TGF-β1水平，降低肺组织TGFβ/Smad3,NFκB/IKBamRNA和蛋白表达，并且安全性好，毒副作用低。

本发明为利用具有传统治疗优势的中药复方制备抗肺纤维化药物供新的选择，具有重要的社会效益和经济效益。

2、本发明提供的中药复方组合物的制备方法，根据各原料药味的理化性质特点，采用优选的提取工艺，提取得到活性成分高，杂质少，制备得到的中药组合物的提取物，可方便和药学上可接受的载体制备成具有明显抗肺纤维化的作用的药物制剂。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

1、一种具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物，它由下列重量份数的原料制成：

人参3份、桑白皮6份、地骨皮6份、甘草3份、知母6份、橘红6份、天冬6份、丹参6份。

2、具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物的制备方法，它包括以下步骤：

(a)取人参3份、丹参6份，加药材重量10倍体积量75％乙醇(体积浓度)，加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，60℃-70℃回收乙醇，浓缩至含生药量1.1g/mL，得浓缩液1；

(b)取知母6份，加知母药材重量10倍体积量的水，煎煮2次，每次1小时，合并建煎煮液，滤过，常压浓缩，浓缩至含生药量0.8-1.2g/mL，与浓缩液1合并，常压浓缩至含生药量1.2-1.8g/mL，得浓缩液2；

(c)取桑白皮6份、地骨皮6份、甘草3份、橘红6份、天冬6份与步骤(a)中的人参和丹参药渣、步骤(b)中知母药渣合并，加10倍体积量水，加热煎煮2次，每次1.5小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩至含生药量0.3-0.8g/mL，得浓缩液3；

(d)合并浓缩液2和浓缩液3，常压至含生药量0.8-1.5g/mL；

(e)取步骤(d)浓缩液，加适量阿司巴甜，搅拌溶解，用糊精30份，喷雾制粒，整粒，分装成颗粒剂。

实施例2

1、一种具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物，它由下列重量份数的原料制成：

人参4份、桑白皮4份、地骨皮5份、甘草3份、知母10份、橘红8份、天冬4份、丹参4份。

2、具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物的制备方法，它包括以下步骤：

(a)取人参4份、丹参4份，加药材重量8倍体积量85％乙醇(体积浓度)，加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，60℃-70℃回收乙醇，浓缩至含生药量1.1g/mL，得浓缩液1；

(b)取知母10份，加知母药材重量12倍体积量的水，煎煮2次，每次2小时，合并建煎煮液，滤过，常压浓缩，浓缩至含生药量0.8-1.2g/mL，与浓缩液1合并，常压浓缩至含生药量1.2-1.8g/mL，得浓缩液2；

(c)取桑白皮4份、地骨皮5份、甘草3份、橘红8份、天冬4份与步骤(a)中的人参和丹参药渣、步骤(b)中知母药渣合并，加8倍体积量水，加热煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩至含生药量0.3-0.8g/mL，得浓缩液3；

(d)合并浓缩液2和浓缩液3，常压至含生药量0.8-1.5g/mL；

(e)取步骤(d)浓缩液，加入玉米淀粉，硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

实施例3

一种具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物，它由下列重量份数的原料制成：

人参10份、桑白皮20份、地骨皮20份、甘草10份、知母20份、橘红20份、天冬20份、丹参20份。

采用实施例1同样的制备方法制备得到提取物和载体玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

实施例4

一种具有抗肺纤维化作用的中药复方组合物，它由下列重量份数的原料制成：

人参2份、桑白皮2份、地骨皮2份、甘草1份、知母2份、橘红2份、天冬2份、丹参2份。

采用实施例1同样的制备方法制备得到提取物，加入蒸馏水，调节pH值，灭菌灌注制备成口服液。

实施例5安全性毒理学和药效学实验

1、急性毒性试验：

观察供试品小鼠一日两次灌胃给药后，所产生的毒性反应和死亡情况。

SPF级ICR小鼠，雌性，体重(20±2)g，取小鼠40只，随机分为正常对照组和给药组。给药组(实施例1)一日内两次按40mL·kg^-1灌胃给药，正常对照组给予等体积的蒸馏水。连续观察两周，记录受试小鼠行为、活动、体重、粪便、死亡等情况，未死亡小鼠于两周后处死进行尸检。

按实施例1制备得到提取物400.0g·kg^-1(5.0g·mL^-1×40mL·kg^-1×2次)，一日内分两次灌胃给药的20只小鼠，在观察时间内一般情况良好，毛色光滑、活动、摄食、粪便色泽与质地正常，活动无减少，且两周内无死亡及其它异常现象发生。14天后处死动物，解剖无肉眼可见的病理性改变。给药后14天内均未见动物死亡或出现异常，无法测出供试品口服给药的LD₅₀。供试品小鼠口服给药的最大给药量为400.0g生药·kg^-1，相当于临床成人用量的320倍。

2、该组合物在制备防治肺纤维化药物中的应用

药效学实验：

SD大鼠，体重(180±20g)，随机分为A、B、C、D、E、F6组，每组10只，除空白组外博来霉素(日本化药株式会社)5mg/kg，一次性气管内注射造模。模型复制24小时后，各给药组(实施例1)给予中药组合物高剂量组(12.0g·kg^-1·d^-1)，中药组合物中剂量组(6.0g·kg^-1·d^-1)，中药组合物低剂量组(3.0g·kg^-1·d^-1)，强的松阳性对照组(5.0mg·kg^-1·d^-1)。上述药物采用灌胃给药，每天1次，连续给药4周。空白对照组、模型对照组喂等容积生理盐水。各组动物分别于造模后第28天取肺组织行HE、Masson染色评价肺组织病理变化，消化法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量，ELISA法测定肺气道灌洗液中TGF-β1、PDGF、NF-kB、TNF-α、IFN-γ的表达。

(1)一般情况观察：模型对照组大鼠体重下降尤为明显，大鼠状态不佳，可见蜷缩骚动，精神萎靡，食量减少，呼吸喘促；用药组各组大鼠体重均有所上升，尤以本发明提供的中药组合物组明显，大鼠精神较前转好，毛发较前光整，呼吸逐渐趋于平稳，活动增多，食量增加。

(2)肺组织病理改变：模型组HE染色见肺组织内成纤维细胞增生明显，并见胶原纤维形成，炎细胞类型主要为单个核细胞，少数为中性粒细胞。Masson染色见肺组织成纤维细胞增生，并产生胶原纤维，致局部肺组织结构被破坏，多数肺泡壁明显增厚,局部肺泡腔消失。Mmasoon染色为蓝绿色粗细不等的条索或网状结构，位于肺间质(肺泡壁，肺内支气管和血管分支周围组织)。本发明提供的中药组合物各剂量应用后，肺组织内成纤维细胞增生、胶原纤维数量、肺组织其它病变程度较模型组明显减轻。表明本发明提供的中药组合物经灌胃给药有减轻博来霉素引起的肺组织纤维化等肺部病变的作用。

(3)各组大鼠肺HYP含量比较

如表2，HYP的量反映结缔组织疾病的胶原代谢情况，通过测定HYP的含量可以了解组织的纤维化程度。模型组HYP含量均明显升高，与模型组比较，本发明提供的中药组合物干预后实验大鼠HYP含量降低，反映肺纤维化程度较模型组均有所改善。

表2各组肺组织中HYP含量比较(μg/ml，)

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

(4)对肺泡灌洗液中细胞因子水平的影响

采用ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β₁、PDGF、NF-κB、TNF-α、IFN-γ含量。与模型组相比，本发明提供的中药组合物干预后实验大鼠肺泡灌洗液中TGF-β1、PDGF、NF-κB、TNF-α含量降低，IFN-γ提高，具体结果如表3和表4所示。

表3各组BALF中TGF-β_1、PDGF含量

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

表4各组BALF中NF-κB、TNF-α、IFN-γ含量(ng/L，)

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

实施例6对肺纤维化模型动物肺功能和对Smad3和TGF-β1蛋白表达的影响

1、实验方法：24只SD大鼠，体重(180±20g)，随机分为空白组、模型组、强的松组、取实施例2中的中药组合物，按中剂量组(6.0g·kg^-1·d^-1)给药，除空白组外博来霉素5mg/kg一次性气管内注射造模。模型复制24小时后，给药组给予中药组合物中剂量(6.0g·kg^-1·d^-1)，阳性对照组给予强的松(5.0mg·kg^-1·d^-1)。上述药物采用灌胃给药，每天1次，连续给药4周。

2、肺功能检测：10％水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射，麻醉大鼠，BuxcoPFT检测FVC(用力肺活量,ml)、RI(肺阻力,cmH2O*sec/ml)、TLC(肺总气量，ml)、Cchord(ml/cmH2O)等肺功能指标。

3、实验结果

(1)如表5所示，与空白对照组比较，模型组大鼠的FVC明显下降(P＜0.01)，与模型对照组比较，中药组合物组明显升高(P＜0.01)，阳性对照组升高(P＜0.05)。与空白对照组比较，模型组大鼠的TLC明显降低(P＜0.01)，与模型对照组比较，中药组合物组、阳性对照组升高(P＜0.05)。与空白对照组比较，模型组大鼠的RI明显上升(P＜0.01)，与模型对照组比较，阳性对照组、中药组合物组明显升高(P＜0.01)。与空白对照组比较，模型组大鼠的Cchord明显下降(P＜0.01)，与模型对照组比较，中药组合物组明显升高(P＜0.01)，阳性对照组亦有升高(P＜0.05)。

表5各组肺功能FVC、TLC、RI、Cchord改变(n＝6)

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

(2)Westernblot检测TGF-β₁、Smad3蛋白的表达。

按照全蛋白抽提试剂盒说明书提取蛋白。提取的蛋白按照Braford蛋白含量检测试剂盒说明书进行定量。ECL检测试剂盒显色，G:BOXchemiXR5成像。

Westemblot结果分析显示，Smad3蛋白在空白组大鼠肺组织中表达较少，而在模型组小鼠肺组织中高表达(P＜0.01)；给予中药组合物组中剂量(6.0g·kg^-1·d^-1)及阳性药干预之后，Smad3蛋白在大鼠肺组织中表达明显降低(P＜0.01)。TGF-β₁蛋白在空白组大鼠肺组织中有表达，而在模型组大鼠肺组织高表达(P＜0.01)；给予中药组合物组中剂量(6.0g·kg^-1·d^-1)及阳性药干预之后，TGF-β₁mRNA表达量与模型组相比较均显著降低(P＜0.01)，具体如表6所示。

表6肺组织中Smad3和TGF-β₁的蛋白表达

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。