一种胆舒胶囊的指纹图谱检测方法

摘要

本发明提供一种胆舒胶囊的指纹图谱检测方法，其采用气相色谱检测方法，初始温度为73℃～75℃，结束温度为160℃～200℃，采用程序升温，进样口温度为250℃，检测器温度为250℃对胆舒胶囊内容物制备得到的样品溶液进行检测，该检测方法检出成分多、各组分分离度好，能够为胆舒胶囊质量控制提供有效的标准，且整体出峰时间短，大大减少了检测时间和检测成本，更利于工业生产应用。

说明书

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种胆舒胶囊的指纹图谱检测方法。

背景技术

薄荷广泛分布于我国各地，如云南、江苏、浙江、江西等都有出产。中国是薄荷油、 薄荷脑的主要输出国之一。薄荷素油(OleumMenthaeDementholatum)是薄荷中的主要化 学成分，是一种传统的中药，具有清凉止痒、抗炎镇痛、祛痰、利胆、溶石排石等药效 [刘红杰等，薄荷油研究进展，山东中医药大学学报2006，30(6)：502-505]，临床上主 要用来治疗慢性胆囊炎[韩捷等，胆舒胶囊治疗慢性胆囊炎25例临床观察，中成药，2007， 29(1)：说明书CN102210742B32/8页4附8-9]、胆结石[黄欣等，胆舒胶囊治疗胆石症 的疗效观察，中国全科医学，2005，8(1)：55-56]、慢性结石性胆囊炎、肠易激综合症[闫 峻等，薄荷油治疗肠易激综合症的药理和临床研究，国外医药·植物药分册，2006，21(2)： 50-62]、产后腹胀[张文，薄荷油湿布热敷治疗产后腹胀，J.huaihuaMed.，2001，19(3)： 264-265]、老年术后肠功能恢复[江桂林，薄荷油湿热敷对老年术后肠功能恢复的临床观 察，实用临床医药杂志(护理版)，2006，2(4)：42-43]、胆源性消化不良[黄宁新，胆舒 治疗胆源性消化不良临床意义的探讨，中国基层医药，2005，12(8)：1099]等病症。

胆舒胶囊主要活性成分为薄荷素油，是根据舒肝利胆、理气止痛的中医理论研制而 成的一种胶囊剂，具有舒肝理气，利胆功能，临床常用于慢性结石性胆囊炎，慢性胆囊 炎及胆结石肝胆郁结，湿热胃滞证的治疗。经现代研究表明，其利胆、消食作用机制 主要为：正常人的胆汁由胆汁酸、胆固醇、卵磷脂等有机成份及钠钾钙等无机离子组 成，其中胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合形成的钠盐或钾盐称为胆盐。胆固醇与既有亲 水性又有亲脂性的胆盐和卵磷脂按一定比例[1：(11±2.5)]组合，胆盐和卵磷脂的亲水 基团排列在表面，而亲脂基团包在内部，形成微胶粒，从而将胆固醇“溶解”在胆汁中。 若胆汁中胆固醇含量相对或绝对增多，胆固醇便因过饱和而析出结晶，不利于胆汁的排 放，而胆舒胶囊能够改善胆汁流出通道，显著松弛胆道平滑肌及Oddi氏括约肌的作用， 减轻胆管因胆囊切除术后淤胆代偿性扩张，使胆汁流出量增加，从而改善胆囊切除后的 右上腹胀闷不适症状。同时，其改善餐后不适综合征(PDS)的临床方面也有较好应用， 其机制可能与胆舒胶囊及其活性成份能够有效降低胃肠张力，改善胃肠容受性，降低胃 肠对扩张刺激的敏感性，及抵御轻度焦虑症的作用有关。此外，相关研究表明，胆舒胶 囊还具有一定的解痉和抗炎镇痛作用。

胆舒胶囊包含醇类、酮类、酯类、萜烯类等多种活性成分，其检测方法主要为气相 检测，然而，现有的检测方法中存在检测时间长、检测到的活性成分峰个数少、分离效 果不好等技术问题，因此，寻求一种能够快速、有效的胆舒胶囊检测方法对于其质量控 制而言显得尤为重要。

发明内容

为解决现有技术中存在的检测时间长、检出成分少、分离效果差等技术问题，本发 明提供一种快速、有效的胆舒胶囊的指纹图谱检测方法，其包括以下步骤：

1)样品制备方法：取胆舒胶囊内容物适量，置具塞试管中，加入有机溶剂，充分 振摇或超声后滤过，取续滤液即得；

2)气相色谱条件：采用极性毛细管柱，氢火焰离子化检测器，初始温度为73℃ ～75℃，结束温度为160℃～200℃，采用程序升温，进样口温度为250℃，检测器温度为 250℃。

3)测定：吸取步骤1)中制备得到的样品溶液注入气相色谱仪进行检测，得到指 纹图谱。

上述胆舒胶囊的指纹图谱检测方法中，所述的程序升温过程优选为：初始温度保持 4min，以2℃·min^-1的速率升温至100℃，再以6℃·min^-1的速率升温至结束温度；进一 步优选为：初始温度75℃，保持4min，以2℃·min^-1的速率升温至100℃，再以6℃·min^-1的速率升温190℃。

上述胆舒胶囊的指纹图谱检测方法中，所述的气相色谱条件中进样量优选为1.0μl， 分流比优选为40:1。

上述胆舒胶囊的指纹图谱检测方法中，所述样品制备方法中有机溶剂优选乙醇、无 水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、环己烷、三氯甲烷、乙醚，进一步优选无水乙醇。

上述胆舒胶囊的指纹图谱检测方法中，所述色谱条件中极性毛细管柱优选聚乙二醇 毛细管柱、改性聚乙二醇毛细管柱，进一步优选聚乙二醇毛细管柱。

上述胆舒胶囊的指纹图谱检测方法中，所述样品制备方法优选为，取胆舒胶囊内容 物0.72g，置具塞试管中，加入无水乙醇10ml，充分振摇或超声后滤过，取续滤液即得；

本发明所提供的胆舒胶囊指纹图谱检测与现有技术相比，存在以下优势：

1、本发明提供胆舒胶囊指纹图谱检测方法检出成分多、各组分分离度好，能够为 胆舒胶囊质量控制提供有效的标准。

2、本发明提供的胆舒胶囊指纹图谱检测方法在20min内出峰完毕，整体检测时间 短，大大减少了检测时间和节约检测成本，更利于工业生产应用。

本申请发明人考察了不同溶剂提取胆舒胶囊内容物对于检测结果的影响，发现采用 30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、90％乙醇、无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、环己烷、三 氯甲烷、乙醚提取时均能够有效检出各组分，且分离度较好，其中采用无水乙醇提取时， 效果最佳。

附图说明

图1为实施例1中气相色谱图

图2为实施例2中气相色谱图

图3为实施例3中气相色谱图

图4为实施例4中气相色谱图

图5为实施例5中气相色谱图

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进一步说明，但不能限制本发明的保护范围。

本发明中涉及的实验仪器和药品、试剂如下：

实验仪器：安捷伦7890A气相色谱仪；气相色谱柱：OPTIMA-WAXplus(柱长为 30m,内径为0.32mm，膜厚度为0.25μm，德国MachereyNagel公司)；检测器：氢火 焰离子化检测器。

实验药品及试剂：胆舒胶囊(四川济生堂药业有限公司，121008、121009、121010)， 柠檬烯对照品(来源：中检院、批次：100470-200801)，桉油精对照品(来源：中检 院、批次：10788-201105)，薄荷酮对照品(来源：中检院、批次：111705-201105)， 胡薄荷酮(来源：中检院、批次：111706-201205)，薄荷脑(来源：中检院、批次： 110728-200506)，无水乙醇(AR，成都金山化学试剂有限公司，20130506)。

实施例一胆舒胶囊气相色谱检测

样品制备方法：取胆舒胶囊内容物0.72g，置具塞试管中，加入无水乙醇10ml，充分振 摇或超声后静置20min，滤过，取续滤液即得；

对比色谱条件：初始温度60℃，保持4min，以2℃·min^-1的速率升温至100℃，再以 100℃·min^-1的速率升温230℃，进样口温度为250℃，FID检测器，检测器温度为250℃， 进样量为1.0μl，分流比为10:1，载气：N2，流速20ml*min^-1。

按照上述方法制备样品溶液，进行气相色谱检测，检测结果如图1所示，其检测得到的 色谱峰为13个，保留时间分别为0.60min、0.76min、1.10min、3.44min、4.40min、5.08min、 5.59min、7.63min、8.05min、9.35min、10.10min、11.27min、13.61min，其中柠檬烯和 桉油精两个成分峰堆积在一起(1.10min)，未能得到分离，其他色谱峰分离多数也不 能满足要求，总体分离效果差。

实施例二胆舒胶囊气相色谱检测

样品制备方法：取胆舒胶囊内容物0.72g，置具塞试管中，加入无水乙醇10ml，充分振 摇或超声后静置20min，滤过，取续滤液即得；

色谱条件：初始温度73℃，保持4min，以2℃·min^-1的速率升温至100℃，再以6℃·min^-1的速率升温160℃，进样口温度为250℃，FID检测器，检测器温度为250℃，进样量为 1.0μl，分流比为40:1，载气：N2，流速2ml*min^-1。

按照上述方法制备样品溶液，进行气相色谱检测，检测结果如图2所示，其检测得到的 组分色谱峰总个数为20个，保留时间分别为2.07min、2.51min、3.28min、3.44min、 7.44min、9.40min、9.82min、10.37min、13.31min、13.79min、14.18min、15.04min、15.70min、 16.34min、16.66min、17.16min、18.24min、18.90min、19.48min、19.94min，且各色谱 峰分离度较好。

实施例三胆舒胶囊气相色谱检测

样品制备方法：取胆舒胶囊内容物0.72g，置具塞试管中，加入无水乙醇10ml，充分振 摇或超声后静置20min，滤过，取续滤液即得；

色谱条件：初始温度74℃，保持4min，以2℃·min^-1的速率升温至100℃，再以6℃·min^-1的速率升温200℃，进样口温度为250℃，FID检测器，检测器温度为250℃，进样量为 1.0μl，分流比为40:1，载气：N2，流速20ml*min-1，载气：N2，流速2ml*min^-1。

按照上述方法制备样品溶液，进行气相色谱检测，检测结果如图3所示，其检测得到的 组分色谱峰总个数为20个，保留时间分别为2.05min、2.47min、3.21min、3.37min、 7.20min、9.13min、9.53min、10.09min、12.95min、13.42min、13.82min、14.65min、15.30min、 15.94min、16.27min、16.75min、17.81min、18.45min、19.04min、19.49min，且各色谱 峰分离度较好。

实施例四胆舒胶囊气相色谱检测

样品制备方法：取胆舒胶囊内容物0.72g，置具塞试管中，加入无水乙醇10ml，充分振 摇或超声后静置20min，滤过，取续滤液即得；

柠檬烯对照品制备方法：取柠檬烯对照适量，精密称定，加无水乙醇制成约每1ml含 480μg溶液。

桉油精对照品制备方法：取桉油精对照适量，精密称定，加无水乙醇制成约每1ml含 36μg溶液。

薄荷酮对照品制备方法：取薄荷酮对照适量，精密称定，加无水乙醇制成约每1ml含 640μg溶液。

胡薄荷酮对照品制备方法：取胡薄荷酮对照适量，精密称定，加无水乙醇制成约每1ml 含190μg溶液。

薄荷脑对照品制备方法：取薄荷脑对照适量，精密称定，加无水乙醇制成约每1ml含 3800μg溶液。

色谱条件：初始温度75℃，保持4min，以2℃·min^-1的速率升温至100℃，再以6℃·min^-1的速率升温190℃，进样口温度为250℃，FID检测器，检测器温度为250℃，进样量为 1.0μl，分流比为40:1，载气：N2，流速2ml*min^-1。

按照上述方法制备样品溶液和对照品溶液，分别进行气相色谱检测，检测结果如图4所 示，其检测得到的组分色谱峰总个数为20个，保留时间分别为2.03min、2.43min、 3.14min、3.29min、6.96min、8.86min、9.24min、9.79min、12.59min、13.06min、13.46min、 14.26min、14.89min、15.54min、15.87min、16.33min、17.37min、18.00min、18.58min、 19.04min。根据对照品出峰时间可以看出，其中3号峰为柠檬烯(3.14min)，4号峰为 桉油精(3.29min)，6号峰为薄荷酮(8.86min)，15号峰为胡薄荷酮(15.87min)， 16号峰为薄荷脑(16.33min)，且各色谱峰分离度好。

实施例五胆舒胶囊气相色谱检测

样品制备方法：取胆舒胶囊内容物0.72g，置具塞试管中，加入无水乙醇10ml，充分振 摇或超声后静置20min，滤过，取续滤液即得；

色谱条件：初始温度75℃，保持4min，以2℃·min^-1的速率升温至100℃，再以6℃·min^-1的速率升温190℃，进样口温度为250℃，FID检测器，检测器温度为250℃，进样量为 1.0μl，分流比为40:1，载气：N2，流速2ml*min^-1。

按照上述方法制备样品溶液，分别对6批次的胆舒胶囊进行气相色谱检测，检测结 果见图5，其中6批次样品出峰时间一致，出峰面积一致，表明该方法重现性良好，检 测结果稳定。