一种exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉及其制备方法

摘要

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉及其制备方法。本发明主要针对大黄炮制品存在总蒽醌减少，游离蒽醌类衍生物和没食子酸含量少，结合型二蒽酮类衍生物含量高的问题，提供一种exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉。本发明exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉通过下述方法制成：(1)、将大黄粉碎成大黄粗粉，灭菌；(2)、按照体积比为1:30～50的比例取exigua酿酒酵母菌和蒸馏水混合均匀制成exigua酿酒酵母菌液，再按照1千克大黄粗粉中加入2500～3000mLexigua酿酒酵母菌液的比例，取exigua酿酒酵母菌液加入大黄粗粉中，混合均匀，在28～32℃温度下发酵培养3～5天，然后将发酵后的大黄发酵混合物在50～80℃温度下烘干，粉碎成细粉，即exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉。

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉及其制备方法。

背景技术

中药大黄为蓼科植物掌叶大黄RheumPalmatumL、唐古特大黄Rheumtanguticum MaximexBalf或药用大黄RheumOfficinaceBaill的干燥根及根茎，具有泻下攻积，清热泻 火，凉血解毒，逐瘀通便，利湿退黄的功效。大黄是中医临床应用最为广泛的中药之一。化 学成分主要含有：(1)游离蒽醌类衍生物：大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大 黄酸；(2)结合型二蒽酮类衍生物：为大黄的主要泻下成分，番泻叶甙A、B；(3)没食子酸。 其中游离蒽醌类衍生物是主要的抗菌活性物质；没食子酸具有抗炎、抗突变、抗氧化、抗自 由基等多种生物活性，同时没食子酸具有抗肿瘤作用。只有结合型二蒽酮类衍生物具有很强 的泻下功效，因此增加游离蒽醌类衍生物和没食子酸的含量，减少结合型二蒽酮类衍生物的 含量成为炮制大黄的重点。

目前临床应用有：大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭。不同炮炙方法对蒽醌类成份的影响 是比较大的，酒炒与醋炒由于受热程度较轻，一般为160-170°，酒大黄总蒽醌减少约1/10， 其中结合性蒽醌减少了1/4。用蒸、炖、煮法炮炙大黄，受热温度在100°左右，但对结合型 与游离型蒽醌类衍生物均产生较大影响，含量全部明显下降。熟大黄总蒽醌量减少1/4以上， 其中结合性大黄酸减少近1/2，鞣酸含量也减少1/3。炒炭受热程度一般达到250-300°，蒽 醌类衍生物含量均剧烈下降，大黄炭总蒽醌只减少约1/10，而结合性蒽醌减少约4/5，结合 性大黄酸也减少2/3，鞣酸含量仅减少1/3。酒炒大黄与醋炒大黄总游离蒽醌衍生物量下降 1/7-1/5，游离大黄酸及结合型蒽醌类衍生物未受影响，大黄炭全部蒽醌类衍生物量均剧烈下 降，仅保留有1/3左右。仅游离蒽醌衍生物减量，结合型甙类受影响。，

发明内容

本发明主要针对常规的大黄炮制品存在总蒽醌减少，其中结合性蒽醌减少了1/4，游离 蒽醌类衍生物和没食子酸的含量少，结合型二蒽酮类衍生物的含量高的问题，提供一种exigua 酿酒酵母菌发酵大黄粉。

本发明的另一目的是提供exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉的制备方法。

本发明为解决上述问题而采取的技术方案为：

本发明exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉通过下述方法制成：

(1)、将大黄粉碎成大黄粗粉，灭菌；

(2)、按照体积比为1:30～50的比例取exigua酿酒酵母菌和30～40℃的蒸馏水混合均 匀制成exigua酿酒酵母菌液，再按照1千克大黄粗粉中加入2500～3000mLexigua酿酒酵母 菌液的比例，取exigua酿酒酵母菌液加入大黄粗粉中，混合均匀，在28～32℃温度下发酵 培养3～5天，然后将发酵后的大黄发酵混合物在50～80℃温度下烘干，粉碎成细粉，即exigua 酿酒酵母菌发酵大黄粉。

所述的exigua酿酒酵母菌中含菌量为1.5×10⁶～1.5×10⁸个/mL。

本发明exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将大黄粉碎成大黄粗粉，灭菌；

(2)、按照体积比为1:30～50的比例取exigua酿酒酵母菌和30～40℃的蒸馏水混合均 匀制成exigua酿酒酵母菌液，再按照1千克大黄粗粉中加入2500～3000mLexigua酿酒酵母 菌液的比例，取exigua酿酒酵母菌液加入大黄粗粉中，混合均匀，在28～32℃温度下发酵 培养3～5天，然后将发酵后的大黄发酵混合物在50～80℃温度下烘干，粉碎成细粉，即exigua 酿酒酵母菌发酵大黄粉。

本发明采用上述技术方案，利用微生物产生的酶系发酵中药，使微生物作用于中药底物 或微生物直接转化中药底物，以共同产生新的活性成份，提高中药药效，降低中药不良反应， 去除中药中的大分子杂质，使中药化学成份进行调整，改变药物作用，应用微生物exigua酿 酒酵母菌(Kazachstaniaexigua)发酵中药大黄的生产工艺，使大黄中①游离型蒽醌类衍生 物：大黄酚增加了20％-35％，大黄素增加了50％-60％，大黄素甲醚增加了30％-40％，芦荟大黄 素增加了70％-80％，大黄酸增加了40％-50％；②结合型二蒽酮类衍生物：番泻叶甙A，减少了 50％-60％，番泻叶甙B减少了30％-45％；③没食子酸增加了200％-300％。没食子酸是具有抗炎、 抗突变、抗氧化、抗自由基等多种生物活性，同时没食子酸具有抗肿瘤作用，通过微生物发 酵炮炙大黄，在药材组织内进行成份的调整，比用传统炮炙方法和提取分离手段简便而稳定， 且临床运用形式是发挥炮制品全成份的总体综合作用，有利于工业化大生产，增加了新的大 黄炮炙品种，能使中医传统用药的优势得以充分体现，因此本发明exigua酿酒酵母菌发酵大 黄粉可有效增加大黄的逐瘀解毒作用，达到活血逐瘀通便作用，缓解大黄的剧烈泻下对胃肠 道的不良反应。

具体实施方式

实施例1

一种exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉，通过下述方法制成：

(1)、将大黄粉碎成大黄粗粉，钴60照射灭菌；

(2)、按照体积比为1:30的比例取exigua酿酒酵母菌和30℃的蒸馏水混合均匀制成 exigua酿酒酵母菌液，再按照1千克大黄粗粉中加入2500mLexigua酿酒酵母菌液的比例， 取exigua酿酒酵母菌液加入大黄粗粉中，混合均匀，在28℃温度下发酵培养3天，然后将 发酵后的大黄发酵混合物在50℃温度下烘干，粉碎成细粉，即exigua酿酒酵母菌发酵大黄 粉，其中exigua酿酒酵母菌含菌量为1.5×10⁸个/mL。

利用高效液相色谱法进行含量测定，其中用2010年版中华人民共和国药典(一部)大 黄含量测定项：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚高效液相色谱法测定。 再用《现代中药研究与实践》中《大黄酒炙前后8种成分的含量比较》中的含量测定测定方 法测定：没食子酸、番泻苷A、番泻苷B。

对发酵前和发酵后的大黄粉进行检测，其中生大黄粉的检测结果见表1，制成的exigua 酿酒酵母菌发酵大黄粉检测结果见表2：

表1生大黄粉的检测结果mg/g

批号 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 没食子酸 番泻苷A 番泻苷B 1 1.778 4.218 2.601 17.753 22.289 5.937 0.322 0.381 2 1.695 4.220 2.578 17.363 22.197 6.003 0.334 0.391 3 1.754 4.192 2.623 17.617 22.098 6.134 0.315 0.379 平均值 1.742 4.21 2.60 17.578 22.195 6.025 0.324 0.387

表2exigua酿酒酵母菌大黄粉的检测结果mg/g

批次 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 没食子酸 番泻苷A 番泻苷B 1 3.027 6.005 4.046 22.918 30.418 18.946 0.167 0.291 2 3.152 6.023 4.074 23.012 30.638 19.045 0.151 0.213 3 2.974 5.981 4.136 22.873 30.541 18.893 0.160 0.275 平均值 3.051 6.003 4.085 22.934 30.532 18.961 0.159 0.259

实施例2

一种exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉，通过下述方法制成：

(1)、将大黄粉碎成大黄粗粉，钴60照射灭菌；

(2)、按照体积比为1:40的比例取exigua酿酒酵母菌和35℃的蒸馏水混合均匀制成 exigua酿酒酵母菌液，再按照1千克大黄粗粉中加入2800mLexigua酿酒酵母菌液的比例， 取exigua酿酒酵母菌液加入大黄粗粉中，混合均匀，在30℃温度下发酵培养4天，然后将 发酵后的大黄发酵混合物在65℃温度下烘干，粉碎成细粉，即exigua酿酒酵母菌发酵大黄 粉，其中exigua酿酒酵母菌含菌量为1.5×10⁷个/mL。

利用高效液相色谱法进行含量测定，其中用2010年版中华人民共和国药典(一部)大 黄含量测定项：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚高效液相色谱法测定。 再用《现代中药研究与实践》中《大黄酒炙前后8种成分的含量比较》中的含量测定测定方 法测定：没食子酸、番泻苷A、番泻苷B。

对发酵前和发酵后的大黄粉进行检测，其中生大黄粉的检测结果见表3，制成的exigua 酿酒酵母菌大黄粉检测结果见表4：

表3生大黄粉的检测结果mg/g

批号 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 没食子酸 番泻苷A 番泻苷B 1 1.778 4.218 2.601 17.753 22.289 5.937 0.322 0.381 2 1.695 4.220 2.578 17.363 22.197 6.003 0.334 0.391 3 1.754 4.192 2.623 17.617 22.098 6.134 0.315 0.379 平均值 1.742 4.21 2.60 17.578 22.195 6.025 0.324 0.387

表4exigua酿酒酵母菌大黄粉的检测结果mg/g

批次 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 没食子酸 番泻苷A 番泻苷B 1 3.138 6.017 4.051 22.892 30.529 19.055 0.164 0.287 2 3.097 6.113 4.102 23.122 30.647 19.103 0.148 0.215 3 2.996 5.997 4.068 22.783 30.551 18.984 0.159 0.249 平均值 3.077 6.042 4.073 22.962 30.575 18.380 0.157 0.250

实施例3

一种exigua酿酒酵母菌发酵大黄粉，通过下述方法制成：

(1)、将大黄粉碎成大黄粗粉，钴60照射灭菌；

(2)、按照体积比为1:50的比例取exigua酿酒酵母菌和40℃的蒸馏水混合均匀制成 exigua酿酒酵母菌液，再按照1千克大黄粗粉中加入3000mLexigua酿酒酵母菌液的比例， 取exigua酿酒酵母菌液加入大黄粗粉中，混合均匀，在32℃温度下发酵培养5天，然后将 发酵后的大黄发酵混合物在80℃温度下烘干，粉碎成细粉，即exigua酿酒酵母菌发酵大黄 粉，其中exigua酿酒酵母菌含菌量为1.5×10⁶个/mL。

利用高效液相色谱法进行含量测定，其中用2010年版中华人民共和国药典(一部)大 黄含量测定项：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚高效液相色谱法测定。 再用《现代中药研究与实践》中《大黄酒炙前后8种成分的含量比较》中的含量测定测定方 法测定：没食子酸、番泻苷A、番泻苷B。

对发酵前和发酵后的大黄粉进行检测，其中生大黄粉的检测结果见表5，制成的exigua 酿酒酵母菌大黄粉检测结果见表6：

表5生大黄粉的检测结果mg/g

批号 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 没食子酸 番泻苷A 番泻苷B 1 1.778 4.218 2.601 17.753 22.289 5.937 0.322 0.381 2 1.695 4.220 2.578 17.363 22.197 6.003 0.334 0.391 3 1.754 4.192 2.623 17.617 22.098 6.134 0.315 0.379 平均值 1.742 4.21 2.60 17.578 22.195 6.025 0.324 0.387

表6exigua酿酒酵母菌大黄粉的检测结果mg/g

批次 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 没食子酸 番泻苷A 番泻苷B 1 3.153 6.014 4.123 23.148 30.513 19.127 0.156 0.247 2 3.098 6.135 4.068 23.015 30.784 19.210 0.147 0.202 3 2.987 6.045 4.136 22.998 30.698 19.415 0.139 0.235 平均值 3.049 6.064 4.109 23.053 30.665 19.250 0.147 0.228