具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物及其应用

摘要

本发明公开了一种具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，本发明取新鲜的当归茎叶自然干燥或在60℃低温干燥后，粉碎，过筛，得当归干燥茎叶，取当归干燥茎叶，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇或水提取，得到提取物，浓缩，干燥，得到具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物。本发明以废弃的当归茎叶为原料，通过大量实验筛选其生物活性，优选得到具有很好的抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，本发明充分利用当归废弃的茎叶，变费为宝，制备得到的提取物可以用于制备绿色环保、高效、低毒的生物农药，具有重要的环境保护意义和经济价值，值得推广和应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药提取物，具体涉及一种以当归茎叶为原料，制备得到具有抗腐烂茎 线虫活性的提取物。

背景技术

随着我国大中药产业的快速发展和健康服务业的不断推进，以及国际市场对源于自然资 源性产品的青睐，促使中药及天然药用生物资源原料的生产规模不断扩大，资源经济产业链 得到延伸和拓展。与此同时，在中药资源产业化过程中也产生了巨量的中药废弃物。近年来 我国中药及天然药用生物资源生产面积已超过2.40×106hm²，药材产量可达5.40×10⁶吨， 而废弃的植物根系、地上茎叶等组织器官生物量高达1.1×107-1.6×10⁷吨，造成严重的资源 浪费和环境污染。据初步统计，以中药制药为主体的中药资源产业化过程中每年消耗植物类 药材约7.0×10⁵吨，产生的废弃组织器官、废渣等高达数百万吨，中药废弃物一般含水量较 高，且含有一定营养成分，极易腐败，对环境易造成严重污染。目前对中药废弃物的处理方 法：一是作为废弃物集中堆放或掩埋，这样不仅占用大量土地，产生大量有害发酵气体，而 且易污染地下水；二是将中药废弃物干燥后焚烧，但焚烧后产生大量烟尘、二氧化碳等排放 物，造成环境污染和资源的极大浪费。因此，在中药资源产业化过程中，应重视中药废弃物 的产生及其资源化利用问题，按照循环经济理念，遵循经济效益、生态效益和社会效益相统 一的发展原则，提高资源综合利用效率，延伸资源经济产业链，促进中药资源产业的健康可 持续发展。

腐烂茎线虫(DitylenchusdestructorThorne)属线虫纲、垫习目、茎线虫属，主要分布于 美国、加拿大、秘鲁、伊朗、巴基斯坦、日本、新西兰、南非和许多欧洲国家，也是我国重 要的进境植物检疫性线虫，主要分布于我国河南、山东、河北、北京等地。该线虫主要侵染 甘薯、马铃薯等农作物以及当归、薄荷、人参等多种中药材，造成农产品及中药材大量减产， 品质低劣，该线虫病害是一种毁灭性病害。因此，建立有效可行的防治技术体系，以期促进 农作物及中药材产量和品质的提高。

目前腐烂茎线虫的防治方法主要包括农业防治、物理防治及化学防治等，然而在实际生 产中化学药剂防治腐烂茎线虫的危害仍然是目前综合防治线虫病害中重要的手段之一，其中 有机磷类杀虫剂较多品种被用于该线虫的化学防治。我国甘薯生产区多使用神农丹、灭线磷、 克线丹等一些药剂来防治腐烂茎线虫，在防治初期虽然取得了一定效果，但由于此类药剂高 毒、高残留，安全性低，严重环境污染；此外，这些药剂的长期大量使用导致线虫对农药产 生抗性，使之更加难于除治。因此，研制开发一种高效、低毒、低残留、低成本而又方便使 用的生物型杀线虫剂成为当前的迫切需要。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于充分利用中药废弃资源，变费为宝，以当归茎叶为原料， 提取得到具有抗腐烂茎线虫用途的提取物，本发明提供的以当归茎叶为原料的中药提取物， 绿色环保，成本低，抗腐烂茎线虫活性强，具有重要的环境保护意义。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，它是通过以下方法制备得到的:取新鲜的当 归茎叶自然干燥或在60℃低温干燥后，粉碎，过筛，得当归干燥茎叶，取当归干燥茎叶，用 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇，乙醇或水提取，得到提取物，浓缩，干燥，得到具有抗腐烂茎 线虫活性的中药提取物。

作为优选方案，以上所述的具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，取当归干燥茎叶，加 入当归干燥茎叶重量6～15倍体积量的石油醚提取，得到石油醚提取物，浓缩，干燥，得到具 有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物。

作为优选方案，以上所述的具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，提取方法为回流提取 法，超声提取法，连续回流提取法，提取次数为1～3次，每次0.5～2小时。

本发明提供的具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物在制备抗腐烂茎线虫活性农药制剂 中的应用。

抗腐烂茎线虫活性筛选实验

一、实验方法

1、当归茎叶样品的制备

将新鲜的当归茎叶自然干燥或在60℃低温干燥后，粉碎，过筛，即得当归干燥茎叶样品。

2、中药提取物抗腐烂茎线虫的研究

取当归干燥茎叶样品，用体积浓度为70％的乙醇回流提取，浓缩得提取物，精确称取当 归干燥茎叶70％乙醇提取物10mg，分别溶于DMSO中制成样品母液。试验时以DMSO稀释 成不同浓度的试液进行线虫触杀活性测定。吸取适量线虫悬浮液分别注入96孔细胞培养板的 样品孔内，每孔含线虫约20～40条，补充无菌水至总体积300μL，每处理设3组重复，分别 以加入相应浓度的DMSO和无菌水作为对照(CK)。25℃分别培养1、3、5、7d后进行线虫 死亡与存活情况的统计。计算公式如下：

线虫死亡率(％)＝(死亡线虫数/供试线虫数)×100％

3、当归茎叶不同提取部位抗腐烂茎线虫的研究

称取适量的当归茎叶干燥样品，分别采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水，回流提取后， 浓缩至干，采用DMSO进行复溶，制备成不同浓度的试液进行线虫触杀活性测定。

二、实验结果

1、采用对倍稀释法配制500μg/mL，250μg/mL，125μg/mL，62.5μg/mL，31.25μg/mL， 15.625μg/mL，7.8125μg/mL的当归茎叶提取物试液进行线虫的触杀活性测定，结果表明，高 浓度的当归茎叶提取物对线虫的触杀作用较强，当浓度超过31.25μg/mL时，对线虫的触杀 作用基本上差异不大，其中250μg/mL当归茎叶提取物对线虫的致死率相对较强；此外，随 着共培养时间的延长，各种浓度的当归茎叶提取物对线虫的触杀作用增强，当提取物与线虫 共培养7天，各种浓度提取物对线虫的致死率基本达到100％，其中31.25μg/mL以上浓度的 提取物在与线虫共培养5天时，线虫的致死率可超过70％(如图1所示)。

2、采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水不同提取溶剂对当归茎叶的进行提取，将提取液 低温浓缩至干后，采用DMSO进行复溶，得当归茎叶不同提取部位，并考察不同提取部位对 线虫的触杀作用，如图2的实验结果表明，当归茎叶中非极性提取部位对线虫的触杀作用较 强，尤其是石油醚的提取部位对线虫的致死效果最强，与线虫共培养至第3天，线虫的致死 率可达到58.2％，显著高于其它试验组致死率。

有益效果：本发明提供的具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物具有以下优点：

本发明以废弃的当归茎叶为原料，通过大量实验筛选其生物活性，优选得到具有很好的 抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，本发明变费为宝，充分利用当归废弃的茎叶，制备得到的 提取物可以用于制备绿色环保、高效、低毒的生物农药，具有重要的环境保护意义和经济价 值，值得推广和应用。

附图说明

图1是不同浓度的中药提取物对腐烂茎线虫的触杀作用。

图2是当归茎叶不同提取部位对腐烂茎线虫的触杀作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于 限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改 均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1

一种具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，它是通过以下方法制备得到的:取新鲜的当 归茎叶自然干燥后，粉碎，过筛，得当归干燥茎叶，取当归干燥茎叶，用8倍量的石油醚回 流提取3次，每次2小时，得到提取物，浓缩，干燥，得到具有抗腐烂茎线虫活性的中药提 取物。

实施例2

一种具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，它是通过以下方法制备得到的:取新鲜的当 归茎叶在60℃低温干燥后，粉碎，过筛，得当归干燥茎叶，取当归干燥茎叶，用12倍量的 正丁醇连续回流提取2次，每次3小时，得到提取物，浓缩，干燥，得到具有抗腐烂茎线虫 活性的中药提取物。

实施例3

一种具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，它是通过以下方法制备得到的:取新鲜的当 归茎叶在60℃低温干燥后，粉碎，过筛，得当归干燥茎叶，取当归干燥茎叶，用10倍量的 乙酸乙酯，超声提取2次，每次3小时，得到提取物，浓缩，干燥，得到具有抗腐烂茎线虫 活性的中药提取物。

采用本发明实施例1～3制备得到的具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物，加入助剂制成 乳油、悬浮剂、可湿性粉剂、粒剂、水剂、母液、母粉等农业制剂。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发 明的保护范围。