一种尖孢镰刀菌及其在促进铁皮石斛生长中的应用

摘要

本发明公开了一种尖孢镰刀菌，其分类命名为尖孢镰孢(Fusarium？oxysporum)，菌株号为JSNL004，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC？No.11310，保藏日期为2015年9月10日。本发明尖孢镰刀菌JSNL004在提高铁皮石斛生长速度等方面作用效果显著；且能够人工培养，繁殖速度快，便于进行规模化生产，具有良好的开发应用前景。

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种尖孢镰刀菌及其在铁皮石斛抗病中的应用。

背景技术

铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，研究表明，从其种子萌发到苗的健康生长，无不需要共生真菌的参与。由于野生铁皮石斛资源濒临枯竭，目前，铁皮石斛的市场需求主要靠人工栽培，但人工种植铁皮石斛生长速度慢，平均产量低。菌根是土壤中菌根真菌与植物根系形成的具有特定形态结构和功能的共生体，是自然界中普遍存在的一种共生现象。兰科植物对菌根的依赖性较强，菌根真菌与植物根系互为条件形成共生体，在生理上是一个相互协调的整体，并在共同进化的过程中，形成特定的形态特征。菌根真菌与宿主植物的相互关系多数情况下是互利的，菌根真菌从植物体内获取生长必需的营养物质，而植物通过与共生真菌结合，也能更好的从土壤中得到所需的养分及水分等。合理利用菌根资源，提高铁皮石斛的抗病能力，在一定程度上减少化学农药的施用量，这也符合农业的可持续发展战略。因此，菌根菌剂相关研究已成为铁皮石斛产业的一个重要方向。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对铁皮石斛促生作用效果显著地菌根真菌——子囊菌亚门镰刀菌属尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004。

本发明还要解决的技术问题是提供上述真菌在提高铁皮石斛生长速度中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种尖孢镰刀菌，其分类命名为尖孢镰孢(Fusariumoxysporum)，菌株号为JSNL004，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.11310，保藏日期为2015年9月10日。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。

上述菌株JSNL004是2011年8月在浙江省乐清市铁皮石斛栽植区内生长状况较好的植株上分离获得的，该菌株对铁皮石斛促生作用显著。

尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004的菌落特征如下：

形态学特征观察表明：在PDA平叛上培养后，肉眼观察菌落形态，发现其菌丝体呈绒毛状，并稍带有乳黄色色素(图1A)；小型分生孢子单胞，卵形，着生于单生瓶梗上，常在瓶梗顶端聚成团(图1B)。扩增ITS区全序列并进行测序，PCR扩增得到的16sRNA全序列如SEQIDNo：1所示。

上述尖孢镰刀菌对铁皮石斛促生作用的应用也在本发明的保护范围之内。

具体的应用方法是：将尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004制备成固体菌剂，置于铁皮石斛幼苗栽培基质表面，每丛铁皮石斛幼苗的固体菌剂接种量为5g，施用菌剂后，基质相对含水量维持在60％以上10天，以确保菌丝在基质内成活。

其中，所述的固体菌剂按如下方法制备得到：以棉籽壳菌渣为培养基质、硝酸铵为外源氮源、蔗糖为外源碳源，制备成固体培养基，灭菌，接种尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004，在27℃、12h光照+12h黑暗、pH6-8条件下培养25～30天，将培养好的菌剂切割成1cm³大小的块状物，用于铁皮石斛植株菌根菌剂的接种。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是：

(1)尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004对铁皮石斛促生作用效果较为显著。

(2)尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。

附图说明

图1为铁皮石斛菌根真菌JSNL004的形态特征。

图2为JSNL004菌对铁皮石斛的促生能力分析。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：

将菌根真菌尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004制备成固体菌剂。具体制备方式为：以棉籽壳菌渣为培养基质、硝酸铵为外源氮源、蔗糖为外源碳源，制备成固体培养基质装入高压灭菌袋内，于121℃和101.3千帕的高压条件下灭菌20分钟。待培养基质冷却后在无菌条件下接种菌根真菌JSNL004，然后进行人工培养。具体培养条件为26℃、12h光照+12h黑暗、pH6.5，培养25～30天。将培养好的菌剂加工成1cm³大小的块状物，放置于当年栽种的铁皮石斛幼苗栽培基质表面。栽培铁皮石斛选用口径15cm的营养钵，每个营养钵栽培1丛(5株)铁皮石斛。接种时选择长势基本一致的铁皮石斛植株，并进行苗高和地径的测定。每丛铁皮石斛种苗的固体菌剂接种量为5g。施用菌剂后，基质相对含水量维持在60％以上10天，确保菌丝在基质内成活。接种后6个月，进行铁皮石斛根系的菌根化程度检测，确保接种的菌根真菌尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)JSNL004已与铁皮石斛根部结合，形成了菌根。接种后12个月，进行铁皮石斛菌根化植株的促生效果分析(表1，图2)。以未接种菌根菌剂，仅接种等量棉籽壳菌渣的铁皮石斛植株为对照植株(CK)。

表1JSNL004对铁皮石斛植株的促生效果