Vaginatin在制备防治肥胖药品或保健品中的应用

摘要

本发明公开了Vaginatin在制备防治肥胖药品或保健品中的应用，本发明通过大量实验筛选研究表明，Vaginatin具有很好的治疗肥胖的作用，对肥胖及肥胖合并高血脂和肥胖合并高血糖等疾病均具有非常好的治疗效果，且实验过程中，未表现出副作用等不良反应，有望开发成为安全有效，用于防治肥胖及其并发症的药品或保健品。

说明书

技术领域

本发明涉及一种倍半萜类化合物，具体涉及Vaginatin在防治肥胖保健品或药品中的应用。

背景技术

肥胖是一种由多种因素引起的慢性代谢性疾病，特点是体脂占体重的百分比异常增高并在某些局部过多沉积脂肪。据世界卫生组织统计，目前全球约有39％的成年人存在超重情况，而存在肥胖的人群约有13％。肥胖本身并不致命，但由于肥胖与多种疾病如糖尿病，高血脂，高血压，癌症等发生相关，正受到越来越多的关注。肥胖的发生是人体内摄入热量高于消耗，而造成大量前脂肪细胞分化形成脂肪细胞。所以抑制前脂肪细胞分化生成脂肪细胞，被认为是治疗肥胖的一种方式。脂肪细胞分化过程伴随着细胞结构和功能的改变，是一个高度精密的调控过程，多种转录因子、信号通路及miRNA均在脂肪细胞分化过程中发挥作用。其中PPARγ和C/EBPs家族蛋白在前脂肪细胞分化为脂肪细胞过程中起着关键作用。

目前，防治肥胖的药物疗效一般，因此，很有必要在现有技术的基础之上设计研发一种具有很好的防治肥胖及其肥胖引起的糖尿病，高血脂，高血压或脂肪肝疾病的药物。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，通过大量实验筛选，提供Vaginatin在制备防治肥胖的药品及保健品中的应用，开发其新的临床用途。实验结果表明，Vaginatin具有很好的抑制前脂肪细胞分化，降低细胞甘油三酯含量，同时可以增加胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

Vaginatin的分子式为C₂₀H₃₀O₄，分子量为334.2，结构式如下：

Vaginatin的化学名称为：10α-当归酰氧基-5β-羟基4α(H)-胡萝卜-8-烯-2-酮。

本发明通过大量实验研究表明，Vaginatin具有很好的减肥的作用，可用于制备治疗肥胖药品或保健品中的应用。

作为优选方案，Vaginatin在制备防治肥胖症合并高血糖的药品或保健品中的应用。

作为优选方案，Vaginatin在制备防治肥胖合并高脂血症的药品或保健品中的应用。

作为优选方案，Vaginatin在制备防治肥胖同时降低肝脂肪或内脏脂肪的药品及保健品中的应用。

本发明所述的Vaginatin在制备防治肥胖药物中的应用，将Vaginatin和药学上可接受的载体制成胶囊剂、颗粒剂、喷雾剂、注射剂、微囊、片剂、软膏剂或口服液剂型的药品或保健品。

本发明提供的Vaginatin制成胶囊剂时，把Vaginatin和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

将本发明提供的Vaginatin制成片剂时，把Vaginatin和乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁,混合均匀，然后压片制成片剂。

本发明提供的Vaginatin制成颗粒剂时，把Vaginatin和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

本发明提供的Vaginatin制成注射液时，取Vaginatin加入生理盐水溶解然后加入活性碳,搅拌均匀，80℃加热30分钟，过滤，调节pH值，用垂熔玻璃漏斗或其它滤器过滤至澄明,灌装，在100至115℃灭菌30分钟制成注射液。

有益效果：本发明通过大量实验筛选，发现Vaginatin具有很好的治疗肥胖的作用，并且对肥胖合并高血糖、高血脂和脂肪肝等疾病均具有非常好的治疗效果，并且未见有不良反应，有望开发成为新一代安全有效，用于防治肥胖的药物。

附图说明

图1为Vaginatin对3T3-L1前脂肪细胞分化影响的柱状图。

图2为Vaginatin对PPARγ、C/EBPα、LPL和FABP4表达的影响图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

具有防治肥胖的化合物Vaginatin，其通过以下方法制备得到：

取明党参根皮8kg，粉碎，粗粉用5倍量95％乙醇回流提取3次，合并滤液，浓缩至无醇味，石油醚萃取并回收石油醚至形成浸膏(142g)。拌140g硅胶后，进行500g硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，比例为100:1、20:1、10:1、2:1。将石油醚：乙酸乙酯20:1部位通过硅胶柱反复洗脱(石油醚：乙酸乙酯20:1)并通过中压ODS柱色谱分离。用5倍量二氯甲烷-石油醚(1:2)进行重结晶，得到精制vaginatin约200mg。经¹H-NMR，MS确定为Vaginatin，分子式为C₂₀H₃₀O₄，分子量为334。

实施例2Vaginatin对前脂肪细胞3T3-L1的生长抑制

1.实验方法

取对数生长期的3T3-Ll前脂肪细胞每孔8000～10000个接种于96孔板，每孔体积200μL。将细胞分为阴性对照组(细胞用培养基)、溶媒对照组(细胞用含0.1％DMSO的培养基处理)、给药组(细胞用500、250、125、62.5、31.25、15.625μM浓度梯度的Vaginatin药物处理)。培养24h后，将上清液吸出，给药组加入200μL含各浓度梯度的药物的培养基，DMSO体积分数＜0.1％。然后将96孔板置于培养箱中培养48h。随后每孔加入5mg/mLMTT试剂20μL，继续培养4h。然后轻轻吸出96孔板中培养液，加入DMSO，150μL/孔。震荡摇匀10min，在490nm波长处用酶标仪测定各孔吸光度(A)值。实验重复3次。

2.实验结果

Vaginatin对细胞增殖影响的结果见表1。由表1可知，当Vaginatin浓度达到250μM及以上时，对前脂肪细胞的增殖有较大影响(p<0.05)。当浓度低于125μM时，Vaginatin并未对3T3-L1细胞产生明显的抑制作用。

表1.Vaginatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响(n＝3)

*p<0.05与对照组比较

实施例3Vaginatin对前脂肪细胞分化的影响

1.实验方法

取对数生长期的3T3-Ll前脂肪细胞以每孔30000个接种于24孔板，以基础培养液培养，至细胞完全铺满孔底，融合48h后开始诱导。融合后的细胞加含0.5mMIBMX，10mg·L^-1胰岛素、1μM的地塞米松、10％FBS的DMEM培养液培养，每孔500μL。48h后弃去原液换以含10mg·L-1胰岛素，10％FBS的DMEM培养液继续培养48h后以含10％FBS的DMEM培养液培养96h，中途换液一次。

在诱导的同时，加入不同浓度药物(50μM，25μM，5μM和0μM的vaginatin)。于诱导后的8d取出细胞，4％多聚甲醛固定，PBS清洗后油红。染色，拍片后加入200μL乙醇溶液提取，振荡5mim,酶标仪于570nm处测定孔吸光度值(A)。

3T3-L1前脂肪细胞在诱导分化为脂肪细胞过程中，可见形态由长梭形逐渐变为椭圆形或圆形，同时形成大量小脂滴分布在细胞外围，油红染色可见脂滴成戒环状。而在诱导分化同时加入药物，当药物浓度达到25μM时可见视野中脂滴数量明显少于空白组。与此同时，通过油红染色提取法测得OD值后计算的抑制率可以发现，25μM和50μM可以显著抑制前脂肪细胞分化为脂肪细胞，如图1。

实施例4Westernblot检测Vaginatin对脂肪细胞中各种蛋白表达的影响

1.实验方法

以不同浓度Vaginatin(50μM，25μM，5μM和0μM)作用于细胞，在诱导分化的8d收取细胞，提取总蛋白测定蛋白含量，调整所有样品至同一浓度。SDS-PAGE电泳、转膜、封闭，相应的一抗、HRP标记的二抗孵育，化学发光法显色。

2.实验结果

由图2可知，与模型组相比，Vaginatin在25～50μM时，能够显著抑制3T3-L1细胞中PPARγ、C/EBPα、LPL和FABP4蛋白的表达(p<0.05和p<0.01)。表明Vaginatin可抑制PPARγ、C/EBPα等关键调控因子的表达，从而具有抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化的作用。并且结果表明，Vaginatin能够降低脂肪细胞分化晚期的特征蛋白LPL和FABP4的表达。

实施例5Vaginatin对胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖摄取率影响

1.实验方法

将已诱导分化好的脂肪细胞分组进行处理，加入1μmol·L^-1地塞米松来诱导胰岛素抵抗，2d后，设模型组、阳性对照组(罗格列酮，终含量为3.4μg/mL^-1)，Vaginatin处理组(50μM，25μM和5μM)，同时加入地塞米松共培养2d。取上清，测定葡萄糖消耗量。葡萄糖含量使用葡萄糖检测试剂盒测定。

2.实验结果

Vaginatin对胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖摄取率影响的结果见表2。由表2可知，当Vaginatin浓度达到50μM时，可增加胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖摄取率。

表2Vaginatin对胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖摄取率影响

与*p<0.05与模型组比较

另外，实验结果表明，本发明提供的Vaginatin化合物具有明显的降低高血脂模型大鼠总胆固醇和甘油三酯的含量，具有很好的降低高血脂模型大鼠血脂的作用。

并且本发明检测Vaginatin化合物对糖尿病小鼠的空腹血糖的影响，实验结果表明，本发明提供的Vaginatin化合物能明显降低糖尿病小鼠的空腹血糖，具有明显的降血糖作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。