一种意大利石松种子生活力测定方法

摘要

本发明涉及国外引进优良防风固沙经济植物种子育苗技术领域，特别是常绿树种意大利石松种子生活力测定方法。该方法包括种子引进、种子处理、种皮破除、浸种、配置TTC溶液、染色、鉴定和统计。具体包括从国外引进当年成熟饱满的意大利石松种子装在棉布袋中储藏；种子放在烧杯中蒸馏水浸泡5～10min；浸泡在质量百分比浓度0.1%的HgCl

说明书

技术领域

本发明涉及国外引进优良防风固沙经济植物种子育苗技术领域，特别是常绿树种意大利石松种子生活力测定方法。

背景技术

种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或胚的生命力。种子生活力除了在种子质量评定中作为一个必不可少的衡量指标外，还对育苗造林技术具有重要的指导意义。例如，人们在播种前通过对种子生活力的测定,可以精确计算出播种量,进而降低种子的投入成本（特别是那些进口或者名贵的种子）。在农业生产中，测定种子生活力的常用方法有种子萌发法、TTC法、碘化钾法等。这些方法在实际的操作中存在很多问题。首先，由于具体方法选择或者某些关键环节的操作不当等原因，致使测定值远低于真实值(低于出苗率)。例如，采用种子萌发法测定种子生活力，如果待测种子具有休眠现象，那么测定结果肯定偏低；在TTC方法中,如果染色时间和种子处理时间掌握不好,测定的结果比真实值低；碘化钾法是测量松柏类种子生活力比较有效的方法,也存在这样的问题；其次，很多方法在具体的某些关键的步骤都给出一个范围。例如，浸种和染色的时间3～8h，对于具体的物种可能会不一样；再者，有些物种你严格参照TTC法或碘化钾法测定的生活力也可能远远低于出苗率。更重要的是在目前的沙漠生态系统中，种子生活力的测定常常参照农业上的方法，但是，由于沙漠生态系统中环境差异大，所以，产生的种子在形态和结构上与农业种子差异较大，因此，在沙生植物种子生活力的测定中，只是参照农业上的方法，对于具体的物种，测定方法选择，关键步骤等方面都应该根据具体种子的特性，做出相应的改变，形成一套具体而有效的方法。

意大利石松(PinuspineaL.)是一种常绿乔木，隶属于松科（chenopodiaceace）、松属(pinea)；原产于地中海，分布在南欧、北非和地中海北部的海岸沙滩。具有抗逆性强、耐瘠薄、喜生于光照充足、排水良好的沙地，具备根系发达、生长速度快、四季常绿和种子营养价值高的优点。由此可见，意大利石松符合我国西北沙区当前防风固沙植物新材料筛选要求。我们已经研究出了一种意大利石松容器种子育苗的方法，但是，关于意大利石松种子生活力的测定，至今尚无一套成熟的方法。而且，意大利石松种子价格较高，一粒种子大约1美元，所以，探索种子生活力的测定方法对于降低播种量十分重要。我们曾经通过种子萌发率来测定种子生活力，花费时间太长大约1个月，测量结果差异大；我们也采用碘化钾测定法，比较费时间，浸种18h和放置72h，然后染色，鉴定判断较为麻烦，并且测定的结果（46%）低于实际出苗率。

在国家林业局948项目“意大利石松种质资源及其培育技术引进”的资助下，我们通过反复试验，参照TTC法，探索出了意大利石松种子生活力的测定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种意大利石松种子生活力测定方法，以便于精确计算播种量，降低由于种子生活力计算不准确（通常用出苗率估计种子生活力）而造成的资源浪费。

为了实现所述目的，本发明采取的技术方案如下，一种意大利石松种子生活力的测定方法，包括种子引进、种子处理、种皮破除、浸种、配置TTC溶液、染色、鉴定和统计；具体步骤如下：

1.种子引进

通过购买的方式，经过海关检疫，从国外引进当年成熟饱满的意大利石松种子。

2.种子处理

2.1种子储藏：将意大利石松种子装在棉布袋中储藏，储藏期间避免烟熏、鼠害、虫害、水湿等；室温保持在13～30℃，相对湿度＜30%；

2.2除杂：将意大利石松种子放在实验台上,去除小的石块、大小和颜色与种子相似的石块杂物、明显发霉和种皮发黑的种子，意大利石松种子一般为黄色；

2.3水选：将除杂待测的种子放在大烧杯中加蒸馏水浸泡5～10min，然后用玻璃棒连续搅拌3～5min停止，等到液面静止5～20min，去除浮在水面上的种子；而后将沉在烧杯底部的种子取出得水选种子随即进行下步骤；

2.4种子消毒：将水选种子完全浸泡在质量百分比浓度0.1%的HgCl₂试剂中10～15min，取出，用蒸馏水反复冲洗3～5次得消毒种子，随即进行下步骤。

3.种皮破除

3.1浸种

意大利石松种皮坚硬，透水性差；为了使种子在浸种过程中提高吸水效率，采取了破除种皮的操作。从消过毒种子中随机地选择100粒种子，在常温下用蒸馏水浸泡4～8h后取出种子，用滤纸吸干种子表面的水分，然后进行破皮；

3.2破皮

破皮的方法有二种，方法一，在种皮上找到种脐，将绣花针放在种脐部位，然后轻轻地往里扎，在此过程中种皮会出现小的裂缝，就可以通过该裂缝用刀片拨开种皮，去掉黄褐色的内种皮，得到淡黄色的种子。在此过程中，特别注意不要用力过大，否则会伤害种子的胚。

方法二，在种皮上找到种脐，然后采用嗑瓜子的方法嗑种皮，当听见种皮破裂的声音时，取下种子，破除种皮（此方法容易掌握，对种子的伤害较小），最后，去掉褐色的内种皮，得到淡黄色的种子。值得注意的是，此操作的容易程度与种子浸泡时间有关，一般而言，浸泡时间越长，种子越容易破皮。

4．浸种

将淡黄色的种子100粒放在烧杯中,加入100～200mL蒸馏水，然后用玻璃棒搅拌；等到种子完全沉到烧杯底部时，将烧杯放在30℃～35℃的恒温箱中浸种8～12h，在此期间每隔3～4h,取出烧杯用玻璃棒搅拌。

5.配置TTC溶液

染色剂采用0.5%的TTC溶液，配置方法如下：称取0.5gTTC放入小烧杯中，先加少许乙醇用玻璃棒搅拌溶解后，再用蒸馏水稀释定容至100mL；TTC溶液最好随用随配，不宜久藏；溶液应遮光贮藏，若已变为红色，则不能继续使用。

6.染色

将经步骤4浸种后充分吸水的种子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒温箱进行染色，恒温箱的温度设置为30~35℃，染色过程中每隔3～4h用玻璃棒搅拌1～2min，使溶液换气，加快染色的速度，同时避免种子因无氧呼吸而导致的种子腐烂；染色的时间根据种子染色的程度一般保持在14~20h。

7.鉴定和统计

将已经染色的种子从TTC溶液中取出,用蒸馏水反复冲洗3～5次，然后用滤纸吸干种子表面的水分；而后用解剖刀片沿着种子的长轴方向将种子切成两半，任取其中一半，将被切平的一面朝上平铺在玻璃板上，放置10～15min，然后进行种子生活力的鉴定。鉴定标准如下：凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子；如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子；生活力=N/100×100%，其中：N代表已经染色的种子数。

本发明提供的方法填补了意大利石松种子生活力测定方法的空白，能够准确的反应意大利石松种子的生活力，从而客观精确计算出种子播种量,进而降低了种子的购置成本投入成本，降低了由于种子生活力计算不准确（现有技术有的是以出苗率估计种子生活力）而造成的资源浪费。

具体实施方式

实施例1

1．种子引进

2012年8月，通过购买的方式，经过海关检疫，从法国引进当年成熟饱满的意大利石松种子45kg。种子千粒重为643.3g，含水量：3.6%。

2种子处理

2.1种子储藏：将意大利石松种子装在棉布袋中储藏，储藏期间避免烟熏、鼠害、虫害、水湿等；室温保持在13～30℃，相对湿度＜30%。

2.2除杂：将意大利石松种子放在实验台上,去除如小的石块,大小和颜色与种子相似的石块等杂物、去除明显发霉和种皮发黑的种子，意大利石松种子一般为黄色。

2.3水选：将待测的种子放在大烧杯中加蒸馏水浸泡5min，然后用玻璃棒不断地搅拌3min停止，等到液面静止10min后，去除浮在水面上的种子。然后将沉在烧杯底部的种子取出，等待下一步操作。

2.4种子消毒：将水选后的意大利石松种子放入质量百分比浓度0.1%的HgCl₂试剂中浸泡10min取出，用蒸馏水反复冲洗3次。

3.种皮破除

3.1浸种

从消过毒的种子中随机地选择100粒种子，在常温下用蒸馏水浸泡4h，最后取出种子，用滤纸吸干种子表面的水分，然后进行破皮。

3.2破皮

在种皮上找到种脐，将绣花针放在种脐部位，然后轻轻地往里扎，在此过程中种皮会出现小的裂缝，就可以通过该裂缝用刀片拨开种皮，最后去掉黄褐色的内种皮，得到淡黄色的种子。在此过程中，特别注意不要用力过大，否则会伤害种子的胚。最后，去掉褐色的内种皮，得到淡黄色的种子。

4．浸种

将水选后淡黄色的种子100粒放在烧杯中,加入100mL蒸馏水，然后用玻璃棒搅拌。等到种子完全沉到烧杯底部时，将烧杯放在35℃的恒温箱中，浸种时间为8h,在此期间每隔3h,取出烧杯用玻璃棒搅拌,使得种子换气，避免发生由无氧呼吸而导致的种子腐烂，影响以后的染色。

5.配置TTC溶液

称取0.5gTTC放入小烧杯中，先加少许乙醇用玻璃棒搅拌溶解后，再用蒸馏水稀释定容至100mL。TTC溶液最好随用随配，不宜久藏。溶液应遮光贮藏。若已变为红色，则不能继续使用。

6.染色

将经步骤4浸种处理后充分吸水的种子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒温箱进行染色，恒温箱的温度设置为35℃，染色过程中每隔3h用玻璃棒搅拌1.5min，使溶液换气，加快染色的速度，同时避免种子因无氧呼吸而导致的种子腐烂；染色的时间16h。

7.鉴定及统计

将染色的种子从TTC溶液中取出,用蒸馏水反复冲洗3次,然后用滤纸吸干种子表面的水分；用解剖刀片沿着种子的长轴方向将种子切成两半，任取其中一半，将被切平的一面朝上平铺在玻璃板上，放置11min，然后进行种子生活力的鉴定。具体鉴定的标准如下：凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子。本实施例100粒种子均为具有生活力的种子，即种子生活力为100%。

实施例2

1.种子引进，使用2012年8引进的种子。

2.种子处理

2.1种子储藏：同实施例1。

2.2除杂：同实施例1。

2.3水选：将待测的种子放在大烧杯中加蒸馏水浸泡8min，然后用玻璃棒不断地搅拌4min停止，等到液面静止后12min，去除浮在水面上的种子。然后将沉在烧杯底部的种子取出，等待下一步操作。

2.4种子消毒：将水选后的意大利石松种子完全浸泡在质量百分比浓度0.1%的HgCl₂试剂中12min，取出，用蒸馏水反复冲洗4次。

3.种皮破除

3.1浸种

从消毒的种子中随机地选择100粒种子，在常温下用蒸馏水浸泡6h，取出种子，用滤纸吸干种子表面的水分，然后进行破皮。

3.2破皮

在种皮上找到种脐，采用嗑瓜子的方法嗑种皮，当听见种皮破裂的声音时，取下种子，破除种皮，并去掉褐色的内种皮，得到淡黄色的种子。

4．浸种

将淡黄色的种子100粒放在烧杯中,加入150mL蒸馏水，然后用玻璃棒搅拌；等到种子完全沉到烧杯底部时，将烧杯放在30℃的恒温箱中，浸种时间为10h,在此期间每隔4h,取出烧杯用玻璃棒搅拌,使种子换气。

5.配置TTC溶液：同实施例1。

6.染色

将经步骤4浸种后充分吸水的种子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒温箱进行染色，恒温箱的温度设置为32℃，染色过程中每隔4h或3h用玻璃棒搅拌1min，染色的时间18h。

7.鉴定及统计

将已经染色的种子从TTC溶液中取出,用蒸馏水反复冲洗5次,然后用滤纸吸干种子表面的水分,用解剖刀片沿着种子的长轴方向将种子切成两半，任取其中一半，将被切平的一面朝上平铺在玻璃板上，放置12min，然后进行种子生活力的鉴定。鉴定标准同实施例1。统计结果：生活力为99%。

100%。

实施例3

1.种子引进

2013年9月，通过购买的方式，经过海关检疫，从法国引进当年成熟饱满的意大利石松种子50kg。种子千粒重为646.0g，含水量：3.9%。

2.种子处理

2.1种子储藏：同实施例1。

2.2除杂：同实施例1。

2.3水选：将待测的种子放在大烧杯中加蒸馏水浸泡6min，然后用玻璃棒不断地搅拌5min停止，等到液面静止15min后，余同实施例1。

2.4种子消毒：将水选后的意大利石松种子完全浸泡在质量百分比浓度0.1%的HgCl₂试剂中15min，取出，用蒸馏水反复冲洗5次。

3.种皮破除

3.1浸种，同实施例2。

3.2破皮

同实施例1.

4．浸种

将淡黄色的种子100粒放在烧杯中,加入200mL蒸馏水，然后用玻璃棒搅拌，等到种子完全沉到烧杯底部时，将烧杯放在34℃的恒温箱中，浸种时间为10h,在此期间每隔3.5h，取出烧杯用玻璃棒搅拌。

5.配置TTC溶液：同实施例1。

6.染色

将经步骤4浸种后充分吸水的种子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒温箱进行染色，恒温箱的温度设置为32℃，染色过程中每隔4h用玻璃棒搅拌2min，染色时间20h。

7.鉴定及统计

将染色的种子从TTC溶液中取出,用蒸馏水冲洗5次,然后用滤纸吸干种子表面的水分；用解剖刀片沿着种子的长轴方向将种子切成两半，任取其中一半，将被切平的一面朝上平铺在玻璃板上，放置12min，然后进行种子生活力的鉴定。鉴定标准同实施例1。统计结果：种子生活力为100%。

实施例4

1.种子引进，同实施例3；

2.种子处理

2.1种子储藏：同实施例1；

2.2除杂：同实施例1；

2.3水选：将待测的种子放在大烧杯中加蒸馏水浸泡10min，然后用玻璃棒连续4min停止，等到液面静止18min后，去除浮在水面上的种子。

2.4种子消毒：将水选后的意大利石松种子完全浸泡在质量百分比浓度0.1%的HgCl₂试剂中13min，取出，用蒸馏水反复冲洗4次。

3.种皮破除

3.1浸种

从水选的种子中随机选择100粒种子，然后在常温下用蒸馏水浸泡8h取出，用滤纸吸干种子表面的水分，然后进行破皮。

3.2破皮

同实施例2。

4．浸种

将淡黄色的种子100粒放在烧杯中,加入130mL蒸馏水，然后用玻璃棒搅拌，等到种子完全沉到烧杯底部时，将烧杯放在32℃的恒温箱中，浸种时间为12h，期间每隔4h,取出烧杯用玻璃棒搅拌,使种子换气。

5.配置TTC溶液：同实施例1

6.染色

将经步骤4浸种充分吸水的种子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒温箱进行染色，恒温箱的温度设置为30℃，染色过程中每隔3h用玻璃棒搅拌1min，染色的时间15h。

7.鉴定及统计

将已经染色的种子从TTC溶液中取出，用蒸馏水冲洗4次,然后用滤纸吸干种子表面的水分；用解剖刀片沿着种子的长轴方向将种子切成两半，任取其中一半，将被切平的一面朝上平铺在玻璃板上，放置10min，然后进行种子生活力的鉴定。鉴定标准同实施例1。统计结果：种子生活力为98%。