亚甲蓝温敏水凝胶及其制备和解剖性肝切除术中的应用

摘要

本发明公开了一种亚甲蓝温敏水凝胶及其制备和解剖性肝切除术中的应用，所述亚甲蓝温敏水凝胶为负载有亚甲蓝的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶；所述亚甲蓝水凝胶的制备方法包括：温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯共聚物的合成；空白凝胶的制备；亚甲蓝的预处理以及亚甲蓝温敏水凝胶的制备步骤。本发明的亚甲蓝温敏水凝胶可以通过门静脉注射到拟切除的肝组织中，到达体内后逐步形成胶凝状态，实现在病变部位的缓慢释放和定位作用，使拟切除肝组织持久染色，从而达到精准解剖性肝切除术的目的。

说明书

技术领域

本发明涉及一种在精准解剖性肝切除术中使用的染色剂。更具体地说，本发明涉及一种用在精准解剖性肝切除术中的亚甲蓝温敏水凝胶及其制备方法。

背景技术

精准解剖性肝切除术是肝癌肝切除术的最理想术式，精确界定肝脏切除的界面是解剖性肝切除术的核心。精准解剖性肝切除术由于沿着肝脏的肝段或肝叶的间隙进行肝实质离断，有助于减少术中出血；同时，因为肝癌具有沿着荷瘤肝段门静脉支进行播散的生物学特性，易侵犯癌旁门静脉，形成隐性门静脉癌栓和在该段门静脉支配区域形成卫星灶，解剖性肝(段)切除符合肝癌的根治原则。然而由于肝叶、肝段之间缺乏明确的解剖标记、形态不规则、变异很大，因此较难确定精准解剖性肝切除术的界面。国际上最早由Makuuchi教授采用术中超声引导下向目标肝段的门静脉支注射亚甲蓝的染色技术，而Takasaki教授采用先阻断Glisson蒂后肝表面出现缺血的界限，据此界限进行肝切除术，但是肝段、叶之间的界限并不是平面，而是不规则的形状，这两种技术只能在肝脏的表面明确肝段、叶的界限，均无法明确肝段、叶或者半肝间在肝实质内的分界。在前期的临床工作中改进操作方法，创造性采用肝蒂注射亚甲蓝后结扎染色的新方法，明显改善肝脏表面和实质内的分界，显著提高了切除的精准度。

然而，临床实践发现亚甲蓝代谢快，肝组织染色较浅，染色不均匀而且褪色快，进入肝实质离断时，往往已无法判断界限。因此，手术中常常需要多次注射，注射过程中常常溢出至局部手术，吸引器不易吸干净，严重影响手术操作。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种能在解剖性肝切除手术中染色更均匀、持久、使肝段、叶在肝实质内的界限更明显样的亚甲蓝温敏水凝胶，其能够通过向拟切除肝叶或肝段的门静脉内注射给药，以期达到拟切除肝组织内亚甲蓝稳定、缓慢释放、持久染色的效果，从而实现精准解剖性肝切除。

本发明还有一个目的是通过动态高压微射流超微化方法对亚甲蓝进行了预处理，使得亚甲蓝在温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯共聚物表面均匀分散，提高了亚甲蓝的比表面积，以便获得更好的染色效果。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种亚甲蓝温敏水凝胶，其中，所述水凝胶为负载有亚甲蓝的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶。

优选的是，其中，所述亚甲蓝与温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶的重量份数比为15∶85～20∶80。

优选的是，其中，所述亚甲蓝与温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶的重量份数比为18∶82。

本发明的目的还可以进一步包括亚甲蓝温敏水凝胶的制备方法，该制备方法包括步骤：

1)共聚物的制备：称取一定量的混旋丙交酯DL-LA、乙交酯GA以及聚乙二醇PEG1500分别置于35～40℃的烘箱中干燥1.5h，再于120～140℃的烘箱中干燥0.5h，干燥结束后混合装入干燥的50mL的西林瓶中，并加入催化剂异辛酸亚锡，所述催化剂异辛酸亚锡的用量为原料总质量的0.2wt％，然后将西林瓶放入冷冻干燥机进行干燥，冷冻干燥温度为-10～-30℃，干燥时间为1.5～2.0h，待抽成真空后压盖取出，用青霉素瓶电动轧盖机轧盖封口，于120～135℃下反应13～14h，所得产物用5℃的纯净水溶解，加热至75～80℃使共聚物沉淀后弃去水层，反复操作3次以去除未反应的单体以及低分子的水溶性物质，所得共聚物冷冻干燥25～28h即得纯化的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯PLGA-PEG-PLGA共聚物，通过调节原料比例和PEG1500的分子量，制备具有不同相变温度和释放速率的温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物药物载体；

2)空白凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物于容量瓶中，加入去离子水溶解，定容到所需体积，配制成共聚物的质量浓度为20％的溶液，磁力缓慢搅拌下使其分散均匀，放入4℃冰箱冷藏48～50h，使共聚物充分溶胀、分散均匀，直到共聚物完全溶解得到澄清溶液，用0.22μm滤膜过滤制得PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液；

3)亚甲蓝预处理：采用动态高压微射流超微化技术，剪切、破碎和均质亚甲蓝粉末，其中超微化的工作压力为150～180MPa，工作温度为20～25℃；

4)亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量亚甲蓝粉于容量瓶中，以所述步骤2)配制的PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液为溶剂，加入经所述步骤3)预处理的亚甲蓝粉末，超声处理，超声频率为2～8kHz，超声时间为5～10分钟，超声结束后的混合液置于4℃冰箱溶胀24～28h至形成均匀的溶液，用0.22μm滤膜过滤制得亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶。

优选的是，其中，所述步骤1)中反应原料冷冻干燥温度为-20℃，干燥时间为2.0h。

优选的是，其中，所述步骤1)中所得共聚物冷冻干燥的温度为-50℃，冷冻干燥时间为26h。

优选的是，其中，所述步骤3)中超微化的工作压力为160MPa，工作温度为25℃。

优选的是，其中，所述步骤4)中超声处理的超声频率为6kHz，超声时间为8min。

本发明的目的还可以进一步由所述亚甲蓝温敏水凝胶用于精准解剖性肝切除术中的肝组织染色的应用来实现。

本发明至少包括以下有益效果：

1、由于将亚甲蓝负载到温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶上，因此能够使其具有稳定、缓慢释放、持久染色的效果，从而实现精准解剖性肝切除；

2、由于通过动态高压微射流超微化方法对亚甲蓝进行了预处理，使得亚甲蓝在温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯共聚物表面均匀分散，提高了亚甲蓝的比表面积，以便获得更好的染色效果；

3、由于在制备PLGA-PEG-PLGA共聚物时，通过调节原料比例和PEG的分子量，使载药系统具有合适的相变温度和释放速率。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明的一个实施例中亚甲蓝温敏水凝胶制备和解剖性肝切除术中的应用的流程示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

图1示出了根据本发明的一种实现形式，示出了亚甲蓝温敏水凝胶的制备过程。其中包括：

1)共聚物的制备：称取一定量的混旋丙交酯DL-LA、乙交酯GA以及聚乙二醇PEG1500分别置于35～40℃的烘箱中干燥1.5h，再于120～140℃的烘箱中干燥0.5h，干燥结束后混合装入干燥的50mL的西林瓶中，并加入催化剂异辛酸亚锡，所述催化剂异辛酸亚锡的用量为原料总质量的0.2wt％，然后将西林瓶放入冷冻干燥机进行干燥，冷冻干燥温度为-10～-30℃，干燥时间为1.5～2.0h，待抽成真空后压盖取出，用青霉素瓶电动轧盖机轧盖封口，于120～135℃下反应13～14h，所得产物用5℃的纯净水溶解，加热至75～80℃使共聚物沉淀后弃去水层，反复操作3次以去除未反应的单体以及低分子的水溶性物质，所得共聚物冷冻干燥25～28h即得纯化的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯PLGA-PEG-PLGA共聚物，通过调节原料比例和PEG1500的分子量，制备具有不同相变温度和释放速率的温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物药物载体；

2)空白凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物于容量瓶中，加入去离子水溶解，定容到所需体积，配制成共聚物的质量浓度为20％的溶液，磁力缓慢搅拌下使其分散均匀，放入4℃冰箱冷藏48～50h，使共聚物充分溶胀、分散均匀，直到共聚物完全溶解得到澄清溶液，用0.22μm滤膜过滤制得PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液；

3)亚甲蓝预处理：采用动态高压微射流超微化技术，剪切、破碎和均质亚甲蓝粉末，其中超微化的工作压力为150～180MPa，工作温度为20～25℃；

4)亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量亚甲蓝粉于容量瓶中，以所述步骤2)配制的PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液为溶剂，加入经所述步骤3)预处理的亚甲蓝粉末，超声处理，超声频率为2～8kHz，超声时间为5～10分钟，超声结束后的混合液置于4℃冰箱溶胀24～28h至形成均匀的溶液，用0.22μm滤膜过滤制得亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶。

图1还示出了根据本发明的一种实现形式，示出了亚甲蓝温敏水凝胶的体外与体内评价过程，其中包括：

亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的体外评价过程：

①胶凝温度测定：采用倒转试管法测定样品的相变温度，配置不同浓度的凝胶水溶液置于试管中水浴加热，从25℃持续升温直到发生相变和沉淀，升温速率控制在0.5℃/次，当溶液形成凝胶并保持10s不流动时，判定此时的水浴温度即为凝胶的相变温度。每个样品测定3次，取平均值作为样品的相变温度。

②体外释药测定：采用无膜释放法研究凝胶中药物的释放行为。采用《中国药典》2010年版(二部)附录溶出度测定法中的浆法装置。称取一定量的含药凝胶于称量瓶中(释药面积12.56cm2)，置于37℃水浴15min，使充分胶凝，然后投入1000ml的溶出杯中，以500ml(37±0.5℃)，pH＝6.8PBS为溶出介质，浆速50r·min^-1。分别于5、10、15、30、45、60、90、120min取样5ml，立即用0.80μm滤膜过滤，并向溶出杯中补充等温等体积的释放介质。将滤液适当稀释后，用高效液相色谱系统，测定亚甲蓝的含量，计算药物累积释放百分率。

③采用磷钨酸负染法，通过透射电镜等观察含药凝胶的理化特性，包括大小、形状等。

④采用旋转流变仪测定粘度：用旋转流变仪分别测量含药凝胶和加入血液后凝胶的粘度。将制备好的含药凝胶于室温下测定不同剪切速度(D)0.1，0.2，0.5，1S^-1下的粘度，每个样品测定3次，结果取均值。加入血液后再次测定不同剪切速度(D)0.1，0.2，0.5，1S^-1下的粘度，每个样品测定3次，结果取均值。计算不同切变速率相对应的表观粘度。

亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的体内评价过程：

中国实验用小型猪12头根据完全随机化法，分为2组，每组6头。按临床建立的精准肝切除方法(亚甲蓝染色+选择性肝蒂鞘外结扎)对实验动物行左半肝切除。A组注射亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶；B组注射含与A组相同剂量亚甲蓝注射液，所有实验动物记录以下数据：从注射完毕后到拟切除肝叶表面完全染色的时间；30min后观察肝表面的染色情况；切除左半肝后观察肝断面的染色情况。

实施例1

一种亚甲蓝温敏水凝胶，其中，所述水凝胶为负载有亚甲蓝的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶，所述亚甲蓝与温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶的重量份数比为18∶82。

所述亚甲蓝温敏水凝胶的制备方法包括步骤：

1)共聚物的制备：称取一定量的混旋丙交酯DL-LA、乙交酯GA以及聚乙二醇PEG1500分别置于38℃的烘箱中干燥1.5h，再于130℃的烘箱中干燥0.5h，干燥结束后混合装入干燥的50mL的西林瓶中，并加入催化剂异辛酸亚锡，所述催化剂异辛酸亚锡的用量为原料总质量的0.2wt％，然后将西林瓶放入冷冻干燥机进行干燥，冷冻干燥温度为-20℃，干燥时间为2.0h，待抽成真空后压盖取出，用青霉素瓶电动轧盖机轧盖封口，于120～135℃下反应13～14h，所得产物用5℃的纯净水溶解，加热至75～80℃使共聚物沉淀后弃去水层，反复操作3次以去除未反应的单体以及低分子的水溶性物质，所得共聚物冷冻干燥26h，其中冷冻干燥的温度为-50℃，即得纯化的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯PLGA-PEG-PLGA共聚物，通过调节原料比例和PEG1500的分子量，制备具有不同相变温度和释放速率的温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物药物载体；

2)空白凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物于容量瓶中，加入去离子水溶解，定容到所需体积，配制成共聚物的质量浓度为20％的溶液，磁力缓慢搅拌下使其分散均匀，放入4℃冰箱冷藏48～50h，使共聚物充分溶胀、分散均匀，直到共聚物完全溶解得到澄清溶液，用0.22μm滤膜过滤制得PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液；

3)亚甲蓝预处理：采用动态高压微射流超微化技术，剪切、破碎和均质亚甲蓝粉末，其中超微化的工作压力为160MPa，工作温度为25℃；

4)亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量亚甲蓝粉于容量瓶中，以所述步骤2)配制的PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液为溶剂，加入经所述步骤3)预处理的亚甲蓝粉末，超声处理，超声频率为6kHz，超声时间为8分钟，超声结束后的混合液置于4℃冰箱溶胀24～28h至形成均匀的溶液，用0.22μm滤膜过滤制得亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶。

实施例2

一种亚甲蓝温敏水凝胶，其中，所述水凝胶为负载有亚甲蓝的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶，所述亚甲蓝与温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶的重量份数比为15∶85。

所述亚甲蓝温敏水凝胶的制备方法包括步骤：

1)共聚物的制备：称取一定量的混旋丙交酯DL-LA、乙交酯GA以及聚乙二醇PEG1500分别置于40℃的烘箱中干燥1.5h，再于140℃的烘箱中干燥0.5h，干燥结束后混合装入干燥的50mL的西林瓶中，并加入催化剂异辛酸亚锡，所述催化剂异辛酸亚锡的用量为原料总质量的0.2wt％，然后将西林瓶放入冷冻干燥机进行干燥，冷冻干燥温度为-30℃，干燥时间为1.5h，待抽成真空后压盖取出，用青霉素瓶电动轧盖机轧盖封口，于120～135℃下反应13～14h，所得产物用5℃的纯净水溶解，加热至75～80℃使共聚物沉淀后弃去水层，反复操作3次以去除未反应的单体以及低分子的水溶性物质，所得共聚物冷冻干燥28h，其中冷冻干燥的温度为-30℃，即得纯化的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯PLGA-PEG-PLGA共聚物，通过调节原料比例和PEG1500的分子量，制备具有不同相变温度和释放速率的温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物药物载体；

2)空白凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物于容量瓶中，加入去离子水溶解，定容到所需体积，配制成共聚物的质量浓度为20％的溶液，磁力缓慢搅拌下使其分散均匀，放入4℃冰箱冷藏48～50h，使共聚物充分溶胀、分散均匀，直到共聚物完全溶解得到澄清溶液，用0.22μm滤膜过滤制得PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液；

3)亚甲蓝预处理：采用动态高压微射流超微化技术，剪切、破碎和均质亚甲蓝粉末，其中超微化的工作压力为180MPa，工作温度为20℃；

4)亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量亚甲蓝粉于容量瓶中，以所述步骤2)配制的PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液为溶剂，加入经所述步骤3)预处理的亚甲蓝粉末，超声处理，超声频率为8kHz，超声时间为5分钟，超声结束后的混合液置于4℃冰箱溶胀24～28h至形成均匀的溶液，用0.22μm滤膜过滤制得亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶。

实施例3

一种亚甲蓝温敏水凝胶，其中，所述水凝胶为负载有亚甲蓝的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶，所述亚甲蓝与温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯凝胶的重量份数比为20∶80。

所述亚甲蓝温敏水凝胶的制备方法包括步骤：

1)共聚物的制备：称取一定量的混旋丙交酯DL-LA、乙交酯GA以及聚乙二醇PEG1500分别置于40℃的烘箱中干燥1.5h，再于120～140℃的烘箱中干燥0.5h，干燥结束后混合装入干燥的50mL的西林瓶中，并加入催化剂异辛酸亚锡，所述催化剂异辛酸亚锡的用量为原料总质量的0.2wt％，然后将西林瓶放入冷冻干燥机进行干燥，冷冻干燥温度为-10℃，干燥时间为2.0h，待抽成真空后压盖取出，用青霉素瓶电动轧盖机轧盖封口，于120～135℃下反应13～14h，所得产物用5℃的纯净水溶解，加热至75～80℃使共聚物沉淀后弃去水层，反复操作3次以去除未反应的单体以及低分子的水溶性物质，所得共聚物冷冻干燥27h，其中冷冻干燥的温度为-40℃，即得纯化的温敏聚乙交酯丙交酯-聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯PLGA-PEG-PLGA共聚物，通过调节原料比例和PEG1500的分子量，制备具有不同相变温度和释放速率的温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物药物载体；

2)空白凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量温敏PLGA-PEG-PLGA共聚物于容量瓶中，加入去离子水溶解，定容到所需体积，配制成共聚物的质量浓度为20％的溶液，磁力缓慢搅拌下使其分散均匀，放入4℃冰箱冷藏48～50h，使共聚物充分溶胀、分散均匀，直到共聚物完全溶解得到澄清溶液，用0.22μm滤膜过滤制得PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液；

3)亚甲蓝预处理：采用动态高压微射流超微化技术，剪切、破碎和均质亚甲蓝粉末，其中超微化的工作压力为150MPa，工作温度为25℃；

4)亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的制备：在25℃室温下，用分析天平称取适量亚甲蓝粉于容量瓶中，以所述步骤2)配制的PLGA-PEG-PLGA空白凝胶溶液为溶剂，加入经所述步骤3)预处理的亚甲蓝粉末，超声处理，超声频率为2kHz，超声时间为10分钟，超声结束后的混合液置于4℃冰箱溶胀24～28h至形成均匀的溶液，用0.22μm滤膜过滤制得亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶。

实施例4

对实施例1、实施例2和实施例3制得的亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶分别进行体外评价与体内评价实验，同时并与光是亚甲蓝进行染色的对比例比较：

体外评价：

胶凝温度测定：采用倒转试管法测定样品的相变温度，配置不同浓度的凝胶水溶液置于试管中水浴加热，从25℃持续升温直到发生相变和沉淀，升温速率控制在0.5℃/次，当溶液形成凝胶并保持10s不流动时，判定此时的水浴温度即为凝胶的相变温度。每个样品测定3次，取平均值作为样品的相变温度。

②体外释药测定：采用无膜释放法研究凝胶中药物的释放行为。采用《中国药典》2010年版(二部)附录溶出度测定法中的浆法装置。称取一定量的含药凝胶于称量瓶中(释药面积12.56cm²)，置于37℃水浴15min，使充分胶凝，然后投入1000ml的溶出杯中，以500ml(37±0.5℃)，pH＝6.8PBS为溶出介质，浆速50r·min^-1。分别于5、10、15、30、45、60、90、120min取样5ml，立即用0.80μm滤膜过滤，并向溶出杯中补充等温等体积的释放介质。将滤液适当稀释后，用高效液相色谱系统，测定亚甲蓝的含量，计算药物累积释放百分率。

③采用磷钨酸负染法，通过透射电镜等观察含药凝胶的理化特性，包括大小、形状等。

④采用旋转流变仪测定粘度：用旋转流变仪分别测量含药凝胶和加入血液后凝胶的粘度。将制备好的含药凝胶于室温下测定不同剪切速度(D)0.1，0.2，0.5，1S^-1下的粘度，每个样品测定3次，结果取均值。加入血液后再次测定不同剪切速度(D)0.1，0.2，0.5，1S^-1下的粘度，每个样品测定3次，结果取均值。计算不同切变速率相对应的表观粘度。

体内评价：

中国实验用小型猪12头根据完全随机化法，分为2组，每组6头。按临床建立的精准肝切除方法(亚甲蓝染色+选择性肝蒂鞘外结扎)对实验动物行左半肝切除。A组注射亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶；B组注射含与A组相同剂量亚甲蓝注射液，所有实验动物记录以下数据：从注射完毕后到拟切除肝叶表面完全染色的时间；30min后观察肝表面的染色情况；切除左半肝后观察肝断面的染色情况。

通过上述实验，以及与亚甲蓝单独染色肝脏的对比，得出的结果如下表：

其中，对比例中亚甲蓝的用量与本发明实施例1中亚甲蓝的用量相同；

由表中可以得出，本发明温敏水凝胶作为亚甲蓝的载体缓释系统，使其对亚甲蓝均匀负载，同时增大亚甲蓝表观粘度，实现更好的靶向药物释放，不至于光是用亚甲蓝进行染色时，手术未进行完毕，药物已经流失或者代谢、褪色掉，同时本发明的载体的缓释作用，使得染色时间大大增长，完全满足肝脏切除手术的最长时间，药物缓释，向拟切除肝脏的门静脉内原位给药，达到原位稳定较长时间释放亚甲蓝，使拟切除肝组织持久染色，从而达到精准解剖性肝切除术的目的。

这里说明的模块数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的亚甲蓝PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。