法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2016-08-31
授权
授权
2015-12-02
实质审查的生效 IPC(主分类):A01G1/00 申请日:20150805
实质审查的生效
2015-11-04
公开
公开
技术领域
本发明涉及三七栽培领域。更具体地说,本发明涉及一种提高三七中三七皂苷R1含 量的方法。
背景技术
三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.chen的干燥根,是我国的传统珍 贵药材,具有止血、散瘀、消肿、止痛等功效,其以三七或总皂苷制成的制剂在临床上广 泛用于心脑血管疾病的治疗。三七皂苷R1属于原人参三醇型皂苷,是三七中的特有化学 成分,也是三七最具有代表的特征性化合物,以往研究已证实三七皂苷R1对防治血管内 皮细胞损伤有较好疗效。三七皂苷R1属于原人参三醇型,是三七中最具有代表的特征性 化合物,具有广泛的药理作用,已作为冠心丹参滴丸的主要成分用于治疗心肌缺血性疾病。 抗炎是三七皂苷R1的重要药理作用之一,以往研究已证实三七皂苷R1对防治血管内皮 细胞损伤有较好疗效。由于三七生产周期较长,且三七中三七皂苷R1含量低,化学合成 方法很难实现工业化生产。因此,能否找到一种提高三七中三七皂苷R1含量的方法显得 尤为重要。迄今,尚未有提高栽培三七中三七皂苷R1含量的报道。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题,并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种提高三七中三七皂苷R1含量的方法,解决三七中三 七皂苷R1含量过低的问题。
本发明还有一个目的是通过水杨酸溶液在三七采收前处理三七的叶片以提高三七中 三七皂苷R1的含量,可以在常规的三七栽培方法中,大规模使用,以便于大规模的工厂 化生产三七皂苷R1,满足市场对三七皂苷R1的需求。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种提高三七中三七皂苷R1含 量的方法,在三七采收前,用水杨酸溶液喷施三七植株。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述水杨酸溶液的溶度为 0.3-1.3mmol/L。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,在三七采收前30-70天采用 所述水杨酸溶液喷施所述三七植株。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述三七植株为栽培2-3年 的三七植株。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述水杨酸溶液喷施于所述 三七植株的叶片表面。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述三七采收前,每间隔10-20 天用所述水杨酸溶液喷施所述三七植株一次,共计喷施2-3次。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,三七种子于第一年1月份播 种,在第二年1月份得到三七苗,移栽后定植,得到定植苗,并于4-5月份在定植苗靠近 根部处沿其圆周刻伤,并在刻伤处先喷施质量分数为1.2%-1.5%的壳聚糖水溶液,再涂覆 植物捣碎液,然后用厚度为3-5mm的海绵缠绕一圈,所述海绵经消毒后在第一浸泡液中 浸泡20-22h,浸泡温度为33-35℃,其中,
所述壳聚糖水溶液中壳聚糖为N-脱乙酰度为85%-88%的壳聚糖;
所述植物捣碎液由芦荟、苔藓和胡椒按照质量比为3∶7∶1混合后捣碎、研磨制得;
所述第一浸泡液由竹醋液、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、薄荷精油和水按照质量比为 2-3∶5-7∶1-2∶1000混合制成。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,三七采收前30天,每间隔 10天喷施所述水杨酸溶液于三七植株的叶片上,共计喷施3次,并采用无纺布套套住三 七植株的叶片,2-4h后取下无纺布套,所述无纺布套采用第二浸泡液在28-30℃下浸泡 20-22h,所述第二浸泡液由水杨酸钠、水杨酸和水按照质量比为4-5∶7-8∶1000混合制成。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,在第三年3月份,在三七植 株的主干上,沿主干的长度方向扎多个细孔,再采用喷雾器喷施磺酸水溶液于细孔处,所 述磺酸水溶液由磺酸、椰油酰羟乙磺酸酯钠和水按照质量比为7∶3-5∶10000混合组成。
优选的是,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述播种前,先对三七种子 消毒处理后,在三七种子表面扎3-5个针孔,并在33-35℃下于第三浸泡液中浸泡5-7h, 并用薄膜包覆三七种子3-5min再去除薄膜,所述第三浸泡液由水杨酸、水溶性壳聚糖、 羊毛脂、乙醇和水按照质量比为1∶7-9∶5∶200∶800混合配制得到。
本发明所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法操作简单,成本低廉,适用于大规 模常规种植三七的方法,对种植三七的人员要求低,至少包括以下有益效果:
1)本发明通过在三七采收前采用水杨酸溶液喷施三七的叶片,以刺激并诱导三七中 三七皂苷R1生物合成功能基因的表达,即葡萄糖基转移酶基因等,打破三七皂苷R1合 成过程中的限速步骤,从而在短时间内积累大量的三七皂苷R1,从而提高其含量;
2)本发明通过在定植苗靠近根部处刻伤,并喷施壳聚糖水溶液,从伤处刺激三七定 植苗并诱导三七皂苷R1的生物合成功能基因表达,加速三七皂苷R1的合成与积累;植 物捣碎液一方面是采用胡椒进一步刺激三七定植苗合成三七皂苷R1,另一方面通过芦荟 和苔藓进行保湿、杀菌,促进三七组织细胞再生,间接提高三七皂苷R1的含量;另外, 采用第一浸泡液浸泡后的海绵包覆刻伤处,可以进一步刺激三七皂苷R1的合成,并延长 三七合成三七皂苷R1的时间,以此提高其含量,其中,竹醋液可以促进三七细胞吸收喷 施、涂覆或包裹于刻伤处的其他成分,还可以促进三七植株生长,脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸 钠可刺激刻伤处的细胞损伤扩大,而薄荷精油促进三七刻伤处的细胞活力增加,均能促进 和延长三七皂苷R1生物合成的时间;
3)本发明在采收前用水杨酸溶液喷施三七植株的叶片后,使用经第二浸泡液浸泡的 无纺布套套住叶片,增加叶片呼吸过程中对无纺布中的第二浸泡液组分的吸收,从而延长 刺激诱导三七皂苷R1生物合成的时间,提高三七皂苷含量的积累;
4)三七植株种植2-3年可采收,第3年采收虽然种植时间长,但三七中三七皂苷的 含量略有增加,本发明的发明人还发现在第三年三月份对三七植株的主干扎孔后喷施磺酸 水溶液,可以进一步促进三七皂苷在茎上的合成与积累;
5)三七一般种子育苗进行大规模种植,在播种前,对三七种子扎针孔后用第三浸泡 液浸泡,并用薄膜包覆,可以进一步通过水杨酸和水溶性壳聚糖刺激种子中三七皂苷R1 生物合成功能基因的表达,以此提高三七植株中三七皂苷R1的含量,而羊毛脂和乙醇可 以促进三七种子吸收水杨酸和水溶性壳聚糖并接受其刺激。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本发明 的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书 文字能够据以实施。
应当理解,本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。
实施例1:
一种提高三七中三七皂苷R1含量的方法,在三七采收前,用水杨酸溶液喷施三七植 株。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述水杨酸溶液的溶度为 0.3-1.3mmol/L。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,在三七采收前30-70天采用所述 水杨酸溶液喷施所述三七植株。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述三七植株为栽培2-3年的三 七植株。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述水杨酸溶液喷施于所述三七 植株的叶片表面。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述三七采收前,每间隔10-20 天用所述水杨酸溶液喷施所述三七植株一次,共计喷施2-3次。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,三七种子于第一年1月份播种, 在第二年1月份得到三七苗,移栽后定植,得到定植苗,并于4-5月份在定植苗靠近根部 处沿其圆周刻伤,并在刻伤处先喷施质量分数为1.2%-1.5%的壳聚糖水溶液,再涂覆植物 捣碎液,然后用厚度为3-5mm的海绵缠绕一圈,所述海绵经消毒后在第一浸泡液中浸泡 20-22h,浸泡温度为33-35℃,其中,
所述壳聚糖水溶液中壳聚糖为N-脱乙酰度为85%-88%的壳聚糖;
所述植物捣碎液由芦荟、苔藓和胡椒按照质量比为3∶7∶1混合后捣碎、研磨制得;
所述第一浸泡液由竹醋液、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、薄荷精油和水按照质量比为 2-3∶5-7∶1-2∶1000混合制成。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,三七采收前30天,每间隔10天 喷施所述水杨酸溶液于三七植株的叶片上,共计喷施3次,并采用无纺布套套住三七植株 的叶片,2-4h后取下无纺布套,所述无纺布套采用第二浸泡液在28-30℃下浸泡20-22h, 所述第二浸泡液由水杨酸钠、水杨酸和水按照质量比为4-5∶7-8∶1000混合制成。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,在第三年3月份,在三七植株的 主干上,沿主干的长度方向扎多个细孔,再采用喷雾器喷施磺酸水溶液于细孔处,所述磺 酸水溶液由磺酸、椰油酰羟乙磺酸酯钠和水按照质量比为7∶3-5∶10000混合组成。
其中,所述的提高三七中三七皂苷R1含量的方法,所述播种前,先对三七种子消毒 处理后,在三七种子表面扎3-5个针孔,并在33-35℃下于第三浸泡液中浸泡5-7h,并用 薄膜包覆三七种子3-5min再去除薄膜,所述第三浸泡液由水杨酸、水溶性壳聚糖、羊毛 脂、乙醇和水按照质量比为1∶7-9∶5∶200∶800混合配制得到。
实施例2:
发明人2014年1月于广西靖西县武平镇,将三七一年生种苗定植于土壤中,按常规 栽培方法栽培。
于2014年9月进行采收前的处理。将三七植株随机分为6组:对照组A、实验组A1, 实验组A2、实验组A3、实验组A4和实验组A5,每组30株。
对照组A于采收前用水喷施三七植株,每隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组A1于采收前用浓度为0.1mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组A2于采收前用浓度为0.3mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组A3于采收前用浓度为0.8mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组A4于采收前用浓度为1.3mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组A5于采收前用浓度为1.7mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
水杨酸溶液的配制:先配置10mmol/L的水杨酸贮备液,用时加水稀释。10mmol/L 水杨酸溶液的配置方法为:称取1.381g水杨酸,溶于约0.8L水中,用1mol NaOH溶液 调节pH值至7.0,加水定容至1L。
以上6个处理组均在最后一次喷施处理后第10天采收根茎,根据《中国药典》第一 部“三七”药材【含量测定】项下的方法,用甲醇提取三七皂苷R1,高效液相色谱法测 定三七皂苷R1含量。各组的实验结果如表1所示。
表1 各处理三七块根中三七皂苷R1含量
*注n=30,与对照组相比,p<0.05。
表1的实验数据表明,经过水杨酸溶液处理后的三七块根中的三七皂苷R1含量均有 所提高,尤其是使用0.8mmol/L水杨酸溶液处理三七叶片后,其块根中三七皂苷R1含量 由0.23%(对照组A)提高到0.38%(实验组A3),提高了65%;由表1可以看出,随着 水杨酸溶液的浓度增加,三七皂苷R1的含量是先增加后减少的,水杨酸溶液的最佳使用 浓度为0.8mmol/L。
实施例3:
发明人2013年1月于广西靖西县武平镇,将三七一年生种苗定植于土壤中,按常规 栽培方法栽培。
于2014年9月进行采收前的处理。将三七植株随机分为6组:对照组B、实验组B1, 实验组B2、实验组B3、实验组B4和实验组B5,每组30株。
对照组B于采收前用水喷施三七植株,每隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组B1于采收前用浓度为0.1mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组B2于采收前用浓度为0.3mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组B3于采收前用浓度为0.8mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组B4于采收前用浓度为1.3mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组B5于采收前用浓度为1.7mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
以上6个处理组均在最后一次喷施处理后第10天采收根茎,根据《中国药典》第一 部“三七”药材【含量测定】项下的方法,用甲醇提取三七皂苷R1,高效液相色谱法测 定三七皂苷R1含量。各组的实验结果如表2所示。
表2 各处理三七块根中三七皂苷R1含量
*注n=30,与对照组相比,p<0.05。
表2的实验数据表明,经过水杨酸溶液处理后的三七块根中的三七皂苷R1含量均有 所提高,尤其是使用0.8mmol/L水杨酸溶液处理三七后,其块根中三七皂苷R1含量由 0.39%(对照组B)提高到0.63%(实验组B3),提高了61.5%。由表1可以看出,随着水 杨酸溶液的浓度增加,三七皂苷R1的含量是先增加后减少的,因此水杨酸溶液的最佳使 用浓度为0.8mmol/L。
实施例4:
发明人2012年1月于广西靖西县武平镇,将三七种子于1月份播种,在2013年1月 份得到三七苗,移栽后定植,得到定植苗,并于4月中旬在定植苗靠近根部处沿其圆周刻 伤,并在刻伤处先喷施质量分数为1.35%的壳聚糖水溶液,再涂覆植物捣碎液,然后用厚 度为3-5mm的海绵缠绕一圈,所述海绵经消毒后在第一浸泡液中浸泡20h,浸泡温度为 35℃,其中,
所述壳聚糖水溶液中壳聚糖为N-脱乙酰度为85%的壳聚糖;
所述植物捣碎液由芦荟、苔藓和胡椒按照质量比为3∶7∶1混合后捣碎、研磨制得;其 中,苔藓为泥炭藓,胡椒为胡椒果实部分。
所述第一浸泡液由竹醋液、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、薄荷精油和水按照质量比为 2∶6∶1∶1000混合制成。
其他过程按常规栽培方法栽培。
于2014年9月进行采收前的处理。将三七植株随机分为6组:对照组C、实验组C1, 实验组C2、实验组C3、实验组C4和实验组C5,每组30株。
对照组C于采收前用水喷施三七植株,每隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组C1于采收前用浓度为0.1mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组C2于采收前用浓度为0.3mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组C3于采收前用浓度为0.8mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组C4于采收前用浓度为1.3mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
实验组C5于采收前用浓度为1.7mmol/L的水杨酸溶液均匀喷施于三七叶片表面,每 隔10天喷施一次,共喷施3次。
以上6个处理组均在最后一次喷施处理后第10天采收根茎,根据《中国药典》第一 部“三七”药材【含量测定】项下的方法,用甲醇提取三七皂苷R1,高效液相色谱法测 定三七皂苷R1含量。各组的实验结果如表3所示。
表3 各处理三七块根中三七皂苷R1含量
*注n=30,与对照组相比,p<0.05。
结合表2和表3可以看出,在定植苗靠近根部处沿其圆周刻伤,并在刻伤处先喷施壳 聚糖水溶液,再涂覆植物捣碎液,然后用海绵缠绕一圈,再不用水杨酸处理叶片时三七皂 苷R1的含量是略有增加的,经水杨酸溶液处理后,三七皂苷R1含量均显著提高,且随 水杨酸溶液的浓度增加,三七皂苷R1的含量是先增加后减少的,使用0.8mmol/L水杨酸 溶液处理三七后,其块根中三七皂苷R1含量分别由0.45%(对照组B)提高到0.77%(实 验组B3),提高了71.1%,而实验组C3相比实验组B3提高了22%。
实施例5:
在实施例4的基础上,于2014年9月进行采收前的处理。将三七植株随机分为6组: 对照组D、实验组D1,实验组D2、实验组D3、实验组D4和实验组D5,每组30株。
三七采收前50天,将上述6个处理组喷施3次所述水杨酸溶液于三七植株的叶片上, 喷施浓度、时间和方法与实施例4相同,每次喷完立即采用无纺布套套住三七植株的叶片, 3h后取下无纺布套,所述无纺布套采用第二浸泡液在30℃下浸泡21h,所述第二浸泡液 由水杨酸钠、水杨酸和水按照质量比为4∶7∶1000混合制成。
以上6个处理组均在最后一次喷施处理后第10天采收根茎,根据《中国药典》第一 部“三七”药材【含量测定】项下的方法,用甲醇提取三七皂苷R1,高效液相色谱法测 定三七皂苷R1含量。各组的实验结果如表4所示。
表4 各处理三七块根中三七皂苷R1含量
*注n=30,与对照组相比,p<0.05。
结合表3和表4可以看出,套经第二浸泡液浸泡后的无纺布套处理,三七皂苷R1的 含量是均略有增加的,且以实验组D3的增长率提高较为明显,其中,实验组D3相比实 验组C3三七皂苷R1含量提高了15.58%,其他实验组的增长率相对较低。
实施例6:
在实施例4的基础上,在2014年3月份,在三七植株的主干上,沿主干的长度方向 扎多个细孔,再采用喷雾器喷施磺酸水溶液于细孔处,所述磺酸水溶液由磺酸、椰油酰羟 乙磺酸酯钠和水按照质量比为7∶4∶10000混合组成。
于2014年9月进行采收前的处理,具体方法同实施例4。将三七植株随机分为6组: 对照组E、实验组E1,实验组E2、实验组E3、实验组E4和实验组E5,每组30株。
以上6个处理组均在最后一次喷施处理后第10天采收根茎,根据《中国药典》第一 部“三七”药材【含量测定】项下的方法,用甲醇提取三七皂苷R1,高效液相色谱法测 定三七皂苷R1含量。各组的实验结果如表5所示。
表5 各处理三七块根中三七皂苷R1含量
*注n=30,与对照组相比,p<0.05。
结合表3和表5可以看出,在2014年3月份,在三七植株的主干上,沿主干的长度 方向扎多个细孔,再采用喷雾器喷施磺酸水溶液于细孔处,三七皂苷R1的含量是均有所 增加的,且以实验组E3的增长率提高较为明显,其中,实验组E3相比实验组C3三七皂 苷R1含量提高了7.8%。
实施例7:
在实施例4的基础上,在播种前,先对三七种子消毒处理后,在三七种子表面扎3-5 个针孔,并在34℃下于第三浸泡液中浸泡6h,并用薄膜包覆三七种子4min再去除薄膜, 所述第三浸泡液由水杨酸、水溶性壳聚糖、羊毛脂、乙醇和水按照质量比为1∶8∶5∶200∶800 混合配制得到。
于2014年9月进行采收前的处理,具体方法同实施例4。将三七植株随机分为6组: 对照组F、实验组F1,实验组F2、实验组F3、实验组F4和实验组F5,每组30株。
以上6个处理组均在最后一次喷施处理后第10天采收根茎,根据《中国药典》第一 部“三七”药材【含量测定】项下的方法,用甲醇提取三七皂苷R1,高效液相色谱法测 定三七皂苷R1含量。各组的实验结果如表6所示。
表6 各处理三七块根中三七皂苷R1含量
*注n=30,与对照组相比,p<0.05。
结合表3和表6可以看出,在播种前,在三七种子表面扎3-5个针孔,并在第三浸泡 液中浸泡,并用薄膜包覆三七种子4min再去除薄膜,三七皂苷R1的含量是均有较大程度 的增加,其中实验组F3相比实验组C3,三七皂苷R1的含量提高了约9%。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运 用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地 实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
机译: 一种提高三七中三七皂苷R1含量的方法
机译: 丹参素,三七皂苷R1或其组合在制备用于预防和治疗由微循环障碍引起的疾病的药物中的用途
机译: 丹参素,三七皂苷R1或其组合在制备预防和治疗微循环障碍疾病的药物中的用途