毛钩藤碱类似物及其在制备抗高血压药物中的用途

摘要

本发明属中药制药领域，涉及式（1）结构的中药钩藤提取物毛钩藤碱类似物化合物及其在制备抗高血压药物中的用途。本发明的毛钩藤碱类似物化合物经实验证实具有显著的抗高血压和扩血管的药理作用。本发明的化合物经自发性高血压大鼠（SHR）实验证实，给药后30分钟内SHR大鼠血压和心率均明显降低，能快速有效降低原发性高血压大鼠的血压；体外离体血管环舒缩实验结果证实所属化合物能在极低剂量显著舒张由苯肾上腺素引发的血管环收缩。本发明的化合物可作为药物制剂的原料，进一步制备治疗高血压的药物，尤其是用于制备高血压急症的扩血管药物。(1)。

说明书

技术领域

本发明属中药制药领域，涉及中药钩藤提取物毛钩藤碱类似物的结构、制备 及其在制备抗高血压药物中的用途。

背景技术

高血压急症是指原发性或继发性高血压患者，在某些诱因作用下，血压突然 和显著升高（一般超过180/120mmH_g），同时伴有进行性心、脑、肾等重要靶器 官功能急性损害的一种严重危及生命的临床综合征。高血压急症包括高血压脑 病、颅内出血、脑梗死、急性心力衰竭、肺水肿、急性冠脉综合征、主动脉夹层、 子痫等。恶性高血压、高血压危象等均属于此范畴。临床实践显示，通过给药扩 张动脉血管，减缓血管压力是缓解高血压急症的一个有效途径。目前临床上常用 的效果较好的速效降压药如硝苯地平等，大多存在有加快心率的副作用,安全性 低等缺陷。

钩藤是一种常绿藤本植物，为茜草科植物，以带钩的的茎枝入药。研究显示 其主要生物碱成分有钩藤碱，异钩藤碱，去氢钩藤碱，毛钩藤碱等，已知具有清 热平肝，息风止痉的功效，临床用于治疗高血压病显示有一定疗效。

本申请的发明人拟通过合成中药生物碱类似物，尤其是采用化学方法合成具 有新的化学结构的毛钩藤碱类似物，进一步用于制备抗高血压的药物，以达到迅 速显著降低血压并可减缓心率的目的。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的速效降压药物毒副作用大的缺陷，提供新的 化学结构的毛钩藤碱类似物及其抗高血压的药物用途，尤其是在制备治疗高血压 急症药物中的用途。

本发明提供了式(1)结构的毛钩藤碱类似物化合物，所述化合物经实验证实 具有显著的抗高血压和扩血管的药理作用。

结构(1)

本发明提供了如上式(1)结构所示的毛钩藤碱类似物的制备方法,其包括： 按下述合成路线，

通过下述步骤:

1、以化合物2为起始原料，在催化剂DPTS和DIC条件下与BOC保护的SPRC 缩合；

2、取酯缩合产物在三氟乙酸和二氯甲烷条件下脱去保护基BOC，获得式(1) 结构的毛钩藤碱类似物化合物。

本发明进行了所述的毛钩藤碱类似物抗高血压的用途试验和初步机制实验。

本发明采用自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR） 进行动物实验，该动物模型是本领域公认的高血压动物模型，SHR大鼠在出生5 周以后血压开始自发性升高，到15-17周时为稳定高血压模型；实验中，监测给 予如以上结构(1)所示毛钩藤碱类似物一小时内SHR大鼠的血压和心率变化情 况，结果显示30分钟内SHR大鼠血压和心率均明显降低，表明该类似物能快速 有效降低原发性高血压大鼠的血压。

本发明通过体外离体血管环舒缩实验，结果证实如上结构(1)所示毛钩藤碱 类似物能在极低剂量显著舒张由苯肾上腺素引发的血管环收缩；

本发明经动物实验和离体实验证明，式(1)结构的毛钩藤碱类似物具有以下 作用：

1、降低血压，尤其是在短时间内迅速降低血压；

2、减缓高血压导致的心率过快；

3、扩张血管。

实验结果表明，本发明如以上结构(1)所示毛钩藤碱类似物可作为药物制剂 的原料，进一步制备治疗高血压的药物，尤其是用于制备高血压急症的扩血管药 物。

为了便于理解，以下将通过具体的实施方式对本发明进行详细地描述。需要 特别指出的是，这些描述仅仅是为了示例性的描述，并不构成对本发明范围的限 制。

附图说明

图1是用苯肾上腺素预刺激血管环后加入如以上结构(1)所示毛钩藤碱类 似物对于1uM苯肾上腺素诱导的血管收缩的抑制作用，

其中，纵坐标为收缩率，数据用平均值±标准误来表示，n=6.***P<0.001vs. 对照组。

图2是SHR大鼠给予如以上结构(1)所示毛钩藤碱类似物后1h内血压变化情 况，

其中，显示了在给药0.5h内使SHR大鼠血压水平显著下降，与给药前血压 相比，*P<0.05，**P<0.01vs.对照组。

图3是SHR大鼠给如以上结构(1)所示毛钩藤碱类似物后1h内心率变化情 况，

其中，显示了在给药0.5h内使SHR大鼠心率水平显著下降，与给药前心率 相比，*P<0.05vs.对照组。

具体实施方式

实施例1制备式(1)结构的毛钩藤碱类似物

1、制备N-叔丁基氧代羰基-S-炔丙基-半胱氨酸（SPRC-Boc）

取S-炔丙基-半胱氨酸（1.59g，10mmol）溶于四氢呋喃和水的混合溶液（50 ml/50ml）中，加入(Boc)₂O（3.27g，15mmol）和三乙胺（2.79ml，20mmol）， 室温搅拌12小时，TLC监测反应，高锰酸钾显色剂显色，反应完全后减压旋去 四氢呋喃，然后剩余反应液乙醚萃取三次，水层用1N HCl调Ph=2后，乙酸乙酯 萃取三次，合并有机相，有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤旋干后得到棕色油状 物直接用于反应原料；

2、制备化合物（2）

结构(2)

将化合物T6-OH（109mg，0.25mmol）溶于干燥的二氯甲烷（10ml）中， 加入化合物SPRC-Boc（97mg，0.37mmol）的二氯甲烷（10ml）溶液，然后加 入DPTS（115mg，0.37mmol）、DIC（99μl，0.37mmol）室温搅拌3小时，TLC 监测反应完全后，水洗三次后合并有机相，有机相用Na₂SO₄干燥，旋干后得到 黄色初产物，柱层析（DCM/MeOH=20:1）分离纯化后得到化合物Y-682（138mg， yield=81%），MS(m/z):684[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.89(d,J=7.6 Hz,1H),7.42–7.36(m,1H),7.21(dd,J=13.7,6.9Hz,2H),5.42(d,J=7.0Hz,1H), 4.56(s,1H),4.23(t,J=6.5Hz,2H),3.94(s,1H),3.72(s,3H),3.30(dd,J=23.7,9.3 Hz,2H),3.24–3.15(m,1H),3.06(dd,J=14.1,5.9Hz,1H),2.86(d,J=16.5Hz, 3H),2.71(d,J=7.2Hz,1H),2.66(t,J=10.4Hz,3H),2.56(d,J=14.6Hz,1H), 2.28(dd,J=5.4,2.6Hz,1H),2.18(s,1H),2.03(d,J=12.7Hz,2H),1.89(dd,J= 12.3,6.4Hz,1H),1.80(d,J=12.9Hz,1H),1.66(s,9H),1.44(s,9H)；

3、按如下合成路线合成结构(1)所示毛钩藤碱类似物：

取初产物（2.2mmol）溶于二氯甲烷（25ml）中，然后加入三氟乙酸（8ml）， 室温搅拌30mins，TLC监测，原料反应完全后减压旋蒸，旋去溶剂后，硅胶柱 层析（DCM/MeOH=15:1）得到毛钩藤碱类似物Y-482（562mg，yield=53%）， MS(m/z):483[M]⁺;¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.21(s,1H),8.63(s,2H),7.43 (dd,J=35.5,7.6Hz,2H),7.20–6.90(m,2H),5.12(d,1H),4.83(d,1H),4.23(s, 2H),4.14(t,J=7.3Hz,1H),3.64(s,3H),3.60-3.45(m,4H),3.26(s,1H),3.19- 3.09(m,3H),2.95(d,J=15.6Hz,1H),2.85–2.52(m,3H),2.32(s,1H),2.18-1.72 (m,3H),1.58–1.46(m,1H).

实施例2药理作用实验

结构(1)所示毛钩藤碱类似物降低SHR大鼠的血压和心率水平实验：

采用16周龄近交系SHR大鼠32只分为四组，每组8只，按如下方案给 药，并记录给药后1小时内大鼠血压变化情况：

（1）SHR对照组：SHR大鼠经尾静脉途径给予乙醇溶液（每公斤体重给予 400微升）；

（2）5mg/kg组:SHR大鼠经尾静脉途径给予如以上结构(1)所示毛钩藤碱类 似物乙醇溶液（每公斤体重给予400微升，每400微升含类似物5mg）；

（3）10mg/kg组:SHR大鼠经尾静脉途径给予如以上结构(1)所示毛钩藤碱 类似物乙醇溶液（每公斤体重给予400微升，每400微升含类似物 10mg）；

（4）20mg/kg组:SHR大鼠经尾静脉途径给予如以上结构(1)所示毛钩藤碱 类似物乙醇溶液（每公斤体重给予400微升，每400微升含类似物 20mg）；

各组大鼠开始给药前测定体重，通过行颈动脉插管术，在清醒状态下测定大 鼠动脉血压及心率，腹腔注射水合氯醛（20mg/kg）麻醉大鼠，在左颈动脉插管 并头后留置，次日清醒后将预留的另一端插管与多通道生理记录仪（上海嘉龙教 仪厂）连接，实时记录大鼠清醒状态下给药前血压和心率，后按给药方案经尾静 脉给药，继续记录大鼠给药后1h内的血压和心率变化情况，实验数据以平均值 ±标准差表示，通过单因素方差分析（one-way ANOVA）作组间比较，P<0.05为 有统计学上的显著差异；

实验结果表明：结构(1)所示毛钩藤碱类似物以每公斤体重20mg的剂量通过 尾静脉给药，可在半小时内迅速缓解SHR大鼠的高血压和心率过快现象，表现为 给予每公斤体重20mg毛钩藤碱类似物的SHR大鼠给药后1h内血压（如图2所示） 和心率（如图3所示）明显降低，与SHR对照组相比，10min内血压有显著性降 低，P<0.01；0.5h内心率缓慢降低，P<0.05；之后血压和心率均有回升之势。

实施例3离体血管环实验

将SD大鼠腹腔注射水合氯醛（20mg/kg）麻醉后断颈处死，剪开胸腔，取出 完整的胸主动脉后放入通有氧气的PSS营养液中剥离血管外的结缔组织和脂肪， 将血管制成3mm的血管环，血管环置于37度通氧PSS营养液中，通过不锈钢三 角钩连接到SUMC-PC生物信号处理器（上海嘉龙教仪厂）的张力换能器上，记录 血管收缩张力，去甲肾上腺素刺激血管后用乙酰胆碱舒张以证明血管内皮完整， 后清洗换液，用苯肾上腺素刺激血管收缩达到平台期后按浓度由低到高依次加入 Y482，并绘制量效曲线；实验数据以平均值±标准差表示，通过单因素方差分析 （one-way ANOVA）和t检验作组间比较，P<0.05为有统计学上的显著差异；

实验结果表明：所述的毛钩藤碱类似物从1x10^-9M开始即有明显舒张血管的 效果（如图1所示），半数抑制率为1.129x10^-9，与乙醇对照组相比，P<0.001。

本发明上述动物实验和离体环实验结果证明，所述的毛钩藤碱类似物具有快 速明显缓解高血压急症和高血压导致的心率过快的作用，并能够在极低剂量舒张 血管，可用于制备抗高血压药物，尤其用于制备治疗高血压急症药物。

基于高血压可引起一系列心脑血管并发症等，因此本发明结构(1)所示毛钩 藤碱类似物还可用于制备防治高血压引起的高血压性脑病和高血压性心脏病包 括脑出血，脑卒中，心肌梗死和心肌缺血缺氧等的药物。