一种防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂及制备方法

摘要

本发明公开了一种防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂，由细辛、丁香，藜芦、瑞香狼毒四种植物的全株混合提取物以及助剂和溶剂制成。试验表明，本发明植物源杀菌剂对烟草花叶病毒有很好的抑制效果，无论采用灌根还是喷雾，室内盒栽试验保护作用均在43%以上；治疗作用抑制率均在73%以上；田间试验的防治效果在68%以上，较化学杀菌剂高出20个百分点。本发明杀菌剂所采用的原料均来源于天然植物，在自然界有其降解途径，无残留问题，与环境和协；并且在植物提取物中除抑菌活性成分外，还有其它多种成分，有促进植物生长、提高植物的免疫力、增加其抗病性等优点和特点，这对减少化学农药的使用、保护环境、生产绿色安全农产品都有重要意义。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物源农药，尤其涉及一种由细辛、丁香、藜芦、瑞香狼毒四种植物中提取活性成分混合后制备的植物源杀菌剂，以及该杀菌剂的制备方法。

背景技术

由植物病毒引起的病毒病，是农业生产上的一类重要病害，烟草花叶病毒（TMV）每年造成的经济损失就超过1亿美元。由于病毒在植物细胞内绝对寄生，其复制所需的能量、物质、场所完全由寄主细胞提供，加之植物没有完整的免疫代谢系统，这使得植物病毒病的防治更加困难，并且目前所使用的化学抗病毒剂只能在一定程度上起到延缓或减轻病毒病症状的作用，不能根除病毒，对植物病毒病治疗效果甚微，因此植物病毒病的防治一直是植物病害及病毒学研究的难点和热点问题。

植物源农药以其独特的优势，成为天然抗病毒活性物质研究的主要来源，也使发展新型植物源抗病毒类植物源农药己越来越受到人们重视。我国从80年代后期至今，许多学者做了大量的工作，到目前发现含有植物病毒抑制物质的植物有几十种，但均未成为商品。

目前，农业生产中防治病毒病主要还是通过选育抗病品种、种子消毒、加强田间管理（农事操作和传播媒介）等措施。常用的一些化学药剂效果不佳，还容易带来环境污染、易产生抗药性等弊端。鉴于此，本发明从植物中提取有效成分，按不同比例制成防治烟草花叶病毒病的药剂，从而为农业生产更好的服务。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂，本发明的植物源杀菌剂具有高效、低毒、低残留、与环境和协、提高寄主免疫力的特点。本发明还公开了该植物源杀菌剂的制备方法。

本发明防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂由细辛（Asarum sieboldii Miq）全株、丁香（Syzygium aromaticum）花蕾、藜芦（Veratrum nigrum L）全株、和瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.）根四种植物的混合提取物以及助剂和溶剂制成。

本发明防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂的制备方法包括如下步骤：

(1)将细辛全株、丁香花蕾、藜芦全株、瑞香狼毒根四种植物不同部位分别烘干、粉碎通过20-40目筛，备用；

(2) 将(1)制备的原料按质量份分别称取细辛1－3、丁香3－12、藜芦5－8、瑞香狼毒6－15，混合均匀后倒入提取罐，加入4-7倍原料质量份的有机溶剂，搅拌中加热至40-60℃,回流提取4-6小时或恒温浸提5-8小时，备处理；

 (3) 将(2)制备的提取液减压浓缩后得到膏状物，备用；

(4)将(3)制备的膏状物质量1-3倍的助剂与膏状物混合均匀后，再加入膏状物质量100-300倍的20%乙醇溶液或水，制成防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂。

所述的有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮的一种或几种有机溶剂的混合液。

所述的助剂为吐温类，如吐温80。

所述的植物细辛（Asarum sieboldii Miq）为马兜铃科、细辛属多年生草本；是我国特有的传统中药。中医用于治疗风寒头痛、关节疼痛、鼻塞及口腔糜烂等。细辛所含的挥发油对黄曲霉（Aspergillus sp.）、黑曲霉（Aspergilluser sp.）、白色念珠菌（Candida sp.）、伤寒杆菌（Salmonella sp.）有抑菌作用；对黑斑病菌（Alternaria panax）、疫病菌（Phytophthora cactorum）和番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）等植物病原真菌均有较好的抗菌效果。

丁香（Syzygium aromaticum）为桃金娘科植物丁香（Eugenia caryophyllata Thunb）的干燥花蕾，又称公丁香。丁香味辛性温，用于治疗脾胃虚寒、呃逆呕吐、食少吐泻、心腹冷痛和肾虚阳痿；丁香含挥发油（即丁香油），油中主要成分为丁香酚，具有消炎、杀菌、驱虫、镇痛等功效，尤其以丁香花蕾为原料提取的挥发油其效果更加突出。

藜芦（Veratrum nigrum L）属多年生草本植物。别名大叶芦，山葱。性味辛、苦，寒；有毒。其主要活性成分为生物碱，如藜芦碱等，有催吐，祛痰，杀虫抑菌的功能。

瑞香狼毒（Stellera chamaejasme L.）属瑞香科狼毒属植物。以根入药，含有黄酮类化合物、香豆素类化合物、二萜类物质和木脂体类成分等 ，其主要活性成分为狼毒素，属黄酮类物质，具有杀虫抑菌作用。

本发明的防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂的药效试验

1、室内盆栽药效实验

1.1供试杀菌剂的制备

(1)将细辛全株、丁香花蕾、藜芦全株、瑞香狼毒根四种植物不同部位分别烘干、粉碎通过30目筛，备用；

(2) 将(1)制备的原料按质量份分别称取细辛2、丁香8、藜芦6、瑞香狼毒10，混合均匀后倒入提取罐，加入5倍原料质量份的乙醇，热回流提取5小时，备处理；

(3) 将(2)制备的提取液，减压浓缩后得到膏状物，备用；

(4)将(3)制备的植物提膏状物加入膏状物质量2倍的吐温80，混合均匀后，再加入膏状物质量300倍的净水，制成防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂。

试验方法

保护作用试验 选择 5-6 叶期，长势一致、健壮的植株供试。试验以施药后1d接种TMV的番茄苗为处理组，分别用供试药剂300 倍液进行喷雾以及灌根，只接种不施药的番茄苗为空白对照组。TMV接种浓度为 1：20(W/V)。接种后 14d、30d 检查番茄叶片上的枯斑数，计算抑制率。每处理20 株苗，试验重复 3次。

治疗作用试验 以接种 TMV 后施药 的为处理组，以只接种不施药对照组。接种毒源 TMV，接种浓度为 1：20(W/V)，接种后5d 进行药剂处理。处理为供试药剂300倍液喷雾和灌根，分别于用药后 14d、30d检查番茄新生叶片上的枯斑数，计算抑制率。每处理20 株苗，试验重复 3次。

抑制率 = （对照平均枯斑数-处理平均枯斑数）/对照平均枯斑数×100

1.3 结果与分析

实验结果见下表1、表2。

表1 本发明杀菌剂对番茄病毒病保护作用测定结果

表2  本发明杀菌剂药剂对番茄病毒病治疗作用的测定结果

 

     从表1和2可以看出，在保护作用中，以不同方式处理后，其14天对TMV的抑制效果都在90%以上；而在治疗作用中，以灌根方式更为有效，30天后的抑率仍有86.97%。

保护作用是指喷药后对病害发生情况影响，而治疗作用是指作物感染病毒后药物对其的治疗作用，从本实验来看地，保护作用在14天时比较明显，治疗作用以灌根方式更为有效，这也表明本药剂对TMV有很好的抑制作用，且持效期较长，可达30天左右。

、田间药效实验

2.1试验方法

试验在山西省晋中市太谷县山西农业大学进行，小区试验随机区组排列，小区面积100㎡。试验田为连作露地番茄，管理水平一般，番茄花叶病毒病中度发生。试验于2014年6月18号开始处理，将上述制备好的药剂稀释300倍，采用田间小区试验方法进行喷雾和喷雾加灌根处理，并设化学药剂对照和清水对照，每个处理设3次重复，分别于施药前和第施药14天和21天进行调查，每小区连续调查30株，以株为单位进行分级记录，计算病情指数和相对防治效果。

病情指数分级标准

0级：全株无病；

1级：轻微花叶或上下部部超过1/3叶片，植株矮化为正常植株的3/4以上；

2级：1/3-1/2叶片黄化、卷叶，植株矮化为正常植株的2/3以上；

3级：1/2-2/3叶片黄化、卷叶，植株矮化为正常植株的1/2-2/3以上；

4级：全株叶片黄化、卷叶，植株矮化为正常植株的1/3-1/2以上；

病情指数，防治效果计算方法：

病情指数（100）=Σ各级株数×病情级数/4×调查总株数×100；

相对防治效果（100）=[1-(CK₀*PT₁) /(CK₁*PT₀)]×100；

CK₀  为空白对照区施药前病情指数

CK₁   为空白对照区施药前病情指数

PT₀   为药剂处理区施药前病情指数

PT₁  为药剂处理区施药前病情指数

2.2 试验结果

本发明杀菌剂对番茄病毒病的实验结果见表3。

表3  本发明杀菌剂对番茄病毒防治效果的测定结果

从表3可以看出，在保护作用中，空白对照组的病情指数由最初的21.54增加到40.96，表明番茄病毒病的病情在不断加重；化学药剂吗啉呱处理组的病情指数从最初的36.00减少到施药后14天的32.00，说明病情有所减轻，但21天的病情指数又增加到35.11，病情又有所加重；采用本发明杀菌剂处理后，无论是直接喷雾还是喷雾加灌根，病情指数在用药后均有所降低，相对防治效果在21天后分别达到72.02%和68.72%，均优于吗啉呱的48.71%。

本发明的有益效果

（1）用本发明制备的植物源杀菌剂对烟草花叶病毒（TWV）有很好的抑制效果，试验结果表明，无论采用灌根还是喷雾方式，室内盆栽试验保护作用抑制率均在43%以上；治疗作用抑制率均在73%以上；田间试验的防治效果在68%以上，较化学杀菌剂高出20个百分点。

 （2）本发明杀菌剂所采用的原料均来源于天然植物，在自然界有其降解途径，无残留问题，与环境和协；并且在植物提取物中除抑菌活性成分外，还有其它多种成分，有促进植物生长、提高植物的免疫力、增加其抗病性等优点和特点，这对减少化学农药的使用、保护环境、生产绿色安全的农产品都有重要意义。

具体实施方式

实施例1

首先将细辛全株、丁香花蕾、藜芦全株、瑞香狼毒根四种植物不同部位分别烘干、粉碎通过20目筛，其次将上述制备的原料按质量份分别称取细辛1、丁香3、藜芦5、瑞香狼毒6，混合均匀后倒入提取罐，加入4倍原料质量份的甲醇，搅拌中加热至40℃,回流提取4小时制得提取液，再减压浓缩后得到膏状物，最后将膏状物质量1倍的吐温80，与膏状物混合均匀后，再加入膏状物质量100倍的20%乙醇溶液，即制成防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂。

实施例2

首先将细辛全株、丁香花蕾、藜芦全株、瑞香狼毒根四种植物不同部位分别烘干、粉碎通过40目筛，其次将上述制备的原料按质量份分别称取细辛3、丁香12、藜芦8、瑞香狼毒15，混合均匀后倒入提取罐，加入7倍原料质量份的乙醇，搅拌中加热至60℃,回流提取6小时制得提取液，再减压浓缩后得到膏状物，最后将膏状物质量3倍的吐温80，与膏状物混合均匀后，再加入膏状物质量300倍的水，即制成防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂。

实施例3

首先将细辛全株、丁香花蕾、藜芦全株、瑞香狼毒根四种植物不同部位分别烘干、粉碎通过30目筛，其次将上述制备的原料按质量份分别称取细辛2、丁香6、藜芦7、瑞香狼毒10，混合均匀后倒入提取罐，加入6倍原料质量份的丙酮，搅拌中加热至50℃, 恒温浸提5小时制得提取液，再减压浓缩后得到膏状物，最后将膏状物质量2倍的吐温80，与膏状物混合均匀后，再加入膏状物质量200倍的水，即制成防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂。

实施例4

首先将细辛全株、丁香花蕾、藜芦全株、瑞香狼毒根四种植物不同部位分别烘干、粉碎通过20－30目筛，其次将上述制备的原料按质量份分别称取细辛2－3、丁香5－6、藜芦7－8、瑞香狼毒12－14混合均匀后倒入提取罐，加入5－6倍原料质量份的乙醇，搅拌中加热至50－55℃, 恒温浸提6－7小时制得提取液，再减压浓缩后得到膏状物，最后将膏状物质量2－2.5倍的吐温80，与膏状物混合均匀后，再加入膏状物质量200－250倍的水，即制成防治烟草花叶病毒病的植物源杀菌剂。