一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法

摘要

本发明公开了一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法。它包含以下工艺过程1)将红豆杉枝叶粉碎烘干后，用80％乙醇回流提取5小时，连续提取3次，滤液减压浓缩后得10-DABIII提取物。2)将10-DABIII提取物溶解后干法上样，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品。3)将10-DABIII半成品溶解后，按1：1.5-4的摩尔比加入咪唑类化合物，搅拌30min后静置，0℃冷却，过滤，干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物。4)将10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，萃取，干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品含量在99％以上。

说明书

技术领域

本发明涉及一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III(10-DAB  III)的方法，特别是利用10-DAB III粗品与咪唑类化合物结晶纯化获得高纯度 10-DAB III的分离方法。

背景技术

多西紫杉醇被认为是迄今疗效最显著的抗癌药物之一，1996年经FDA确 认开始用于肺癌、乳腺癌、结肠癌等方面的临床药物。多西紫杉醇和紫杉醇(Taxol) 一样具有广谱的抗白血病和抗实体肿瘤活性，结构复杂，多官能团和多手性中心 等，全合成成本高、难度较大。当发现欧洲红豆杉的针叶中提取到浓度较高的紫 杉烷类似物10-去乙酰基巴卡亭(10-deacetyl baccatin III,简称10-DAB III)中间体 后，多西紫杉醇的合成及规模化生产才成为可能。10-DAB III的结构式如下：

10-DAB Ⅲ主要分布在红豆杉的枝叶中，其含量可高达0.1％以上，而在多 年生的树皮含量最少。其分布与紫杉醇的分布刚好相反,紫杉醇主要分布在多年 生的红豆杉树皮中，含量多在0.03％以下，而在叶中含量极低，大多不及树皮中 含量的十分之一。枝叶是可再生资源，因此生产10-DAB Ⅲ不象生产紫杉醇以 牺牲有限的红豆杉资源为代价，因此,研究10-DABⅢ的提取和纯化工艺具有十 分重要的意义。

目前，关于10-DABⅢ的提取分离已有大量文献和专利报道，基本上都是采 取提取、分离、结晶三个步骤，其中分离和结晶是影响得率和纯度的关键步骤。 常规采用甲醇或酒精进行浸泡提取，萃取浓缩，然后多次硅胶柱层析分离，重结 晶得到一定纯度的10-DABIII。多次柱层析分离和重结晶过程不仅费时费力，增 加溶剂成本，还会降低得率。因而如何简化分离纯化工艺，尽可能少的利用有机 溶剂方便的获得高质量的10-DABIII成为该领域研究的重点。

中国专利公开号CN1473821A公开了一种提取10-DABIII的方法，采用常规 硅胶柱层析分离提取处理出的半成品10-DABIII，该方法较耗费时间，溶剂消耗 量也大，容易造成得率的损失。中国专利公开号CN1398859A公开了一种从种 植红豆杉枝叶用后残渣中提取10-DABIII的方法，该方法涉及制备液相色谱分离 过程，但所用溶剂体系和梯度洗脱手段在规模化生产中显得工艺复杂，溶剂消耗 量大。中国专利公开号CN101045719A公开了一种利用制备液相色谱分离纯化 10-DABIII的半成品，用分析纯四氢呋喃、正己烷和甲醇混合溶剂为洗脱流动相， 制备工艺较为复杂，更适合于实验室小批量生产。

发明内容

针对10-DABIII的提取纯化需要使用多次柱层析及重结晶，或者使用复杂 的制备色谱技术来实现的现状，本发明提出将10-DABIII粗品经一次柱层析和一 次添加咪唑类化合物进行结晶纯化获得高纯度精品的简化分离方法。考虑到 10-DABⅢ的结构中含有多羟基，如果加入含氮有机化合物，则两者之间可能通 过氢键形成结晶化合物，我们研究发现，10-DABⅢ易与咪唑形成结晶配合物， 而不受其它杂质影响，更为重要的是，形成的结晶配合物加水后可以方便的用有 机溶剂提取出来，这样的结晶分离过程为获得高纯度的10-DABⅢ提供了方便。

本发明的目的在于提供一种简易高效分离纯化10-DABIII粗品，获得高纯 度10-DABIII的方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

(1)将红豆杉枝叶粉碎烘干后，按固液比1:10的比例用体积分数为80％ 的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得到 10-DABIII提取物，其中10-DABIII的质量含量为8-20％；

(2)将10-DABIII提取物用溶剂溶解后干法上样，用洗脱液洗脱，收集含 10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品；

(3)将上述10-DABIII半成品用二氯甲烷溶解后，按摩尔比为10-DABIII 半成品：咪唑类化合物＝1：1.5-4.0的比例加入咪唑类化合物，室温搅拌30min 后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的 结晶配合物；

(4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取 三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品。

步骤(2)所述溶解10-DABIII提取物的溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇 中的一种或几种；

步骤(2)所述的洗脱液选自下述混合溶剂中的任意一种：乙酸乙酯-石油醚、 甲醇-四氢呋喃-正己烷、乙酸乙酯-环己烷；

步骤(3)所述的咪唑类化合物为咪唑、1-甲基咪唑、2-甲基咪唑中的一种 或几种。

本发明具有以下优点：

(1)利用10-DABⅢ易与咪唑类化合物形成结晶配合物的特点，方便的实 现了10-DABⅢ与其它紫杉烷类化合物进行分离的目的；

(2)10-DABⅢ与咪唑类化合物形成结晶配合物后，可以方便的用有机溶剂 提取分离，从而获得高纯度产品；

(3)分离过程仅需一次柱层析和一次结晶分离过程，避免了连续多次的柱 层析及重结晶操作，大大减少了人力、物力耗费；

(4)与10-DABⅢ形成结晶配合物的咪唑类化合物可以回收，循环使用， 成本更低也更环保。

具体实施方式

实施例1：

(1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取1kg细粉按固液比1:10 的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤 液，减压浓缩后得10-DABIII提取物120g。

(2)将10-DABIII提取物用300mL四氢呋喃溶解后干法上样，用乙酸乙 酯-石油醚(体积比乙酸乙酯：石油醚＝2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液， 蒸除溶剂得10-DABIII半成品1.85g。

(3)将上述10-DABIII半成品用20mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑0.20g， 室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII 与咪唑的结晶配合物1.08g。

(4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三 次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品0.896g，纯度 99.2％。

实施例2：

(1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取10kg粉末按固液比1:10 的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤 液，减压浓缩后得10-DABIII提取物1350g。

(2)将10-DABIII提取物用3000mL四氢呋喃溶解后多次干法上样，用乙 酸乙酯-环己烷(体积比乙酸乙酯：环己烷＝2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗 脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品22.8g。

(3)将上述10-DABIII半成品用200mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑3.0g， 室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII 与咪唑的结晶配合物11.9g。

(4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三 次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品9.35g，纯度 99.4％。

实施例3：

(1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取5kg粉末按固液比1:10 的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤 液，减压浓缩后得10-DABIII提取物680g。

(2)将10-DABIII提取物用1200mL二氯甲烷溶解后多次干法上样，用乙 酸乙酯-石油醚(体积比乙酸乙酯：石油醚＝2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗 脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品10.9g。

(3)将上述10-DABIII半成品用100mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑2.0g， 室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII 与咪唑的结晶配合物5.8g。

(4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三 次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品4.38g，纯度 99.5％。