一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法

摘要

本发明涉及一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法，该方法包括以下步骤：(I)蒙药材荜拨提取物的制备，包括购买市售蒙药材-干燥荜拨果实进行超微粉碎，加入乙醇质量分数为65-100wt％的乙醇溶液，在40-45℃下进行超声提取，时间为4-6小时，过滤，得提取液；(II)蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分定性分析；采用高效液相色谱对蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分进行定性分析，取上述制备的蒙药材荜拨提取物溶于流动相，通过高效液相色谱进行分离，将得到的色谱图同荜拨药效成分标准品的色谱图进行比对，以分析该蒙药材荜拨提取物的成分。本发明的方法操作简单，能够将荜拨中的多种药效成分提取出来，且提高了药效活性成分的提取率，适合工业化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及的是中药提取物，具体涉及一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法。

背景技术

蒙药有着悠久的历史，是蒙古族人民长期同疾患作斗争的经验总结，并吸收藏医、 汉医经验逐渐形成的，是中华民族医学的一个重要组成部分，是具有民族特色的医药。 它在几千年临床医学中被证实为一门不可缺少的学科。蒙药材荜拨是胡椒科植物荜拨的 近成熟或成熟果穗，归脾经、胃经、大肠经、肺经、膀胱经、肝经、肾经。主治脘腹冷 痛、呕吐、泄泻、偏头痛、鼻渊、外治牙痛、冠心病、心绞痛，是中、蒙、藏医常用药。

研究表明荜拨能明显抑制胃酸和胃蛋白酶的分泌，具有止痛、消炎、抗溃疡，促进 消化系统的功能。有方剂记载，荜拨穴位敷贴可以治疗胃脘证。同时在一定程度上还可 以治疗腹泻，对付痢疾，《唐太宗实录》、《独异志》、《定命录》中均记载了唐太宗气痢发 动，中医名药试之无效，有人献乳煎荜拨一方，服之灵验的事，说明荜拨治腹泻具有悠 久历史。荜拨还有一定的抗惊厥疗效，在小鼠实验的时候，有镇静作用，同时对于癫痫 等精神疾病也用治疗效果，能维持中枢神经的稳定性，与一些神经方面的药物有相同的 功效。除此之外，还有关于荜拨药材治疗牙痛和鼻炎的报道。因此，多项研究表明，蒙 药材荜拨用药历史悠久，具有多重功效，是一味非常具有研究价值的药材。

研究发现荜拨中的主要成分有胡椒碱，荜拨宁，棕榈酸，四氢胡椒酸，十一碳-1-烯 -3，4-甲撑二氧苯，哌啶，挥发油，芝麻素等。结合国内外有关荜拨的有效成分的药理 作用的研究发展认为荜拨中的有效成分胡椒碱、荜拨宁有调血脂作用，尤其是胡椒碱有 显著的调血脂作用，其疗效显著，未发现毒副作用，此后，关于荜拨及其有效成分的调 血脂作用不断深入。为此开展的研究证明，荜拨中胡椒碱能同时抑制内源性和外源性血 脂升高，同时了解到胡椒碱也可能有毒性。但不可否认胡椒碱在降血脂方面有很好的疗 效。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法，本发明采用超微 粉技术、超声提取技术并结合硅胶柱层析和大孔吸附树脂柱层析技术处理蒙药材荜拨， 得到一种全新的蒙药材荜拨药效物质基础分析方法，该方法操作简单，能够将荜拨中的 多种药效成分提取出来，且提高了药效活性成分的提取率，适合工业化生产。

本发明具体涉及一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法，该方法包括以下步骤：

(I)蒙药材荜拨提取物的制备，包括

1)购买市售蒙药材-干燥荜拨果实进行超微粉碎，加入乙醇质量分数为65-100wt％的乙 醇溶液，在40-45℃下进行超声提取，时间为4-6小时，过滤，得提取液；

(II)蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分定性分析

采用高效液相色谱对蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分进行定性分析，取上述 制备的蒙药材荜拨提取物溶于流动相，通过高效液相色谱进行分离，将得到的色谱图同 荜拨药效成分标准品的色谱图进行比对，以分析该蒙药材荜拨提取物的成分；通过分析 得出，第(I)步中得到的蒙药材荜拨提取物的色谱图能够清楚的区分出各药效成分的 色谱峰。

优选地，所述的一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法，该方法包括以下步骤：

(I)蒙药材荜拨提取物的制备，包括

1)购买市售蒙药材-干燥荜拨果实进行超微粉碎，加入乙醇质量分数为65-100wt％的乙 醇溶液，在40-45℃下进行超声提取，时间为4-6小时，过滤，得提取液；

(II)蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分定性分析

采用高效液相色谱对蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分进行定性分析，取上述 制备的蒙药材荜拨提取物溶于流动相，通过高效液相色谱进行分离，将得到的色谱图同 荜拨药效成分标准品的色谱图进行比对，以分析该蒙药材荜拨提取物的成分；通过分析 得出，第(I)步中得到的蒙药材荜拨提取物的色谱图能够清楚的区分出胡椒碱、荜茇 明宁碱、二氢荜茇明宁碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、 荜茇十一碳三烯哌啶、N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的色谱峰。

优选地，所述的一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法，该方法包括以下步骤：

(I)蒙药材荜拨提取物的制备，包括

1)购买市售蒙药材-干燥荜拨果实进行超微粉碎，加入乙醇质量分数为65-100wt％的乙 醇溶液，在40-45℃下进行超声提取，时间为4-6小时，过滤，得提取液；

2)将提取液经过硅胶层析柱吸附，用水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用有机溶剂 为洗脱液，进行洗脱，收集该洗脱液；

3)将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；

(II)蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分定性分析

荜拨药效成分标准品溶液的配制：取等质量的胡椒碱、荜茇明宁碱、二氢荜茇明宁 碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、荜茇十一碳三烯哌啶 和N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的标准物质，用流动相溶解，即将上述物质一起溶解 于流动相中；

采用高效液相色谱对蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分进行定性分析，取上述 制备的蒙药材荜拨提取物溶于流动相，通过高效液相色谱进行分离，将得到的色谱图同 荜拨药效成分标准品的色谱图进行比对，以分析该蒙药材荜拨提取物的成分；通过分析 得出，第(I)步中得到的蒙药材荜拨提取物的色谱图能够清楚的区分出胡椒碱、荜茇 明宁碱、二氢荜茇明宁碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、 荜茇十一碳三烯哌啶、N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的色谱峰。

优选地，所述的一种蒙药材荜拨药效物质基础分析方法，该方法包括以下步骤：

(I)蒙药材荜拨提取物的制备，包括

1)购买市售蒙药材-干燥荜拨果实进行超微粉碎，加入乙醇质量分数为65-100wt％的乙 醇溶液，在40-45℃下进行超声提取，时间为4-6小时，过滤，得提取液；

2)将提取液经过硅胶层析柱吸附，用水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯 仿为洗脱液，进行洗脱，收集该洗脱液；

3)将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；

4)将上述干浸膏用丙酮质量分数为75-80wt％的丙酮溶液溶解，上大孔吸附树脂柱，然 后用3倍柱体积的丙酮质量分数为10-20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质 量分数为75-80wt％的丙酮溶液洗脱，收集该洗脱液；

5)将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨提取物；

(II)蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分定性分析

色谱条件：色谱柱为C18；流动相为甲醇-水溶液，甲醇与水的体积比为50-70∶30-50； 检测波长为250-350nm，柱温为30-45℃，流速1.0mL/min；进样体积50μL；采用等梯 度洗脱；

荜拨药效成分标准品溶液的配制：取等质量的胡椒碱、荜茇明宁碱、二氢荜茇明宁 碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、荜茇十一碳三烯哌啶、 N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的标准物质，用流动相溶解；

采用高效液相色谱对蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分进行定性分析，取上述 制备的蒙药材荜拨提取物溶于流动相，通过高效液相色谱进行分离，将得到的色谱图同 荜拨药效成分标准品的色谱图进行比对，以分析该蒙药材荜拨提取物的成分；通过分析 得出，第(I)步中得到的蒙药材荜拨提取物的色谱图能够清楚的区分出胡椒碱、荜茇 明宁碱、二氢荜茇明宁碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、 荜茇十一碳三烯哌啶、N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的色谱峰。

优选地，步骤1)中所述的超微粉碎是将荜拨原料粉碎至粒径为100-120μm。

优选地，步骤1)中乙醇溶液的浓度为70-85wt％，乙醇溶液的用量为：每100克原 料使用乙醇溶液1-1.5；更优选，乙醇溶液的浓度为80wt％，乙醇溶液的用量为：每100 克原料使用乙醇溶液1.25L。

优选地，步骤1)中在45℃下进行超声提取，时间为5小时。

优选地，步骤2)中甲醇-氯仿的体积比为1∶3.5。

优选地，步骤4)中的大孔吸附树脂为AB-8柱。

在本发明中，如无特殊说明，乙醇溶液均为乙醇的水溶液，丙酮溶液均为丙酮的水 溶液。

本发明的技术方案取得了如下有益的技术效果：本发明采用超微粉技术、超声提取 技术并结合硅胶柱层析和大孔吸附树脂柱层析技术处理蒙药材荜拨，是一种全新的蒙药 材荜拨药效物质基础分析方法，该方法操作简单，能够将荜拨中的多种药效成分提取出 来，且提高了药效活性成分的提取率，适合工业化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于 这些具体的实施方式。

具体实施方式

实施例1：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(甲醇与氯仿的体积比为1∶3.5)为洗 脱液，进行洗脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用 丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积 的丙酮质量分数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的 丙酮溶液洗脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质 基础分析用荜拨提取物125.38g。

精密称取提取物，溶于流动相，作为供试品溶液。精密称取等质量的胡椒碱、荜茇 明宁碱、二氢荜茇明宁碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、 荜茇十一碳三烯哌啶和N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的标准物质，用流动相溶解后配 制成上述各物质的质量体积浓度均为10ng/mL，作为对照品溶液；进行高效液相色谱对蒙 药材荜拨提取物的药效物质基础成分进行定性分析；将得到的色谱图同荜拨药效成分标 准品的色谱图进行比对。

色谱条件：色谱柱为C18；流动相为甲醇-水溶液，体积比为70∶30；检测波长为 250-350nm，柱温为30-45℃，流速1.0mL/min；进样体积50μL；采用等梯度洗脱。

高效液相色谱分析结果表明：通过与荜拨药效成分标准品溶液的色谱图对比，第(I) 步中得到的蒙药材荜拨提取物的色谱图能够清楚的显示出胡椒碱、荜茇明宁碱、二氢荜 茇明宁碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、荜茇十一碳三 烯哌啶和N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的色谱峰，并且各物质色谱峰能够区分开。

实施例2：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为70wt％的乙醇溶液2.5L，在40℃下进行超声提取， 超声波功率为700W，提取4小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为75wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为75wt％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物123.51g。蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分定性分析部分同实施例1。

高效液相色谱分析结果表明：通过与荜拨药效成分标准品溶液的色谱图对比，第(I) 步中得到的蒙药材荜拨提取物的色谱图能够清楚的显示出胡椒碱、荜茇明宁碱、二氢荜 茇明宁碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、荜茇十一碳三 烯哌啶和N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的色谱峰，并且各物质色谱峰能够区分开。

实施例3：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为85wt％的乙醇溶液2.5L，在43℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取6小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物126.32g。蒙药材荜拨提取物的药效物质基础成分定性分析部分同实施例1。

高效液相色谱分析结果表明：通过与荜拨药效成分标准品溶液的色谱图对比，第(I) 步中得到的蒙药材荜拨提取物的色谱图能够清楚的显示出胡椒碱、荜茇明宁碱、二氢荜 茇明宁碱、胡椒酰胺、四氢胡椒酸、荜茇壬二烯哌啶、荜茇壬三烯哌啶、荜茇十一碳三 烯哌啶和N-异丁基十八碳-2，4-二烯酰胺的色谱峰，并且各物质色谱峰能够区分开。

对比例1：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为140-160μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物128.85g。

对比例2：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为70-90μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物115.96g。

对比例3：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-石油醚(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行 洗脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分 数为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量 分数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用 荜拨提取物127.31g。

对比例4：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用乙醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物129.35g。

对比例5：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入体积百分比为80％乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取，超声 波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用水洗 脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3)为洗脱液，进行洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数为 80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分数为 20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗脱，收 集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨提 取物125.57g。

对比例6：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶4)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物127.92g。

对比例7：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1.5∶3.5)为洗脱液，进行 洗脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分 数为80wt％的丙酮溶液溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量 分数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用 荜拨提取物123.52g。

对比例8：

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的丙酮溶液溶解，上D101大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物124.37g。

对比例9

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的丙酮溶液溶解，上XDA-1大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的丙酮溶液洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的丙酮溶液洗脱， 收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨 提取物127.93g。

对比例10

购买市售蒙药材-干燥荜拨果实200.00g进行超微粉碎，粉碎至粒径为100-120μm， 放入容器中，然后加入乙醇质量分数为80wt％的乙醇溶液2.5L，在45℃下进行超声提取， 超声波功率为600W，提取5小时，过滤，得提取液；将提取液经过硅胶层析柱吸附，用 水洗脱3个柱体积，弃去洗脱液，然后用甲醇-氯仿(体积比为1∶3.5)为洗脱液，进行洗 脱，收集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，得干浸膏；将上述干浸膏用丙酮质量分数 为80wt％的乙醇溶液溶解，上XDA-1大孔吸附树脂柱，然后用3倍柱体积的丙酮质量分 数为20wt％的乙醇洗脱，弃去洗脱液；再用丙酮质量分数为80wt％的乙醇溶液洗脱，收 集该洗脱液；将上述洗脱液减压浓缩，干燥，得蒙药材荜拨药效物质基础分析用荜拨提 取物122.17g。

本发明的蒙药材荜拨提取物的制备过程中对荜拨药材进行超微粉碎，可以破坏荜拨 果实细胞组织结构，使有效成分释放更快、更充分，大大提高有效成分的提取率。超声 波提取主要是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级 效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并 充分与溶剂混合，利于提取。现以荜拨的活性成分胡椒碱的提取率(产物中胡椒碱的质 量/原料中胡椒碱的总质量×100％)为指标，对实施例1-3以及对比例1-10中蒙药材荜 拨提取物的制备过程进行评价。其中胡椒碱的含量按照《中国药典2010版》第一部，荜 拨项下液相色谱方法测定。

表1不同方法对蒙药荜拨中胡椒碱提取率的影响

      

样品 胡椒碱提取率(wt％) 实施例1 96.93％       

      

实施例2 96.81％ 实施例3 96.76％ 对比例1 84.49％ 对比例2 85.38％ 对比例3 80.68％ 对比例4 81.83％ 对比例5 88.17％ 对比例6 86.21％ 对比例7 86.21％ 对比例8 80.18％ 对比例9 76.37％ 对比例10 78.56％

从表1中可以得出，实施例1-3中胡椒碱的提取率达到96％以上，这说明原料荜拨 中的活性成分胡椒碱大部分被转移到产物中，而对比例1-2中原料的粉碎粒径在本发明 的范围以外时(粉碎粒径分别为140-160μm、70-90μm)，提取率就显著降低，这说明 选择粒径为100-120μm时，胡椒碱的提取率最高，而增大或者降低粒径都会损失胡椒碱 的提取率。

从表1的结果还可以得出，实施例1-3比对比例3-4中(分别以甲醇-石油醚、乙醇- 氯仿为洗脱液)时，胡椒碱的提取率大大提高；并且通过实施例1-3和比较例5-7对比可 以得出，选择甲醇-氯仿作为硅胶柱层析的洗脱液尤其是二者为特定配比(1∶3.5)时，比 现有技术中常用的其他有机溶剂能够取得预料不到的技术效果。

通过实施例1-3同对比例8-10比较可以得出，选择AB-8大孔吸附树脂比选择D101 大孔吸附树脂、XDA-1大孔吸附树脂能提高胡椒碱的提取率，并且选择丙酮溶液作为洗 脱液较现有技术中常用的乙醇具有较好提取率，这相对与现有技术是无法预料的。

本发明的技术方案能够显著提高有效成分的收率，其中超微粉碎的粒径、洗脱液的 选择以及大孔吸附树脂的种类对最终结果有显著影响。此外，本发明采用超声波提取亦 能提高胡椒碱的提取率，缩短生产周期。