一种含有吉西他滨的注射用药物组合物

摘要

本发明针对吉西他滨原料药对水分及氧化条件不稳定的缺陷，设计了一种含有吉西他滨的注射用药物组合物。通过在组合中加入特定用量的多酚类抗氧剂并控制最终冻干产品中含水量的技术方法，得到了一种稳定性更佳的吉西他滨注射用冻干制剂。本发明所述吉西他滨注射用冻干制剂制备方法简单，可采用常规制备方法生产，无需特殊设备，具有容易产业化、生产效率高、稳定性好、质量可控等显著优点，具有突出的实质性特点和显著的进步。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含有吉西他滨的注射用药物组合物及其制备 方法和用途。

背景技术

盐酸吉西他滨(Gemcitabine hydrochloride)是1983年礼来公司研制的一种新型二氟核苷 类抗代谢肿瘤药，英文名称为Gemcitabine，化学名为2’-脱氧-2’，2’-双氟腺苷(β-异构体)， 分子式为C9H11F2N3O4，分子量为263.1。制剂所用化合物为盐酸吉西他滨，分子式为 C9H11F2N3O4·HCl，分子量为299.66，结构式如下：

吉西他滨主要杀伤DNA合成(S)期细胞，也可以阻断细胞由G1向S期进展。其在细 胞内由核苷激酶转化为具有活性的二磷酸盐(dFdCDP)和三磷酸盐(dFdCTP)，抑制DNA的合 成。

一方面，dFdCDP抑制核糖核苷酸还原酶，使合成DNA必需的脱氧三磷酸核苷(包括 dCTP在内)生成减少。另一方面，dFdCDP与dCTP竞争掺入DNA分子中，而细胞内dCTP 浓度的降低更加促进dFdCTP向DNA的掺入。dFdCTP掺入DNA后，由于DNA聚合酶不能 去除掺入的dFdCTP而修复延伸中DNA链，在延伸链中掺入的dFdCTP可进一步抑制DNA 合成。此外，其可使慢性红系骨髓增生症的T成淋巴细胞样细胞核内DNA呈碎片样改变， 从而导致细胞凋亡。

1995年南非、瑞典、荷兰、澳大利亚等国家批准注射用盐酸吉西他滨上市，1996年 FDA批准临床用于治疗非小细胞肺癌和胰腺癌的一线治疗，1999年我国批准进口Lilly公司 的注射用盐酸吉西他滨。

吉西他滨是治疗非小细胞肺癌最有效的一线药物之一，具有作用机制独特、抗瘤谱广、 高缓解率、延长生存期和毒性反应低等优点，与其他化疗药物无交叉耐药且毒性反应无叠加 等特点，特别是其能有效延长病人的生命，提高病人生存质量。目前，注射用盐酸吉西他滨 已在100多个国家得到广泛临床应用。

1998年，礼来公司首次在FDA网站公布了其上市产品注射用盐酸吉西他滨的产品说 明书，并公开了产品的配方：每瓶含200mg盐酸吉西他滨(以自由碱表示)，200mg甘露醇 和12.5mg醋酸钠，制备成无菌冻干粉末。

但是吉西他滨原料药并不稳定，尤其在氧化及碱性条件下会降解产生如下两种杂质， 杂质A，化学名为，2’-脱氧-2’，2’-二氟尿嘧啶，结构如下：

杂质B，化学名为，4-氨基-1-(2-脱氧-2,2-二氟-α-D-赤式呋喃核糖)嘧啶-2(1H)- 酮，结构式如下：

尤其是在水解及酸性条件下会降解生产杂质A。

对此，研究人员提出了不同的解决方法。

中国专利CN102302462B公开了一种盐酸吉西他滨冻干制剂，由盐酸吉西他滨、冻干 保护剂和抗氧化剂组成，其中：盐酸吉西他滨占20-70重量份，冻干保护剂占15-60重量份， 抗氧剂占0.005-0.5重量份。加入抗氧化剂的目的在于进一步提高药物的稳定性，该专利中所 选择的抗氧剂为焦亚硫酸氢钠、枸橼酸、维生素C、L-半胱氨酸中的任意一种。焦亚硫酸氢 钠对人体是有害的，目前临床上已报道诸多不良反应，最常见的是亚硫酸盐过敏(尤其是哮 喘病人)，症状是支气管痉挛、喘鸣、呼吸困难、恶性喉部水肿，低血压、休克甚至死亡。此 外，还有一些研究报道，亚硫酸盐可能对染色体及DNA造成损伤，以及蛋白质中双硫键的 不可逆反应等。

中国专利CN102144981A公开了一种盐酸吉西他滨冻干粉针剂及其制备方法。该粉针 剂包括盐酸吉西他滨20-30份、甘露醇5-9份、醋酸钠3-10份、乳糖5-9份。该冻干粉针剂 虽然具有工艺路线简单，冻干时间短，操作方便的优点，然而由于增加了乳糖作为附加剂， 乳糖容易引起“乳糖不耐受症”，尤其多发于亚洲地区。此外，还可能引入残余蛋白和杂糖等 有关物质带来的过敏原，临床应用可能存在一定风险。

中国专利CN101564381A公开了一种盐酸吉西他滨冻干粉针剂，由盐酸吉西他滨、甘 露醇和醋酸钠组成，其中盐酸吉西他滨与甘露醇重量配比是1∶0.5-5，盐酸吉西他滨与醋酸 钠重量配比是1∶0.01-0.1。

综上，现有技术并未完全解决吉西他滨制剂的稳定性问题。

发明内容

如上所述，为了解决吉西他滨制剂的稳定性问题，获得一种稳定性更好的吉西他滨制 剂。发明人经过深入研究，得到一种含有吉西他滨的注射用组合物，该组合物以吉西他滨为 主药成分，包括抗氧剂，冻干支持剂，助溶剂，pH调节剂。

该组合物可以通过如下步骤进一步制备成注射用冻干制剂：

1)取盐酸吉西他滨原料药粉碎，备用；

2)取全量80％的注射用水，依次加入助溶剂醋酸钠，抗氧剂，冻干支持剂甘露醇及原料药盐 酸吉西他滨，搅拌，使溶解；

3)以0.1M盐酸和氢氧化钠作为pH调节剂，调节溶液pH至2.5-3.5，并定容至全量；

4)向步骤3)所得溶液中加入0.2％的针用活性炭，保温搅拌30分钟；

5)取步骤4)所得溶液，以0.45um滤器，滤过，两次；

6)取步骤5)所得溶液，灌入适当容积管制瓶中，半加塞，为冻干前制剂；

7)取步骤6)所得冻干前制剂，置入冻干机中，冻干，除去水分；

8)步骤7)冻干过程结束，充氮气，全加塞，轧盖，即得吉西他滨注射用冻干制剂；

其特征在于，所述抗氧剂为多酚类化合物，所述吉西他滨冻干用注射剂含水量小于1.0％。

多酚类化合物指芳香烃中苯环上一个或多个氢原子被羟基取代所生成的化合物，是植 物的重要次生代谢产物，天然来源的多酚成分具有多样的生物学活性，如抗氧化、抗辐射、 抗癌、降血压等，对人类的健康起着非常重要的作用。

茶多酚又名茶单宁、茶鞣质，是茶叶中含有的一类多羟基酚类化合物的总称。其中儿 茶素类化合物为茶多酚的主体成分，约占茶多酚总量的65％～80％。儿茶素类化合物主要包 括表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和没食子儿茶素没食子酸酯四种物质。

在茶多酚结构中具有活泼的酚羟基,可作为氢供体,将单线态氧还原成活性较低的三 线态氧,从而减少氧自由基的产生,并能终止自由基的连锁反应,捕获过量的自由基,因此常作 为一种理想的抗氧化剂。其次，在中性、酸性条件下,茶多酚的酚羟基极易与金属离子螯合, 从而阻止金属离子对自由基连锁反应的催化作用。茶多酚与自由基反应生成较为稳定的酚氧 自由基,从而达到直接清除自由基的目的。

没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是从中国绿茶中提取的一种成份，它是绿茶主要 的活性和水溶性成份，是儿茶素中含量最高的组分，占绿茶毛重的9％-13％，因为具有特殊 的立体化学结构，EGCG具有非常强的抗氧化活性，抗氧化活性至少是维生素C的100多倍， 是维生素E的25倍。结构式如下：

经过进一步研究，确认所述含有吉西他滨的注射用组合物中所用的抗氧剂为没食子儿 茶素没食子酸酯，并且其在组合物中所占质量百分比为0.3％-0.5％。

所述单剂量组合物中含有吉西他滨200mg或者1000mg。

所述组合物处方如下：

原辅料 规格1 规格2 盐酸吉西他滨(以吉西他滨计) 200g 1000g

甘露醇 200g 1000g 醋酸钠 12.5g 62.5g 没食子儿茶素没食子酸酯 2.0g 10.0g 0.1M盐酸或氢氧化钠 适量 适量 加注射用水至 10000ml 50000ml pH 2.5-3.5 2.5-3.5 共制成 1000支 1000支 。

制备工艺如下：

1)取盐酸吉西他滨原料药粉碎，备用；

2)取全量80％的注射用水，依次加入醋酸钠，没食子儿茶素没食子酸酯，甘露醇及盐酸吉西 他滨，搅拌，使溶解；

3)以0.1M盐酸和氢氧化钠作为pH调节剂，调节溶液pH至2.5-3.5，并定容至全量；

4)向步骤3)所得溶液中加入0.2％的针用活性炭，保温搅拌30分钟；

5)取步骤4)所得溶液，以0.45um滤器，滤过，两次；

6)取步骤5)所得溶液，灌入适当容积管制瓶中，半加塞，为冻干前制剂；

7)取步骤6)所得冻干前制剂，置入冻干机中，冻干，除去水分；

8)步骤7)冻干过程结束，充氮气，全加塞，轧盖，即得吉西他滨注射用冻干制剂，终产品 水分小于1.0％。

通过以下实验进一步说明本发明的有益效果。

试验一抗氧剂选择及用量确定实验

已知盐酸吉西他滨原料药对光照及高温(60℃，10天)稳定。将盐酸吉西他滨原料药；盐酸 吉西他滨分别与维生素C，焦亚硫酸钠，没食子儿茶素没食子酸酯混合，三种抗氧剂各自分 别按质量百分数0.1％，0.3％，1.0％加入，并将第一份样品溶解于注射用水，后9份样品分别 溶解于0.3％双氧水溶液中。依次编号A，B，C，D，E，F，G，H，I，J。溶解1小时后， 分别取样测定，盐酸吉西他滨的降解百分比，如下表所示：

样品编号 降解质量百分数(％) 样品编号 降解质量百分数(％) A(API) 1.14 F(0.3％焦亚) 2.81 B(0.1％Vc) 4.86 G(1.0％焦亚) 2.20 C(0.3％Vc) 3.36 H(0.1％没) 1.56 D(1.0％Vc) 2.49 I(0.3％没) 1.21 E(0.1％焦亚) 3.28 J(1.0％没) 1.08 。

从以上实验结果可以看出，三种抗氧剂在相同质量百分比条件下，没食子儿茶素没食 子酸酯抗氧化能力最强，具体表现为H，I，J组样品与加入相同质量百分比其他两种抗氧剂 的样品，降解质量百分比更低。

在H，I，J三组样品中，随着抗氧剂质量百分数的提高，原料药降解逐渐减少，样品 I和J降解百分数与样品A几乎相同，说明在此两种质量百分比抗氧剂条件下，游离氧被完 全抵消，原料药不受其影响。之所以降解质量百分数较高，是因为原料药本身对水溶液不稳 定，易降解，从另一个侧面说明中产品冻干制剂中水含量不能过高。

故以此试验结果，可以选择质量百分数为0.3％-1.0％的没食子儿茶素没食子酸酯作为 抗氧剂，加入到吉西他滨的制剂中，以增强其稳定性。为了便于操作，选择约0.5％加入。

实验二：注射用冻干制剂制备及检测。

低共熔点的确定；

取实施例1所得冻干前盐酸吉西他滨含药溶液，经电阻法测定，其共晶点为-17.5℃，由于实 施例1和实施例2两个规格样品，其不同之处仅在于所用包材容积不同，处方组成完全相同， 故实施例2所得冻干前盐酸吉西他滨含药溶液，其共晶点同样为-17.5℃。

冻干工艺确认：

本品需在共晶点以下10℃左右进行预冻，以使样品完全冻结，之后进行一次干燥，初步除去 水分，最后进行二次干燥以进一步除去水分，本品最终含水量需达到1.0％以下，故仅需在相 同的预冻及一次干燥过程后，适当调整二次干燥的时间，即可获得所需样品。

冻干工艺如下：

1)进箱:将已经灌装好的实施例1和实施例2所得冻干前盐酸吉西他滨含药溶液瓶子送入冻 干箱；

2)预冻：将板层温度设定为-40℃，待样品温度降到-35℃左右，保持4小时，启动真空泵， 干燥箱真空度达20Pa，开始升温干燥；

3)第一次干燥：控制真空度在15-30Pa，板层温度设定为-10℃--15℃，缓慢升温，升温 至设定温度后保温15小时；

4)第二次干燥：将板层温度设定为20℃，缓慢升至设定温度后，分别维持2小时，5小时， 10小时，15小时；

5)冻干结束，向冻干箱中冲入氮气，并压塞。

取上述试验所得两个规格不同二次干燥时间之样品，以卡尔费休法测定样品水分，如 下表所示：

规格 2小时 5小时 10小时 15小时 200mg 1.3％ 0.8％ 0.75％ 0.7％ 1.0g 1.5％ 1.2％ 0.9％ 0.85％ 。

经过此试验得知，最终样品含水量完全可以控制在1.0％以下。

试验三：注射用吉西他滨冻干粉与市售冻干粉加速稳定性对比试验

取实施例1和实施例2中两个规格注射用吉西他滨冻干粉(含包装)以及市售吉西他滨冻干 粉(含包装)分别置40℃±2℃条件下存储12个月，分别于0月，1月，3月，6月，12月， 取样测定相关性质，得到相应数据，如下表所示：

由上表数据可以看出，依本发明所述实施例1和实施例2处方和工艺所制备的盐酸吉 西他滨注射用冻干制剂，在加速条件下，12个月存储后，其含量，有关物质均有所变化，但 是含量均超过97％，杂质A％和杂质B％的生成得到有效抑制，最大不过0.343％和0.336％， 与之相对应，市售品中杂质A和杂质B含量则最大分别为0.670％和0.591％。令人意想不到 的是12个月时，样品中吉西他滨含量明显超出对应规格吉西他滨上市样品，均超过97％，而 对应市售品含量则低于95％，并且其他最大单杂和其他总杂质含量均有所降低。

如上所述的吉西他滨注射用冻干制剂，作为吉西他滨的注射制剂，适用于治疗不能手 术的晚期或转移性胰腺癌及治疗局部进展性或转移性非小细胞肺癌,治疗中、晚期非小细胞肺 癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌及其他实体肿瘤。

即通过本发明的处方和工艺使吉西他滨注射用冻干制剂在存储过程中，杂质A和杂质 B的生成得到有效抑制，从而提高的药品质量。从而使得本发明具有突出的实质性特点和显 著进步，并具有实用性。

具体实施方式

通过以下实验进一步说明本发明的有益效果。但并不局限于下述实施例，本领域的技 术人员在本发明基础上所作的，不脱离本发明实质内容的等同替代或变换,亦均在本发明的保 护范围之内。

实施例1 200mg规格吉西他滨注射用冻干制剂的制备

原辅料 用量 盐酸吉西他滨(以吉西他滨计) 200g 甘露醇 200g 醋酸钠 12.5g 没食子儿茶素没食子酸酯 2.0g 0.1M盐酸或氢氧化钠 适量 加注射用水至 10000ml pH 2.5-3.5 共制成 1000支 。

制备工艺如下：

1)取盐酸吉西他滨原料药粉碎，备用；

2)取全量80％的注射用水，依次加入醋酸钠，没食子儿茶素没食子酸酯，甘露醇及盐酸吉西 他滨，搅拌，使溶解；

3)以0.1M盐酸和氢氧化钠作为pH调节剂，调节溶液pH至2.5-3.5，并定容至全量；

4)向步骤3)所得溶液中加入0.2％的针用活性炭，保温搅拌30分钟；

5)取步骤4)所得溶液，以0.45um滤器，滤过，两次；

6)取步骤5)所得溶液，灌入适当容积管制瓶中，半加塞，为冻干前制剂；

9)进箱：将已经灌装好的步骤6)所得盐酸吉西他滨含药溶液瓶子送入冻干箱；

10)预冻：将板层温度设定为-40℃，待样品温度降到-35℃左右，保持4小时，启动真空泵， 干燥箱真空度达20Pa，开始升温干燥；

11)第一次干燥：控制真空度在15-30Pa，板层温度设定为-10℃-15℃，缓慢升温，升温至 设定温度后保温15小时；

12)第二次干燥：将板层温度设定为20℃，缓慢升至设定温度后，维持5小时；

13)冻干结束，向冻干箱中冲入氮气，并压塞，扎铝盖。

实施例 21000mg规格吉西他滨注射用冻干制剂的制备

原辅料 用量 盐酸吉西他滨(以吉西他滨计) 1000g 甘露醇 1000g 醋酸钠 62.5g 没食子儿茶素没食子酸酯 10.0g 0.1M盐酸或氢氧化钠 适量 加注射用水至 50000ml pH 2.5-3.5 共制成 1000支 。

制备工艺如下：

1)取盐酸吉西他滨原料药粉碎，备用；

2)取全量80％的注射用水，依次加入醋酸钠，没食子儿茶素没食子酸酯，甘露醇及盐酸吉西 他滨，搅拌，使溶解；

3)以0.1M盐酸和氢氧化钠作为pH调节剂，调节溶液pH至2.5-3.5，并定容至全量；

4)向步骤3)所得溶液中加入0.2％的针用活性炭，保温搅拌30分钟；

5)取步骤4)所得溶液，以0.45um滤器，滤过，两次；

6)取步骤5)所得溶液，灌入适当容积管制瓶中，半加塞，为冻干前制剂；

9)进箱：将已经灌装好的步骤6)所得盐酸吉西他滨含药溶液瓶子送入冻干箱；

10)预冻：将板层温度设定为-40℃，待样品温度降到-35℃左右，保持4小时，启动真空泵， 干燥箱真空度达20Pa，开始升温干燥；

11)第一次干燥：控制真空度在15-30Pa，板层温度设定为-10℃--15℃，缓慢升温，升温至 设定温度后保温15小时；

12)第二次干燥：将板层温度设定为20℃，缓慢升至设定温度后，维持10小时；

13)冻干结束，向冻干箱中冲入氮气，并压塞，扎铝盖。