将瑞巴派特作为有效成分而包含的高脂血症及与之相关的疾病的预防或治疗用组合物

摘要

本发明涉及一种在预防或治疗高脂血症及与之相关的疾病中所使用的瑞巴派特的药学用途，尤其涉及将瑞巴派特作为有效成分而包含的高脂血症及与之相关的疾病的预防或治疗用组合物。根据本发明的瑞巴派特化合物抑制在巨噬细胞中分泌的作为高脂血症诱发炎性细胞因子的TNF-a、IL-6以及IL-1b的生成；且抑制形成动脉硬化斑块(Artherosclerotic plaque)前体细胞的泡沫细胞(Foam cell)的生成；降低血液内总-胆固醇、LDL-胆固醇以及中性脂肪数值来改善血液脂质；改善脂肪肝；抑制B细胞的活性；使加速动脉硬化斑块的生成的Th17的表达减少，同时可增大能够控制炎症反应的Treg细胞的表达。据此，瑞巴派特化合物通过如上所述的多样的机理可有利地使用为能够预防或治疗高脂血症及与之相关的动脉硬化症、心力衰竭、高血压性心脏病的药学组合物。此外，也没有作为药物的毒性及副作用，因而长期服用时也可安心地使用，而且对体内具有稳定的效果。

说明书

技术领域

本发明涉及在高脂血症及与之相关的疾病的预防或治疗中所使用的瑞巴 派特(Rebamipide)的药学用途，尤其涉及将瑞巴派特(Rebamipide)作为有 效成分而包含的高脂血症及与之相关的疾病的预防或治疗用组合物。

背景技术

现代人由于追求西欧式的饮食生活和生活方式的变化以及方便性的时代 要求而过于过量地摄取饱和脂肪和胆固醇，这被认为会引发肥胖、高脂血症、 动脉硬化以及心肌梗塞等心血管系统疾病，并且在脂类过氧化物等在生物体 内引起退行性过程且促使癌变及衰老，并且使生物膜发生变化或破坏生物膜。 血中胆固醇被证明为是缺血性脑血管疾病及冠状动脉疾病的危险因子，且被 证明为是诸如自由基的衰老及脑血管疾病、心血管系统疾病、癌等慢性疾病 的原因。

对于韩国而言，以2008年为基准，三大死亡原因即恶性肿瘤(癌)、脑 血管疾病、心脏疾病(包括缺血性心脏疾病及其他心脏疾病)占整个死亡者 的48.1％，通过统计结果可确认虽然相比1998年脑血管疾病的死亡率得到了 减少，然而心脏疾病(包括缺血性心脏疾病及其他心脏疾病)反而增加了 [National Statistical Office Republic of Korea:Annual Report on the Cause of  Death Statistics 2008(2010)]。

此外，这种疾病与饮食生活的变化具有紧密的关系，从2008年国民健康 营养调查的结果来看，对于慢性疾病而言，肥胖(19岁以上)的患病率为 30.7％，高血压(30岁以上)的患病率为26.8％，糖尿病(30岁以上)的患 病率为9.7％，高脂血症(30岁以上)的患病率为10.9％，最近10年高血压 和糖尿病虽然得到了减少，然而肥胖和高脂血症却反而增加。

所谓“高脂血症(hyperlipemia)”是指在血液内存在需要量以上的过多的 脂肪成分物质而堆积到血管壁内从而引起炎症，结果导致心血管疾病的状态。 高脂血症是一种胆固醇(cholesterol)、中性脂肪(甘油三酯：triglyceride)， 磷脂以及游离脂肪酸等的血清脂质中一个以上的血清内浓度高于空腹时血清 脂质的正常范围(即，中性脂肪50～150mg/dl，磷脂150～250mg/dl，胆固醇 130～230mg/dl，游离脂肪酸5～10mg/dl)的状态。如果对这种高脂血症放任 不管，则会导致高血压、冠状动脉硬化症(心绞痛、心肌梗塞)、脑动脉硬化 (脑梗塞)等命在旦夕的并发症的可能性变高。

当前作为高脂血症治疗剂在临床上使用着与胆汁酸结合的树脂(resin) (例如，消胆胺(cholestyramine)、降胆宁(colesripol)等)、作为胆固醇生 物合成过程的主要酶的HMG-CoA还原酶抑制剂(例如：洛伐他汀(lovastatin)， 氟伐他汀(fluvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin))等， 然而长期服用这些高脂血症治疗剂时有可能引起副作用。尤其作为HMG-CoA 还原酶抑制剂的他汀类药物被认为有可能会导致肝损伤和肌病等。

此外，当前正在销售的降血胆固醇药剂大致上有3-羟基-3-甲基戊二酰辅 酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutayl-CoA(HMG-CoA)reductase)抑制剂、 胆盐螯合剂(bile-salt sequestrants)、贝特(fibrate)类以及烟酸(niconic acid) 衍生物。这些中洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀等是最为被人所熟知的在胆 固醇生物合成的初期阶段抑制HMG-CoA还原酶的降胆固醇药剂，然而还抑 制类固醇激素和多萜醇的合成，因而会导致严重的副作用(Havel,R.L.et al., Ann.Internal Med.,107:609-615,1987；Illingworth,D.R.and Bacon,S.Am.J. Cardiolopy 60:33-42,1987)。

因此，实际情况是迫切需要开发一种既安全又脂质代谢抑制及高脂血症 治疗效果优异的新的治疗剂。

对此，本申请的发明人首次查明了当前作为胃溃疡治疗剂而使用的瑞巴 派特(rebamipide)具有如下效果：抑制在巨噬细胞中分泌的作为高脂血症诱 发炎性细胞因子的TNF-a、IL-6以及IL-1b的生成；抑制形成动脉硬化斑块 (Artherosclerotic plaque)前体细胞的泡沫细胞(Foam cell)的生成；降低血 液内总-胆固醇、LDL-胆固醇以及中性脂肪数值来改善血液脂质；改善脂肪肝； 抑制B细胞的活性；使加速动脉硬化斑块的生成的Th17的表达减少，同时 可增大能够控制炎症反应的Treg细胞的表达。据此，确认到可有利地使用为 高脂血症以及与此相关的疾病的治疗剂，由此完成了本发明。

发明内容

技术问题

因此，本发明的目的在于提供一种具有高脂血症及与之相关的疾病的预 防或治疗效果的瑞巴派特的新用途。

技术方案

为了实现如上所述的本发明的目的，本发明提供一种高脂血症及与之相 关的疾病的预防或治疗用组合物，该组合物将瑞巴派特化合物或其药学上允 许的盐作为有效成分而包含。

在本发明的一个实施例中，所述瑞巴派特可抑制在巨噬细胞中分泌的作 为高脂血症诱发炎性细胞因子的TNF-a、IL-6以及IL-1b的生成。

在本发明的一个实施例中，所述瑞巴派特不仅可以抑制形成动脉硬化斑 块前体细胞的泡沫细胞的生成，而且可通过减少使动脉硬化斑块的生成加速 的Th17的表达以及增大能够控制炎症反应的Treg细胞的表达来抑制动脉硬 化斑块的形成。

在本发明的一个实施例中，所述瑞巴派特可通过降低血液内总-胆固醇、 LDL-胆固醇以及中性脂肪数值来改善血液脂质。

在本发明的一个实施例中，所述瑞巴派特在组合物中可以以0.1μM至 10000μM的浓度包含。

在本发明的一个实施例中，所述高脂血症可以是源于自身免疫疾病的高 脂血症。

在本发明的一个实施例中，与所述高脂血症相关的疾病可从由动脉硬化 症、心力衰竭、高血压性心脏病、心律失常、先天性心脏病、心肌梗塞、心 绞痛、中风、外周血管疾病组成的组中选择。

有益效果

根据本发明的瑞巴派特化合物抑制在巨噬细胞中分泌的作为高脂血症诱 发炎性细胞因子的TNF-a、IL-6以及IL-1b的生成；且抑制形成动脉硬化斑 块(Artherosclerotic plaque)前体细胞的泡沫细胞(Foam cell)的生成；降低 血液内总-胆固醇、LDL-胆固醇以及中性脂肪数值来改善血液脂质；改善脂肪 肝；抑制B细胞的活性；使加速动脉硬化斑块的生成的Th17的表达减少， 同时可增大能够控制炎症反应的Treg细胞的表达。据此，瑞巴派特化合物通 过如上所述的多样的机理可有利地使用为能够预防或治疗高脂血症以及与此 相关的动脉硬化症、心力衰竭、高血压性心脏病的药学组合物。此外，也没 有作为药物的毒性及副作用，因而长期服用时也可安心地使用，而且对体内 具有稳定的效果。

附图说明

图1为通过ELISA分析来测定基于瑞巴派特处理的在巨噬细胞中的所分 泌的炎性细胞因子生成量而示出的图(Nil：LPS及瑞巴派特未处理组)。

图2是为了查看瑞巴派特的针对作为小鼠巨噬细胞的RAW 264.7的细胞 毒性而进行MTT assay(MTT试验)的结果(Nil：LPS及瑞巴派特未处理组)。

图3为在利用人类巨噬细胞株(即，THP1细胞)的oxLDL(氧化低密 度脂蛋白)诱导泡沫细胞形成中，通过油红O染色而示出将瑞巴派特按浓度 (100、250、500、1000μM)分别处理而获得的泡沫细胞生成程度的照片。

图4为在利用人类巨噬细胞株(即，THP1细胞)的oxLDL(氧化低密 度脂蛋白)诱导泡沫细胞形成中，通过油红O染色而示出将瑞巴派特单独处 理、将辛伐他汀单独处理或将瑞巴派特和辛伐他汀并用处理而获得的泡沫细 胞生成程度的照片

图5为给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特之后，测量小鼠 血清内总-胆固醇、LDL-胆固醇及中性脂肪浓度变化而示出的图表。

图6为给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特之后，测量小鼠 血清内AST(天门冬氨酸转氨酶)和ALT(丙氨酸转氨酶)活性数值而示出 的图表。

图7为给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特之后，通过油红 O染色而示出小鼠的主动脉内aorta branch(主动脉分支)程度的照片。

图8为给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特之后，测量小鼠 血清内总IgG和IgG1的数值而示出的图表。

图9为给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特之后，用FACS (流式细胞仪)对在小鼠的脾细胞中Th17细胞和Treg细胞的表达程度进行 分析的图表。

图10为给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特之后，通过共聚 焦显微镜对在小鼠的脾脏片段中Th17细胞和Treg细胞的表达程度进行分析 的图表。

图11为给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特之后，通过 RT-PCR对在小鼠的脾细胞中MMP-9的mRNA表达量进行分析的图表。

具体实施方式

本发明涉及将瑞巴派特(rebamipide)化合物或其药学上允许的盐作为有 效成分而包含的高脂血症以及与此相关的疾病的预防或治疗用组合物。

本申请的发明人为了开发既安全又脂质代谢抑制及高脂血症治疗效果优 异的新的治疗剂而关注了瑞巴派特化合物，瑞巴派特作为对由胃溃疡、急性 胃炎或慢性胃炎的急性恶化引起的胃黏膜损伤的治疗具有卓越效果的医药， 被广泛地使用为消化性溃疡治疗剂，其化学名为2-(4-氯苯甲酰胺基)-3-(1,2- 二氢-2-氧代-4-喹啉基)丙酸(2-(4-Chlorobenzoylamino)-3-[2(1 H)-quinolinon-4-yl]propionic acid)。该药剂通过促进PGE2生物合成而增加粘 液来保护胃黏膜，且促进细胞增殖，尤其对感染了幽门螺杆菌(Helicobacter  pylori)的患者，抑制菌粘附且扩散于胃黏膜细胞，从而具有抑制胃炎的特征。

然而，在以往从来没有提及过瑞巴派特可使用为用于治疗高脂血症及与 此相关的疾病的用途。

因此，在本发明中首次查明了可通过如下的机理来诱导所述高脂血症及 与此相关的疾病的预防及治疗效果的事实：瑞巴派特化合物可作为用于预防 或治疗高脂血症及与此相关的疾病的用途，尤其抑制作为高脂血症诱发炎性 细胞因子的TNF-a、IL-6以及IL-1b的生成；抑制形成动脉硬化斑块 (Artherosclerotic plaque)前体细胞的泡沫细胞(Foam cell)的生成；降低血 液内总-胆固醇、LDL-胆固醇以及中性脂肪数值来改善血液脂质；改善脂肪肝； 抑制B细胞的活性；使加速动脉硬化斑块的生成的Th17的表达减少，同时 可增大能够控制炎症反应的Treg细胞的表达。

通常，高脂血症表现为需要量以上的过多的脂肪成分物质存在于血液内 并引发各种并发症，这种并发症大部分是诸如动脉硬化、心绞痛、心肌梗塞 等非常危险的疾病，因此要求特殊的预防或治疗。

动脉硬化的特征在于在内皮上积聚脂质且引起炎症反应而形成粥样斑块 (atherosclerotic plaque)，此时斑块使动脉变得狭窄，而狭窄的动脉被血栓堵 住时容易破裂，从而有可能引起心血管疾病。

在这种动脉硬化的初期阶段中起到重要作用的是源自单核细胞 (monocyte)的巨噬细胞。因高脂血症而使血液内的低密度脂蛋白(LDL) 浓度过高或者LDL氧化而变形的情况下，巨噬细胞利用清道夫受体(scavenger  receptor)而移入被氧化的LDL(oxLDL:oxidized LDL)，此时将移入了被氧 化的LDL的巨噬细胞称为泡沫细胞(foam cells)。通常，吞噬病原体的巨噬 细胞朝另一位置移动，然而泡沫细胞在移入被氧化的LDL之后不离开其位置， 因而会丧失正常的生物性功能，且渗透到血管内皮细胞而通过形成动脉硬化 斑块(atherosclerotic plaque)使平滑肌变得肥厚。尤其，已知在泡沫细胞被 捕获于动脉的内皮的情况下会促使局部炎症反应发生。

在本发明的下述实施例1中可以确认到，为了查看瑞巴派特对巨噬细胞 产生的影响，在对小鼠腹腔巨噬细胞用瑞巴派特处理之后用LPS进行刺激的 情况下，有效地抑制了作为高脂血症诱发因子的TNF-a、IL-6、IL-1b的生成 (参照图1)。

此外，在本发明的下述实施例3中，查看了瑞巴派特在形成动脉硬化斑 块前体细胞的泡沫细胞的生成中产生的影响，其结果，表现为作为血管病因 细胞的泡沫细胞的生成依赖于瑞巴派特处理浓度而得到抑制(参照图3)，尤 其，可以确认到与作为以往的高脂血症治疗药物的辛伐他汀相比，泡沫细胞 的生成抑制效果更加突出。

此外，在本发明的下述实施例4中，查看了给高脂血症动物模型给药瑞 巴派特而产生的血液脂质改善效果，其结果，在给高脂血症动物模型小鼠通 过口服给药瑞巴派特的情况下，可确认到血清内总-胆固醇、LDL-胆固醇以及 中性脂肪浓度有效地减小(参照图5)。

此外，在本发明的下述实施例5中，查看了给高脂血症动物模型给药瑞 巴派特而产生的脂肪肝改善效果，其结果，在给高脂血症动物模型小鼠通过 口服给药瑞巴派特的情况下，表现为血清AST以及ALT活性显著降低，由 此可以确认瑞巴派特在高脂血症动物模型中可以抑制肝损伤(参照图6)。

此外，在本发明的下述实施例6中，查看了给高脂血症动物模型给药瑞 巴派特而产生的动脉硬化斑块形成抑制效果，其结果，在给高脂血症动物模 型小鼠通过口服给药瑞巴派特的实验组中，表现为在主动脉中看到的主动脉 分支(aorta branch)其油红O阳性明显微弱，由此可以确认瑞巴派特实际上 抑制动脉硬化斑块的形成(参照图7)。

此外，在本发明的下述实施例7中，调查了给高脂血症动物模型给药瑞 巴派特而产生的B细胞抗体免疫反应，其结果，在给高脂血症动物模型小鼠 通过口服给药瑞巴派特的情况下，表现为血清内IgG(免疫球蛋白G)和IgG1 的数值得到减少，由此可以确认B细胞的活性因瑞巴派特而得到抑制(参照 图8)。

此外，在本发明的下述实施例8中，查看了给高脂血症动物模型给药瑞 巴派特而产生的Th17细胞抑制以及Treg细胞诱导同时调节反应，其结果可 以确认，在给高脂血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特的情况下，表现 为加速动脉硬化斑块(Artherosclerotic plaque)生成的Th17的表达在脾脏细 胞内得到了减小，而作为免疫调节细胞的Treg细胞的表达却反而得到了增加 (参照图9及图10)。

作为参考，作为在针对各种病原体的生物体防御系统即免疫系统中担任 重要作用的细胞群的一个有T细胞。T细胞从人体的胸腺生成且经过一系列 的分化过程而被分化为具有固有特性的T细胞，完成分化的T细胞根据其功 能而分为1型辅助细胞(Th1)和2型辅助细胞(Th2)。其中，Th1细胞的主 要功能是参与到细胞媒介性免疫，Th2细胞则参与到体液性免疫，在免疫系 统中这两个细胞群相互牵制以避免彼此过于活性化，从而维持免疫系统的均 衡。

因此，大部分的免疫疾病可以看作是由于这样的两个免疫细胞之间的不 均衡而引起的，例如，已知在Th1细胞的活性非正常地增加的情况下有可能 发生免疫疾病，在Th2细胞的活性非正常地增加的情况下会引起由过敏反应 导致的免疫疾病。

此外，根据针对Th1细胞的分化的最近研究结果，知道了存在能够调节 Th1细胞的活性的新的群(group)，即免疫调节T细胞(Regulatory T cell， 以下简称为“Treg”)，从而正开始研究利用此的免疫疾病的治疗，其中Treg 细胞具有抑制被非正常地激活的免疫细胞的功能而控制炎症反应的特性，因 而有很多通过增加Treg细胞的活性的作用来治疗免疫疾病和炎症疾病的实验 的报告。

此外，除了Treg细胞之外，还有在分化过程中被制造的又一个群，即 Th17细胞，且已知Th17细胞在未分化T细胞的分化过程中经过与Treg细胞 的分化类似的过程而形成。即，Treg细胞和Th17细胞的分化在TGF-β的存 在下共同进行，然而对于Treg细胞而言，不需要IL-6，而对于Th17细胞而 言，却在与TGF-β一起存在有IL-6的情况下进行分化。此外，分化的Th17 细胞的特征在于分泌IL-17。

与Treg细胞不同，Th17细胞被证明为参与到在免疫疾病中所表现的炎 症反应的最前线中，以使炎症反应的信号最大化，从而加速疾病的发展。

因此，在能够同时调节Th17细胞的抑制和Treg细胞的诱导的情况下可 以有效地抑制过度的免疫反应或炎症反应，对于瑞巴派特而言，可以抑制 Th17细胞的表达的同时可以增加Treg细胞的表达，由此判断出其可以有效 地抑制过度的免疫反应或炎症反应。

此外，在本发明的下述实施例9中，调查了基于给高脂血症动物模型给 药瑞巴派特的MMP-9的mRNA表达量。已知分解非纤维状胶原蛋白 (non-fibrillar collagen)的MMP-9在动脉硬化斑块中被表达，且在动脉硬化 斑块破裂方面重要的病态生理学机制中起到主要的作用。其结果，在给高脂 血症动物模型小鼠通过口服给药瑞巴派特的情况下，确认到小鼠的脾细胞中 MMP-9的表达量比起作为阳性对照组的通过口服给药辛伐他汀的组明显减 少(参照图11)。对此，本申请的发明人判断为由于瑞巴派特有效地减少了 MMP-9的表达，从而可更加有效地防止由动脉硬化斑块破裂引起的脑梗塞或 心肌梗塞的发病。

通过这样的结果，本申请的发明人从实验上证明了瑞巴派特通过多种机 理而对高脂血症及与此相关的疾病的预防和治疗有效。

因此，将瑞巴派特或其药学上允许的盐作为有效成分而含有的本发明的 组合物可有利地使用于高脂血症以及与此相关的疾病的预防或治疗。

根据本发明的所述瑞巴派特可以是由下述化学式1表示的化合物。

<化学式1>

根据本发明的所述瑞巴派特化合物可以以盐的形态使用，优选为以药学 上允许的盐的形态使用。所述盐优选为由药学上允许的游离酸形成的酸加成 盐，所述游离酸可使用有机酸和无机酸。所述有机酸包括柠檬酸、乙酸、乳 酸、酒石酸、马来酸、富马酸、甲酸(formic acid)、丙酸、草酸、三氟乙酸、 苯甲酸、葡萄糖酸、甲基磺酸、乙醇酸、琥珀酸、4-甲苯磺酸、谷氨酸和天 冬氨酸，但并不局限于此。此外，所述无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸以及 磷酸，但并不局限于此。

根据本发明的瑞巴派特化合物可以使用市场上销售的瑞巴派特化合物， 或者也可以使用天然地分离或利用本领域公知的合成方法制造的瑞巴派特化 合物。

本发明的一个具体示例中，所述瑞巴派特通过抑制巨噬细胞中作为高脂 血症诱发炎性细胞因子的TNF-a、IL-6以及IL-1b的生成的机理，可具有高 脂血症以及与此相关的疾病的预防或治疗效果。

此外，在根据本发明的另一具体示例中，所述瑞巴派特可在本发明的组 合物中以0.1至10000μM的浓度包含。

另外，本发明中提供的高脂血症及与此相关的疾病的预防或治疗用组合 物优选为药学组合物。

本发明中“高脂血症相关疾病”是指根据高脂血症而诱发或促进的疾病， 例如，可从由动脉硬化症、心力衰竭、高血压性心脏病、心律失常、先天性 心脏病、心肌梗塞、心绞痛、中风、外周血管疾病中组成的组中选择，但并 不特别地限制其种类。

本发明中所谓“治疗”在没有特别说明的情况下是指逆转或缓解疾患或疾 病、或所述疾患或疾病的一种以上的症状，或者抑制或预防其发展，在本申 请中所使用的所述治疗这一术语中，“治疗的”是指基于如上所述的定义的治 疗行为。因此，在哺乳动物中，高脂血症及与此相关的疾病的“治疗”或“治疗 方法”可包括下述情形的一种以上情形。

(1)阻止高脂血症及与此相关的疾病的发展；

(2)预防高脂血症及与此相关的疾病的扩散；

(3)减轻高脂血症及与此相关的疾病；

(4)预防高脂血症及与此相关的疾病的再次发作；以及

(5)缓解(palliating)高脂血症及与此相关的疾病的症状。

对于本发明的药学组合物而言，除了使用作为有效成分的瑞巴派特之外， 还可使用药学上适宜且生理学上允许的辅助剂来制得，所述辅助剂可使用赋 形剂、崩解剂、甜味剂、粘合剂(binder)、包衣剂、溶胀剂、润滑剂、润泽 剂、香味剂等。

此外，为了能够给药，所述药学组合物除了包含作为有效成分瑞巴派特 之外还额外地包含药学上允许的一种以上的载体(carrier)，据此理想地制剂 化为药学组合物。

所述药学组合物的制剂形态可以是颗粒剂、散剂、片剂、包衣片剂、胶 囊剂、栓剂、液体制剂、糖浆、汁、悬浊剂、乳剂、滴剂或可注射的液体制 剂等。例如，为了制剂化成片剂或胶囊剂的形态，有效成分可以与诸如乙醇、 甘油、水之类的口服的且无毒性的药学上允许的惰性载体结合。此外，在期 望或需要的情况下，适宜的粘合剂(binder)、润滑剂、崩解剂、以及显色剂 也可作为混合物包含。适宜的粘合剂包括淀粉、明胶、如葡萄糖或β-乳糖等 的天然糖、玉米甜味剂、诸如阿拉伯胶、黄蓍胶、油酸钠之类的天然或合成 胶(gum)、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等，然而并不 局限于此。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等，然而 并不局限于此。在制剂化为液态溶液的组合物中，可允许的药学载体是适合 于灭菌和生物体的载体，如生理盐水、无菌水、林格氏溶液、缓冲生理盐水、 白蛋白注射液、右旋糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇以及这些成分中混 合一种成分以上而使用，且可根据需要而添加抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂等 其他通常的添加剂。而且，可额外地添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘 合剂以及润滑剂而制剂化为诸如水溶液、悬浊液、乳浊液等注射用剂型、药 丸、胶囊、颗粒或片剂。进而，作为相关领域的适宜的方法，可利用在 Remington's Pharmaceutical Science,Mack Publishing Company,Easton PA中公 开的方法，从而根据各个疾病或成分而适宜地制剂化。

在本发明的一个实施例中，本发明的瑞巴派特在组合物中可以以0.1至 10000μM的浓度包含，而且，相对于组合物总重量，本发明的瑞巴派特可以 以0.1～95重量％包含。

作为本发明的药学组合物能够表现出治疗效果的疾病的种类，可以是从 由高脂血症、动脉硬化症、心力衰竭、高血压性心脏病、心律失常、先天性 心脏病、心肌梗塞、心绞痛、中风、外周血管疾病组成的组中选择的疾病， 但并不局限于此。

本发明的药学组合物中，可将瑞巴派特与药学上允许的载体一起以药学 上有效的量包含。

在本发明中“药学上有效的量”是指对于所要治疗的疾病表现出缓解、 抑制、好转和/或完全治愈效果的有效成分的量。本发明的瑞巴派特的剂量的 范围根据患者的体重、年龄、性别、健康状态、饮食、给药时间、给药方法 以及疾病的严重程度等而多样。例如，对于治疗上有效的给药量而言，初期 可使用通过细胞培养的试管内分析来确定。本领域中不经过过多的试验也可 确定对治疗有效的量，利用这种信息可以更加准确地确定人体中有用的给药 量。

在本发明的一个具体示例中，根据本发明的瑞巴派特化合物或其盐的药 学上有效的量可以是0.5～100mg/天/体重kg，可优选为0.5～5mg/天/体重kg。

本发明还提供一种将所述瑞巴派特作为有效成分而包含的组合物在制造 高脂血症及与此相关的疾病的预防或治疗用医药方面的应用。将瑞巴派特作 为有效成分而包含的本发明的组合物可利用为制造高脂血症及与此相关的疾 病的预防或治疗用医药的用途。

本发明还提供高脂血症及与此相关的疾病的预防或治疗方法，包括给哺 乳动物给药治疗上有效量的本发明的药学组合物。

在此使用的术语“哺乳动物”是指作为治疗、观察或实验的对象的哺乳 动物，优选指人类。

其中使用的术语“治疗方面有效量”表示由研究人员、兽医、医生或其他 临床经验预想到的在组织系统、动物或人类中诱导生物学或医学反应的有效 成分或药学组合物的量，其包括诱导所治疗的疾病或障碍的症状的缓和的量。 针对本发明的有效成分的治疗方面有效剂量及给药次数将根据所期望的效果 而变化，这对于本领域技术人员而言乃是不言而喻的。因此，要给药的最适 剂量可由本领域技术人员容易确定，且可根据包括疾病的种类、疾病的严重 度、组合物所含有的有效成分及其他成分的含量、剂型的种类、以及患者的 年龄、体重、一般健康状态、性别、以及食物、给药时间、给药途径和组合 物的分泌率、治疗时间、同时使用的药物在内的多样的因素而调节。

并且，本发明提供一种将瑞巴派特(rebamipide)作为有效成分包含的用 于预防或改善高脂血症及与之相关的疾病的保健功能食品。

本发明的保健功能食品的目的在于预防或改善高脂血症及与之相关的疾 病，可将其以锭剂、胶囊、粉末、颗粒、液状、丸等形态制造和加工。

在本发明中，“保健功能食品”是指通过使用具有基于有关保健功能食品 的法律第6727号的人体所能受用的功能性的原料或成分而制造和加工的食 品，其表示出于针对人体的结构或功能而调节营养素或者获得生理学作用之 类的对保健用途有用的效果的目的而摄取的食品。

本发明的保健功能食品可包括普通的食品添加剂，关于作为食品添加剂 是否合适，只要没有其他规定，则根据食品医药品安全局承认的韩国食品添 加剂法典(Korean Food Additives Codex)的总则和一般试验法等对相关品种 规定的规格和标准而判定。

作为所述“食品添加剂法典”中收录的品种，例如可以列举：酮类、甘氨 酸(glycine)、柠檬酸钙(calcium citrate)、烟酸(nicotinic acid)、肉桂酸 (cinnamic acid)之类的化学合成物；柿色素(Persimmon Color)、甘草提取 物、结晶纤维素、高粱色素、瓜尔豆胶(guar gum)之类的天然添加剂； L-谷氨酸钠制剂、面类添加碱剂、防腐剂制剂、焦油色素制剂之类的混合制剂 类等。

例如，对于锭剂(片剂)形态的保健功能食品而言，将作为本发明的有 效成分的瑞巴派特与赋形剂(excipient)、粘合剂、崩解剂及其他添加剂进行 混合的混合物以普通的方法进行颗粒化，然后投入润泽剂(Slip modifiers)等 而压缩成型，或者可以将所述混合物直接压缩成型。而且，所述锭剂形态的 保健功能食品可根据需要而还可以含有矫味剂等。

在胶囊形态的保健功能食品中，硬质胶囊剂可通过在普通的硬质胶囊中 充入将作为本发明的有效成分的瑞巴派特与赋形剂之类的添加剂进行混合的 混合物而制造，而软质胶囊剂可通过将瑞巴派特与赋形剂之类的添加剂进行 混合的混合物充入明胶(gelatin)之类的胶囊基剂而制造。所述软质胶囊剂 可根据需要而含有甘油或山梨糖醇(sorbitol)之类的增塑剂、着色剂、防腐 剂等。

丸形态的保健功能食品可通过将作为本发明的有效成分的瑞巴派特与赋 形剂、粘合剂、崩解剂等进行混合的混合物利用现有的公知方法进行成型而 制造，且可以根据需要而利用白糖或其他被覆剂(coating agent)进行被覆， 或者还可以用淀粉、滑石(talc)之类的物质对表面进行涂覆。

对于颗粒形态的保健功能食品而言，可利用现有的公知方法而将作为本 发明的有效成分的瑞巴派特与赋形剂、粘合剂、崩解剂等进行混合的混合物 制造成粒状，且可以根据需要而含有增香剂(Fragrance ingredients)、矫味剂 等。

所述保健功能食品可以是饮料类、肉类、巧克力、食品类、饼干类、比 萨饼、方便面、其他面类、口香糖类、糖果类、冰淇淋类、酒精饮品类、维 生素复合剂以及保健辅助食品类等。

[实施例]

以下，通过实施例更加详细地说明本发明。这些实施例用于更加具体地 说明本发明，本发明的范围并不局限于这些实施例。

<实施例1>

基于对巨噬细胞(macrophages)进行瑞巴派特处理的炎性细胞因子(inflammatory cytokines)生成抑制效果

本申请的发明人为了探明瑞巴派特对巨噬细胞产生的影响，对小鼠 (Mouse)巨噬细胞进行了瑞巴派特前处理，并利用LPS(脂多糖； lipopolysaccharide)施加刺激，从而将巨噬细胞中分泌的炎性细胞因子TNF-a (肿瘤坏死因子-α；tumor necrosis factor-alpha)、IL-6(白介素-6；interleukin-6) 以及IL-1β(白介素-1β；interleukin-1β)的生成程度通过ELISA (酶联免疫吸附测定；enzyme linked immunosorbent assay)分析而进行了评 估。

<1-1>细胞培养

将作为小鼠的巨噬细胞株的RAW 264.7细胞从韩国细胞株银行(KCLB) 得到配给，为了细胞培养，使用了包含10％的FBS和1％的青霉素-链霉素 (penicillin-streptomycin)的DMEM(Dulbeccos Modified Eagle Medium)培 养基。在37℃、5％的CO₂的条件下培养了细胞。

<1-2>瑞巴派特对炎性细胞因子(TNF-a、IL-6以及IL-1β)的生成量产生的影响

首先，对RAW 264.7细胞而将瑞巴派特以20,100μg/ml的浓度进行前处 理，并在1小时之后将LPS以100ng/ml的浓度进行处理，从而在37℃的培 养器(incubator)中培养48小时并在巨噬细胞中诱导了炎症反应。

为了测定生成的细胞因子(TNF-α、IL-6以及IL-1β)的量，收集所培养 的细胞的上清液并利用ELISA而分别考察了TNF-α、IL-6以及IL-1β的生成 程度。在96孔板中，分别将单克隆性抗-TNF-α(anti-TNF-α)、抗-IL-6 (anti-IL-6)、抗-IL-1β(anti-IL-1β)在4℃中以1μg/mL彻夜进行反应，并 在反应之后利用阻断溶液(1％BSA/PBST)阻断了非特异结合。将TNF-α重 组体(TNF-αrecombinant)、IL-6重组体(IL-6recombinant)、IL-1β重组体 (recombinant)以每次1/2的方式连续稀释而使用为标本(standard)，并投 入细胞培养上清液而在室温下进行了2小时的反应。然后，将生物素化抗 -TNF-α(biotinylated anti-TNF-α)、生物素化抗-IL-6(biotinylated anti-IL-6)、 生物素化抗-IL-1β(biotinylated anti-IL-1β)在室温下进行了2小时的反应， 然后清洗4次之后将ExtraAvidin-碱性磷酸酶缀合物(ExtraAvidin-Alkaline  Phosphatase conjugate)稀释而添加，并在室温下进行了2小时的反应。然后， 投入PNPP/DEA溶液并显色之后在405nm波长中测定了吸光度。

其结果，如图1所示，在未经瑞巴派特前处理而只进行LPS处理的情况 下，TNF-α和IL-6的生成量表现为比对照组(正常细胞)显著增加，然而在 进行了瑞巴派特前处理的实验组中，可确认TNF-α和IL-6的生成量依赖于浓 度而减少。并且，在未经瑞巴派特前处理而只进行LPS处理的情况下，虽然 IL-1β的生成量比起对照组(正常细胞)没有表现出差异，然而在将瑞巴派特 以100μg/ml浓度进行处理的实验组中却表现为生成量减少。Nil作为阴性对 照组，表示无处理组。

通过这样的结果，判断出瑞巴派特通过抑制在高脂血症和动脉硬化初期 阶段起到重要作用的巨噬细胞的炎症反应的机理，必将在预防或治疗高脂血 症及与之相关的疾病方面有用。

<实施例2>

瑞巴派特对细胞的毒性测定

为了探明瑞巴派特的针对作为小鼠巨噬细胞的RAW 264.7的细胞毒性， 执行了MTT试验(MTT assay)。

该方法对MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐；噻唑蓝) 转换为甲瓒(Formazan)进行测定，其在96孔板中分装1×10⁴细胞/孔 (cells/well)的RAW 264.7细胞，并将瑞巴派特按浓度(20、100、500、1000、 5000μM)进行了18小时的处理。对每个孔(well)分别添加100μl的MTT 溶液，从而在37℃、5％的CO₂的培养器中进行了4小时的反应，然后利用酶 标仪(microplate reader；VERSAmax，Molecular Devices公司，USA)而在 570nm中测定出吸光度的变化。

其结果，如图2所示，在作为见效的有效浓度的20μM、100μM及其以 上的浓度中细胞毒性较弱，于是可知基本上对细胞的生存率不产生影响这一 事实。这样的事实意味着瑞巴派特在巨噬细胞中的炎症反应抑制效果并不是 纯粹因为细胞死亡引起细胞的炎性介质(TNF-α、IL-6以及IL-1β)的生成受 到抑制，而是表示该炎症反应抑制效果为瑞巴派特的固有效果。

<实施例3>

基于瑞巴派特处理的血管病因细胞抑制效果

在本实验中，考察了在血管病因细胞中进行瑞巴派特处理的情况下是否 真的可以抑制血管病因细胞的生成。所述“血管病因细胞”表示形成会引发动 脉硬化的动脉硬化斑块(Artherosclerotic plaque)前体细胞的泡沫细胞(Foam cell)，出于其为成为引发动脉硬化的原因的细胞这一点的考虑，本发明中任 意命名为血管病因细胞。

<3-1>基于瑞巴派特处理的血管病因细胞抑制效果

为了进行本实验，对作为人类巨噬细胞株的THP1细胞进行160nM浓度 的PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate；12'-豆蔻酸-13'-乙酸佛波醇)处理 而将细胞激活，然后将PAF(血小板激活因子；platelet-activating factor)以 10ug/ml进行处理，与此同时将瑞巴派特按浓度(100、250、500、1000μM) 分别处理，从而将形成会引发动脉硬化的动脉硬化斑块前体细胞的泡沫细胞 生成程度通过Oil Red O(油红O)溶液(Sigma aldrich；西格玛奥德里奇) 染色而进行了测定。

其结果，如图3所示，可确认作为血管病因细胞的泡沫细胞依赖于瑞巴 派特处理浓度而得到抑制。

<3-2>比起现有高脂血症治疗药物的瑞巴派特的血管病因细胞抑制效果

将瑞巴派特的血管病因细胞抑制效果与目前市场中使用为降脂剂(高脂 血症治疗药物)的辛伐他汀(Simvastatin)进行了比较。

为了进行本实验，对作为人类巨噬细胞株的THP1细胞进行160nM浓度 的PMA(phorbol 12'-myristate 13'-acetate；12'-豆蔻酸-13'-乙酸佛波醇)处理 而将细胞激活，然后将PAF(血小板激活因子；platelet-activating factor)以 10ug/ml进行处理，与此同时将瑞巴派特(1000μM)或辛伐他汀(10μM)分 别进行处理，从而将形成会引发动脉硬化的动脉硬化斑块前体细胞的泡沫细 胞生成程度通过Oil Red O溶液染色而进行了测定。

其结果，由图4可确认，比起将辛伐他汀单独处理的实验组，将瑞巴派 特单独处理的实验组生成更少的泡沫细胞，且比起作为现有高脂血症治疗药 物的辛伐他汀，表现出提高20％的效果。

<实施例4>

基于对高脂血症动物模型给药瑞巴派特的血液脂质改善效果

在本实验中，为了于在活体(in vivo)上测定出瑞巴派特的血液脂质改 善效果，在高脂血症动物模型中将瑞巴派特口服给药预定量之后，测定出小 鼠血清内的总-胆固醇、LDL-胆固醇以及中性脂肪数值。

具体而言，给8周龄的Apoe ko小鼠(去除载脂蛋白(apolipoprotein)E基 因的小鼠)饲喂西式食物(Western diet)，并口服给药100mg/kg的瑞巴派特， 然后在食用西式食物之后达到8周时致死，并在血清中测定出总-胆固醇、 LDL-胆固醇以及中性脂肪数值。作为阳性对照组，用目前市场中使用为降脂 剂的辛伐他汀25mg/kg代替瑞巴派特而口服给药。总-胆固醇计算使用了一般 的总-胆固醇计算方法(LDL＝T-CHO-(0.2×TG)-HDL， T-CHO＝HDL+(0.2×TG)+LDL)。

其结果，由图5可确认，当在高脂血症动物模型小鼠中口服给药瑞巴派 特时，血清内总-胆固醇、LDL-胆固醇以及中性脂肪浓度有效地减少，尤其， 与作为阳性对照组的辛伐他汀给药群相比，LDL-胆固醇和中性脂肪浓度更加 有效地减少。

<实施例5>

基于对高脂血症动物模型给药瑞巴派特的脂肪肝改善效果

在本实验中，为了于在活体上测定瑞巴派特的脂肪肝改善效果，在高脂 血症动物模型中将瑞巴派特口服给药预定量之后，测定出小鼠血清内的AST 和ALT数值。

如果细胞膜的结构和功能破坏，则作为肝细胞质内广泛存在的酶的AST (谷草转氨酶；Aspartateamino-transferase)和ALT(谷丙转氨酶；Alanine  aminotransferase)流出到血液中，因此血液内的AST和ALT数值频繁地作为 肝损坏指标而使用。在本实验中，为了验证瑞巴派特是否具有关于脂肪肝预 防和脂肪肝改善的效果，测定了血清内的AST和ALT数值。

具体而言，给8周龄的Apoe ko小鼠(去除载脂蛋白E基因的小鼠)饲 喂西式食物，并口服给药100mg/kg的瑞巴派特，然后在食用西式食物之后达 到8周时致死，并在血清中测定出AST和ALT数值。作为阳性对照组，用 目前市场中使用为降脂剂的辛伐他汀25mg/kg代替瑞巴派特而口服给药。AST 和ALT的活性通过定量用kit试剂(盈东制药，韩国)而进行了测定。将AST 和ALT基质液1.0mL在37水槽中加热2分钟，然后投入0.2mL的血浆并 在37℃的水槽中进行了30分钟的反应。30分钟之后将显色试剂投入1.0mL， 并在室温下放置20分钟，然后投入0.4N NaOH 10.0mL并在505nm中测定 出吸光度。将AST和ALT基准液(2mM丙酮酸酯(pyruvate))按浓度分别以 与上述方法相同的方法进行显色而测定出吸光度，然后外插到标准曲线而计 算出试料的活性。

其结果，由图6可确认，当高脂血症动物模型小鼠中口服给药瑞巴派特 时，血清AST和ALT活性显著降低。据此可以推测，瑞巴派特在高脂血症 动物模型中在具有改善血液脂质的活性的同时具有抑制肝损伤的活性。

<实施例6>

基于对高脂血症动物模型给药瑞巴派特的动脉硬化斑块(Artherosclerotic plaque)形成抑制效果

在本实验中，为了在活体上测定瑞巴派特的动脉硬化斑块形成抑制效果， 在高脂血症动物模型中口服给药预定量的瑞巴派特之后，通过染色观察了小 鼠的主动脉分支(aorta branch)。主动脉分支对应于发生动脉硬化时形成动 脉硬化斑块的位置。

具体而言，给8周龄的Apoe ko小鼠(去除载脂蛋白E基因的小鼠)饲 喂西式食物，并口服给药100mg/kg的瑞巴派特，然后在食用西式食物之后达 到8周时致死而获取全部主动脉(Aorta)，并在经过固定过程之后实施了 Oil red O染色。作为阳性对照组，用目前市场中使用为降脂剂的辛伐他汀 25mg/kg取代瑞巴派特而口服给药。

其结果，如图7所示，对于阴性对照组(高脂血症动物模型小鼠)而言， 主动脉分支大部分表现为Oil red O阳性，相反地，对于在高脂血症动物模型 小鼠中口服给药瑞巴派特的实验组而言，可确认主动脉中可见的主动脉分支 明显较少表现出Oil red O阳性，尤其，与阳性对照组(口服给药辛伐他汀) 相比，主动脉分支仍是Oil red O阳性部分更少。

<实施例7>

基于对高脂血症动物模型给药瑞巴派特的B细胞抗体免疫反应考察

在本实验中，为了在活体上考察瑞巴派特对B细胞抗体免疫反应产生的 影响，在高脂血症动物模型中口服给药预定量的瑞巴派特之后，测定出小鼠 血清内总IgG和IgG1数值。

具体而言，给8周龄的Apoe ko小鼠(去除载脂蛋白E基因的小鼠)饲 喂西式食物，并口服给药100mg/kg的瑞巴派特，然后在食用西式食物之后达 到8周时致死，从而在血清中对总IgG和IgG1数值进行ELISA分析而进行 了测定。作为阳性对照组，用目前市场中使用为降脂剂的辛伐他汀25mg/kg 替代瑞巴派特而口服给药。利用ELISA kit(bethyl公司)而根据制造者的指 示而测定出血清内总IgG和IgG1浓度。即，在96孔板中铺垫捕获器(Capture) 并彻夜(Overnight)进行反应，然后将血清以1:1000进行稀释(dilution)并 进行1小时的反应，然后以总(Total)IgG、IgG1检测(detection)ab进行 了1小时的反应，并附上HRP之后用TMB溶液(solution)进行显色而读取 吸光度。

其结果，由图8可知，当在高脂血症动物模型小鼠中口服给药瑞巴派特 时，血清内的IgG和IgG1数值减小，从而借助于瑞巴派特而抑制B细胞的 活性。

<实施例8>

基于对高脂血症动物模型给药瑞巴派特的Th17细胞抑制及Treg细胞诱导同时调节反应

在本实验中，为了在活体上考察瑞巴派特对Th17/Treg细胞产生的影响， 在高脂血症动物模型中将口服给药预定量的瑞巴派特之后，在小鼠脾脏细胞 中考察了Th17细胞和Treg细胞的表达程度。

具体而言，给8周龄的Apoe ko小鼠(去除载脂蛋白E基因的小鼠)饲 喂西式食物，并口服给药100mg/kg的瑞巴派特，然后在食用西式食物之后达 到8周时致死，从而在脾脏片段中通过测定CD4+细胞的IL-17表达量而分析 了Th17细胞的表达与否，并通过测定CD4+CD25+细胞的Foxp3表达量而分 析出Treg细胞的表达与否。Th17细胞和Treg的表达分析通过借助于染色的 FACS及共聚焦显微镜(confocal microscope)而执行。另外，对于阳性对照 组，用目前市场中使用为降脂剂的辛伐他汀25mg/kg替代瑞巴派特而口服给 药。

应予说明，分化的Th17细胞将分泌IL-17作为特征，因此对IL-17的表 达的确认成为可测定Th17细胞活性或扩增的指标。并且，Foxp3主要存在于 源自胸腺(thymus)的免疫调节T细胞(Regulatory T cell,Treg)，且作为存 在于具有CD4+CD25+示踪抗原的细胞的转录调节因子(transcriptional  factor)，其功能如下：在执行针对表达Foxp3的T细胞的抗原识别时对抗原 具有低反应性，与此同时，针对从胸腺分化出的不表达Foxp3的CD4+CD25-T 细胞当中能够潜在地诱发自身免疫症的T细胞，起到作为抑制IL-2的生成和 细胞分裂现象的抑制性T细胞(suppressor T cell)的作用。据悉，Foxp3针 对表达Foxp3的调节T细胞及通过细胞-细胞间接触(cell-cell contact)的CD25- T细胞，不仅起到抑制IL-2的作用，而且还起到抑制受到作为转录因子的 NFAT的影响的IL-4、IFN-等的转录调节的功能。因此，对于表达起到上述 作用的Foxp3的T细胞而言，应用于通过抑制或调节免疫反应的作用而治疗 免疫疾病的领域，而且，对于表达人类中存在的Foxp3的CD4+T细胞的自 身抗原特异性T细胞(self-antigen specific T cell clone)，通过高浓度的IL-2 细胞因子处理以及与抗-CD3、抗-CD28抗体之间的组合处理而增加其数量， 从而试图作为细胞处理方法应用的尝试延续至今。因此，对Foxp3的表达的 确认成为可测定Treg细胞的活性或扩增的指标。

<8-1>FACS染色(stain)分析

FACS染色是将小鼠致死之后在小鼠的脾细胞中执行。针对Th17细胞， 首先将抗-CD4抗体进行4至30分钟的反应，然后将Cytofix/Cytoperm处理 而进行30分钟反应之后清洗，然后将抗-IL-17抗体进行处理而进行30分钟 反应，然后用FACScalibur阅读之后使用Flow jo程序而进行了分析。针对 Treg细胞，将抗-CD4和抗-CD25抗体进行处理而进行30分钟反应，然后进 行Treg专用Cytofix/Cytoperm处理而进行30分钟反应，然后清洗之后用抗 -Foxp3抗体进行30分钟反应，并用FACScalibur阅读之后使用Flow jo程序 而进行了分析。

其结果，如图9所示，当在高脂血症动物模型小鼠中口服给药瑞巴派特 时，加速动脉硬化斑块生成的Th17的表达在脾细胞内减少，相反地，可确认 作为免疫调节细胞的Treg细胞的表达却增加。尤其，比起作为阳性对照组的 辛伐他汀给药组，在瑞巴派特给药群中Th17的表达进一步减少。

<8-2>共聚焦显微镜分析

在共聚焦显微镜分析方法中，将所述小鼠致死之后，利用小鼠的脾脏片 段而将OCT冰冻切片包埋剂(OCT compound)进行包埋(embedding)，然 后对随后液氮急速冷却的组织利用冰冻切片机而以7m的厚度贴附于滑体。 将其切片用丙酮进行固定，然后以10％正常山羊血清阻断了非特异性反应30 分钟。Th17细胞利用了PE-示踪抗-CD4(PE-labeled anti-CD4)和FITC-示踪 抗-IL-17(FITC-labeled anti-IL-17)抗体。Treg细胞利用了PE-示踪抗-CD4 (PE-labeled anti-CD4)、FITC-示踪抗-Foxp3(FITC-labeled anti-Foxp3)以 及APC-示踪抗-CD25(APC-labeled anti-CD25)抗体。染色的组织用共聚焦 显微镜进行了分析(LSM 510Meta.Zeiss，Go ttingen，Germany)。

其结果，如图10所示，当在高脂血症动物模型小鼠中口服给药瑞巴派特 时，加速动脉硬化斑块生成的Th17的表达在脾脏细胞内减少，相反地，可确 认作为免疫调节细胞的Treg细胞的表达却增加。

<实施例9>

基于对高脂血症动物模型给药瑞巴派特的MMP-9表达量分析

在本实验中，对高脂血症动物模型小鼠的MMP-9的mRNA表达量进行 了考察。分解非纤维状胶原蛋白(non-fibrillar collagen)的MMP-9(基质金 属蛋白酶-9；matrix metalloproteinase-9)在动脉硬化斑块中表达，且已知在动 脉硬化斑块破裂方面重要的病态生理学机制中起到重要作用。

具体而言，给8周龄的Apoe ko小鼠(去除载脂蛋白E基因的小鼠)饲 喂西式食物，并分别口服给药20mg/kg、100mg/kg的瑞巴派特，然后在食用 西式食物之后达到8周时致死而获得脾细胞。对这样获得的脾脏细胞进行 PMA 25ng/ml和离子霉素(Ionomycin)250ng/ml的处理而刺激4小时，然后 在所述细胞的RNA中通过RT-PCR而考察了MMP-9的表达。RT-PCR利用 LightCycler FastStart DNAmaster SYBR green I(Takara)荧光染料(fluorescent  dye)而借助于ABI PCR器械而执行，作为用于此的反应化合物，将以1μg 进行合成的cDNA以1/3进行稀释之物1μl、LightCycler FastStart DNAmaster  SYBR green I(Takara)10μl、Taqman探针(Applied biosystems公司)1μl 进行混合，然后用蒸馏水制成最终体积达到20μl而使用。关于反应条件，以 95℃中10分钟、在95℃中10秒、在64℃中30秒的方式共进行了50次反应。 对循环阈值(Ct；Cycle threshold)进行分析，从而将MMP-9的mRNA表 达量用与作为管家基因(house keeping gene)的β-肌动蛋白(β-actin)的mRNA 表达量之间的相对定量进行了表示。在所述RT-PCR中使用的引物(primers) 使用了正向(Forward)：5′-CTG TCC AGA GTA CAG CCT-3′、反向(Reverse)： 5′-GAG GTA TAG TGG GAC ACA TAG TGG-3′。另外，作为阳性对照组， 用目前市场中使用为降脂剂的辛伐他汀25mg/kg替代瑞巴派特而口服给药。

其结果，由图11可确认，当在高脂血症动物模型小鼠中口服给药瑞巴派 特时，比起口服给药辛伐他汀的群，小鼠的脾脏细胞中MMP-9的表达量显著 减少。

因此，通过这样的结果判断出瑞巴派特有效地减少动脉硬化斑块破裂中 在病态生理学机制上起到主要作用的MMP-9的表达，从而必将更加有效地防 止由动脉硬化斑块破裂引起的脑梗塞或心肌梗塞。

至此，将优选实施例作为中心而考察了本发明，本发明所属技术领域中 具有普通知识的人员当可理解能够在不脱离本发明的实质性特性的限度内将 本发明实现为变形的形态。因此，不应从限定性观点出发而考虑公开的实施 例，而是应从说明性观点出发而予以考虑。本发明的范围并不取决于前述的 说明，而是体现在权利要求书，应当解释为落在与所述权利要求书相等的范 围内的所有差别均包含于本发明。

产业上的可利用性

根据本发明的瑞巴派特化合物可通过多样的机理而作为可预防或治疗高 脂血症及与之相关的动脉硬化症、心力衰竭、高血压性心脏病等的药学组合 物而有效地得到利用。