在特应性皮肤的美容学治疗中通过蔗糖硬脂酸酯和/或脱水山梨醇酯抑制病原微生物的附着

摘要

用于局部应用的组合物，包含：含有至少70重量％的蔗糖和硬脂酸的单酯的蔗糖硬脂酸酯，其余为蔗糖和硬脂酸的二酯，三酯和聚酯，和/或脱水山梨醇酯，在特应性皮炎的治疗中作为试剂使用以抑制金黄色葡萄球菌对人皮肤和鼻腔粘膜的粘附。

说明书

发明范围

本发明的目的是一种用于人特应性皮炎的美容学治疗方法，该方法基于在 皮肤上涂覆一种能在其上成膜的化妆品组合物。根据本发明，这种膜-凭借其 组分-抑制致病微生物与皮肤的黏附，并加强皮肤屏障。

更具体地，所述化妆品组合物包含蔗糖的酯和/或脱水山梨醇的酯，其能够 阻断葡萄球菌与皮肤和鼻腔粘膜的黏附，从而抑制致病菌群的增殖。这种抑制 的效果是通过限制金黄色葡萄球菌间接造成的脂质，特别是神经酰胺的分解来 保护皮肤屏障。

现有技术

特应性皮炎或特应性皮肤是一种与遗传免疫易感性和皮肤屏障异常相关的 炎性，痒疹皮肤状况。在临床上，这种遗传倾向也可以表现为过敏性鼻炎和哮 喘。

特应性皮炎导致对健康受试者耐受的环境过敏原超敏。

在特应性皮炎中，湿疹表示由Th2淋巴细胞(其产生IL-4和IL-5)和抗 原呈递细胞介导的迟发型超敏反应。

与任何由抗原特异性T淋巴细胞介导的免疫反应相似，特应性皮炎的湿疹 的炎性反应经历三个阶段。

第一阶段是无症状的致敏作用。这个阶段在临床上不明显，并导致抗原特 异性T淋巴细胞的扩增。通常情况下，致敏通过暴露于树突状细胞捕捉的环境 过敏原而在青年期发生。

在第二阶段，湿疹产生。在重新暴露于所讨论的变应原后，朗格汉斯 (Langerhans)细胞迁移和激活抗原特异性的产细胞因子Th2淋巴细胞，进而 激活皮肤中各种不同类型的细胞。该机制有助于募集白细胞进入真皮和表皮， 在此它们产生炎症介质。持续时间可变的这一阶段的特点是湿疹病变。在大多 数患者中，它伴随着高水平的抗原特异性IgE抗体，其中一些结合于朗格汉斯 细胞表面。

最后，该病变在第三阶段消退。特应性皮炎湿疹的产生是突发的，间隔有 自发消退期。参与调节炎症的机制仍然知之甚少。

特应性皮炎影响到10-30％的人口，但它的发病率不断上升，在发达国家， 在过去的二十年已经两倍或三倍。

特应性皮炎的特点是急性湿疹的突发痒疹，间隔有消退期。这在儿童最常 见。它在出生后大约几个月发作，其形式是在受摩擦的脸颊和皮肤区域的病变。 然后在一岁和两岁之间以疾病发作的形式发展。在此期间，皮肤干燥发红，渗 液斑块，特别在皮肤皱褶的内表面上。五岁以后，疾病发作趋于消失，但皮肤 仍然干燥和敏感。有些人，特应性皮炎可以持续到成年。

有两种现象在特应性皮炎之后产生。首先，皮肤屏障被减弱，其次，皮肤 有致病微生物群寄居。

皮肤屏障的主要组织是角质层，表皮的最外层包括角质细胞(corneocyte) 和特定的脂质，包括胆固醇、游离脂肪酸、脑苷脂和神经酰胺。这些脂质作为 细胞间“接合剂”，并使角质层防水。

特应性皮炎患者的角质层分析显示某些蛋白和皮肤脂质明显不足。丝聚蛋 白(filaggrin)和内皮蛋白(involucrin)都缺乏，其中丝聚蛋白是参与角质细 胞中聚集角蛋白丝的蛋白质，而内皮蛋白是构建角质层中的蛋白质骨架必不可 少的蛋白。不足最明显的脂质是神经酰胺1和3。

神经酰胺在通过限制水的蒸发来调节皮肤屏障功能中尤其重要。

这些蛋白质和脂质的不足意味着角质细胞彼此黏附时较弱，影响了角质层 的凝聚力和完整性。这表现为这些患者的角质层厚度显著减少。

特应性皮炎表现为皮肤蛋白和脂质的显著损失，正如上面提到的，这导致 了水分的蒸发和皮肤干燥。显而易见的是这使得过敏原更容易进入皮肤。

因此，特应性皮炎触发这样的恶性循环：细胞内水的蒸发会导致皮肤脱水 和皮肤干燥，进而又增加皮肤的渗透性。皮肤渗透性增加使得过敏源更容易穿 透其维持肌肤应激性的组织。

皮肤的屏障功能也可被由腐生菌菌群组成的局部生态系统加强。

腐生菌群是皮肤表面的一个自然的，永久的特性。皮肤表面上的细菌的密 度估计在10²和10⁵/平方厘米之间。最常见的种类为葡萄球菌，尤其是凝固酶 阴性的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和相关的种类(微球菌 (Micrococcus))和棒状杆菌型细菌，无论是好氧(棒状杆菌属 (Corynebacterium)，短杆菌属(Brevibacterium))和厌氧(痤疮丙酸杆菌 (Propionibacterium acnes))。这些细菌是建立在角质层上，在此处它们粘 附于角质细胞以形成保护性生物膜。

因此，这种腐生菌群强化屏障功能，因为它占据其他微生物(可能是致病 的)潜在的粘附位点-并抑制它们的增殖。

但是，如果皮肤处于特应性皮炎中而遭到损坏，受损的皮肤屏障功能会促 进水的蒸发，并产生一个有利于细菌、病毒或真菌寄居的皮肤表面环境。这种 合适的环境由湿疹发作过程中发生的皮肤温度上升而加剧。

因此，致病细菌菌群可以在皮肤的表面暂时增长。大部分这些种类在正常 环境中能找到，包括属于假单胞菌属(Pseudomonas)和不动杆菌属 (Acinetobacter)的种类；从消化或口腔菌群，例如肠细菌、链球菌属获得的 其它种类或梭菌属(Clostridium)的其他种类。

这些细菌通常不能够在人体皮肤的表面上增殖，但是如果在特应性皮炎中 皮肤屏障功能受到损害，它们可能会导致感染，在那它们可以形成一个致病细 菌生物膜。

在瞬时致病菌群的细菌中，金黄色葡萄球菌(S.aureus)是潜在的最致病 种类，它是在15％-30％的健康人的鼻腔和喉咙中能发现的属中最常见的成员。 这种革兰氏阳性菌通过粘附于皮肤细胞在皮肤上寄居。

最近的研究表明，90％的特应性皮炎患者的皮肤被金黄色葡萄球菌寄居， 相比之下健康对象中只有5％。

值得注意的是，特应性皮炎也被证实是鼻粘膜金黄色葡萄球菌膜寄居的风 险因素，由其在特应性(皮炎)患者的环境中提供的(细菌)贮库(Pascolini等， 2011年)。

一些研究还显示，由皮肤菌群产生的神经酰胺(酶)在金黄色葡萄球菌的存 在下被激活。神经酰胺酶水解角质层中的神经酰胺，可能暗示由金黄色葡萄球 菌对皮肤的寄居部分导致特应性表皮中该类脂质的不足。(Kita等，2002)。

金黄色葡萄球菌是也超抗原的一个来源(蛋白质毒素)，所述超抗原在患 有特应性皮炎的对象中，与免疫细胞相互作用，放大炎性反应，从而引发突发。

因此，金黄色葡萄球菌在表皮表面的增殖和神经酰胺不足而导致皮肤屏障 功能受损之间存在有形联系，特别是在特应性(皮炎)对象中(记住，受损的屏 障功能促进对环境过敏原的致敏和皮肤炎症的维持)。负责感染的两种主要病 毒是单纯疱疹病毒(HSV)和牛痘病毒。马拉色菌(Malassezia)酵母的寄居也 已在特应性皮炎患者上观察到。

目前对特应性皮炎的治疗方式是基于管理炎症和控制细菌寄居。

旨在管理炎症的方式包括给予糖皮质激素和钙调磷酸酶抑制剂，如吡美莫 司和他克莫司。这些产品通常与润肤产品结合。

细菌控制，特别是涉及广谱抗生素的给药和消毒液的施用已有广泛报道。 一线治疗因为细菌的抗药性变得困难。此外，这两类治疗不仅杀死存在于皮肤 上的病原菌，同时也杀死有益腐生菌。

这两种方式的主要缺点是，它们破坏有效屏障功能所需的成分，即腐生菌 群。

最近的研究表明，含有某些糖的组合物的局部应用能抑制致病细菌与皮肤 的粘附。

文件WO 2006/106220报道，某些糖，单-和寡-聚糖如鼠李糖，半乳糖， 甘露糖和月桂基葡糖苷，能抑制细菌特别是葡萄球菌属(中间葡萄球菌 (Staphylococcus intermedius))的细菌与特应性(皮炎)狗的角质细胞的粘附。

文件WO 96/23479提示，某些糖可用于抑制某些微生物的粘附。挑出的单 糖有，例如棉子糖、甘露糖和鼠李糖，二糖，寡糖，胺化糖和各种糖类的酯， 包括葡萄糖的酯，如鲸蜡硬脂基糖苷、辛基糖苷和癸基糖苷。这些不同的糖类 可混入化妆品或皮肤病学制剂的组合物中以抑制细菌粘附，例如金黄色葡萄球 菌的粘附，和/或用于治疗目的，特别是特应性皮炎的治疗。

文件EP0875239A2中列出糖的各种酯，包括蔗糖酯，它们对某些革兰氏阳 性菌如表皮葡萄球菌，金黄色葡萄球菌，棒状杆菌属和痤疮丙酸表现出抗性， 这些革兰氏阳性菌参与一系列显示特应性皮炎的病状。列出的酯是棕榈酸/硬 脂酸二酯、硬脂酸二酯、月桂酸单酯、肉豆蔻酸单酯和硬脂酸三酯和四酯。

文件EP1340486A1中列出的各种糖酯，包括蔗糖、果糖、葡萄糖和海藻糖 的酯。只有果糖、葡萄糖和海藻糖的酯测试了它们抑制金黄色葡萄球菌生长的 能力。蔗糖酯没有测试这种活性。此家族只有一个代表，即蔗糖硬脂酸酯，经 过测试，这仅适用于漂白活性(见表7)。最后，这份文件并没有提到过敏性 皮炎。

文件EP0815841A1报道了控制由于尿布摩擦导致的皮肤发红的组合物。这 不是对上述特应性皮炎的治疗。该文件描述了蔗糖与棕榈酸和硬脂酸的单酯混 合物或与棕榈酸和月桂酸的单酯混合物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生 长的抑制作用。

文件EP2210588A1描述了含有聚山梨醇酯80，即山梨糖醇的酯的发泡组合 物。聚山梨醇酯80是一个非常普遍的乳化剂。

Mintel文件(XP002693208)描述了含有蔗糖硬脂酸酯的保湿组合物。

文件WO 4/037225A2描述了用作发泡气溶胶载体的不含乙醇或丙二醇的组 合物。在其他可以利用辅以一些特定的活性物质的气雾剂加以治疗的疾病中提 到了特应性皮炎。在实施例中提到的蔗糖硬脂酸酯和聚山梨醇酯80是常用的 表面活性剂。

文件FR2798591A1描述了使用特殊的植物油来提高皮肤脂质的合成，特别 是用于特应性皮炎的治疗。蔗糖二硬脂酸酯和脱水山梨糖醇三硬脂酸酯通常用 作表面活性剂。

MERCK文件(XP-002693209)描述了含有蔗糖硬脂酸酯的抗皱组合物。

文献EP1639989A1描述了含有用作表面活性剂的糖或脱水山梨糖醇的酯的 微乳剂的产生。

在文件US2005/158348A1的实施例5和8中，所述组合物分别含有聚山 梨酯80和蔗糖酯。这些组合物用于疼痛和炎症的治疗。脱水山梨醇和蔗糖酯 用作赋形剂。

文献US2010/080768A1描述了用于多种疾病，包括特应性皮炎的治疗的组 合物中存在的各种神经酰胺和鞘脂。

文献US2011/101135描述了脱水山梨醇单辛酸酯用作化妆品组合物的防腐 剂。测试了各种细菌菌株，包括金黄色葡萄球菌。

尽管如此，仍然需要对目前用于管理特应性皮炎的各种方式的更有效替代 方案。

正是在这种情况下，本申请人出乎意料地发现，某些糖酯如蔗糖和脱水山 梨醇的酯，强烈地抑制了致病微生物对皮肤和粘膜的附着。

抑制金黄色葡萄球菌对皮肤表面的粘附能防止病原微生物增殖，甚至在没 有抗生素或局部消毒剂的情况下。

抑制病原微生物，特别是金黄色葡萄球菌，对皮肤的黏附的优点之一，是 维持腐生菌群和通过减少其组分脂类的分解来增强皮肤的屏障功能。

糖酯可以有利地与表皮中天然产生的脂质结合，以形成膜，膜的作用还能 更有效地对抗表皮屏障的崩解和病原体对皮肤的寄居。

本发明的其它的目的和方面将显现在下面的详细描述，这是用于说明展示 的目的并且不以任何方式限制。

发明详述

本发明的第一个方面旨在提供一种局部应用的化妆品组合物，其含有至少 一种蔗糖酯和/或脱水山梨醇酯作为试剂，以抑制金黄色葡萄球菌粘附到人的 皮肤和鼻腔粘膜。

更具体地说，本发明涉及一种局部应用的组合物，含有至少一种用于治疗 特应性皮炎的蔗糖酯和/或脱水山梨醇酯，作为试剂来抑制金黄色葡萄球菌粘 附到人的皮肤和鼻腔粘膜。

糖酯是一种糖，其中至少一个游离醇基已被脂肪酸链酯化。

一系列不同的糖酯家族已见诸描述。值得注意的是，有葡萄糖，蔗糖和脱 水山梨醇的酯(Piccicuto等，2001)。它们具有无毒和无刺激性的优点，常 常由于它们的表面活性性能而在食品加工、制药和化妆品工业中广泛使用。

这三种不同的家族中，本申请仅涉及蔗糖和脱水山梨醇的酯。

这些非离子表面活性剂具有通过酯键结合到脂肪酸构成的疏水性基团的 蔗糖或脱水山梨醇构成的亲水性基团。这些酯的表面活性性质还使它们很容易 在化妆品组合物，特别是乳液中与脂质结合。

α-D-吡喃葡萄糖-β-D-呋喃果糖苷或蔗糖携带有8个游离醇基，因此可 与最多8个脂肪酸酯化。

脱水山梨醇是由山梨糖醇(本身通过还原葡萄糖的醛基以产生醇基得到的 多羟基化合物)脱水产生。脱水山梨醇携带有4个游离醇基，每一个都可以由 脂肪酸酯化。

在如本发明的上下文中，脱水山梨醇酯是指“司盘”型的酯，例如以下结 构式所示的酯：

其中R是脂肪酸，在这种情况下，单酯化司盘。

本发明还涉及“吐温”型聚乙氧基脱水山梨醇酯，例如下式：

其中R是脂肪酸，在这种情况下，单酯化吐温。

脂肪酸的碳链可短可长，例如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸和硬脂酸的相应 链为C₁₂、C₁₄、C₁₆和C₁₈。脂肪酸也可选自饱和和不饱和脂肪酸，例如油酸(在 C₁₈碳链)。

因此，根据本发明的另一个特征，所述化妆品组合物包含其中至少一个醇 基被脂肪酸酯化的蔗糖和/或脱水山梨醇，所述脂肪酸选自碳链在C₁₂和C₂₂之间， 有利地是C₁₂和C₁₈之间的。

取决于脂肪酸对蔗糖的比例，酯化可以得到单酯，二酯，三酯或聚酯(最 多至辛酯)，或所有这些形式的混合物。脱水山梨醇的酯化可以得到单酯，二 酯，三酯，四酯或这些不同形式的混合物。

根据另一个实施例，本发明的化妆品组合物包含蔗糖和/或脱水山梨醇， 其中一部分或全部的醇基已被相同的脂肪酸酯化。

在这种情况下和有利地，所述蔗糖酯选自：蔗糖月桂酸酯，蔗糖豆蔻酸酯， 蔗糖棕榈酸酯和蔗糖硬脂酸酯，和脱水山梨醇酯选自：脱水山梨醇月桂酸酯(司 盘20)，脱水山梨醇单硬脂酸酯(司盘60)，脱水山梨醇油酸酯(司盘80) 和脱水山梨糖醇倍半油酸酯(蒙坦(Montane)83)。

在一个有利的实施例中，蔗糖酯是含有至少70重量％，有利地至少75重 量％的蔗糖和硬脂酸单酯的蔗糖硬脂酸酯，其余为蔗糖和硬脂酸的二，三和聚 酯。

有利的是，本发明的化妆品组合物包含聚乙氧基脱水山梨醇酯。可提及的 有乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20)，聚氧乙烯脱水山梨醇单 硬脂酸酯20(吐温60)和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)。在一个 优选的实施例中，脱水山梨醇酯是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。

根据一个替代性实施例，所述化妆品组合物可以由与蔗糖和/或脱水山梨 醇组成，其中一部分或全部的醇基已被至少两种不同的脂肪酸酯化。

在这种情况下和有利地，蔗糖酯选自：蔗糖棕榈酸酯硬脂酸酯和蔗糖四硬 脂酸酯三乙酸酯，和脱水山梨醇酯选自：脱水山梨糖醇的油酸酯/硬脂酸酯(蒙 坦481)和被来自橄榄油的脂肪酸酯化的山梨糖醇(橄榄油酸脱水山梨醇酯 (olivate sorbitan))。

根据一个优选的实施例，本发明的化妆品组合物中的蔗糖酯是蔗糖硬脂酸 酯，即，与至少一分子的硬脂酸(C₁₈脂肪酸)酯化的蔗糖。

本领域的技术人员都知道，对于给定的脂肪酸碳链长度，混合物中单酯的 比例会影响糖酯的疏水性/亲水性。

借助亲水/亲油平衡值(HLB)指数表征这些属性。1到10之间的值表示亲 脂性糖酯，对应于相对少的单酯，因此，聚酯的比例较高。但11至20的值表 示的亲水性糖酯，对应于高比例的单酯，因此聚酯的比例较低。

在本发明的一个特定实施例中，蔗糖硬脂酸酯具有16的HLB值，对应于 蔗糖单酯和硬脂酸的相对比例在75％到80％(重量)之间。因此，该产品被 称为蔗糖单硬脂酸酯。

优选地，蔗糖酯和/或脱水山梨醇酯占组合物重量的0.1-5％，有利地为1 ％和3％之间。

有利的是，所述化妆品组合物还包含能够恢复皮肤屏障的脂质，分别是：

-至少一种不是天然存在于皮肤中的脂质，有利的是油；和/或

-天然存在于皮肤中的成分的混合物，包括神经酰胺1，3，6，胆固醇， 游离脂肪酸和植物鞘氨醇。

实际上，补充某些特定脂质可以帮助恢复皮肤细胞之间的脂质层，即，胞 外接合剂，从而有助于恢复皮肤屏障。其结果是，皮肤水分的蒸发连同金黄色 葡萄球菌粘附在皮肤表面上并增殖的风险减少了。此作用与本发明的酯的抑制 金黄色葡萄球菌附着并防止角质层的神经酰胺水解的效果相结合。

未天然存在于皮肤中的脂类，如油，介导组织的短期保湿。它们有利地选 自向日葵油和菜籽油(芸苔)，因为这些油中高浓度的必需ω-6和omega-3脂 肪酸。

在本发明的特定实施例中，化妆品组合物含有不是天然存在于皮肤的脂 类，分别是占组合物3-15％(重量)的向日葵油和占组合物的0.05-10％(重 量)的菜籽油(芸苔)。

补充皮肤中自然存在的脂类可以纠正特应性皮炎患者中某些角质层脂质 的缺乏。这可以帮助恢复皮肤的长期屏障功能，特别是与上述酯类的效果相结 合。

在一个具体的实施例中，天然存在的组分的混合物对应于与INCI命名的 脂质组合物，即水，神经酰胺3，神经酰胺6II，神经酰胺1，植物鞘氨醇，胆 固醇，月桂酰乳酸钠，卡波姆，黄原胶。此脂质组合物有利地作为商业产品， SK Influx V^TM(赢创工业股份有限公司-Evonik Industries)提供。

优选地，所述脂质组合物占总组合物的0.01-5％(重量)。

有利的是，所述化妆品组合物还含有选自鼠李糖，木糖醇和甘露糖醇中的 至少一种额外的多羟基化合物。

这些额外的多羟基化合物，如鼠李糖和木糖醇，帮助抑制致病细菌如金黄 色葡萄球菌对人的皮肤和鼻腔粘膜的粘附。甘露醇还具有自由基淬灭活性。

在本发明的特定的实施例中，化妆品组合物包含三种上述的额外多羟基化 合物的混合物。

有利的是，鼠李糖占组合物的0.01-1重量％，木糖醇占组合物的0.05-2 重量ichtyol％和甘露醇占组合物的0.005-1重量％。

有利的是，该组合物还含有特别选自下组的至少一种抗痒疹剂：

-棕榈酰乙醇胺，CAS号544-31-0；

-羟基-α-山椒素，CAS号83883-10-7，zanthalène^TM的组合物的一部分；

-基于酪氨酰精氨酸的脂二肽，calmosensine^TM的组合物的一部分；

-鱼石脂(ichtyol)或鱼石磺酸铵(ammonium ichthosulphonate)，CAS号 码8029-68-3。

有利的是，本发明的化妆品组合物还可以包括至少一种抗炎剂，优选地选 自：

-β-谷甾醇，CAS编号83-46-5；

-甘草次酸(enoxolone)或甘草次酸(glycyrrhetinic acid)，CAS号 471-53-4。

有利的是，所述化妆品组合物还包括已知能促进角质层的脂质，包括神经 酰胺，游离脂肪酸和胆固醇，合成的维生素PP。维生素PP通过刺激丝氨酸棕 榈酰转移酶的活性发挥作用，该酶是鞘氨醇，神经酰胺产生的前体的合成中的 关键酶。

本发明的另一个方面涉及用于特应性皮炎的美容学治疗的化妆品组合物。

本发明还涉及一种特应性皮炎的美容学治疗方式，基于通过下文所述的组 合物在皮肤上形成膜来保护表皮。

在一个有利的实施例中，所述治疗方式包括向所述皮肤施用成膜组合物， 特别是含有蔗糖和/或脱水山梨醇的酯，以抑制金黄色葡萄球菌粘附到皮肤表 面上，连同脂质，如脂肪酸，神经酰胺和胆固醇，加强皮肤对微生物损伤的抵 御，并且特别针对由这种微生物分泌的水解角质层组分的酶。

这种膜可根据疾病的阶段施加到皮肤，以便：

-阻止进展；

-在疾病的突发期起作用；

-防止复发。

有利的是，用于停止进程的组合物含有(以组合物的重量百分比计)：

-1％和5％之间的蔗糖单硬脂酸酯和/或脱水山梨醇酯；

-3％和25％之间的油的混合物；

-0.01％和5％之间的SK Influx V^TM；

-0.06％和4％之间的鼠李糖，木糖醇和甘露糖醇的混合物。

有利的是，用于治疗突发的组合物包含(以组合物的重量百分比计)：

-1％和5％之间的蔗糖单硬脂酸酯和/或脱水山梨醇酯；

-3％和25％之间的油的混合物；

-0.01％和5％之间的SK Influx V^TM；

-0.06％和4％之间的鼠李糖，木糖醇和甘露糖醇的混合物；

-0.01％和1％之间的抗痒疹剂；

-0.5％和1％之间的抗炎剂。

有利的是，特别是用于预防复发的组合物含有(以组合物的重量百分比 计)：

-1％和5％之间的蔗糖单硬脂酸酯和/或脱水山梨醇酯；

-3％和25％之间的油的混合物；

-0.01％和5％之间的SK Influx V^TM；

-0.06％和3％之间的鼠李糖，木糖醇和甘露糖醇的混合物；

-0.01％和1％之间的抗痒疹剂；

-0.01％和2％之间的维生素PP。

这些不同的组合物是成膜的，也就是说，它们可以在皮肤的表面上产生薄 膜，以保护它免受病原微生物的侵扰。

从阅读本发明可以知晓很多优点：

-减少金黄色葡萄球菌黏附到特应性皮肤以防止致病细菌群的增长，同时 维持腐生菌群；

-已知的是，细菌生物膜生长在皮肤的表面上经历一系列不同的阶段，从 细菌粘附到膜的生长，成熟和扩张。因此，抑制金黄色葡萄球菌对特应性皮肤 的黏附导致致病生物膜形成的抑制；

-使用无毒，无刺激性的蔗糖和/或脱水山梨醇酯来减少对抗微生物剂如 抗生素和局部消毒剂产品的需求；

-并非天然存在于皮肤中的脂质的存在能恢复屏障功能，并有助于减少表 皮水分的蒸发；

-蔗糖和/或脱水山梨醇酯和脂质的互补作用因抑制黏附而降低金黄色葡 萄球菌的负担，然后恢复角质层的屏障功能；

-因此，蔗糖和/或脱水山梨醇酯和脂质在表皮上形成保护它免受病原微 生物侵犯和防止屏障功能破坏的膜。

实施例

1/蔗糖硬脂酸酯对体外固体基质上的金黄色葡萄球菌黏附的影响。

1)方法

采用以下方案：

-37℃下，将金黄色葡萄球菌在La Timone医院(CIP65-8)的临床细菌 学实验室，在“营养肉汤N°2'(Oxoid)中生长12小时；

-培养物以9000g离心10分钟，然后将细菌沉淀物重悬于磷酸盐缓冲盐 水中(PBS)；

-将该悬浮液在水溶液或在含有测试的多羟基化合物的水溶液中稀释50 倍。这是木糖醇或蔗糖硬脂酸酯HLB16(SURFHOPE^TM C1816)；

-37℃下，将细菌与测试多羟基化合物预温育45分钟；

-然后将混合物(100微升)点样到具有固定表面积(0.8平方厘米)与 壁的玻璃细胞学载玻片的孔中，即用于细胞培养的特殊载玻片(腔室载玻片系 统-Chamber Slide System，Labtek)；

-然后将细菌培养物在37℃下温育60分钟，之后将它们用超纯水 (UltraPure water)冲洗，以洗去未粘附到孔的表面上的任何细菌；

-粘附细菌用结晶紫染色10秒，漂洗，在25℃干燥12小时；

-最后，细菌在×1000放大倍数、完全均匀视野的显微镜(浸油)下检查；

-最后，每个孔中细菌的数目用合适的软件自动计数。

2)结果

在这个方法中，对该多羟基化合物的影响进行了分析，与抑制金黄色葡萄 球菌附着到固体基质进行对比。该试验以0.5％终浓度的木糖醇，以及1％终 浓度的HLB16蔗糖硬脂酸酯(蔗糖单硬脂酸酯，SURFHOPE C18-C16)进行。

表1：木糖醇(0.5％)和HLB16蔗糖硬脂酸酯(1％)对金黄色葡萄球菌 在载玻片表面黏附的影响。结果表示为三个视野的平均值计数连同相应的标准 偏差。

3)结论

在1％HLB 16蔗糖硬脂酸酯的存在下观察到金黄色葡萄球菌对载玻片表面 的黏附的强抑制作用。

2/本发明的酯对离体金黄色葡萄球菌对人体角质细胞粘附的影响。

为了证实体外研究结果，对人体角质细胞的离体粘附试验改编自对狗的方 法(McEwan等，2005)。

1)细菌菌株

金黄色葡萄球菌临床株(CIP65-8)在位于马赛的La Timone医院的临床 细菌学实验室中从一位患者分离得到。

2)方法

金黄色葡萄球菌接种到10ml的'营养肉汤N°2'(Oxoid)中，并在37℃ 下孵育搅拌12小时。将培养物离心，将细菌沉淀悬浮于PBS中。细菌密度用 渗透纯水调整为约10⁶CFU/ml。

在一个人类志愿者的手臂上标出目标区域。在每个区域，皮肤碎片用连续 5个“预剥离”程序与Sellotape^TMOriginal圆片取出(直径22毫米)。角质 细胞然后在设定为150克/平方厘米的压力下从每个目标区域使用带有一个 D-Squame圆片施加器的D-Squame^TM粘圆片(直径22毫米)回收。

将圆片放入培养皿(直径为35毫米)并用0.5ml水或0.5ml金黄色葡萄 球菌的悬浮液以10⁶CFU/ml的密度覆盖，其含有测试的多羟基化合物(每个 一式三份的区域)。

以这种方式所测试的多羟基化合物是：

-木糖醇，以0.5％的最终浓度；

-HLB16蔗糖硬脂酸酯(蔗糖氮硬脂酸酯，SURFHOPE C1816，)以1％的 最终浓度，

-蔗糖月桂酸单酯(SURFHOPE C1216，80％的单酯)，以0.1％的最终浓 度，

-聚山梨酯60，以0.1％的最终浓度；

-聚山梨酯60，以1％的最终浓度；

-聚山梨酯20，以0.1％的最终浓度。

所有溶液在水中制成，并且在黏附试验开始之前45分钟在室温下与金黄 色葡萄球菌接触。所述圆片在37℃下孵育60分钟。然后将圆片在渗透纯净水 中漂洗以除去未粘附到角质细胞的任何细菌。粘附的细菌用草酸盐化结晶紫染 色10秒。最后，圆片用渗透纯水漂洗，置于显微镜载玻片上并空气干燥24小 时。

3)图像采集和细菌计数

粘附的细菌使用装有数码相机的Olympus BX53显微镜拍照。这些图像然 后用UTHSCSA图像工具软件(驯鹿图像公司-Reindeer Graphics Inc.)进行 分析。从10-12图像计算每张圆片的细菌平均数目，对应于约100角质细胞的 表面。用STATGRAPHICS Plus软件(Manugistics公司)比较平均值。

4)结果和结论

这些试验结果表明，木糖醇抑制金黄色葡萄球菌对角质细胞的黏附的系数 约20％(表2)。利用终浓度为1％的HLB16蔗糖硬脂酸酯和聚山梨醇酯60观 察到非常强的抑制活性-50％或以上(表2)。0.1％的聚山梨醇酯20和60表 现出非常有前途的抑制活性。与此相反，蔗糖月桂酸酯单酯诱导粘附显著增加。

表2：本发明的木糖醇和糖对金黄色葡萄球菌对人类角质细胞的粘附的影响。

对于木糖醇和蔗糖硬脂酸酯(1％)，每个糖在两个独立的实验中测试。

因此，这些离体结果证实了体外结果，即，周围环境中存在HLB16蔗糖硬 脂酸酯能抑制金黄色葡萄球菌对固体基质，如细胞学载玻片和人类角质细胞的 黏附。

3/局部组合物的实例

ATODERM^TM STOP EVOLUTIVE

产物 ％组合物以重量计 HLB 16蔗糖硬脂酸酯(SURFHOPE C1816) 2.0. 脂相 11.0. 其他多羟基化合物 0.61. 水 足量(Q.s.)100

ATODERM^TM STOP CRISE

产物 ％组合物以重量计 HLB 16蔗糖硬脂酸酯(SURFHOPE C1816) 2.0. 脂相 11.0. 其他多羟基化合物 0.61. 抗痒疹剂 0.3. 抗炎症剂 0.5. 水 足量100

ATODERM^TM STOP RECIDIVE

产物 ％组合物以重量计 HLB 16蔗糖硬脂酸酯(SURFHOPE C1816) 2.0. 脂相 11.0. 其他多羟基化合物 1.1. 抗痒疹剂 0.3. 维生素PP 0.3. 水 足量100

参考文献

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