用共振散射光谱测定吡哌酸的方法

摘要

本发明公开了一种用共振散射光谱测定吡哌酸的方法，主要是利用吡哌酸与四苯硼钠在pH3.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中形成离子缔合物微粒，该微粒在480nm波长处产生一个共振散射光谱峰，且共振散射强度与吡哌酸的浓度呈线性关系，据此，建立一个测定吡哌酸含量的共振散射光谱分析新方法。本发明的优点是：本测定方法与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，操作简便，快速，试剂易得，灵敏度高。

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学，具体是用共振散射光谱测定吡哌酸的方法。

背景技术

吡哌酸（Pipemidic acid）化学名称为8-乙基-5-氧代-5,8-二氢-2(1-哌嗪基)-(2,3-d) 嘧啶-6-羧酸，简称PPA,是一种吡啶酮酸类抗菌药,它具有抗菌谱广、活性强、毒性低等特点，是一种治疗肠道疾病的常用药物。因此,监控吡哌酸的质量有着重要的意义。目前,测定吡哌酸的方法主要有分光光度法,伏安法,示波极谱法,滴定法,化学发光法,荧光光谱法,高效液相色谱法等。这些方法中大多数都具有很多明显的缺点。如示波滴定法中所用的汞是一种剧毒物，对操作者的健康很不利，而高效液相色谱法因仪器昂贵，操作过程较为烦琐很难普及；分光光度法操作虽然简单，但灵敏度不高，干扰大。寻找一种操作简便，价廉，灵敏的测定吡哌酸含量的方法很有必要。目前尚未见共振散射光谱法测定吡哌酸的报道。本发明基于吡哌酸与四苯硼钠在pH 3.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中形成离子缔合物微粒，该微粒在480 nm波长处产生一个共振散射光谱峰，且共振散射强度与吡哌酸的浓度呈线性关系，据此，建立了一个测定吡哌酸的共振散射光谱分析新方法。

发明内容

本发明的目的是为克服现有技术的不足，而提供一种简单快速的用共振散射光谱测定吡哌酸的方法。

实现本发明目的的原理是：在pH 3.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，吡哌酸与四苯硼钠反应形成离子缔合物微粒，该微粒在480 nm波长处产生一个共振散射光谱峰，且共振散射强度与吡哌酸的浓度呈线性关系，据此建立一个用共振散射光谱测定吡哌酸的方法。

用共振散射光谱测定吡哌酸的方法，包括如下步骤：

（1）取5支5 mL的刻度试管，依次移取100～800 μL pH 3.0～4.8的醋酸-醋酸钠缓冲液，50～700 μL 2.0 mmol/L的四苯硼钠溶液，再加入10～950 μL 浓度为200μg/mL的吡哌酸标准溶液，混匀，室温放置20分钟，用二次蒸馏水稀释至2.0 mL，混匀，作标准体系；

（2）另取1支5 mL的刻度试管，用步骤（1）的方法，但不加吡哌酸标准液制备空白对照体系溶液；

（3）分别取按步骤（1）～（2）制备的吡哌酸标准溶液及空白对照体系溶液适量，置于比色皿中，于荧光分光光度计上，设置光电倍增管电压，入射狭缝及激发狭缝仪器参数，在激发波长等于发射波长的条件下，同步扫描，得到体系的共振散射光谱，测定标准体系480 nm处的共振散射强度为I，测试空白对照体系的共振散射强度为I₀，并计算ΔI＝I-I₀；

（4）以ΔI对吡哌酸标准溶液的浓度关系做工作曲线；

（5）被测物样品测定：取含吡哌酸的原料药，可以是研钵中研细的吡哌酸胶囊剂内容物、吡哌酸片剂药品，称取适量药品置于器皿中，每100毫克吡哌酸加0.01 mol/L NaOH溶液1.0 mL，振摇，使吡哌酸完全溶解，再加二次蒸馏水制成含吡哌酸的浓度在1.0～95 μg/mL之间，将此溶液用滤纸过滤，取适量滤液，按步骤（1）～（3）操作，但步骤（1）不加吡哌酸标准溶液，而是加样品液，测定样品的共振散射强度为I_样，空白的共振散射强度为I_样0，算出被测物的ΔI_样＝I_样-I_样0；

（6）根据样品测得的ΔI_样，查步骤（4）的工作曲线，计算出被测物药品吡哌酸的含量。

所述的吡哌酸标准溶液配制方法是：每100毫克吡哌酸标准品加0.01 mol/L NaOH溶液1.0 mL使溶解，再用二次蒸馏水稀释至需要的浓度。

本发明的优点是：与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，操作简便，快速，试剂易得，灵敏度高。

附图说明

图1为本发明实施例测定吡哌酸的部分共振散射光谱图。

图中曲线a至c表示：a: pH 3.6 醋酸-醋酸钠缓冲液+0.4 mmol/L 四苯硼钠溶液； b: pH 3.6 醋酸-醋酸钠缓冲液+0.4 mmol/L 四苯硼钠溶液+20 μg/mL吡哌酸标准溶液；c: pH 3.6 醋酸-醋酸钠缓冲液+0.4 mmol/L 四苯硼钠溶液+40 μg/mL吡哌酸标准溶液。

具体实施方式

实施例：

（1）取5支5 mL的刻度试管，依次移取300 μL pH 3.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，400 μL 2.0 mmol/L的四苯硼钠溶液，再加入10 μL、50 μL、200 μL、400 μL、950 μL浓度为200μg/mL的吡哌酸标准溶液，混匀，室温放置20分钟，用二次蒸馏水稀释至2.0 mL，混匀；

（2）另取1支5 mL的刻度试管，用步骤（1）的方法，但不加吡哌酸标准溶液制备空白对照体系溶液；

（3）分别取按步骤（1）～（2）制备的吡哌酸标准溶液及空白对照体系溶液适量，置于1cm比色皿中，于Cary Eclipse型荧光分光光度计上，设置光电倍增管电压为450v，入射狭缝、激发狭缝均为2.5nm，激发波长等于发射波长的条件下，同步扫描，得到体系的共振散射光谱，测定标准体系480 nm处的共振散射强度为I，测试空白对照体系的共振散射强度为I₀，计算ΔI＝I-I₀；

（4）以ΔI对吡哌酸标准溶液的浓度C做工作曲线，回归方程为ΔI =8.55C +52.6，吡哌酸浓度C的单位为μg/mL；

（5）被测物样品测定：1）精密称取吡哌酸原料药100 mg 2份，分别置于100 mL容量瓶中。2）精密称取规格为0.25g的吡哌酸片20片，称定重量为5.730g，置于研钵中研细，称取115 mg 2份，分别置于100 mL容量瓶中。按每100毫克吡哌酸加0.01 mol/L NaOH溶液1.0 mL，分别置于上述4个容量瓶中，振摇，使吡哌酸完全溶解后，用二次蒸馏水定容至100 mL，摇匀，用滤纸过滤；取0.1 mL滤液，按步骤（1）～（3）操作，但不加吡哌酸标准溶液，测定样品的共振散射强度为I_样，空白的共振散射强度为I_样0。算出被测物吡哌酸的ΔI_样＝I_样-I_样0；

（6）根据样品测得的ΔI_样，查步骤（4）的工作曲线，计算出被测物吡哌酸药品的含量。

本发明实施例测定吡哌酸原料药2份，吡哌酸片2份，计算后吡哌酸原料药含量分别为99.96%、99.85%；吡哌酸片含量分别为100.1%、100.7%，均符合中国药典的标准。

本发明实施例测定吡哌酸的线性范围为1.0～95 μg/mL，检出限为0.05 μg/mL。