一类可用于口服的凝血酶抑制剂、其制法以及医药用途

摘要

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类可用于口服非肽类的抗凝血酶抑制剂(I)、它们的制备方法以及医药用途。药理试验证明，本发明的化合物(I)对凝血酶具有较强的抑制作用。因此，本发明的式I化合物，可用于治疗和预防各种与血栓形成相关的疾病，这些疾病包括动脉血栓栓塞性疾病，静脉血栓栓塞性疾病，以及其它血栓性心脑血管疾病。

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类非肽类的抗凝血酶抑制剂、它们的制备方 法以及对凝血酶的抑制作用和抗血栓作用。

技术背景

当今，血栓性心脑血管疾病已成为威胁人类健康的大敌，动脉血栓栓塞性疾病和静 脉血栓栓塞性疾病是临床上的多发病。临床实验证明，抗凝药物和抗血小板药物联用的 治疗效果优于单一药物的治疗。

达比加群酯(Dabigatran Etexilate)由德国勃林格殷格翰公司开发，于2008年4月 在德国和英国率先上市，这是继华法林之后50年来上市的首个新类别口服抗凝血药物。 本品的上市，是抗凝血治疗领域和潜在致死性血栓预防领域的一项重大进展，具有里程 碑意义。达比加群酯是一种新型的合成的直接凝血酶抑制剂，是达比加群(Dabigatran) 的前体药物，属非肽类凝血酶抑制剂。口服经胃肠吸收后，在体内转化为具有直接抗凝 血活性的达比加群。达比加群结合于凝血酶的纤维蛋白特异结合位点，阻止纤维蛋白原 裂解为纤维蛋白，从而阻断了凝血瀑布网络的最后步骤及血栓形成。达比加群可以从纤 维蛋白-凝血酶结合体上解离，发挥可逆的抗凝作用。

达比加群：R₁＝R₂＝H

达比加群酯：R₁＝-CH₂CH₃，

川芎嗪(Ligustrazine)是从中药伞形科植物川芎的根茎中提取的有效成分，具有 解除血管平滑肌痉挛，降低血黏度，抗血小板聚集以及抗血栓形成的作用。

发明内容

本发明公开了一类通式I的化合物，经药理实验显示，本发明的化合物对凝血酶具 有较强的抑制作用。因此，本发明的式I化合物，可用于治疗和预防各种与血栓形成相 关的疾病，这些疾病包括动脉血栓栓塞性疾病，静脉血栓栓塞性疾病，以及其它血栓性 心脑血管疾病。

R代表：C₁～C₈的烷基、苄基或苯基。其中C₁～C₈烷基可以是直链烷基、支链烷基 或环烷基。

R优选代表正戊基、正己基或叔丁基。

本发明部分优选的化合物是：

3-[2-((4-(N′-(甲氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-1)

3-[2-((4-(N′-(乙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-2)

3-[2-((4-(N′-(丙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-3)

3-[2-((4-(N′-(异丙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲 酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-4)

3-[2-((4-(N′-(丁氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-5)

3-[2-((4-(N′-(异丁氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲 酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-6)

3-[2-((4-(N′-(叔丁氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲 酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-7)

3-[2-((4-(N′-(戊氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-8)

3-[2-((4-(N′-(己氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-9)

3-[2-((4-(N′-(庚氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-10)

3-[2-((4-(N′-(辛氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-11)

3-[2-((4-(N′-(苄氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-12)

3-[2-((4-(N′-(4-氯苯甲氧基羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑 -5-甲酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-13)

3-[2-((4-(N′-(4-氟苯甲氧基羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑 -5-甲酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-14)

3-[2-((4-(N′-(4-甲氧基苯甲氧基羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d] 咪唑-5-甲酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-15)

3-[2-((4-(N′-(4-硝基苯甲氧基羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪 唑-5-甲酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-16)

3-[2-((4-(N′-(苯氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-17)

3-[2-((4-(N′-(4-氯苯氧基羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5- 甲酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-18)

3-[2-((4-(N′-(4-氟苯氧基羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5- 甲酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-19)

3-[2-((4-(N′-(4-甲氧基苯氧基羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪 唑-5-甲酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-20)

本发明通式化合物(I)可用下列方法制备：

由化合物II和氯甲酸酯制备化合物III时，可选用的溶剂有四氢呋喃、丙酮、二氯甲 烷、乙腈、四氢呋喃与水的混合溶剂或丙酮与水的混合溶剂；优选四氢呋喃与水的混合 溶剂。

由化合物III水解制备化合物IV时，所用的碱可以是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、 碳酸钠或碳酸钾；优选氢氧化钠。所用的溶剂可以为水、含水醇、含水丙酮；优选含水 乙醇。

由化合物IV与2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪制备化合物I时，可用二环己基碳二亚胺 (DCC)、N，N’-羰基二咪唑(CDI)、1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI) 和4-二甲氨基吡啶(DMAP)为缩合剂；优选1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐 (EDCI)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)。反应溶剂可以是N，N-二甲基甲酰胺、乙腈、 二氯甲烷或任意两者的混合溶剂；优选N，N-二甲基甲酰胺。

其中化合物II的制备可参照文献(J Med Chem.2002，45：1757-1766；中国医药工业 杂志.2010，41(5)：321-325.)，以3-硝基-4-氯苯甲酸为原料，合成方法如下：

其中a～f为反应条件：a：25％-30％甲胺水溶液；b：二氯亚砜；c：三乙胺，二氯甲烷； d：低亚硫酸钠，50％乙醇；e：羰基二咪唑，无水四氢呋喃；f：①氯化氢，无水乙醇；② 碳酸铵，无水乙醇。

以下是本发明部分化合物的药理试验及结果。

一、凝血酶诱导的血小板聚集的抑制作用：

实验材料：

材料：新西兰兔，体重2.2～2.3kg

试剂：(1)凝血酶；

(2)氯化钠注射液；

(3)二甲亚砜

药物活化及溶液配制：

(1)肝微粒体的制备：取兔的肝组织剪成碎块，用含KCl(0.15mol·L^-1)的磷酸缓 冲液(0.1mol·L^-1，pH 7.4)反复冲洗除掉组织中的血液成份，最后按1∶4(W/V)加入上述 KCl磷酸缓冲溶液，用内切式组织匀浆机制成肝匀浆。将制备好的肝匀浆在超速离心机 上离心(9000r·min^-1)15min，取上清液再离心(16000r·min^-1)60min，取粉红色上清液，即 肝微粒体溶液。

(2)药物活化及溶液配制：称取I系列各受试药及达比加群酯2mg，加入二甲亚 砜40μL溶解，加入上述肝匀浆1mL，混匀，置于37℃水浴锅中温育4h，然后用生理盐 水稀释成10^-5、10^-6、10^-7、10^-8mol·L^-1等浓度。

操作流程：

取新西兰兔一只，普鲁卡因局麻后右侧颈总动脉插管取血。全血按照体积比9∶1与3. 8％枸橼酸钠混匀，以转速1000r/min离心5min，取上清液，即为富血小板血浆(PRP)；剩 余血液以转速3000r/min离心10min，得贫血小板血浆(PPP)。用PPP调零，以PRP为血 小板供体，分别取200μL PRP，与溶媒对照组、各浓度阳性对照组及受试药组混合，37 ℃温育1min后，分别加入15U/mL的Thr 20μL，利用SC-2000血小板聚集仪描记血小 板聚集曲线，观察10min内血小板最大聚集率(MAR)，按仪器说明书操作测定血小板聚 集率。

活性筛选结果：

以达比加群酯为阳性对照，对目标化合物I进行体外对凝血酶诱导的血小板聚集的 抑制活性的筛选，结果见表1。

表1：达比加群酯及本发明系列化合物抑制凝血酶诱导的血小板聚集的IC₅₀值

  化合物   R   IC₅₀(mol/L)   I-1   CH₃  (2.87±1.54)×10^-7  I-2   CH₂CH₃  (2.18±1.03)×10^-7  I-4   CH(CH₃)₂  (2.95±2.57)×10^-7  I-7   C(CH₃)₃  (3.13±0.405)×10^-9  I-8   (CH₂)₄CH₃  (7.28±1.77)×10^-8  I-9   (CH₂)₅CH₃  (3.81±1.17)×10^-8  I-12   CH₂C₆H₅  (2.92±0.356)×10^-7  达比加群酯   (3.26±0.187)×10^-7

由表1可见，本发明的化合物抑制凝血酶的活性强于达比加群酯。

二、对大鼠下腔静脉结扎所形成血栓的抑制作用：

实验材料：

材料：SD大鼠(体重240-260g，体重2.2～2.3kg)

试剂：(1)CMC-Na

(2)二甲亚砜

溶液配制：

称取受试药20mg，加入二甲亚砜20μL，溶解，加入适量5％CMC-Na将受试药配 置成2mg·mL^-1  。其他受试药浓度按此浓度稀释。灌胃量为1mL/100g，使各浓度药物 按预定剂量给药。

操作流程：

取SD大鼠104只，雌雄各半，体重240～260g，随机分为13组，每组8只，即模型对 照组；受试药I-7、I-9的高剂量组(20mg/kg)，中剂量组(5mg/kg)，低剂量组(1mg/kg)；达 比加群酯的高剂量组(10mg/kg)，中剂量组(5mg/kg)，低剂量组(1mg/kg)；Y-5的高剂量组 (60mg/kg)，中剂量组(40mg/kg)，低剂量(20mg/kg)。模型对照组给予等量溶剂，每天灌 胃给药1次，连续3d，于末次给药后2h，各组大鼠腹腔注射20％乌拉坦麻醉，手术结 扎大鼠下腔静脉，缝合腹壁4h，造大鼠下腔静脉血栓模型，4h后重新打开腹腔，在结扎 下方2cm处用止血钳夹住血管，将该段血管内血液吸尽，然后纵行剪开管腔，观察有无 血栓形成，如有即取出血栓，用滤纸沾去血栓表面的浮血，称血栓湿重，再置60℃烤箱 烤20h，冷却后称血栓干重。

活性结果见表2：

表2化合物I-7和I-9对大鼠下腔静脉结扎所形成血栓的抑制作用

  化合物   ED₅₀(mg/kg)   I-7   1.8±1.4   I-9   2.1±1.3   达比加群酯   4.4±2.2

由表2可见，本发明的化合物I-7和I-9对大鼠下腔静脉结扎所形成血栓的抑制作 用强于达比加群酯，其ED₅₀值约为达比加群酯的二分之一。

本发明还提供了一种预防和治疗血管血栓栓塞性疾病的药物组合物，其中含有治疗 有效量的通式I化合物和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是普通片剂或胶囊、 缓释片剂或胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。

一般地，本发明的通式I化合物用于治疗时，人用剂量范围为1mg～5000mg/天。也 可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。

具体实施方式

实施例1

3-[2-((4-(N’-(甲氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并咪唑-5-酰胺基] 丙酸乙酯(III-1)的制备

于0-5℃下，取II(1.9g，0.0038mol)和碳酸钾(1.55g，0.0112mol)加入60mL四氢 呋喃与12mL水的混合溶剂中，室温搅拌下滴加氯甲酸甲酯(0.43g，0.0045mol)，滴毕， 反应30min后升至室温，搅拌5h，停止反应，减压浓缩，用二氯甲烷多次提取，合并 有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物进行硅胶柱 层析(洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)，得1.18g白色固体，产率：55.6％，m.p.156～158℃。

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：1.21(3H，t，J＝7.2Hz，-OCH₂CH₃)，2.80(2H，t，J＝7.2Hz， ＞NCH₂CH₂-)，3.68(3H，s，＞NCH₃)，3.77(3H，s，-OCH₃)，4.07(2H，q，J＝7.2Hz，-OCH₂CH₃)， 4.41-4.45(4H，m，＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.37(1H，s，-NH-)，6.64(2H，d，J＝8.8Hz，ArH)， 6.71(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，6.96-6.99(1H，m，ArH)，7.06(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.25-7.28 (1H，m，ArH)，7.33(1H，td，J₁＝7.6Hz，J₂＝2.0Hz，ArH)，7.68(1H，s，ArH)，7.73(2H，d， J＝8.7Hz，ArH)，8.40(1H，dq，J₁＝4.9Hz，J₂＝0.7Hz ArH)，9.20-9.70(2H，brs，-NH₂)； ESI-MS(m/z)：558.2[M+H]⁺，580.2[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(甲氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺基] 丙酸(IV-1)的制备

将III-1(1.12g，0.002mol)和氢氧化钠(0.28g，0.007mol)加入30mL乙醇与15mL 水的混合溶剂中，室温搅拌6h，减压蒸去大部分乙醇，加5mL水稀释，于冰浴下，用 10％柠檬酸调pH至4～5，固体析出，冰箱过夜，过滤，滤饼用少量冰水洗涤，将其转 移至25mL茄形瓶中，加入15mL无水乙醇，回流搅拌30min，静置冷却至室温，过滤， 得0.76g白色固体，产率71.5％，m.p.256～258℃.

¹H-NMR(500MHz DMSO-d6)δ(ppm)：2.53(2H，t，J＝7.4Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.58(3H，s， -OCH₃)，3.76(3H，s，＞NCH₃)，4.15(2H，t，J＝7.8Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，d，J＝5.4Hz， -CH₂NH-)，6.76(2H，d，J＝8.8Hz，ArH)，6.96(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.10-7.12(1H，m，ArH)， 7.16(1H，dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.2Hz，ArH)，7.39(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.47(1H，s，ArH)，7.55 (1H，td，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.8Hz，ArH)，7.79(2H，d，＝8.8Hz，ArH)，8.36(1H，d，J＝3.4Hz，ArH)， 8.50-9.70(2H，brs，-NH₂)，10.40-10.80(1H，brs，-COOH)；

ESI-MS(m/z)：530.2[M+H]⁺，552.2[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(甲氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-1)的制备

取IV-1(0.54g，0.001mol)，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(0.23g，0.0015mol)，EDCI (0.25g，0.0013mol)及DMAP(0.07g，0.0006mol)加入20mL DMF中，于0～5℃搅拌 30min，缓慢升至室温，反应10h，用40mL二氯甲烷稀释，饱和食盐水洗涤，有机层 用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物柱层析(洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)， 得0.39g白色固体，产率：57.6％，m.p.170～172℃.

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：2.47-2.50(9H，m，吡嗪甲基)，2.87(2H，t，J＝7.2Hz， ＞NCH₂CH₂-)，3.64(3H，s，＞NCH₃)，3.75(3H，s，-OCH₃)，4.39-4.44(4H，m，＞NCH₂CH₂-， -CH₂NH-)，5.30(2H，s，吡嗪-CH₂O-)，5.41(1H，s，-CH₂NH-)，6.59(2H，d，J＝8.6Hz，ArH)， 6.69(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，6.95-7.02(2H，m，ArH)，7.21(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.28-7.32 (1H，m，ArH)，7.64-7.72(3H，m，ArH)，8.38(1H，d，J＝4.3Hz，ArH)，9.00-10.00(2H，brs， -NH₂)；

IR(cm^-1)：3415.93，2938.05，1736.95，1609.03，1587.52，1484.35，1470.31，1437.88，1393.92， 1327.32，1268.29，1143.85，1127.21；

HRMS(EI+)：m/z 664.2993[M+H]⁺，[C₃₅H₃₈N₉O₅]⁺calc.for 664.2996，found 664.2993.

实施例2

3-[2-((4-(N’-(乙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并咪唑-5-酰胺基] 丙酸乙酯(III-2)的制备

以II(1.9g，0.0038mol)、碳酸钾(1.55g，0.0112mol)及氯甲酸乙酯(0.49g，0.0045mol) 为原料，操作类似III-1的制备，得1.32g白色固体，产率：60.7％，m.p.172～174℃， ¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：1.21(3H，t，J＝6.8Hz，-OCH₂CH₃)，1.33(3H，t，J＝6.8Hz， -NCOOCH₂CH₃)，2.79(2H，t，J＝6.8Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.64(3H，s，＞NCH₃)，4.07(2H，q， J＝6.8Hz，-OCH₂CH₃)，4.19，(2H，q，J＝6.8Hz，-NCOOCH₂CH₃)，4.40-4.42(4H，m， ＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.52(1H，s，-NH-)，6.57(2H，d，J＝8.0Hz，ArH)，6.70(1H，d， J＝7.8Hz，ArH)，6.97-7.02(2H，m，ArH)，7.21(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.33(1H，d，J＝7.6Hz， ArH)，7.65-7.69(3H，m，ArH)，8.40(1H，s，ArH)，9.30-9.70(2H，brs，-NH₂)，； ESI-MS(m/z)：572.0[M+H]⁺，594.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(乙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺基] 丙酸(IV-2)的制备

以III-2(1.09g，0.0019mol)和氢氧化钠(0.28g，0.007mol)为原料，操作类似IV-1 的制备，得0.87白色固体，产率：83.9％，m.p.202-203℃， ¹H-NMR(500MHz DMSO-d6)δ(ppm)：1.21(3H，t，J＝6.9Hz，-CH₂CH₃)，2.61(2H，t， J＝7.5Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.77(3H，s，＞NCH₃)，4.02(2H，q，J＝7.1Hz，-CH₂CH₃)，4.18，(2H，t， J＝7.5Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，d，J＝5.5Hz，-CH₂NH-)，6.76(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)，6.94 (1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.10-7.13(1H，m，ArH)，7.16(1H，dd，J₁＝8.5Hz，J₂＝1.5Hz，ArH)， 7.39(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.47(1H，d，J＝1.0Hz，ArH)，7.56(1H，td，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.9Hz， ArH)，7.79(2H，d，J＝8.9Hz，ArH))8.40(1H，d，J＝3.7Hz，ArH)，8.50-9.50(2H，brs，-NH₂)， 11.50-12.50(1H，brs，-COOH)；

ESI-MS(m/z)：544.0[M+H]⁺，566.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(乙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-23)的制备

以IV-2(0.54g，0.001mol)，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(0.23g，0.0015mol)，EDCI (0.25g，0.0013mol)以及DMAP(0.07g，0.0006mol)为原料，操作类似I-1的制备，得 0.41g白色固体，产率：60.9％，m.p.141～142℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：1.34(3H，t，J＝7.1Hz，-CH₂CH₃)，2.47-2.51(9H，m，吡 嗪甲基)，2.88(2H，t，J＝7.2Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.65(3H，s，＞NCH₃)，4.19(2H，q，J＝7.1Hz， -CH₂CH₃)，4.42-4.45(4H，m，＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.16(2H，s，吡嗪-CH₂O-)，5.42(1H， s，-CH₂NH-)，6.60(2H，d，J＝8.5Hz，ArH)，6.69(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，6.95-6.98(1H，m， ArH)，7.02(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.22(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.29-7.32(1H，m，ArH)， 7.64-7.66(1H，m，ArH)，7.71(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)8.39(1H，d，J＝3.9Hz，ArH)，9.00-9.90 (2H，brs，-NH₂)；

IR(cm^-1)：3411.47，3293.48，1737.55，1608.79，1468.74，1391.08，1364.90，1327.43，1264.32， 1171.98，1141.93，1126.00，1099.02，1075.87；

HRMS(EI+)：m/z 678.3151[M+H]⁺，[C₃₆H₄₀N₉O₅]⁺ calc.for 678.3152，found 678.3151.

实施例3

3-[2-((4-(N’-(异丙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并咪唑-5-酰胺 基]丙酸乙酯(III-4)的制备

以II(1.9g，0.0038mol)、碳酸钾(1.55g，0.0112mol)以及氯甲酸异丙酯(0.55g， 0.0045mol)为原料，操作类似III-1的制备，得1.36g白色固体，产率：61.1％， m.p.128～130℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：1.21(3H，t，J＝7.2Hz，-OCH₂CH₃)，1.33(6H，d， J＝6.3Hz，-CH(CH₃)₂)，2.80(2H，t，J＝7.3Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.66(3H，s，＞NCH₃)，4.07(2H，q， J＝7.2Hz，-OCH₂CH₃)，4.40-4.43(4H，m，＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，4.97(1H，sep，J＝6.3Hz， -CH(CH₃)₂)，5.38(1H，s，-NH-)，6.60(2H，d，J＝8.6Hz，ArH)，6.70(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)， 6.96-6.99(1H，m，ArH)，7.03(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.24(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.32(1H， td，J₁＝7.9Hz，J₂＝1.8Hz，ArH)，7.67(1H，s，ArH)，7.71(2H，d，J＝8.5Hz，ArH)，8.40(1H，d， J＝3.6Hz，ArH)，9.20-9.80(2H，brs，-NH₂)；

ESI-MS(m/z)：586.1[M+H]⁺，608.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(异丙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺 基]丙酸(IV-4)的制备

以III-4(1.17g，0.002mol)和氢氧化钠(0.28g，0.007mol)为原料，操作类似IV-1 的制备，得0.85g白色固体，产率76.3％，m.p.198～200℃，

¹H-NMR(500MHz DMSO-d6)δ(ppm)：1.20(6H，d，J＝6.3Hz，-CH(CH₃)₂)，2.57(2H，t， J＝7.7Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.76(3H，s，＞NCH₃)，4.16(2H，t，J＝7.7Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，d， J＝5.0Hz，-CH₂NH-)，4.80(1H，sep，J＝6.3Hz，-CH(CH₃)₂)，6.76(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)， 6.94-6.97(1H，m，ArH)，7.10-7.12(1H，m，ArH)，7.15(1H，dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.5Hz，ArH)， 7.39(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.48(1H，d，J＝1.0Hz，ArH)，7.55(1H，td，J₁＝7.8Hz，J₂＝2.0Hz， ArH)，7.79(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)，8.37(1H，dq，J₁＝4.9Hz，J₂＝1.3Hz，ArH)，8.50-9.50(2H， brs，-NH₂)，10.60-11.00(1H，brs，-COOH)；

ESI-MS(m/z)：558.0[M+H]⁺，580.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(异丙氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲 酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-4)的制备

以IV-4(0.56g，0.001mol)，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(0.23g，0.0015mol)，EDCI (0.25g，0.0013mol)及DMAP(0.07g，0.0006mol)为原料，操作类似I-1的制备，得0.43g 白色固体，产率61.9％，m.p.160-162℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：1.32(6H，d，J＝6.3Hz，-CH(CH₃)₂)，2.48-2.51(9H，m， 吡嗪甲基)，2.88(2H，t，J＝7.3Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.66(3H，s，＞NCH₃)，4.42-4.44(4H，m， ＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，4.98(1H，sep，J＝6.3Hz，-CH(CH₃)₂)，5.17(2H，s，吡嗪-CH₂0-)， 5.36(1H，t，J＝4.5Hz，-CH₂NH-)，6.61(2H，d，J＝8.6Hz，ArH)，6.69(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)， 6.95-6.98(1H，m，ArH)，7.03(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.23(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.30(1H， td，J₁＝7.9Hz，J₂＝1.9Hz，ArH)，7.66(1H，s，ArH)，7.72(2H，d，J＝8.6Hz，ArH)，8.39(1H，dd， J₁＝4.8Hz，J₂＝1.2Hz，ArH)，9.00-10.00(2H，brs，-NH₂)；

IR(cm^-1)：3395.45，2978.24，1735.90，1608.90，1470.41，1371.88，1330.71，1266.07，1168.57， 1146.73，1109.21，986.13，837.88，812.86，749.61，566.82；

HRMS(EI+)：m/z 692.3314[M+H]⁺，[C₃₇H₄₂N₉0₅]⁺ calc.for 692.3309，found 692.3314.

实施例4

3-[2-((4-(N’-(特丁氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并咪唑-5-酰胺 基]丙酸乙酯(III-7)的制备

于0-5℃下，将II(1.9g，0.0038mol)和碳酸钾(1.55g，0.0112mol)加入90mL四氢 呋喃∶水＝1∶1的混合溶剂中，室温搅拌。取BOC酸酐(0.98g，0.0045mol)溶于10mL 四氢呋喃中，将其滴加到上述溶液中，搅拌30min后升至室温，继续搅拌24h，减压浓 缩，二氯甲烷提取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩， 残留物硅胶柱层析(洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)，得1.63g白色固体，产率：71.5％， m.p.150-152℃，

¹H-NMR(500MHz DMSO-d⁶)δ(ppm)：1.12(3H，t，J＝7.1Hz，-CH₂CH₃)，1.43(9H，s， -C(CH₃)₃)，2.68(2H，t，J＝7.0Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.77(3H，s，＞NCH₃)，3.98(2H，q，J＝7.1Hz， -CH₂CH₃)，4.23(2H，t，J＝7.1Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，d，J＝4.4Hz，-CH₂NH-)，6.76(2H，d， J＝8.8Hz，ArH)，6.89(1H，d，J＝7.7Hz，ArH)，7.11(1H，t，J＝7.1Hz，ArH)，7.16(1H，d，J＝8.4Hz， ArH)，7.39(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.48(1H，s，ArH)，7.55(1H，t，J＝7.6Hz，ArH)，7.77(2H，d， J＝8.8Hz，ArH)，8.39(1H，d，J＝3.6Hz，ArH)，8.80-9.70(2H，br.s.，-NH₂)； ESI-MS(m/z)：600.3[M+H]⁺.

3-[2-((4-(N′-(特丁氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺 基]丙酸(IV-7)的制备

将III-7(1.2g，0.002mol)和氢氧化钠(0.28g，0.007mol)加入30mL乙醇与15mL 水的混合溶剂中，室温搅拌6h，减压蒸去大部分乙醇，5mL水稀释，于冰浴下，用10％ 柠檬酸调pH至4～5，固体析出，冷却，过滤，滤饼用少量冰水洗涤，将其转移至50mL 茄形瓶中，加入20mL无水乙醇，回流搅拌30min，静置冷却至室温，过滤，得1.03g 白色固体，产率：90.0％，m.p.226～228℃，

¹H-NMR(500MHz DMSO-d6)δ(ppm)：1.43(9H，s，-C(CH₃)₃)，2.61(2H，t，J＝7.4Hz， ＞NCH₂CH₂-)，3.76(3H，s，＞NCH₃)，4.18，(2H，t，J＝7.5Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.58(2H，d， J＝4.4Hz，-CH₂NH-)，6.75(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)，6.94(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.10-7.13 (1H，m，ArH)，7.16(1H，dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.3Hz，ArH)，7.39(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.48(1H， s，ArH)，7.56(1H，td，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.7Hz，ArH)，7.76(2H，d，J＝8.8Hz，ArH)，8.37(1H，d， J＝3.6Hz，ArH)，8.40-9.55(2H，brs，-NH₂)，11.30-12.75(1H，brs，-COOH)； ESI-MS(m/z)：572.2[M+H]⁺，570.2[M-H]^-.

3-[2-((4-(N′-(叔丁氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲 酰胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-7)的制备

取IV-7(0.57g，0.001mol)，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(0.23g，0.0015mol)，EDCI (0.25g，0.0013mol)及DMAP(0.07g，0.0006mol)加入20mLDMF中，于0～5℃搅拌 30min，缓慢升至室温，反应10h，停止反应，加入60mL二氯甲烷稀释，饱和食盐水 洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物进行硅胶柱层析(洗脱剂为二氯 甲烷∶甲醇＝30∶1)，得0.43g白色固体，产率：61.1％，m.p.126～128℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：1.53(9H，s，-C(CH₃)₃)，2.47-2.50(9H，m，吡嗪甲基)， 2.87(2H，t，J＝7.3Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.61(3H，s，＞NCH₃)，4.38，(2H，d，J＝4.6Hz，-CH₂NH-)， 4.43(2H，t，J＝7.2Hz，＞NCH₂CH₂-)，5.16(2H，s，吡嗪-CH₂O-)，5.44(1H，s，-CH₂NH-)，6.57 (2H，d，J＝8.8Hz，ArH)，6.68(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，6.95-7.00(2H，m，ArH)，7.20(1H，dd， J₁＝8.4Hz，J₂＝1.5Hz，ArH)，7.28-7.31(1H，m，ArH)，7.64-7.67(3H，m，ArH)，8.39(1H，dd， J₁＝4.9Hz，J₂＝1.2Hz，ArH)，8.50-10.50(2H，brs，-NH₂)；

IR(cm^-1)：3304.32，2924.27，2853.62，1736.51，1647.18，1608.60，1469.84，1388.77，1366.03， 1321.33，1280.35，1169.43，1142.62，809.58，744.75；

HRMS(EI+)：m/z 706.3465[M+H]⁺，[C₃₈H₄₄N₉O₅]⁺calc.for 706.3465，found 706.3469.

实施例5

3-[2-((4-(N’-(戊氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并咪唑-5-酰胺基] 丙酸乙酯(III-8)的制备

以II(1.9g，0.0038mol)、碳酸钾(1.55g，0.0112mol)以及氯甲酸戊酯(0.68g， 0.0045mol)为原料，操作类似III-1的制备，得1.43g白色固体，产率：61.3％， m.p.148～150℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：0.91(3H，t，J＝7.1Hz，-CH₂CH₂CH₃)，1.21(3H，t， J＝7.2Hz，-OCH₂CH₃)，1.33-1.40(4H，m，-CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.73(2H，q，J＝7.3Hz， -OCH₂CH₂CH₂-)2.80(2H，t，J＝7.3Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.67(3H，s，＞NCH₃)，4.07(2H，q， J＝7.1Hz，-OCH₂CH₃)，4.13，(2H，t，J＝6.9Hz，-OCH₂CH₂CH₂-)，4.41-4.43(4H，m， ＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.35(1H，s，-NH-)，6.62(2H，d，J＝8.7Hz，ArH)，6.70(1H，d， J＝8.1Hz，ArH)，6.96-6.99(1H，m，ArH)，7.05(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.25(1H，d，J＝1.5Hz， ArH)，7.32(1H，td，J₁＝7.9Hz，J₂＝1.9Hz，ArH)，7.67(1H，s，ArH)，7.72(2H，d，J＝8.7Hz，ArH)， 8.41(1H，d，J＝3.6Hz，ArH)，9.20-9.80(2H，brs，-NH₂)； ESI-MS(m/z)：614.1[M+H]⁺，636.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(戊氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺基] 丙酸(IV-8)的制备

以III-8(1.22g，0.002mol)和氢氧化钠(0.28g，0.007mol)为原料，操作类似IV-1 的制备，得0.95g白色固体，产率85.1％，m.p.196-198℃，

¹H-NMR(500MHz DMSO-d6)δ(ppm)：0.88(3H，t，J＝7.0Hz，-CH₂CH₂CH₃)，1.29-1.32(4H， m，-CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.59(2H，qui，J＝6.9Hz，-CH₂CH₂CH₂-)，2.58(2H，t，J＝7.5Hz， ＞NCH₂CH₂-)，3.76(3H，s，＞NCH₃)，3.97(2H，t，J＝6.8Hz，-OCH₂CH₂CH₂-)，4.17(2H，t， J＝7.6Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，d，J＝5.5Hz，-CH₂NH-)，6.76(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)， 6.94-6.96(1H，m，ArH)，7.10-7.12(1H，m，ArH)，7.16(1H，dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝1.5Hz，ArH)， 7.39(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.47(1H，d，J＝1.1Hz，ArH)，7.55(1H，td，J₁＝7，8Hz，J₂＝2.0Hz， ArH)，7.79(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)，8.37(1H，dd，J₁＝4.8Hz，J₂＝1.2Hz，ArH)，9.20-9.80(2H， brs，-NH₂)，11.30-12.50(1H，brs，-COOH)；

ESI-MS(m/z)：586.1[M+H]⁺，608.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(戊氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-8)的制备

以IV-8(0.58g，0.001mol)，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(0.23g，0.0015mol)，EDCI (0.25g，0.0013mol)及DMAP(0.07g，0.0006mol)为原料，操作类似I-1的制备，得0.46g 白色固体，产率：64.5％，m.p.134～136℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：0.90(3H，t，J＝6.9Hz，-CH₂CH₃)，1.34-1.37(4H，m， -CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.71(2H，qui，J＝7.2Hz，-CH₂CH₂CH₂-)，2.47-2.51(9H，m，吡嗪甲基)， 2.87(2H，t，J＝7.2Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.67(3H，s，＞NCH₃)，4.13(2H，t，J＝6.9Hz，-OCH₂CH₂-)， 4.42-4.44(4H，m，＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.16(2H，s，吡嗪-CH₂O-)，5.52(1H，s， -CH₂NH-)，6.61(2H，d，J＝8.5Hz，ArH)，6.69(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，6.95-6.97(1H，m，ArH)， 7.03(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.22(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.31(1H，t，J＝8.2Hz，ArH)，7.65 (1H，s，ArH)，7.69(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，8.38(1H，d，J＝3.7Hz，ArH)，9.00-10.50(2H，brs， -NH₂)；

IR(cm^-1)：3393.89，3362.83，2954.04，2359.88，1737.70，1610.81，1588.42，1569.76，1470.34， 1387.38，1326.74，1260.33，1195.09，1165.52，1145.16，1128.23，1112.11，814.06，570.90； HRMS(EI+)：m/z 742.3446[M+Na]⁺，[C₃₉H₄₅N₉O₅Na]⁺ calc.for 742.3441，found 742.3446.

实施例6

3-[2-((4-(N’-(己氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并咪唑-5-酰胺基] 丙酸乙酯(III-9)的制备

以II(1.9g，0.0038mol)、碳酸钾(1.55g，0.0112mol)以及氯甲酸己酯(0.74g， 0.0045mol)为原料，操作类似III-1的制备，得1.47g白色固体，产率：61.6％， m.p.130～132℃(文献值m.p.128-129℃[J Med Chem.2002，45(9)，1757-1766])， ¹H-NMR(300MHz DMSO-d6)δ(ppm)：0.87(3H，t，J＝6.9Hz，-CH₂CH₂CH₃)，1.12(3H，t， J＝7.2Hz，-CH₂CH₃)，1.27-1.29(6H，m，-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.57(2H，q，J＝6.6Hz， -OCH₂CH₂CH₂-)，2.68(2H，t，J＝6.9Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.77(3H，s，＞NCH₃)，3.94-4.00(4H，m， -OCH₂CH₃，-OCH₂CH₂CH₂-)，4.22，(2H，t，J＝6.9Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，d，J＝5.4Hz， -CH₂NH-)，6.76(2H，d，J＝8.7Hz，ArH)，6.88(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，6.98(1H，m，NH)， 7.10-7.17(2H，m，ArH)，7.39(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.47(1H，s，ArH)，7.54(1H，t，J＝7.7Hz， ArH)，7.79(2H，d，J＝8.7Hz，ArH)，8.39(1H，d，J＝4.8Hz，ArH)，8.60-9.30(2H，brs，-NH₂)； ESI-MS(m/z)：628.4[M+H]⁺.

3-[2-((4-(N′-(己氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺基] 丙酸(IV-9)的制备

以III-9(1.25g，0.002mol)、氢氧化钠(0.28g，0.007mol)为原料，操作类似IV-1 的制备，得0.93g白色固体，产率：77.9％，m.p.196～198℃，

¹H-NMR(500MHz DMSO-d6)δ(ppm)：0.87(3H，t，J＝7.0Hz，-CH₂CH₂CH₃)，1.28-1.34(6H， m，-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.58(2H，qui，J＝7.6Hz，-OCH₂CH₂CH₂-)，2.61(2H，t，J＝7.5Hz， ＞NCH₂CH₂-)，3.76(3H，s，＞NCH₃)，3.98(2H，t，J＝6.7Hz，-OCH₂CH₂CH₂-)，4.18，(2H，t， J＝7.5Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，d，J＝4.5Hz，-CH₂NH-)，6.76(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)，6.95 (1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.10-7.13(1H，m，ArH)，7.16(1H，dd，J₁＝8.5Hz，J₂＝1.5Hz，ArH)， 7.39(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.48(1H，s，ArH)，7.55(1H，td，J₁＝7.8Hz，J₂＝2.0Hz，ArH)，7.79 (2H，d，J＝8.9Hz，ArH)，8.38(1H，d，J＝4.8Hz，ArH)，8.50-9.50(2H，brs，-NH₂)，11.30-12.55 (1H，brs，-COOH)；

ESI-MS(m/z)：600.3[M+H]⁺，622.3[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(己氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-9)的制备

以IV-9(0.60g，0.001mol)，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(0.23g，0.0015mol)，EDCI (0.25g，0.0013mol)及DMAP(0.07g，0.0006mol)为原料，操作类似I-1的制备，得0.49g 白色固体，产率：66.7％，m.p.140～142℃， ¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：0.89(3H，t，J＝6.17Hz，-CH₂CH₃)，1.31-1.42(6H，m， -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)，1.72(2H，qui，J＝7.7Hz，-CH₂CH₂CH₂-)，2.48-2.51(9H，m，吡嗪甲 基)，2.88(2H，t，J＝7.3Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.67(3H，s，＞NCH₃)，4.13(2H，t， J＝6.9Hz，-OCH₂CH₂-)，4.42-4.45(4H，m，＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.17(2H，s，吡嗪-CH₂O-)， 5.40(1H，s，-CH₂NH-)，6.62(2H，d，J＝8.5Hz，ArH)，6.69(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，6.95-6.98 (1H，m，ArH)，7.03(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.23(1H，d，J＝7.4Hz，ArH)，7.30(1H，td， J₁＝7.8Hz，J₂＝1.8Hz，ArH)，7.66-7.73(3H，m，ArH)，8.39(1H，d，J＝3.7Hz，ArH)，9.00-9.90 (2H，brs，-NH₂)；

IR(cm^-1)：3403.16，3365.22，1751.06，1611.51，1587.97，1568.59，1498.68，1471.53，1458.10， 1386.70，1326.12，1257.14，1195.47，1145.47，1164.92，1128.13，1112.57；

HRMS(EI+)：m/z 734.3788[M+H]⁺，[C₄₀H₄₈N₉O₅]⁺calc.for 734.3778，found 734.3788.

实施例7

3-[2-((4-(N’-(苄氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(吡啶-2-基)-1H-苯并咪唑-5-酰胺基] 丙酸乙酯(III-12)的制备

以II(1.9g，0.0038mol)、碳酸钾(1.55g，0.0112mol)以及氯甲酸苄酯(0.76g， 0.0045mol)为原料，操作类似III-1的制备，得1.73g白色固体，产率：71.8％， m.p.165～167℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：1.21(3H，t，J＝7.1Hz，-CH₂CH₃)，2.80(2H，t，J＝7.2Hz， ＞NCH₂CH₂-)，3.64(3H，s，＞NCH₃)，4.07(2H，q，J＝7.1Hz，-CH₂CH₃)，4.40-4.43(4H，m， ＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.19(2H，s，-OCH₂Ph)5.32(1H，s，-NH-)，6.60(2H，d，J＝8.4Hz， ArH)，6.70(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，6.95-6.98(1H，m，ArH)，7.04(1H，d，J＝8.4Hz)，7.25-7.34 (5H，m，ArH)，7.43(2H，d，J＝7.3Hz，ArH)，7.67-7.72(3H，m，ArH)，8.40(1H，d，J＝3.8Hz， ArH)，9.20-9.70(2H，brs，-NH₂)；

ESI-MS(m/z)：634.0[M+H]⁺，656.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(苄氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺基] 丙酸(IV-12)的制备

以III-12(1.27g，0.002mol)和氢氧化钠(0.28g，0.007mol)为原料，操作类似IV-1 的制备，得1.11g白色固体，产率：91.5％，m.p.179～181℃，

¹H-NMR(500MHz DMSO-d6)δ(ppm)：2.60(2H，t，J＝7.5Hz，＞NCH₂CH₂-)，3.76(3H，s， ＞NCH₃)，4.17(2H，t，J＝7.5Hz，＞NCH₂CH₂-)，4.59(2H，s，-CH₂NH-)，5.08(2H，s，-OCH₂Ph)， 6.77(2H，d，J＝8.9Hz，ArH)，6.95(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.10-7.12(1H，m，ArH)，7.15-7.17 (1H，m，ArH)，7.31-7.40(6H，m，ArH)，7.48(1H，s，ArH)，7.55(1H，td，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.8Hz， ArH)，7.81(2H，d，J＝8.8Hz，ArH)，8.37(1H，d，J＝3.6Hz，ArH)，9.00-9.70(2H，brs，-NH₂)， 11.70-12.50(1H，brs，-COOH)； ESI-MS(m/z)：606.0[M+H]⁺，628.0[M+Na]⁺.

3-[2-((4-(N′-(苄氧羰基)脒基)苯胺基)甲基)-1-甲基-N-(2-吡啶基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰 胺基]丙酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲基酯(I-12)的制备

以IV-12(0.60g，0.001mol)，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(0.23g，0.0015mol)，EDCI (0.25g，0.0013mol)及DMAP(0.07g，0.0006mol)为原料，操作类似I-1的制备，得0.50g 白色固体，产率：68.2％，m.p.149-150℃，

¹H-NMR(500MHz CDCl₃)δ(ppm)：2.47-2.51(9H，m，吡嗪甲基)，2.87(2H，t，J＝7.1Hz， ＞NCH₂CH₂-)，3.62(3H，s，＞NCH₃)，4.39-4.44(4H，m，＞NCH₂CH₂-，-CH₂NH-)，5.16-5.18(4H， m，吡嗪-CH₂O-，-OCH₂Ph)，5.40(1H，s，-CH₂NH-)，6.58(2H，d，J＝8.3Hz，ArH)，6.68(1H，d， J＝7.9Hz，ArH)，6.94-6.96(1H，m，ArH)，7.00(1H，d，J＝8.4Hz)，7.21-7.33(5H，m，ArH)，7.42 (2H，d，J＝7.3Hz，ArH)，7.64(1H，s，ArH)，7.69(2H，d，J＝8.3Hz，ArH)，8.38(1H，d，J＝3.9Hz， ArH)，9.00-10.00(2H，brs，-NH₂)；

IR(cm^-1)：3377.43，2360.02，2341.60，1739.01，1588.78，1570.78，1488.88，1471.08，1317.10， 1128.18，1169.13，1142.59，1099.67，1013.92，808.79，742.65，698.12；

HRMS(EI+)：m/z 740.3315[M+H]⁺，[C₄₁H₄₂N₉O₅]⁺calc.for 740.3309，found 678.3315.