一种适用于体式显微镜下观察鱼类胚胎发育的方法及装置

摘要

本发明属于一种适用于体式显微镜下观察鱼类胚胎发育的方法及装置，其特征在于，该装置由高位贮水器、低位贮水器、孵化器和废液器组成，所述的高位贮水器按照高位差依次与低位贮水器、孵化器连通，所述的废液器安装在孵化器的侧下方；所述的高位贮水器通过第一连通管与低位贮水器连通；第一连通管的中间装有流速控制阀；所述的低位贮水器中还装有加热棒和充氧泵；所述的低位贮水器通过第二连通管与孵化器相连，其一侧装有一个出水管，将废液排入所述的废液器中。所述的装置的孵化器的可以采用玻璃或有机玻璃或透明塑料制造。本发明还公开了利用该装置在体式显微镜下观察鱼类胚胎发育的方法。

说明书

技术领域

本发明属水产养殖技术领域，具体涉及一种适用于体式显微镜下观察鱼类胚胎发育的方 法及装置。

背景技术

鱼类胚胎发育是鱼类早期发育史中一个重要阶段，其发育过程为：受精卵→卵裂期→囊 胚期→原肠期→器官发生期→脱膜孵化。在此过程中，受精卵会经历整个生命史中最为剧烈 的发育、分化过程，这个时期比较脆弱，死亡率高，因此开展鱼类胚胎发育的研究对开展鱼 类人工育苗、控制孵化条件、提高孵化率等具有重要的指导作用。

目前，对于鱼类胚胎发育的研究，一般在实验室内进行，将鱼类的受精卵放入一个的容 器中，微充气，通过加热棒或室内的空调来控制容器中的水温，观察受精卵时，用滴管吸取 受精卵到培养皿里或者载玻片上，在体式显微镜下观察拍照。在此过程中，需经常更换容器 中的水，给试验操作带来不便，还可能引起孵化水体的水温波动，对受精卵的发育造成影响； 同时在吸取受精卵的过程中，会引起受精卵的应激反应，还可能对受精卵造成损伤，对试验 结果产生一定的影响。因此，需要寻找一种操作方便，适合于体式显微镜下观察鱼类胚胎发 育的方法及装置，满足鱼类胚胎发育对温度和溶氧要求的同时，减少对鱼类受精卵的损伤， 使试验结果更准确。

发明内容

本发明主要是针对目前鱼类胚胎发育的研究所存在的问题，提供一种适用于体式显微镜 下观察鱼类胚胎发育的方法及装置。适合于观察各种鱼类的胚胎发育，满足鱼类胚胎发育对 温度和溶氧要求，减少对鱼类受精卵的损伤，且简单方便，易于操作，便于观察，使试验结 果更准确。

本发明根据鱼类胚胎发育的特点而设计的，它是这样实现的：

一种适用于体式显微镜下观察鱼类特别是麦穗鱼或鳃鱼胚胎发育的方法，其步骤在于：

(1)构建一套观察鱼类特别是麦穗鱼或鳃鱼胚胎发育的专用装置，该装置由高位贮水器 1、低位贮水器7、孵化器9和废液器11组成，所述的高位贮水器1按照高位差依次与低位 贮水器7、孵化器9连通，所述的废液器11安装在孵化器9的侧下方；所述的高位贮水器1 通过第一连通管3与低位贮水器7连通；第一连通管3的中间装有流速控制阀4；所述的低 位贮水器7中还装有加热棒5和充氧泵6；所述的低位贮水器7通过第二连通管8与孵化器9 相连，其一侧装有一个出水管10，将废液排入所述的废液器11中；

(2)将所述的孵化器放到体视显微镜的载物台上，根据体式显微镜载物台的高度调整低 位贮水器的放置位置及高度；

(3)将洁净水注入低位贮水器，通过第二通管使孵化器中水的高度保持为2cm

(4)打开充氧泵和加热棒，设置加热棒的温度，使孵化器中的水温保持为25-28℃；

(4)将洁净的水注入高位贮水器，打开流速控制阀，使水流速度为180-360ml/h，检查 出水管与废液器的连接；

(5)将鱼(例如麦穗鱼和鳃鱼)按传统的干法(例如报道的方法)受精后，取30-50粒 受精卵到孵化器中；

(6)打开体式显微镜，观察受精卵的发育情况，取视野下受精卵各个发育阶段的清晰图 像随时拍照；

(7)保持孵化器中的水温为25-28℃时，使受精卵经4-6天孵化脱膜。

申请人研制了一种适用于体式显微镜下观察鱼类特别是麦穗鱼和鳃鱼胚胎发育的装置， 该装置由高位贮水器1、低位贮水器7、孵化器9和废液器11组成，所述的高位贮水器1按 照高位差依次与低位贮水器7、孵化器9连通，所述的废液器11安装在孵化器9的侧下方； 所述的高位贮水器1通过第一连通管3与低位贮水器7连通；第一连通管3的中间装有流速 控制阀4；所述的低位贮水器7中还装有加热棒5和充氧泵6；所述的低位贮水器7通过第二 连通管8与孵化器9相连，其一侧装有一个出水管10，将废液排入所述的废液器11中。

上述装置中的孵化器9可采用玻璃或有机玻璃或透明塑料制造而成。

本发明能很好的满足鱼类胚胎发育所需的温度和溶氧，提供了适合鱼类胚胎发育的环境， 使得在体视显微镜下对鱼类的胚胎进行观察研究简便可行。

附图说明

图1：是本发明结构示意图。

图中标记如下：1-高位贮水器；2-高位贮水器支架；3-第一连通管；4-流速控制阀；5-加 热棒；6-充氧泵；7-低位贮水器；8-第二连通管；9-孵化器；10-出水管；11-废液器。

图2：麦穗鱼的胚胎发育：其中：图2A：2细胞期；图2B：16细胞期；图2C：桑椹期； 图2D：囊胚期；图2E：胚孔封闭期；图2F：心跳期；图2G：脱膜期。

图3：鳃鱼的胚胎发育：图3A：囊胚期；图3B：原肠胚期；图3C：眼基出现期；图3D： 尾芽期；图3E：晶体出现期；图3F：肌肉效应期；图3G：心跳期；图3H：刚出膜的鱼苗。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步地描述。

如图1所示，该装置由高位贮水器1、低位贮水器7、孵化器9和废液器11组成，所述 的高位贮水器1按照高位差依次与低位贮水器7、孵化器9连通，所述的废液器11安装在孵 化器9的侧下方；所述的高位贮水器1通过第一连通管3与低位贮水器7连通；第一连通管 3的中间装有流速控制阀4；所述的低位贮水器7中还装有加热棒5和充氧泵6；所述的低位 贮水器7通过第二连通管8与孵化器9相连，其一侧装有一个出水管10，将废液排入所述的 废液器11中。

本发明中的高位贮水器1采用玻璃或有机玻璃或塑料材料制作，高位贮水器可制为方形， 容积为10L。高位贮水器支架2用不锈钢材料制作，其高度根据需要调整。低位贮水器7用 玻璃或有机玻璃或塑料材料制作，为圆柱型，内径为20cm，高为30cm。孵化器9采用玻璃 或有机玻璃或塑料材料制作，为圆盘状，内径为12厘米，高3厘米。废液器11为普通的塑 料容器即可，容积为10L。第一连通管3和出水管10为塑料材质，管径相同，为0.3cm，通 过流速控制阀4可调节高位贮水器1中水流入低位贮水器7的速度，第二连通管8为塑料材 质，管内径大小为1cm。加热棒5和充氧泵6为商购。

本发明的具体使用方法(以在体式显微镜OLYMPUS-SZX7下观察麦穗鱼和鳃鱼胚胎发 育为例)如下：(1)将孵化器放到体视显微镜的载物台上，根据体式显微镜载物台的高度调 整低位贮水器的放置位置及高度；(2)将结晶水注入低位贮水器，通过第二通管使孵化器中 水的高度保持为2cm；(3)打开充氧泵和加热棒，设置加热棒的温度，使孵化器中的水温保 持至25-28℃；(4)将洁净水注入高位贮水器，打开流速控制阀，使水流速度为180-360ml/h， 检查出水管与废液器的连接；(5)将麦穗鱼或鳃鱼采用传统的干法受精后，取30-50粒受精 卵到孵化器中；(6)打开体式显微镜，观察麦穗鱼或鳃鱼受精卵的发育情况，取视野下麦穗 鱼受精卵各个发育阶段的清晰图像随时拍照，保持孵化器中的水温至25-28℃时，维持4-6天 使麦穗鱼或鳃鱼的受精卵经孵化脱膜。其中麦穗鱼的胚胎发育见图2(图2A：2细胞期；图 2B：16细胞期；图2C：桑椹期；图2D：囊胚期；图2E：胚孔封闭期；图2F：心跳期；图 2G：脱膜期)。孵化器中的水温为24-26℃时，鳃鱼的受精卵经27-28h可孵化脱膜。鳃鱼的 胚胎发育见图3(图3A：囊胚期；图3B：原肠胚期；图3C：眼基出现期；图3D：尾芽期； 图3E：晶体出现期；图3F：肌肉效应期；图3G：心跳期；图3H：刚出膜的鱼苗)。

本发明全程为鱼类受精卵发育提供了一个优良的环境，可控制鱼类受精卵的孵化水温， 满足受精卵孵化时所需的溶氧，使受精卵的代谢废物及时排走，保证受精卵孵化过程中的清 新水质，使受精卵的孵化率高；同时避免受精卵移动，减少受精卵的应激反应和损伤，使试 验结果更准确。

这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的实施例的保护范围。此外应理解， 在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等 价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的保护范围。