利福昔明粉末、制备其的方法和用于获得长效作用的含所述利福昔明的控释组合物

摘要

本发明描述了利福昔明粉末和制备其的方法。本发明还涉及固体形式的药物组合物，其包含所述利福昔明、可药用赋形剂和任选的其它成分。本发明的组合物适于口服施用，且特征为产生利福昔明的控制释放，由此在患者中获得长效作用。

说明书

本发明涉及利福昔明粉末、制备其的方法、包含所述利福昔明的固体组合物及它们作为药物的应用。

背景技术

利福昔明(INN；参见The Merck Index,第XIII版,8304,CAS编号80621-81-4)，IUPAC命名(2S,16Z,18E,20S,21S,22R,23R,24R,25S,26S,27S,28E)-5,6,21,23,25-五羟基-27-甲氧基-2,4,11,16,20,22,24,26-八甲基-2,7-(桥氧十五-(1,11,13)三烯亚氨基)苯并呋喃(4,5-e)吡啶并(1,2,-a)苯并咪唑-1,15(2H)-二酮,25-乙酸酯)，是一种属于利福霉素类抗生素的半合成的抗生素。更确切地说利福昔明是吡啶并-咪唑并利福霉素，在意大利专利IT 1154655中有描述，而欧洲专利EP 0161534公开了使用利福霉素O作为原料(The Merck Index,第XIII版,8301)制备利福昔明的方法。

US 7,045,620、US 2008/0262220、US7,612,199、US 2009/0130201和Cryst.Eng.Comm.,2008,101074-1081(2008)中公开了利福昔明的新形式。

利福昔明(根据其固体形式、特别是结晶或无定形形式具有全身吸收的特征)，因其对例如引起以下疾病的位于胃肠道的细菌所发挥的抗菌活性而为人所知：感染性肠道疾病、腹泻、肠易激综合征(IBS)、小肠细菌过度生长(SIBO)、克罗恩病(CD)、胰腺功能不全、肠炎、纤维肌痛。

抗生素或抗生素(例如新霉素、甲硝唑、环丙沙星、多西环素、四环素、青霉素、氨苄西林、卡那霉素、利福霉素、万古霉素和利福昔明)的组合用于细菌性肠道感染的治疗法。在这些抗生素中优选全身吸收少的抗生素，例如，利福昔明的一些晶形。全身吸收少的抗生素的吸收通常低于标称浓度的10%，且特别为0.05%至1%。

肠器官受多种炎性病变的影响，通常称之为肠疾病，在文献中被称为“肠病”(IBD)，其中特别涉及的是IBS和CD。

IBS是一种在西方国家影响10-20%的成年人口的肠疾病。这是一种特征为慢性的症状(诸如腹痛、膨胀、鼓胀、排便急迫感或便排不尽感)复发的疾病，且其与肠活动变化有关。

CD是影响各级消化道(从嘴到肛门)的慢性炎性疾病。其主要发生于小肠的最末一部分(回肠，因此称为末端回肠炎)或者结肠(因此称为结肠炎)，或者或在这两个区域(因此称为回肠结肠炎)，但有时仅发生在结肠粘膜和肛区。受侵袭的肠道在整个肠壁中显示炎症、膨胀和溃疡，经常引起狭窄和出血性溃疡，而患病区域之间的组织显得正常。严重性不同的各炎症表现期与各缓解期交替出现，其中主要症状的表现为腹泻、腹痛和体重减轻、通常伴有皲裂或直肠周瘘(perirectal fistulas)，经常需要外科治疗。

虽然，概括而言，对炎性疾病的病因学仍然需要进行进一步的研究，但已经发现了一些遗传学的、炎性的、感染性的、营养的、免疫-粘膜和神经-免疫-粘膜的因素。然而，迄今有三个理论最成功：慢性感染性刺激的存在、粘膜屏障缺陷和膜免疫系统对自身抗原的应答改变。

肠细菌区系在肠炎性病变、特别是克罗恩病的发病机理中的作用可通过一系列确定的征兆被注意到:该疾病更经常发生于高细菌浓度的区域，如Janowitz H.D.等人在Inflamm.Bowel Dis.1998,4,29-39中所述；排泄物排出的改道导致内窥镜检查损伤减轻，这种损伤在成管(canalization)恢复时再出现，如Rutgeerts P.等人在Lancet,1991,338,771-774所述；在IL-IO基因或其他基因敲除小鼠的实验模型中，如果保持“无菌”条件，则自发结肠炎不会发生，如Blumberg R.S.等人在Curr.Opin.Immunol.,1999,11(6),648-56中所述；与粪便物质接触会发生肠粘膜炎症，如Harper P.H.等人在Gut,1985,26(3),279-84中所述；在经历了外科“治愈的”治疗法(由回结肠吻合术构成)的患者的情况中，抗生素治疗延缓了内窥镜检查的和临床的复发的发生，如Cameron J.L.等人在Ann.Surg.,1992,215,546-52中所述；瘘或脓肿-囊(abscess-sacs)的存在进一步指出细菌对疾病发展的作用。

在药物疗法中，大量使用了能减少或控制炎症的药物诸如可的松、柳氮磺吡啶(salazopirine)、美沙拉秦、免疫抑制剂、特定的化学治疗剂、抗生素和肿瘤坏死因子(TNF)作用的蛋白抑制剂或白细胞粘附的蛋白抑制剂。

在炎性肠疾病的急性期的治疗中，经常必需的是更强的治疗诸如胃肠外营养法以恢复损失的蛋白质、液体和盐，及所有以上所述以允许肠休息从而促进溃疡愈合。

治疗的目的是降低症状复发的频率，并降低急性发作出现时的严重性。

然而，使用现有的治疗法，在约50-70%的案例中有急性发作，而在80%的患者中出现复发。

抗生素大量地用于减少肠道细菌生长，并因此减少由细菌生长导致的持续的炎症状态；减少疾病急性期的症状，例如腹泻、肠痛和鼓胀；并预防和治愈脓毒性并发症，诸如脓肿、瘘(fistulas)和中毒状态。

最常使用的抗生素是全身吸收的，例如，甲硝唑(对一些寄生虫和多种厌氧菌具有活性)和环丙沙星(对细菌诸如大肠杆菌(E.CoIi)和需氧肠杆菌科(aerobic enterobacteriaceae)具有活性)。

已将甲硝唑以10-20mg/kg/天的剂量应用4个月，如Sunterland,L.Gut,199132,1071-5所述，而将环丙沙星以1000mg/天的剂量应用6个星期，如Colombel J.F.在Am.J.Gastoenterol.,1999,94,674-8中所述，而Prantera C.等人在Am.J.Gastoenterol.,1996,91,328-32中采用上述两种抗生素的组合，其中甲硝唑以1000mg/天的剂量且环丙沙星以1000mg/天的剂量使用12周。

遗憾地是这些抗生素的高的系统生物利用度是建立在它们在长期治疗中被记录的副作用的高发生率上，而这些副作用对它们的应用产生负面影响。

对于用于有效治疗炎性肠疾病的基于抗生素的药物制剂而言以下的一个或多个特征是有利的：肠水平活性、肠腔中细菌水平控制、对微生物的广谱作用(例如，肠的革兰氏阳性、革兰氏阴性、需氧和厌氧的组分)、无严重副作用的长期治疗的可能性、易于施用以促进顺应性(即使有潜在的高剂量需要)。

具有这些特征中的几项的抗生素是利福昔明，它的特征为对多种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的广谱作用，包括需氧和厌氧菌。在健康志愿者中进行的生物利用度研究显示，当口服施用时，少于1%的利福昔明被吸收，且其集中于肠腔和排泄物中。这个结论已在感染慢性肠疾病的患者中被证实(Rizzello F.等人，Eur.J.Clin.Pharmacol.(1998)54,91-93)。

利福昔明的低的全身吸收减少了副作用、不良事件的发生和不希望的药理学相互作用的风险。因此，利福昔明可被认为可用于炎性慢性肠疾病的治疗中。

目前，利福昔明被认批准用于治疗病原学部分或全部归咎于由革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌导致的肠急性和慢性感染的病变，伴有腹泻综合征，肠内微生物菌丛发生改变的腹泻如夏季腹泻发作(summer diarrhoeicepisodes)，旅行者腹泻，小肠结肠炎，在胃肠外科手术中预防术前和术后的感染性并发症，以及在治疗高氨血症中作为辅助剂。

目前市售的利福昔明作为片剂和胶囊、用于混悬的随时可用的制剂或作为用于治疗局部感染的软膏剂，或作为对抗眼部感染的洗眼剂。

抗生素在临床实践中的应用为剂量的严格控制所指导，所述严格控制包括施用抗生素的量和施用频率两个方面。概括而言，抗生素治疗中的目标是在3-7天的时间提供从不低于治疗上的显著性阈值(therapeuticallysignificant thresholds)的抗生素的血浆浓度。

通常这些阈值建立在微生物抑制浓度(MIC)测定的基础之上，MIC表示历经18-24小时在约35°C的孵育温度完全抑制菌剂的可见生长的抗生素的最低浓度。有时是指MIC50和MIC90值，其被定义为能抑制50%和90%的微生物分离菌的最低浓度。

关于与抗生素使用相关的可能的不良事件，细菌对所使用抗生素的抵抗的问题众所周知。而且在在医院环境中，抗生素的使用经常伴随抗生素抗性的频率的增加，而抗生素消耗的减少可带来对特定药物的抗药性降低，如Guillemot D.等人，Current Opinion in Microbiology,1999,2:494-498所述。

选择抗生素剂量的目的是维持血浆浓度从不低于一些阈值以确保消灭病原微生物。事实上，如果血浆抗生素浓度低于能抑制细菌生长的浓度，或在没有抗生素的治疗周期的情况中，将不能保证消灭病原体，而甚至产生更显著的影响，可能有利于细菌产生对抗生素的抗性。在低于MIC的浓度时，或当抗生素不存在时，事实上细菌能够复制和适应，因而导致抗生素作用失效。

对于利福昔明而言，必须注意到其是局部作用的活性剂，其在粘膜表面或在肠粘膜对胃肠道存在的病原体起作用。

利福昔明的作用机制之一是改变肠道细菌病原体的致病因子。该机制在利福昔明的超-抑制浓度、但更重要地是还在亚-抑制浓度下(如比MIC值低32倍)发生。Debbia等人，J.Chemother.20(2),186-94,2008总结了该致死效应主要取决于抗生素与细菌接触的时间，且显示不受抗生素浓度影响。

利福昔明与细菌接触在作用机制中的关联性还受到Jiang Z.D.等人的支持(Int.J.Antimicrob.Agents 35(3),278-81,2010)，其显示利福昔明甚至在低于MIC 8倍的浓度下对于改变肠毒性大肠杆菌(Escherichia coli)分离菌的毒力依然有效，其在使利福昔明在该浓度下与病原体持续接触至少24小时的条件下进行。与之相反地是，如果接触仅保持8小时，病原体的毒力没有被消除。

Jiang Z.D.报道的证据进一步证实了，在治疗其中肠道中存在的菌剂为致病原因的病变的疗法中，在小肠和大肠二者中提供利福昔明的持续存在的重要性。

将利福昔明与要影响的病原体的接触时间的重要性与这些病原体集中于肠中这一事实相结合能做出以下推断：能在肠中提供更持久的利福昔明的停留时间的药物可能更有效。

因此，在这方面，确定利福昔明与致病细菌在肠道中接触的时间很重要。

然而，该信息很难获取。实际上，由于利福昔明在水中溶解度可忽略不计，任何体外模型都不能精确地再现复杂的肠环境。相反，人体内研究应当预见用放射性同位素标记的产品的应用，其具有使用放射性物质所隐含的制剂的相关问题。

然而，关于利福昔明肠停留时间的有用的信息可以通过根据利福昔明在人体内的药物动力学(PK)特性推测而间接地获得，其中将活性成分或活性部分在生物流体(血液、血浆、血清和/或尿液)中的浓度作为时间的函数而测定。一般而言，可以指出地是必须依赖于化合物在小肠(为主要吸收位置)中的暂时的量而考虑口服施用的化合物的PK特性。化合物在小肠中的量的增加或延长的停留时间都是有利于全身吸收的因素。

化合物在血液和在小肠中的同时存在不必然发生，因为化合物从肠到达血液中需要一定时间；这一时间取决于化合物的特性和个体的生理学或病理学特征二者。在健康的个体中，该时间通常约为1小时。

化合物的全身浓度与该化合物在小肠中的可利用度的联系众所周知，且主要被药学技术利用。事实上，为有利于吸收，采取了措施来增加化合物在小肠中的存在。相反，为对抗全身浓度，采取措施来防碍化合物在小肠中释放，例如使用结肠释放技术。

最后，口服施用的化合物的全身生物利用度还取决于能影响活性成分在肠中的释放和持久性的持续时间的药物所有的这些特性，诸如活性成分的特性、包含活性成分的药物组合物和所施用药物的形式(例如片剂、胶囊、混悬剂、耐胃液制剂或控释制剂)。

此外，药物制备方法具有特别的意义。事实上，药物的溶出特性和崩解特性均可以通过制备方法调节，由此使活性成分的可利用性更高或更低。

这些概念完全适用于利福昔明。因此，在某一时间测定的血浆中的利福昔明浓度一定对应于较早前时间小肠中存在的利福昔明的量。利福昔明在肠中的量与之后的血浆浓度的关联取决于利福昔明的吸收和通过小肠的时间。

因此，可以说明的是在某一时间测定的利福昔明的最大血浆浓度对应于利福昔明在小肠中存在的最大量。很明显，某一时间血浆中没有利福昔明应当是有一段时间小肠不存在利福昔明的指示。

Descombe J.J.等人在Int.J.Clin.Pharmacol.Res.,14(2),51-56,(1994)中报道了在人口服施用400mg片剂后利福昔明的PK数据。特别是，该文献在表II中报道了大多数病例——18位受试者中有16位在施用利福昔明后4小时在血液中没有可检测出的利福昔明，且在所有病例中施用后8小时没有可检测出的量。

由于在美国销售的商品名为的含利福昔明产品预计每8小时施用200mg片剂以治疗“旅行者腹泻”，所以由此可以推断被批准的施用方案不保证利福昔明在小肠恒定存在及因此不保证最佳的抗生素活性。

结论是，任何能够释放利福昔明而使其在小肠中停留延长的时间的含利福昔明的药物组合物将被认为是对利福昔明的治疗效果的改善。

因此需要能释放恒量的利福昔明的改善的组合物，从而维持该抗生素在血浆中的恒定水平达延长的时间。

发明简述

令人惊讶地发现含通过喷雾干燥方法获得的固体粉末形式的利福昔明与可药用赋形剂及任选地还有其它成分的组合物在患者中提供了利福昔明的控制释放和长效的抗生素作用。

本发明的另一个方面是通过喷雾干燥方法获得的利福昔明粉末。所述利福昔明粉末特征为所附权利要求中定义的特定的粒度分布、孔隙率(porosity)和表面积值。

本发明的另一个方面是用于制备上文定义的利福昔明的喷雾干燥方法，所述利福昔明使用结晶或无定形利福昔明或它们的混合物的溶液获得。

本发明的另一个方面是用作药物的通过喷雾干燥获得的利福昔明。

本发明的另一个方面是含通过喷雾干燥获得的利福昔明的组合物。

本发明的另一个方面是用于治疗病变如炎性疾病和细菌感染的含通过喷雾干燥获得的利福昔明的组合物。

本发明的另一个方面是用于预防病变如细菌感染的含通过喷雾干燥获得的利福昔明的组合物及治疗人和动物的方法。

本发明的另一个方面是含其它活性成分和/或其他形式的利福昔明的组合物。

附图描述

图1:在V7受试者多次施用实施例3的利福昔明的200mg片剂和后血浆浓度的特性。

图2:在V11受试者多次施用实施例3的利福昔明的200mg片剂和后血浆浓度的特性。

图3:通过喷雾干燥方法获得的利福昔明的X-射线粉末衍射图。

图4:通过喷雾干燥方法获得的利福昔明的¹³C-NMR谱。

图5:通过喷雾干燥方法获得的利福昔明的FT-IR谱。

图6:通过研磨方法获得的利福昔明的X-射线衍射图。

图7:通过喷雾干燥方法获得的利福昔明的PSD曲线。

图8:通过研磨方法获得的利福昔明的PSD曲线。

图9:通过喷雾干燥方法获得的利福昔明的SEM显微图像。

图10:通过研磨方法获得的利福昔明的SEM显微图像。

发明详述

本发明涉及利福昔明粉末、制备其的方法、包含所述利福昔明的药物组合物或药物制剂，及这些组合物和/或制剂在治疗肠疾病、例如炎性肠疾病、旅行者腹泻、IBS、SIBO、CD、高氨血症疗法、肝性脑病、溃疡性结肠炎、肠炎、慢性胰腺炎、胰腺功能不全、结肠炎、憩室病、纤维肌痛、系统性红斑狼疮和/或隐窝炎中的应用。

利福昔明是以下式表示的化合物

本发明还涉及含4-脱氧-4'-甲基-吡啶并[1',2'-1,2]咪唑并[5,4-c]利福霉素SV和4-脱氧-吡啶并[1',2':1,2]咪唑并[5,4-c]利福霉素SV的组合物。

利福昔明在若干国家被批准和上市销售，用于治疗肠感染、用于治疗由于感染引起的腹泻、用于预防术后感染、用于治疗高氨血症和肝性脑病。特别是在美国、英国、丹麦和德国，利福昔明被批准用于治疗称为旅行者腹泻的肠疾病，使用预计每天施用200mg片三次、连续三天的治疗方案。

受肠疾病(BD)侵袭的个体、罹患活跃的或急性的疾病或综合征的个体和患一种或多种肠疾病后处于缓解状态的个体可以从利福昔明治疗中受益。术语肠疾病包括例如，肠易激综合征(IBS)、不受控的腹泻型肠易激综合征(dIBS)、克罗恩病、旅行者腹泻、溃疡性结肠炎、肠炎、小肠细菌过度生长、慢性胰腺炎、胰腺功能不全、结肠炎、憩室病、纤维肌痛、系统性红斑狼疮或肝性脑病。

具体而言，能通过该治疗获益的个体是罹患或易感各形式的肠疾病的那些个体。

术语“利福昔明”包括利福昔明的溶剂化物和结晶和无定形形式。这些利福昔明多晶型形式在US 7,045,620、US 2008/0262220、US 7,612,199、US 2009/0130201、Cryst.Eng.Comm.,2008,101074-1081中描述。

本文的术语“多晶型的/多晶”表示化合物不同的结晶形式，以水合形式(如一些化合物的性质)和复合物、盐、溶剂化物和无定形。

单个化合物可能存在以多种多晶型形式存在，其尽管具有相同的分子量，但具有不同的物理性质，诸如溶解度、熔化温度、吸湿性、粒子大小、密度和X-射线衍射谱。此外，各多晶型形式的溶解度可以不同，因而其生物利用度也不同。这是为何药物多晶型物的鉴别与获得具有可预见的溶解度特性的药物形式相关的原因。化合物的多晶型形式可以通过X-射线衍射谱和通过其他方法如IR光谱测定。

本发明的目的是含为带来改善的溶解度而特别制备的利福昔明固体制剂的药物组合物，用于得到所述利福昔明制剂的方法、含适于保证利福昔明延长的释放时间的所述利福昔明制剂的药物组合物、它们的制备方法和在病变如细菌感染和治疗方法中的应用。

本发明的利福昔明粉末的和含所述利福昔明的药物组合物的特性的组合确保所述组合物、特别是片剂形式的组合物以可预知和控释的方式释放利福昔明。有利地是本发明的固体组合物在治疗期间在血浆中保持有效的利福昔明浓度。

所述组合物单独包含利福昔明，或者为调节体内吸收包含与其它的利福昔明多晶型形式的混合物。

本发明的另一个方面是包含在药物组合物中的利福昔明固体制剂。

在一个优选的方面中，用于口服应用的组合物为包含20-80mg的量的利福昔明的片剂或胶囊剂形式。因此利福昔明在药物组合物中的量可改变以获得适于在患者中达到期望治疗反应而不在该个体中引起任何毒性作用的量。

对于利福昔明，典型的剂量范围为每天25至3000mg，其不引起任何毒性作用或其他副作用。在药物组合物中的利福昔明以每千克患者体重约1mg至约200mg的浓度施用。

本发明的组合物提供的高疗效要是由于该抗生素活性在感染位置持续较长时间。

本发明的目标组合物可用于治疗受可使用利福霉素类抗生素如利福昔明治疗的肠疾病或其他疾病侵袭的人或动物个体，或者可用于治疗可通过施用所述抗生素获益的个体，或可能处于出现肠疾病的危险中的个体，或处于从肠疾病中缓解的个体，或肠疾病复发的个体，例如受免疫抑制影响的个体，暴露于细菌感染、易患肠综合征的个体，罹患肝损伤的个体，过去有HE发作的个体。

本发明的另一个方面是治疗、预防或减轻肠相关障碍的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的利福昔明的固体分散体组合物。肠相关障碍包括一种或多种肠易激综合征、腹泻、与微生物相关的腹泻、与艰难梭菌(Clostridium difficile)相关的腹泻、旅行者腹泻、小肠细菌过度生长、克罗恩病、憩室病、慢性胰腺炎、胰腺功能不全、肠炎、结肠炎、肝性脑病。

对于具体肠障碍，治疗时间将部分取决于该障碍。例如，旅行者腹泻可能仅需要12至约72小时的治疗持续时间，而克罗恩病可能需要约2天至3个月的治疗持续时间。

药物组合物中的利福昔明可用于肠感染的预防性治疗。

通过本发明方法获得的利福昔明能不受任何限制地用于制备药物组合物，诸如阴道感染或局部感染。

本发明的药物组合物能用于治疗胃消化不良，包括胃炎、胃十二指肠炎、胃窦炎、窦糜烂(antral erosions)、侵蚀性十二指肠炎(erosive duodenitis)和消化性溃疡。

本发明的一个特别的方面是片剂形式的药物组合物，其包含通过喷雾干燥获得的利福昔明以及可药用赋形剂。

可药用赋形剂可以包括例如，稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、助流剂、着色剂、矫味剂或甜味剂中的一种或多种。所述组合物可被配制为所选择的包衣和未包衣的片剂、硬和软明胶胶囊、糖包衣丸剂、锭剂、糯米纸囊片(wafer sheets)、小丸和在密封的袋中的粉末。固体组合物是非限制的，且通过喷雾干燥制备的利福昔明可被配制而用于局部应用，例如，含预定量的通过喷雾干燥制备的利福昔明的软膏剂、膏剂(pomades)、霜剂、凝胶剂和洗剂、水性或非水性乳液中的混悬剂、酏剂或糖浆剂。

根据本发明通过使用向个体提供延长的利福昔明释放的可药用组合物而将利福昔明施用于个体。

本发明的利福昔明粉末在实施例1中描述，其中从结晶或无定形形式的利福昔明或从它们的混合物起始通过使用喷雾干燥技术制备本发明的利福昔明。所述方法能得到具有下文所述特征及特别是无定形形式的特征的固体粉末。

将作为原料的结晶或无定形形式的利福昔明或它们的混合物以及以每千克利福昔明1至40升有机溶剂的量的有机溶剂装入喷雾干燥装置、诸如预热的流化床设备、例如Glatt GPCG 60(配有例如18英寸的Wurster系统和喷雾嘴)。然后将得到的混悬液保持搅拌直至利福昔明完全溶解。

可以使用任何适合的有机溶剂。例如可以使用C1-C4醇，优选乙醇或甲醇。

然后在温空气流下将含利福昔明的溶液在流化床设备内进行喷雾，压力为0.5至2.5巴。然后将固体利福昔明在20°C至120°C的温度、优选35°C至110°C的温度干燥至恒重，并将形成的颗粒在20°C至120°C的范围的温度、优选35°C至110°C的温度干燥至恒重。

将干燥后得到的固体粉末通过X-射线衍射谱进行分析。如下文的特征分析中所报道，得到的X-射线衍射图不显示任何表征结晶性的峰。

图3显示通过喷雾干燥获得的利福昔明的X-射线衍射图，图4显示其¹³C-NMR谱，且图5显示其FT-IR谱。在30°C至40°C的温度范围、高于50%的湿度的条件下，得到的粉末形式的利福昔明在三个月后保持稳定，这证明该活性成分可以制备并保存至其使用。

还可通过研磨方法制备基本上是无定形形式的利福昔明的固体粉末，其中研磨可以人工或机械地操作。

将通过喷雾干燥获得的具有无定形形式特征的利福昔明固体粉末与通过研磨获得的利福昔明固体粉末进行比较。X-射线衍射图、粒度分布(PSD)、扫描电子显微镜(SEM)、比表面积(BET)、密度和溶解度的比较分析在实施例2中报道。

图3和图6分别显示通过喷雾干燥获得的利福昔明和通过研磨获得的利福昔明的X-射线衍射图。这两种固体形式特征均为非-结晶特性，其中没有尖峰表明存在无定形形式的利福昔明。图3和6中的X-射线粉末衍射峰是不同的，具体而言，通过喷雾干燥获得的利福昔明特征为如下的弥散峰，最大值位于约7.75°±0.2、14.54°±0.2和18.33°±0.2，2θ；通过研磨获得的利福昔明特征为如下的弥散峰，最大值位于约7.44°±0.2、14.40±0.2；17.19±0.2，2θ。

粒度分布(PSD)分析显示通过喷雾干燥获得的固体形式的利福昔明的粒度分布比通过研磨方法获得的利福昔明粉末更均匀，如图7和图8所示。

具体而言，通过喷雾干燥制备的利福昔明特征为粒度分布的基本对称特性，粒径约20微米，其中d₉₀(90%的粒径)的测定结果为40至120微米，d₅₀(50%的粒径)为15至30微米，且d₁₀(10%的粒径)为2至10微米。通过碾磨方法获得的利福昔明特征为不对称特性，其中d₉₀为10至20微米，d₅₀为6至12微米，且d₁₀为0.5至4微米。

扫描电子显微镜(SEM)分析显示通过喷雾干燥获得的利福昔明粉末显示大小为约10μm至40μm的聚集体，而通过碾磨方法获得的利福昔明的SEM显示大小为约3至15微米的聚集体。目检图7和图8中得到和报道的图证实这些粉末形式中的差异。

测定通过喷雾干燥制备的利福昔明固体形式的堆密度及研磨的固体利福昔明的堆密度，对应于它们的每单位体积的质量。颗粒的堆密度测定是药物粉末的一项重要的物理特征，且固体的密度取决于其组件(assembly)，因此随晶体结构和结晶度而不同。特别是当固体为无定形或部分无定形形式时，其密度可还取决于制备、处理和存储。

对通过喷雾干燥获得的利福昔明和通过研磨获得的利福昔明，进行三个不同样品的三次测定，并使用10ml量瓶以克/毫升计算密度。

通过喷雾干燥获得的利福昔明的堆密度为0.1至0.5g/ml，通过研磨获得的利福昔明的密度为0.3至0.6g/ml。

比表面积(BET)的测定基于惰性气体的物理吸附，诸如利福昔明表面的氮气能显示通过喷雾干燥获得的利福昔明与通过研磨获得的利福昔明的差别。根据该技术得到结果为通过研磨获得的利福昔明的比表面大于通过喷雾干燥获得的利福昔明的比表面。具体而言，通过研磨获得的利福昔明的粉末粒度的BET范围可以为5至20m²/g，特别是9至12m²/g，而通过喷雾干燥获得的利福昔明的BET为0.01至10m²/g、且特别是5至8m²/g。

通过喷雾干燥制备的利福昔明粉末和通过研磨制备的利福昔明粉末的溶出实验比较在实施例2中报道。该实验在磷酸盐缓冲液中在pH 6.8在30±0.5°C的温度进行。表5中报道的结果显示，如果与例如通过研磨制备的利福昔明比较时，通过喷雾干燥获得的利福昔明的溶出能力更高，且溶解的利福昔明浓度可以为通过研磨获得的利福昔明的1.1至3倍。

比较分析表明通过喷雾干燥制备的利福昔明的X-射线粉末衍射谱、PSD、BET、堆密度和溶解度为来自该粉末的形态学的特征，而形态学由制备方法决定。

通过喷雾干燥方法制备的利福昔明的制备方法赋予利福昔明制剂特别的化学-物理性质，其与其它无定形形式(例如通过研磨方式获得的利福昔明)不同。

本发明的片剂的制备通过以下方法进行，其包括以下步骤:

a)对通过喷雾干燥方法获得的利福昔明进行干法制粒，所述利福昔明任选地与结晶形式的利福昔明混合或者在与其它的的水合物、溶剂化物或无定形形式的利福昔明组成混合物中和/或存在可药用赋形剂；

b)将得到的颗粒润滑；

c)将步骤b)的颗粒与可药用赋形剂压片；

d)任选地制备包衣液(coating varnish)并对片芯包衣。

实施例3描述了包含通过喷雾干燥方法获得的利福昔明的片剂的非限制性制备。

通过喷雾干燥获得的利福昔明粉末为颗粒形式。将该颗粒与额外的颗粒可接受的赋形剂在Kilian机器或与其同类的机器进行压制，所述机器装备有具有不同直径的凹冲，其视片剂所需要的形状而定。

术语“可药用赋形剂”包括，例如，崩解剂、润滑剂、助流剂、稀释剂、缓冲剂、遮光剂(opacizer)、增塑剂、着色剂、矫味剂。

固体组合物可包含提供生物粘附性的生物粘附化合物。

崩解剂选自例如，纤维素衍生物诸如羧甲基纤维素钠(也称作carmelose)、交联羧甲基纤维素钠(也称作croscarmelose)、羟丙基甲基纤维素、羟丙基乙基纤维素、羟丙基纤维素邻苯二甲酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚维酮(聚乙烯吡咯烷酮的聚合物)、共聚维酮(聚乙烯吡咯烷酮的共聚物)、丙烯酸类聚合物和共聚物、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(polyvinylacetate phthalate)、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(poly vinyl acetate phthalate)或羟乙酸淀粉钠和润滑剂，例如硬脂酸镁或硬脂酸钙、硬脂富马酸钠、植物氢化油、矿物油、聚乙二醇类、十二烷基硫酸钠、甘油酯类、苯甲酸钠或它们的混合物。

稀释剂选自纤维素、微晶纤维素、磷酸钙、淀粉、白陶土、硫酸钙水合物、碳酸钙、乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、葡聚糖、木糖葡聚糖、淀粉类、诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉、西黄蓍胶粉、麦芽、明胶。

片剂可以包含助流剂诸如滑石粉、微晶纤维素或碳酸镁和润滑剂诸如硬脂酸镁或硬脂酸钙、二硬脂酸甘油酯、山萮酸甘油酯(glycerol dibenate)。

片剂还可以包含赋形剂诸如天然油、二醇类诸如丙二醇、多元醇类诸如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇、酯诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯、缓冲剂诸如氢氧化镁和氢氧化铝、藻酸、无热原水；等渗盐水、乙醇、磷酸盐缓冲溶液和药物制剂中使用的其它的无毒的可配伍物质。

片剂还可以包含甜味剂诸如蔗糖、山梨醇、甘露醇、糖精、乙酰舒泛和新橙皮甙(neosperidin)。

着色剂、释放剂(release agents)、包衣材料、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。

还可以包括防腐剂和抗氧化剂诸如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠和金属络合剂诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸。

其它的赋形剂有多糖类诸如淀粉、定多寿(kitosan)、硫酸软骨素、右旋糖酐、瓜尔胶、木糖葡聚糖、黄原胶(xantanes)或菊粉和果胶、增塑剂例如己二酸酯类、壬二酸酯类、苯甲酸酯类、柠檬酸酯类、邻苯二甲酸酯类、硬脂酸酯类和二醇类、乙酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、乙酸丙酸纤维素、乙基纤维素、脂肪酸类和它们的酯、蜡类和玉米醇蛋白。

任选地，可以包括亲水聚合物诸如羟乙基纤维素和羟丙基纤维素。

片剂可以被薄膜衣包衣，所述薄膜衣由成膜剂诸如微晶纤维素、羟甲基纤维素或羟丙基纤维素、遮光剂诸如二氧化钛、增塑剂诸如丙二醇或乙二醇和任选地着色剂或矫味剂形成。

为延长利福昔明在小肠中的停留时间，5%至90%的溶出特性(dissolution profile)被认为是适合的。为达到该目标，使用了特别的制粒技术。在制药工艺中本领域技术人员最常使用的方法是湿法制粒，当目的是有利于难溶化合物的溶出时采用该方法。

使用所述已知的技术会造成了无定形形式向其他形式的转化，其有完全溶出或溶出低于5%的浓度的风险(Cryst.Eng.Comm.,2008,10,1074-1081)。

相反，依据欧洲药典第6.0版第266-275页中所述的要求，通过采用干法制粒技术，防止该转化并得到具有相当于5%至90%的包含在组合物中的利福昔明的值的溶出的特征的片剂是可能的。

在一个具体的方面，含通过喷雾干燥方法获得的固体形式的利福昔明的片剂形式的药物组合物包含一种或多种崩解剂、一种或多种助流剂、一种或多种稀释剂，其中利福昔明的范围可以是该固体组合物重量的10-90%。

优选的组合物包含以重量计30至70%的量的利福昔明，以重量计2至5%的润滑剂；以重量计3至8%的崩解剂；以重量计5至65%的稀释剂；以重量计0.1至2%的助流剂(在制得的组合物中)并任选地包含矫味剂和着色剂。

在本发明的优选的组合物中，崩解剂选自羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素、共聚维酮、羟乙酸淀粉钠。

稀释剂选自微晶纤维素、乳糖、纤维素和甘露醇。

润滑剂选自二硬脂酸甘油酯和山萮酸甘油酯(glycerol dibenate)。

助流剂选自滑石粉、二氧化硅和无水胶态二氧化硅。

片剂可使用包括遮光剂、着色剂、增塑剂和矫味剂的薄膜衣材料进行包衣。

表7报道了含通过喷雾干燥制备的利福昔明本发明的片剂与商购的名为片剂的利福昔明片剂对比的溶出特性。由无定形形式的利福昔明、通过喷雾干燥制备方法获得的粉末的形态学和片剂形式的固体药物组合物的组合得到的新的固体组合物显示出意想不到的结果：得到能够提供延长释放利福昔明活性成分的药物组合物。与商购可得的利福昔明制剂相比，如实施例3中的含200mg利福昔明的片剂形式的药物组合物能使得利福昔明在人器官中停留更长的时间，在此它实施其药理作用的时间更长，而血浆吸收水平没有显著地增加，所述血浆吸收水平是限制副作用和/或不良事件的相关方面。

PK特性显示在每天口服施用200mg片剂三次的情况下，该新制剂通过在体内提供有效浓度的利福昔明能确保更好的治疗作用。

该证据在实施例4中显示，实施例4报道了使用依据实施例3制备的含实施例1中所述的通过喷雾干燥获得的利福昔明的片剂进行的药物动力学研究。该研究与含结晶利福昔明如利福昔明多晶型-α的商购制剂比较开展。一组的24位健康志愿者(他们的人口统计数据在表8和表9中报道)接受一片或两片如在实施例3中制备的利福昔明的200mg片剂或者同等数量的的200mg片剂。

表10报道了以ng/mL血液表示的利福昔明的血浆浓度，所述血浆浓度在口服施用如实施例4中所制备的利福昔明的200mg片剂后在人体随时间而测定。另一方面，表11报道了当施用称为的商购可得的利福昔明的200mg片剂时得到相应的值。

对比数据证明，与商购可得的片剂相比，依据实施例3制备的利福昔明的200mg片剂延长了其中在血浆中可检测到利福昔明的时间间隔。实施例4报道了接受口服单个200mg剂量的或两个200mg剂量的实施例3的含通过喷雾干燥获得的利福昔明的组合物的受试者与接受口服单个200mg剂量的或两个200mg剂量的商购片剂的受试者的PK对比数据。结果证明：在大多数受试者中商购利福昔明制剂在施用4小时后在血浆中不再能检测到，且在所有受试者中在施用6小时后在血浆中不再能检测到(表11)，而几乎在所有受试者中本发明的含通过喷雾干燥获得的利福昔明的组合物在施用后4小时在血浆中被检测到(10/12)，在大多数受试者中(7/12)甚至在施用后8小时并且在一些受试者中甚至直至施用后16小时仍在血浆中被检测到。

在施用两片实施例3制备的利福昔明的200mg片剂的情况中，大多数受试者(10/12)在施用后12小时且一些受试者甚至在施用后直至24小时显示出显著量的利福昔明。

这些结果与以下事实有关：施用一片200mg片剂时绝对血浆浓度不超过约15ng/ml，且施用两片200mg片剂时绝对血浆浓度不超过100ng/ml。

通过施用相同量的仅施用6小时后少数受试者显示可检测到的利福昔明的血浆浓度，施用12小时后没有受试者显示可检测到的利福昔明的血浆浓度。

在这些条件下，对含通过喷雾干燥制备的利福昔明的片剂最适合的剂量是施用三片利福昔明的200mg片剂、每天三次，例如，如在治疗旅行者腹泻时的方案。事实上，该剂量方案为个体确保利福昔明更好的抗生素作用。就这一点而言并仅为例证的目的，图1和图2显示，基于表10和表11中得到的值，在受试者V7和V11每天三次施用三片利福昔明的200mg片剂的重复剂量的假设下计算的PK特性。

尽管含通过喷雾干燥获得的利福昔明的实施例3的片剂形式的固体制剂在血浆中保持有限的最大浓度并在治疗期间产生有限的药物蓄积，但所述固体制剂确保利福昔明更恒定的存在。

利福昔明在血浆中最大浓度的限制的影响是片剂组合物、所采用的药物形式和所述药物形式的制备方法的结果。事实上，实施例5的表16报道了当向动物仅施用没有任何另外的赋形剂的依据实施例1制备的利福昔明时在狗中得到的PK参数。为将这些数据与实施例3的表14中所报道的人施用后得到的值进行比较，必须考虑不同的物种(人和犬科动物)，和不同的剂量。

就物种而言，已知由于这两个物种的胃的生理机能非常相似，所以对比人和犬科动物的生物利用度数据是可能的，如Dressmann J.B.在Pharm.Res.4,123-31,1986中所述。然而，人和狗的小肠中显示不同的pH，人的pH约为5，而狗的约为7。如果该差异与化合物的溶解度相关，则可能影响生物利用度。

然而，对于利福昔明，由于pH 5至7的差别不影响利福昔明的溶解度，所以该差异是无关的，如实施例6中所示。

另一个在人和犬科动物之间观察到的差异是狗的肠通过时间较短，可推断这可导致药物被吸收的比例较少。

通过采用狗的剂量至人等效剂量(HED)的换算因子(0.54)，人和犬科动物中的不同的生物利用度因素已经被考虑在内，如在FDA工业指南中所报道。在使狗接受100mg/kg的剂量的实施例5中，其对应于54mg/kgHED。

如表8中所示，接受利福昔明的200mg片剂的被研究的患者的人类受试者的平均体重为67.67kg，因此他们平均接受2.9mg/kg的利福昔明，即其比施用于狗的HED利福昔明的量低18.6-倍。因此，可预期PK参数将通过大致同样的系数成比例地被降低，如表1所示。

表1

当将实施例1的利福昔明包含于实施例3中的药物制剂中时，通过对比在基于狗的实验获得的以2.9mg/kg HED所计算的PK参数的值与在人的实验中获得的值，得出以下结果：如果与直接施用实施例1中所述的通过喷雾干燥方法制备的利福昔明比较，通过如实施例3所述将利福昔明的形式的作用与药物组合物组合而获得的新的组合物降低了利福昔明在血液中的生物利用度水平。

依据实施例3得到的片剂形式的药物组合物的确显示了意想不到的结果，所述结果来自以下两种以相反的方式作用的参数的组合：通过喷雾干燥方法制备的利福昔明导致利福昔明更易溶解，其生物利用度增加是可能的，而组合物和片剂的药物形式和制备方法限制了吸收水平，得到控制释放的结果。

所述制剂的特性的证据在图1和2中显示，这两幅图报道了两个不同的志愿者的血浆浓度值，其是在重复施用依据实施例3制备的含利福昔明的片剂剂型和用作对比的商购产品后所计算得到的。

在接受本发明的制剂的两个健康志愿者中的两种特性的比较证实：在整个治疗期间没有时间间隔显示任何在血浆中可检测到的利福昔明，然而接受商购可得的含利福昔明的片剂的患者显示了没有分析上可检测的利福昔明血浆浓度。

因此本发明的一个方面是能以可预测和控释方式释放利福昔明的组合物。该组合物包含通过喷雾干燥方法得到的具有上文所述的形态学特征的利福昔明粉末。

本发明的另一个方面是含固体形式的利福昔明的药物制剂，在固体制剂中含10至800mg的量的利福昔明以及可接受的赋形剂。

本发明的另一个方面是具有上文所述的形态学特征的利福昔明粉末，其是通过喷雾干燥制备并且伴随有本领域技术人员已知的可接受的赋形剂，其用作局部施用诸如软膏剂、霜剂、灌洗液、泡沫剂。

本发明的另一个方面是具有上文所述的形态学特征的利福昔明粉末，其通过喷雾干燥制备并且伴随有本领域技术人员已知的可接受的赋形剂，其用作口服施用诸如混悬剂、糖浆剂或漱口剂。

本发明的另一个方面是药物组合物，其在施用片剂形式的不低于200mg的量的利福昔明后4-12小时能够在人的血液中产生高于0.5ng/ml的利福昔明的血浆浓度。

本发明的另一个方面是含通过喷雾干燥获得的利福昔明的药物组合物，其在施用片剂形式的不低于400mg的量的利福昔明后6-24小时能够在人的血液中产生高于0.5ng/ml的利福昔明的血浆浓度。

本发明的另一个方面是利福昔明的制剂，其在施用200mg的利福昔明时产生低于约15ng/ml利福昔明在血液中的最大浓度。

本发明的另一个方面是含利福昔明的药物组合物，其在施用200mg的利福昔明时产生低于约100ng/ml的利福昔明在血液中的最大浓度。

本发明的另一个方面是所述制剂在治疗细菌性肠道感染中的应用。

本发明的另一个方面是含治疗有效量的通过喷雾干燥制备的具有上文所述的形态学特征的利福昔明和可药用载体或稀释剂的包装的组合物，其中所述组合物被配制以用于治疗罹患或易患肠疾病的个体，且与用于治疗罹患或易患肠疾病的个体的说明书一起包装。

本文还提供了药盒，例如，用于在个体治疗肠疾病的药盒。药盒可包含例如，一种或多种固体分散体形式的通过喷雾干燥制备的具有上文所述的形态学特征的利福昔明及其使用说明书。该使用说明书可包含禁忌信息、剂量信息、储藏信息等。

利福昔明可以以高于2500mg/天的剂量施用而没有任何副作用，且所述利福昔明组合物可以以约1mg至约200mg/千克体重的浓度施用。

所述药物组合物可以与其他的治疗法的治疗组合施用。

提供了以下的本发明的非限制性实施例。

实施例1

通过喷雾干燥制备利福昔明粉末的方法

向装备有18-英寸Wurster系统和1.8mm喷雾嘴的流化床设备GlattGPCG 60中装入40kg利福昔明-α，然后加入457.2升96%乙醇(v/v)。将形成的混悬液保持搅拌至利福昔明完全溶解。

在1.0至1.5巴的压力下在预热的热气流下将该乙醇溶液通过1.8mm喷雾嘴在流化床内进行喷雾。在喷雾期的末尾，将固体利福昔明粉末进一步干燥以除去过量的溶剂。

喷雾方法采用的条件在表2中详述。

表2

  方法参数  预热  喷雾  干燥  入口空气体积  800±200m³/h  800±200m³/h  800±200m³/h  入口空气温度  90±10°C  90±10°C  60±5°C  喷雾压力  0.7±0.2巴  喷雾速度  50-380g/分钟  产品温度  55–70°C  50±2°C

将得到的利福昔明粉末经X-射线谱、¹³C-NMR谱和IR谱分析，且所述粉末在40°C+2的温度、75%的相对湿度条件下多达3个月保持稳定。

X-射线衍射谱如图3所示，显示具有以下最大值的弥散峰：7.75°±0.2,14.54°±0.2和18.33°±0.2,2θ。

X-射线衍射谱通过Bragg-Brentano几何光学、在以下条件下获得：X-射线管：铜；辐射：K(α1),K(α2)；发生器电流电压：KV 40,mA 40；单色器:石墨；步长:0.02；每步时间:1.25秒；最初和最终的2θ角值:3.0°-30°±0.2°。

图4显示通过Varian 400仪器在100.56MHz获得¹³C-NMR谱，其中将所述样品溶于纯度高于99.8%并含有作为内标的四甲基硅烷的氯仿中。

图5报道了使用Spectrum One仪器(Perkin Elmer)、通过使用利福昔明在溴化钾中的0.5%的分散体获得了IR谱，该谱在4000至450cm^-1的频率记录。

所述这样得到的利福昔明是稳定的，如表3所示。

表3

实施例2

通过喷雾干燥得到的利福昔明和通过研磨方法得到的利福昔明的比较分析

a)X-射线分析

通过Bragg-Brentano几何光学在以下条件下得到X-射线衍射谱:X-射线管:铜；辐射:K(α1),K(α2)；发生器电流电压:KV 40,mA 40；单色器:石墨；步长:0.02；每步时间:1.25秒；最初和最终的2θ角值:3.0°30°±0.2。

图3和图6分别报道了通过喷雾干燥得到的利福昔明和通过研磨得到的利福昔明的X-射线谱。

通过喷雾干燥方法得到的利福昔明的X-射线衍射波谱特征为具有以下最大值的弥散峰：7.75°±0.2、14.54°±0.2和18.33°±0.2,2θ。

通过研磨方法获得的利福昔明的X-射线衍射波谱特征为具有以下最大值的弥散峰：7.44±2θ、14,40±2θ；17.19±2θ。

b)粒度分布(PSD)

使用装备有微-体积池(micro-volume cell)的Beckman–Coulter LS100Q粒度分析仪进行粒度分析。使用的溶剂为White Spirit(WS)。

在表4中报道了使用喷雾干燥和研磨方法得到的颗粒的平均大小。

对于喷雾干燥而言，相当于总的颗粒的10%(d10)的平均大小为4.56μm，且对于研磨而言该值为1.84μm；对于喷雾干燥而言，相当于总的颗粒的50%(d50)的平均大小为19.60μm，且对于研磨而言该值为8.17μm；对于喷雾干燥而言，相当于总的颗粒的90%(d90)的平均大小为62.21μm，且对于研磨而言该值为12.92μm；

表4

图7和图8分别显示通过喷雾干燥方法获得的利福昔明和通过研磨方法得到的利福昔明的粒度特性。

c)SEM显微镜检查

将通过喷雾干燥和研磨得到的利福昔明无定形形式的样品通过SEM分析，结果分别在图9和图10中报道。

通过喷雾干燥制备的利福昔明显示大小为10至40μm的聚集体，且粉末呈现多孔特征和清楚显示的轮廓(defined profile)；通过研磨获得的固体利福昔明显示大小为3至15μm的聚集体，且粉末呈现多孔特征和球体特性。

d)堆密度

对通过喷雾干燥获得的利福昔明和通过研磨获得的利福昔明，进行三个不同样品的三次测定，并使用10ml量瓶计算以克/毫升计算密度。

通过喷雾干燥获得的利福昔明的密度为0.257g/ml，且通过研磨获得的利福昔明的密度为0.327g/ml。

e)比表面积(BET)

为测定低的表面积使用流动气体技术(flowing gas technique)。以10°C/分的加热速度将温度从25°C升高至100°C，使用氮气在300mg对真空下干燥的样品进行该分析。通过喷雾干燥获得的利福昔明的比表面积为0.01至5m²/g且通过研磨获得的利福昔明的比表面积为6至12m²/g。

f)溶解度

分别将500mg的实施例1中报道的利福昔明和通过研磨获得的利福昔明的制剂单独地混悬于750ml的含水的磷酸盐缓冲溶液中，pH 6.8，温度30±0.5°C。

将含混悬的利福昔明的溶液通过扫式搅拌器(sweep stirrer)以250rpm的搅拌速度搅拌150分钟。在第一个小时以5分钟的时间间隔取样，且在剩余时间内以15-分钟的时间间隔取样，过滤后经HPLC分析。结果报道于表5中。

表5

实施例3

利福昔明片剂的制备

含200mg利福昔明的片剂制备包括以下步骤:

a.如实施例1所述通过喷雾干燥制备利福昔明粉末；

b.通过压紧进行干法制粒；

c.润滑颗粒；

d.压片；

e.制备包衣液(coating varnish)；

f.对片芯包衣。

片剂包含的各组分的量在表6中报道。

表6

将羟乙酸淀粉钠、二硬脂酸甘油酯、滑石粉和微晶纤维素分别以表6中报道的量称重，并过0.8mm的筛。然后将它们置于V-型粉末混合机中，并将该混合物搅拌至少30分钟。

将该粉末混合物与相应的量利福昔明加入连续压紧-制粒机器的加料斗中，其产生具有需要的标准的颗粒。

然后将颗粒中加入二硬脂酸甘油酯、滑石粉、微晶纤维素、无水胶体二氧化硅，所有这些原料都预先过0.5mm的筛。将无水胶体二氧化硅和微晶纤维素在过筛前预先混合。然后将该混合物放回混合机中，并混合7分钟。通过装备有直径10mm的凹冲的旋转压片机Kilian或同类机器压制颗粒以得到片剂。在适合的场所在小气候控制下进行包衣操作。

将片剂在41°C-43°C的温度通过温空气加热，并将薄膜衣材料喷于片剂上。在包衣期的末尾，将片剂在41°C-43°C的温度通过温空气干燥30分钟。

通过进行依据欧洲药典6.3版20901号第3943-3945页的测试得知，根据上述制备方法得到的片剂的崩解时限为5分钟。

测定出的片剂溶出速度在表7中显示，依据欧洲药典6.0版20903号第266-275页通过进行溶出试验进行该评价，该试验通过将片剂置于1000ml磷酸盐缓冲液中(0.1M，pH 7.4，温度37±0.5°C)进行，转速100rpm。

对由此制备的片剂释放的利福昔明进行分析，并与商购可得的含利福昔明-α的片剂进行比较。通过分光光度法在波长293±2nm测定了释放于磷酸盐缓冲液中的利福昔明的量，将其与利福昔明参比溶液进行比较。时间长至180分钟所释放的利福昔明的量在表7中报道。

表7

实施例4

为评价口服如实施例3中得到的单个200mg剂量或两个200mg剂量的利福昔明片剂的安全性和PK特性在健康志愿者中进行的随机交叉研究，与口服单个200mg剂量的或两个200mg剂量进行比较

在禁食状态下，12名健康的志愿者(他们的人口统计数据在表7中报道)交叉接受一片实施例3中所述的含200mg利福昔明的片剂或的200mg片剂，且12名健康的志愿者(他们的人口统计数据在表9中报道)接受两片实施例3中所述的利福昔明的200mg片剂或两片的200mg片剂。

每位受试者以1周的间隔单独接受两种利福昔明制剂的每一种。

表8

表9

该研究通过测定口服施用后随时间推移的利福昔明的血浆浓度确定两种利福昔明制剂的生物利用度。

将分别取自施用后0；0.5；1；1.5；2；3；4；6；8；10；12；16；24小时的血液样品通过LC-MS/MS方法进行分析，定量限为0.5ng/ml，施用一片实施例3的利福昔明的200mg片剂和的200mg片剂的结果分别在表10和表11中显示。在表12和表13中报道了对应于施用两片实施例3的利福昔明的200mg片剂和的200mg片剂的值。

表10

n.e.=无法评价，由于其低于该方法的可测下限。

表11

n.e.=无法评价，由于其低于该方法的可测下限。

表12

n.e.=无法评价，由于其低于该方法的可测下限。

表13

n.e.=无法评价，由于其低于该方法的可测下限。

计算了以下的生物利用度参数以比较两种利福昔明制剂:最大被测血浆浓度(C_max)；从施用至得到C_max的时间(T_max)；从时间0小时(首个实验点)直至末次取样(施用后24小时)的浓度-时间曲线下面积AUC_(0-24h)。对于用两片如实施例3所述的利福昔明的200mg片剂和两片的200mg片剂，结果在表14和表15中显示。

表14

表15

实施例5

对狗进行的通过喷雾干燥制备的利福昔明的PK研究

四只雌性比格犬以单次口服施用方式接受依据实施例1制备的利福昔明，剂量为每千克动物体重100mg。

施用仅含利福昔明的硬明胶胶囊，对给药前和给药后观察的情况、体重和体格检查进行评价。

在给药的每一天中，在以下时间点从所有的动物收集血液样品:0(给药前)、每次给药后的1、2、4、6、8和24小时。

浓度-时间曲线确定了表16中报道的PK参数AUC_0-24h、C_max和T_max。

表16

实施例6

利福昔明在不同的pH的溶解度

该研究依据公认的原理进行以满足欧委会指令(Annex to EuropeanCommission Directive)92/69/EEC的附件和OECD化学物质测试指南(Guidelines for Testing of Chemicals)(EEC方法A6,OECD方法105)的要求。

在20°C通过摇瓶方法在纯水和pH 4和7的缓冲溶液中测定水溶解度。

将利福昔明-α的饱和溶液的等分试样适当稀释，然后通过高效液相色谱(HPLC)法分析。与利福昔明的标准溶液比较确定利福昔明的溶解度。

得到的结果在表17中报道。

表17