治疗慢性阻塞性肺疾病肺肾气阴两虚证的中药颗粒

摘要

本发明涉及治疗慢性阻塞性肺疾病肺肾气阴两虚证的中药颗粒，可有效解决缺乏针对COPD特点治疗慢性阻塞性肺疾病的用药问题，其解决的技术方案是，该中药颗粒是由重量计的：人参6-12g、黄精10-20g、麦冬10-20g、五味子9-15g、枸杞子9-15g、熟地10-20g、肉桂3-9g、浙贝母6-12g、地龙9-15g、丹皮9-15g、紫苏子9-15g、百部9-15g和陈皮9-15g制成，本发明原料丰富，补益肺肾、益气养阴，有效用于治疗慢性阻塞性肺疾病肺肾气阴两虚证，是治疗慢性阻塞性肺疾病中药上的创新。

说明书

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种治疗慢性阻塞性肺疾病肺肾气阴两虚证 的中药颗粒（又称益肺滋肾方，以下同）。

背景技术

慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease， COPD）是严重危害公众健康的重大疾病和常见多发病。目前，全球近 1亿人患有中度或重度COPD。2011年WHO调查报告指出，非传染性疾病 是世界上最大的死因，慢性呼吸系统疾病为第3位占12%，COPD已成为 全球死亡原因第4位，预计2020年将会成为全球致死原因的第3位和经 济负担的第5位。我国40岁以上人群COPD患病率高达8.2%，《柳叶刀》 报道，如果按照目前吸烟和固态燃料使用的状况，预计2003-2033年期 间，我国将有6500万人死于COPD，其死亡率约为日本的30倍。COPD疾 病负担沉重，2010年美国总计用于COPD的费用约499亿美元，其中直接 医疗费用将近295亿美元。我国7大城市每年用于COPD的直接医疗费用 人均11744元，平均年住院费用为7120元占60.6％，平均每次住院费用 为8755元，估算城镇每年用于COPD的直接医疗费用高达890亿人民币， 尚不包括直接非医疗费用和间接费用。COPD患者年直接费用约占家庭 收入的40％。可见，COPD是危害巨大的重大疑难疾病，具有患病率高 、死亡率高、致残率高、疾病负担沉重等特点，严重危害患者的健康 和生活质量。目前COPD的西医治疗多采用基于病情严重程度分级的治 疗策略，常用长效β2激动剂、糖皮质激素、抗胆碱能药物两种或三种 药物的联合治疗，效果并不理想，以至于近30年来，COPD的患病率持 续增高，致残率和由此而引起的疾病负担不断上升，成为重大的公共 卫生问题。因此，开展COPD防治研究具有重要意义。

近20余年来，临床研究文献系统评价结果显示，中医治疗COPD具有较 好的效果，一是在急性加重期方面，可以显著改善症状体征、缩短病 程、减少并发症、改善肺通气功能等；二是在COPD稳定期方面，表现 在改善症状、减少急性加重、提高运动能力和生活质量等。不容忽视 的是，目前高质量临床报道较少而多数证据的级别较低，缺乏针对CO PD特点治疗的方法/方药。近年来，我们提出“正虚积损”为COPD主要 病机观点，总结了病机规律，认为肺肾气阴两虚为COPD的主要病机之 一等，常兼有痰浊、血瘀，制定了以补益肺肾、益气养阴为主，佐以 化痰活血的益肺滋肾方，治疗COPD稳定期具有明显效果。因此，近一 步加强COPD稳定期的中药治疗与研究开发，对于提高临床防治水平和 能力具有重要意义。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种 治疗慢性阻塞性肺疾病肺肾气阴两虚证的中药颗粒，可有效解决缺乏 针对COPD特点治疗慢性阻塞性肺疾病的用药问题。

本发明解决的技术方案是，该中药颗粒是由重量计的：人参6-12g、黄 精10-20g、麦冬10-20g、五味子9-15g、枸杞子9-15g、熟地10-20g、 肉桂3-9g、浙贝母6-12g、地龙9-15g、丹皮9-15g 、紫苏子9-15g、 百部9-15g和陈皮9-15g制成。

所述的中药颗粒的制备方法为：先将人参粉碎成粉，备用；再将五味 子、肉桂粉碎，与陈皮、紫苏子合并，加五味子、肉桂、紫苏子和陈 皮6倍重量的水蒸馏5小时，收集挥发油，备用；然后将五味子、肉桂 、紫苏子、陈皮的药渣与人参粉、丹皮、浙贝母混合在一起，加五味 子、肉桂、陈皮、人参粉、丹皮、浙贝母、紫苏子6倍重量的质量浓度 为80%的乙醇，回流提取三次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压 回收乙醇，在50℃时，浓缩至相对密度为1.15～1.20的第一浸膏，备 用；质量浓度为80%的乙醇回流后的药渣，加入五味子、肉桂、陈皮、 人参粉、丹皮、浙贝母、紫苏子6倍重量的水，煎煮1小时，过滤，得 第一滤液，备用；黄精、麦冬、枸杞子、熟地、地龙、百部混合在一 起，每次加入黄精、麦冬、枸杞子、熟地、地龙、百部8倍重量的水， 煎煮三次，每次1小时，过滤，合并滤液，得第二滤液，备用；合并第 一滤液和第二滤液，在50℃时，减压浓缩至相对密度为1.15～1.20的 第二浸膏；合并第一浸膏和第二浸膏，加第一浸膏和第二浸膏重量的 20-40%的糊精，混匀，喷雾干燥成粉，备用；将上述收集的挥发油用 挥发油重量的10倍量β-环糊精研磨包合，减压干燥，粉碎成粉，与上 述第一浸膏和第二浸膏加入糊精喷雾干燥成的粉合并成药粉，加入药 粉重量10-15%的蜂蜜，混合均匀，制成颗粒，干燥，即得。

本发明原料丰富，制备方法科学、先进，其中药颗粒补益肺肾、益气 养阴，有效用于治疗慢性阻塞性肺疾病肺肾气阴两虚证，是治疗慢性 阻塞性肺疾病药物上的创新。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

实施例1

该中药颗粒是由重量计的：人参6g、黄精10g、麦冬10g、五味子9g、 枸杞子12g、熟地15g、肉桂3g、浙贝母9g、地龙12g、丹皮12g、紫苏 子9g、百部9g和陈皮9g制成。

实施例2

该中药颗粒是由重量计的：人参9g、黄精15g、麦冬15g、五味子12g、 枸杞子9g、熟地10g、肉桂6g、浙贝母6g、地龙9g、丹皮9g、紫苏子1 2g、百部12g和陈皮12g制成。

实施例3

该中药颗粒是由重量计的：人参12g、黄精20g、麦冬20g、五味子15g 、枸杞子15g、熟地20g、肉桂9g、浙贝母12g、地龙15g、丹皮15g、紫 苏子15g、百部15g和陈皮15g制成。

实施例1-3任一项中药颗粒的制备方法为：先将人参粉碎成粉，备用； 再将五味子、肉桂粉碎，与陈皮、紫苏子合并，加五味子、肉桂、紫 苏子和陈皮6倍重量的水蒸馏5小时，收集挥发油，备用；然后将五味 子、肉桂、紫苏子、陈皮的药渣与人参粉、丹皮、浙贝母混合在一起 ，加五味子、肉桂、陈皮、人参粉、丹皮、浙贝母、紫苏子6倍重量的 质量浓度为80%的乙醇，回流提取三次，每次1.5小时，过滤，合并滤 液，减压回收乙醇，在50℃时，浓缩至相对密度为1.15～1.20的第一 浸膏，备用；质量浓度为80%的乙醇回流后的药渣，加入五味子、肉桂 、陈皮、人参粉、丹皮、浙贝母、紫苏子6倍重量的水，煎煮1小时， 过滤，得第一滤液，备用；黄精、麦冬、枸杞子、熟地、地龙、百部 混合在一起，每次加入黄精、麦冬、枸杞子、熟地、地龙、百部8倍重 量的水，煎煮三次，每次1小时，过滤，合并滤液，得第二滤液，备用 ；合并第一滤液和第二滤液，在50℃时，减压浓缩至相对密度为1.15 ～1.20的第二浸膏；合并第一浸膏和第二浸膏，加第一浸膏和第二浸 膏重量的20-40%的糊精，混匀，喷雾干燥成粉，备用；将上述收集的 挥发油用挥发油重量的10倍量β-环糊精研磨包合，减压干燥，粉碎成 粉，与上述第一浸膏和第二浸膏加入糊精喷雾干燥成的粉合并成药粉 ，加入药粉重量10-15%的蜂蜜，混合均匀，制成颗粒，干燥，即得。

根据中医药学原理，肺肾气阴两虚、或兼痰瘀为慢性阻塞性肺病的主 要病机之一，以肺肾气阴两虚为本为主，治法当宜补益肺肾、益气养 阴为主兼以化痰活血。方中人参甘平而大补元气而生津，黄精甘平而 平补肺肾气阴而不偏，二味配伍以奏补益肺肾、益气养阴之效而共为 君药。麦冬润肺而滋阴，有助君药养阴之效，枸杞子、熟地滋补肾之 精气，五味子滋补肺肾而酸恋肺气，肉桂温肾助阳以合少火生气之义 并使所滋补肾之阴精化生肾气，麦冬、熟地、枸杞子、五味子、肉桂 之五味共辅人参、黄精而为臣。痰浊稽留不除而反阻肺伤气，肺肾气 虚而有助痰生，痰浊阻塞气机、气虚阴虚而行血乏力，常有血瘀之变 ，故正虚的同时常兼有痰瘀，故在补益肺肾基础上应化痰活血。浙贝 母化痰散结，丹皮活血化瘀，紫苏子降气化痰而止咳平喘，三味配伍 以奏化痰散结活血之效而也共为臣药。地龙通经活络而平喘，百部润 肺止咳，二味配伍有助丹皮的活血之效和苏子的止咳平喘之力，为方 之佐药。陈皮理气和胃，调理脾胃气机，以防补益诸药呆滞、祛邪诸 药伤胃之虑，为方之使药。

本发明治疗慢性阻塞性肺疾病的中药颗粒经试验，具有补益肺肾、益 气养阴，佐以化痰活血，有效用于治疗慢性阻塞性肺疾病，有关研究 资料如下：

一、本发明中药颗粒（益肺滋肾方）治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期大 鼠的疗效

1.材料与方法

1.1 动物：SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，2月龄，体重200 ± 20  g （豫XK2005-0001，河南省实验动物中心）。

1.2 细菌：肺炎克雷伯杆菌（菌株号：46114）购自中国医学细菌保 藏管理中心。感染前用无菌生理盐水配制成浓度为6×10⁸ 菌落形成 单位（colony forming unit，CFU）/ml的菌液（预实验确定）。

1.3 药物：氨茶碱片（0.1 g/片，山东新华制药股份有限公司）。 益肺滋肾方（人参、黄精、麦冬、熟地等，由河南中医学院第一附属 医院制剂室提供，按质量标准制备备用）。

1.4 试剂与仪器：红旗渠牌过滤嘴香烟（烤烟型，焦油量14 mg，烟 气烟碱量1.2 mg，烟气一氧化碳量15 mg），河南安阳卷烟厂）。非 束缚小动物肺功能测量仪（BUXCO，美国）；Hema-screen 18型全自 动血细胞分析仪（Hema-screen，意大利）；PM-10AD光学显微镜及照 相系统（Olympus，Japan）；Image-Pro? Plus 6.0专业图像分析 系统（Media Cybernetics, Inc.，USA）等。

1.5 模型制备：大鼠购回后适应性饲养7天。饲养条件为：室温（25  ± l） oC，相对湿度（50 ± 10）%，换气量10~15次/h，氨 浓度≤14 mg/m³，噪声≤60 db。灭菌饲料喂养，自由饮用灭菌水， 定期检查净化操作系统，保持环境安静。采用香烟熏吸联合细菌感染 法制作COPD稳定期模型：经鼻腔滴入肺炎克雷伯杆菌液（6×10⁸ CF U/ml）0.1 ml，每5天1次，持续8周。香烟燃烧时，将烟雾导入300  L的烟雾暴露箱内。第1~2周每次8支，2次/d；第3~12周每次15支，3次 /d；30 min/次，两次吸烟间隔3 h，持续12周。

1.6 分组与给药：大鼠40只随机分为对照组、模型组、益肺滋肾组（ 本发明）和氨茶碱组，每组10只。自第9周起，各组分别给予2 ml生 理盐水（对照组、模型组）、氨茶碱2.3 mg·kg^-1·d^-1（氨茶碱组） 或益肺滋肾方4.84 g·kg^-1·d^-1，0.5 g·ml^-1（益肺滋肾组）灌胃， 2次/d。灌胃时间为8~9时和17~18时，每周称量体重以调整用药量。给 药共12周，第20周取材。

1.7 取材与处理

1.7.1 一般情况：观察大鼠的精神状况、活动、皮毛、分泌物、进食 进水量变化、大小便，以及咳嗽、气喘、体重等症状体征的变化。

1.7.2 肺功能：于第0、4、8、12、16、20周，采用WBP系统（BUXCO ，美国）测量各组大鼠潮气量（tidal volume，TV）、呼气峰流速（ peek expiratory flow，PEF）、50%潮气量时呼气流速（expirato ry flow at 50% tidal volume，EF50）等。

1.7.3 外周血WBC计数和中性粒细胞比率：尾静脉取血0.1 ml，采用 全自动血细胞分析仪检测WBC计数（WBC，×10⁹/L）和中性粒细胞比率 （NEU，%）。

1.7.4 肺组织病理：于右下肺下叶最大径处取大约3 mm厚的组织块 ，4%多聚甲醛固定72 h，常规包埋、切片、HE染色。显微镜和Image -Pro Plus^? 6.0软件观察气管、支气管、肺泡病理变化并照相，检 测①支气管壁厚度；②支气管管腔狭窄程度积分；③肺泡数量和大小 ；④肺小动脉壁厚度。

1.7.5 支气管肺泡灌洗液制备及指标检测：麻醉下对大鼠进行肺泡灌 洗，获取BALF，回收率达80%以上。①取0.5 ml进行WBC计数；②将B ALF离心10 min，取少许细胞沉渣进行涂片、HE染色，对200个细胞进 行细胞分类，计算中性粒细胞比率（NEU，%）。

1.8 统计学方法：采用SPSS 13.0进行统计分析。组间比较采用单因 素方差分析的最小显著差法，结果以均数（）±标准差（s）表示。 显著性水准取α=0.05。

2. 结果

2.1 一般情况：模型组大鼠出现皮毛无光泽，形体消瘦，精神倦怠， 活动减少，进食量、饮水量减退，大便溏薄，垫料潮湿等情况。益肺 滋肾组和氨茶碱组大鼠上述情况均有不同程度的改善，其中以益肺滋 肾组尤为明显。

2.2 肺功能：第20周，模型组TV、PEF和EF50较对照组明显降低（P< 0.05），益肺滋肾组较模型组TV、PEF和EF50均明显升高（P<0.01）， 氨茶碱组PEF明显升高（P<0.05），TV和EF50有升高趋势（P>0.05）， 益肺滋肾组和氨茶碱组间无显著性统计学差异（P>0.05），见表1。

表1 各组大鼠肺功能TV、PEF和EF50的变化（）

2.3 外周血、BALF中WBC计数和中性粒细胞比率：与对照组比较，模 型组外周血中WBC计数较有升高趋势（P>0.05），BALF中显著升高（P <0.01），与模型组比较，益肺滋肾组和氨茶碱组WBC计数显著降低（ P<0.01，P<0.05），益肺滋肾组WBC计数较氨茶碱组明显降低（P<0.0 5），各组中性粒细胞比率无显著性统计学差异（P>0.05），见表2。

表2 外周血、BALF中WBC计数和中性粒细胞比率（）

2.4 肺脏病理：模型组肺脏组织可见明显的小气道炎症细胞浸润、黏 液分泌腺增大和杯状细胞增多，黏液分泌增加；支气管壁增厚、管腔 狭窄及肺小血管壁增厚等。益肺滋肾组、氨茶碱组肺组织上述病理改 变均不同程度减轻。对照组肺脏组织大致正常。

模型组支气管壁厚度、支气管狭窄程度积分、单位面积的肺泡数和肺 泡直径、肺小动脉壁厚度等均较对照组均明显增厚（P<0.01），益肺 滋肾组上述5个指标均较模型组显著降低（P<0.01），氨茶碱组支气管 壁厚度、支气管狭窄程度积分和肺小动脉壁厚度较模型组厚度明显降 低（P<0.05或P<0.01），益肺滋肾组肺泡直径较氨茶碱组明显减小（ P<0.01），见表3。

表3 各组大鼠支气管壁厚度（）

2.5 肺组织超微结构：对照组肺泡Ⅱ型上皮细胞基本正常。模型组肺 泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛消失，胞浆内板层小体减少，可见少量的线粒 体，线粒体嵴多数变短或消失嵴间腔扩大，粗 面内质网极少见；呼吸膜结构、层次和均匀不一。益肺滋肾组II型上 皮细胞微绒毛较丰富，板层小体增多，线粒体较少，线粒体嵴密集， 粗面内质网增加；呼吸膜结构、层次和有部分较均匀，有部分崎岖不 平。氨茶碱组II型上皮细胞微绒毛消失，板层小体消失，线粒体较少 ，线粒体嵴少数变短或消失，嵴间腔扩大，粗面内质网较少。

3 结  论

COPD患者肺脏虚损，易感外邪，导致病情反复并持续加重，加之病久 失治，痰热内结，痰瘀互阻，久则导致肺脾肾虚损，耗伤机体津液， 后期多见肺肾气阴两虚证等。李建生教授据此拟定了益肺滋肾方，课 题组前期临床试验（“十一五”科技支撑计划课题）证明，益肺滋肾 方能够改善COPD稳定期患者临床症状，减缓肺功能下降，提高运动能 力和生活质量等，减少急性加重次数。

大部分稳定期COPD患者均存在不同程度的营养不良，伴有恶病质者情 况尤为突出，与气道和全身炎症反应、肺功能等状况密切相关；改善 患者营养状况可改善其肺功能，提高生活质量。本组资料表明，COPD 大鼠多表现为精神倦怠，皮毛无光泽，形体消瘦，活动减少，进食进 水量减少，大便溏薄，小便增多等类似肺、脾、肾虚损的证候。益肺 滋肾方可以在一定程度上改善上述症状、体征，增加体重，改善营养 状况。

COPD肺功能改变以小气道阻力增加和肺顺应性下降为主。肺功能检查 是确诊气流受限的金标准。本研究采用无创的WBP系统评估大鼠的肺功 能，观察V_T和反应气流受限程度的PEF、EF50，发现COPD大鼠肺功能较 正常大鼠显著降低，益肺滋肾方可显著改善气流受限，且疗效明显优 于氨茶碱。

慢性支气管炎、肺气肿、小气道和小动脉重塑等是COPD的主要病理表 现。本组资料显示，COPD大鼠表现出支气管壁增厚、支气管狭窄、肺 泡破裂融合、肺部小动脉壁增厚，以及肺组织超微结构的明显损害。 益肺滋肾方和氨茶碱均可明显改善上述病理变化，其中益肺滋肾方减 轻肺组织炎症细胞渗出、改善肺泡破裂融合方面优于氨茶碱，可明显 减轻肺部炎症损伤和肺气肿的发生。

综上所述，益肺滋肾方对COPD稳定期具有良好的疗效，表现为改善肺 功能，减轻肺组织损伤，疗效优于氨茶碱。

二、益肺滋肾方对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠炎症反应的影响

1 材料与方法

1.1 动物和细菌及药品：同上。

1.2 试剂与仪器：IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、可溶性TN F受体（soluble TNF receptor， sTNFR）酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA）试剂盒和免疫组化抗体（武汉博士德生物工程有限公司，中 国，武汉）。其他同上。

1.3 模型制备与分组：同上。

1.4 取材与处理

1.4.1 支气管肺泡灌洗液制备及指标检测：取样本方法同1.7.5。采 用ELISA法测定上清液中TNF-α、IL-8、IL-10水平。

1.4.2 外周血细胞因子：腹主动脉取血，离心制备血清。采用ELISA 法测定血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR（ng/L） 水平。

1.4.3 肺组织细胞因子：按1.7.4制备肺组织切片，采用免疫组织化 学SP法检测IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR水平，应用 IPP 6.0进行数据采集，结果以积分光密度（integrated optical  density，IOD）表示。

1.5 统计学方法：采用SPSS 13.0进行统计分析。组间比较采用单因 素方差分析的最小显著差法，结果以均数（）±标准差（s）表示。 显著性水准取α=0.05。

2 结果

2.1 BALF中IL-8、IL-10和TNF-α的变化：模型组IL-8、IL-10和TNF -α均较模型组显著升高（P<0.01），益肺滋肾组和氨茶碱组均较模型 组显著降低（P<0.01），益肺滋肾组较氨茶碱组降低显著（P<0.01） ，见表4。

表4 各组大鼠BALF中IL-8、IL-10和TNF-α的变化（）

2.2 血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR的变化：模 型组血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR水平均较对 照组显著升高（P<0.01），益肺滋肾组和氨茶碱组均较模型组明显降 低（P<0.01），益肺滋肾组较氨茶碱组显著降低（P<0.01），见表5。

表5 各组大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR的 变化（）

2.3 肺组织IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR的变化：模 型组肺组织IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR水平均较对 照组显著升高（P<0.01），益肺滋肾组上述细胞因子表达均较模型组 明显降低（P<0.05，P<0.01），氨茶碱组上述细胞因子除IL-10外均显 著降低（P<0.05，P<0.01），见表6。

表6 各组大鼠肺组织IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和sTNFR的 变化（）

3 结  论

气道慢性炎症是COPD发病过程中的一个关键环节，与其相关的几乎所 有的结构和功能的损害均为气道和肺组织炎症的结果。COPD稳定期患 者血液、痰液、BALF和支气管黏膜组织等气道细胞学改变以中性粒细 胞、淋巴细胞和肺泡巨噬细胞为主。这些炎症细胞被激活后，释放多 种细胞因子，主要有IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α等。IL-8能 趋化多种细胞，尤其中性粒细胞到达炎症部位，并能提供中性粒细胞 在炎症部位的结合能力，它是气道炎症放大效应中重要的一环，在炎 症反应及变态反应中具有重要的调节作用。TNF-α是一种多功能的细 胞因子，可以激活WBC，尤其是巨噬细胞和中性粒细胞，增加其细胞毒 性，释放更多IL-6、IL-8和其他炎性细胞趋化因子。IL-10是一种以抑 炎作用为主的细胞因子，它可以抑制巨噬细胞和单核细胞产生致炎介 质并能抑制TNF-α、IL-1、IL-2等多种细胞因子的合成及活性。IL-1 β、血清可溶性TNF受体等细胞因子都参与了COPD发病过程中的炎症反 应。本研究资料表明，IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10等炎症细胞因子参 与了COPD的病理进程。与模型组比较，益肺滋肾方和氨茶碱均可以显 著降低血清、BALF和肺组织中上述细胞因子的水平，益肺滋肾方在降 低血清和BALF中细胞因子水平方面疗效优于氨茶碱，结果提示益肺滋 肾方治疗COPD的疗效机制可能与调节炎性细胞因子水平有关，本发明 原料丰富，制备方法科学、先进，其中药颗粒补益肺肾、益气养阴， 有效用于治疗慢性阻塞性肺疾病肺肾气阴两虚证，是治疗慢性阻塞性 肺疾病药物上的创新。