N-取代-4-(7-氯喹啉-4-氨基)-苯甲酰胺衍生物的制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的制备方法，a)以对氨基苯甲酸和4,7-二氯喹啉为原料回流反应，得到Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸；b)然后和氯化亚砜回流反应，得到4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯；c）加入2-（5-氨基-2-甲基苯胺）-4-（4-吡啶）嘧啶反应完全后，重结晶得N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物。

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的4-取代-7氯喹啉衍生物的制备方法，具体来讲是一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的制备方法和应用。 

背景技术

4-（7-氯喹啉-4-氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺，该化合物的分子式是C₃₂H₂₄ClN₇O，结构式为： 

蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的4-取代-7-氯喹啉衍生物具有治疗包括心血管疾病、代谢病、过敏、癌症、及与激素有关的疾病。大量临床试验表明该类化合物同时具有蛋白激酶抑制活性和组蛋白去乙酰化酶抑制活性，可以用于治疗与蛋白激酶活性异常或组蛋白去乙酰化酶活性异常相关的疾病，包括炎症、自身免疫性疾病、癌症、神经系统疾病和神经退化性疾病、心血管疾病、代谢病、过敏、哮喘、以及与激素相关的疾病。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯 甲酰胺衍生物的制备方法与应用。本发明N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物可以作为一种潜在的能够治疗癌症的药物。 

为了达到上述目的，本发明的技术方案是： 

一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的制备方法，包括如下步骤：a)以对氨基苯甲酸和4,7-二氯喹啉为原料回流反应，得到黄色固体4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸；b)4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸和氯化亚砜回流反应，得到4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯；c）4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯中，加入2-（5-氨基-2-甲基苯胺）-4-（4-吡啶）嘧啶反应完全后，重结晶得目标化合物N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物。 

所述的制备方法，优选包括如下步骤： 

a)以化合物Ⅱ对氨基苯甲酸（1.0eq）为原料，溶于有机溶剂A中，加入化合物Ⅲ4,7-二氯喹啉（1.0eq）回流反应4-6小时，TLC检测反应完全后，将有机溶剂A减压蒸干，用30mL二氯甲烷洗涤2次，抽滤，得到黄色固体化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸,见反应方程式（1）: 

b)化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸（1.0eq）溶于氯化亚砜中，回流2-4小时，减压蒸馏除去氯化亚砜，得到化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯。见反应方程式（2）: 

c)化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯（1.0eq）溶于有机溶剂A中，加入化合物VI2-（5-氨基-2-甲基苯胺）-4-（4-吡啶）嘧啶（1.0eq），搅拌半小时，冰浴下滴加含有三乙胺（2.0eq）的有机溶剂A，25℃-50℃反应6-8小时，TLC检测，反应完全后，抽滤除去大部分盐，减压蒸馏，固体物质用有机溶剂B溶解,加入水，萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得粗品，用有机溶剂B重结晶得目标化合物IN-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物。见反应方程式（3）: 

所述的有机溶剂A采用异丙醇、乙醇、四氢呋喃或吡啶中的一种；所述的含有三乙胺的有机溶剂A是指含有三乙胺的异丙醇、乙醇、四氢呋喃或吡啶中的一种。 

所述的有机溶剂B采用二氯甲烷，石油醚，乙酸乙酯或氯仿中的一种。 

所述的步骤a)中对氨基苯甲酸和4,7-二氯喹啉的用量比为 1:1―1.5（摩尔比）。 

所述的步骤b）中4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸和氯化亚砜的用量比为1:5―10。 

所述的步骤c）中4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯和2-（5-氨基-2-甲基苯胺）-4-（4-吡啶）嘧啶的用量比为1:1―1.5。 

所述的有机溶剂A的用量为10mL―40mL；所述的氯化亚砜的用量为5.35g―10.47g；所述的三乙胺加入量为1.64―1.74g，含有三乙胺的有机溶剂A的用量为5mL；所述的有机溶剂B的用量为50mL。 

一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的应用，其特征在于：所述的N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够治疗包括心血管疾病、代谢病、过敏、癌症、及与激素有关的疾病。 

本发明的有益效果是：N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物可以作为一种潜在的能够治疗癌症的药物。 

具体实施方式

实施例1 

本实施例的一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 

a)以10.0mmol(1.36g)化合物Ⅱ对氨基苯甲酸（1.0eq）为原料，溶于10ml异丙醇中，加入10.0mmol(1.96g)化合物Ⅲ4,7-二氯喹啉（1.0eq）回流反应5小时，TLC检测反应完全后，将异丙醇减压蒸干，用30mL二氯甲烷洗涤2次，抽滤，得到黄色固体化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸2.68g,产率为90%。见反应方程式（1）： 

b)采用9.0mmol(2.68g)化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸（1.0eq）溶于45.0mmol（5.35g）氯化亚砜（5.0eq）中，回流3小时，减压蒸馏除去氯化亚砜，得到化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯2.71g，产率为95%。见反应方程式（2）； 

c)8.5mmol（2.71g）化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯（1.0eq）溶于40ml四氢呋喃中，加入8.5mmol(2.35g)化合物VI2-（5-氨基-2-甲基苯胺）-4-（4-吡啶）嘧啶（1.0eq），搅拌半小时，冰浴下滴加三乙胺的四氢呋喃溶液[5ml四氢呋喃中含三乙胺（2.0eq）17mmol]，25℃-50℃反应6-8小时，TLC检测，反应完全后，抽滤除去生成的盐，减压蒸馏，固体物质用50ml乙酸乙酯溶解，加入80ml水，萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得粗品，用二氯甲烷/甲醇重结晶得目标化合物IN-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物2.61g,产率55%，Mass:557.2。见反应方程式（3）: 

4-（7-氯喹啉-4-氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺的核磁数据：1H NMR(400M Hz,DMSO-d6)：δ2.25(s，3H)，7.01(d，J=7.00Hz，1H)，7.24(d，J=8.54Hz，1H)，7.47(d,J=5.26Hz,1H)，7.51(dd，J=8.04Hz，2.04Hz，1H)，7.64(d，J=7.76Hz，1H)，7.65(d，J=8.76Hz，2H)，7.93(dd，J=9.04Hz，2.00Hz，1H)，8.12（d，J=2.24Hz，1H)，8.14（d，J=2.04Hz，1H)，8.18（d，J=8.54Hz，2H)，8.55（d，J=5.26Hz，1H)，8.62（dd，J=6.14Hz,2.00Hz，1H)，8.63（d，J=6.8Hz，1H)，8.76（d，J=4.76Hz，1H)，8.79（d，J=9.04Hz，1H)，9.06(s，1H),9.34(s，1H),10.36(s，1H),11.14(s，1H)。13C NMR(100M Hz,DMSO-d6):18.11，101.36，108.11，116.73，117.36，117.78，119.96,124.79,125.06,126.37,128.14,128.27,129.92,130.58,133.19,134.04,136.25,137.52,138.23,139.14,139.59,140.35,144.47,147.57,150.63,155.00,158.68,159.02,160.01,161.58,161.64,164.88.ESI-MS,m/z558.2[M-H]⁺。 

所述的N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够治疗包括心血管疾病、代谢病、过敏、癌症、及与激素有关的疾病。 

N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的抗肿瘤活性： 

本发明对N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的抗肿瘤活性进行了多次试验，用MTT法测定，发现其具有明显的抗肿瘤活性，所述的肿瘤细胞包括人小细胞肺癌NCI-H446细胞、人肺癌细胞A549细胞、人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌细胞SMMC-7721细胞。 

选择部分抗肿瘤的试验研究结果进行举例。 

4-（7-氯喹啉-4-氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺 

a)人小细胞肺癌NCI-H446细胞。用MTT法测定4-（7-氯喹啉-4-氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺的抗肿瘤活性结果显示：该化合物对人小细胞肺癌NCI-H446细胞的增殖在8―50μM间具有显著抑制作用，且呈明显的浓度依赖性，其72h后的IC50也低于15μM。 

b)人肺癌细胞A549细胞。实验结果显示：在4μM及其以上浓度时，4-（7-氯喹啉-4-氨基）{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺对人肺癌细胞A549细胞的抑制并没有呈明显的浓度依赖性，其72h后的IC50也低于12μM。 

c)人宫颈癌HeLa细胞。从细胞相对增值率可以看出，在32μM浓度下，4-（7-氯喹啉-4-氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用最明显，尤其是在作用了72小时以后，这种作用体现的更加明显。 

d)人肝癌细胞SMMC-7721细胞。用MTT法测定4-（7-氯喹啉-4- 氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺的抗肿瘤活性结果显示：该化合物对人肝癌细胞SMMC-7721细胞的增殖在4―50μM间具有显著抑制作用，且呈明显的浓度依赖性，其72h后的IC50也低于10μM。 

实施例2 

本实施例的一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 

a)以10.0mmol(1.36g)化合物Ⅱ对氨基苯甲酸（1.0eq）为原料，溶于20ml异丙醇，加入15.0mmol(2.97g)化合物Ⅲ4,7-二氯喹啉（1.5eq）回流反应4小时，TLC检测反应完全后，将异丙醇减压蒸干，用30mL二氯甲烷洗涤2次，抽滤，得到黄色固体化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸2.62g,产率为88%；见反应方程式（1）； 

b)采用8.8mmol(2.62g)化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸（1.0eq）溶于88mmol（10.47g）氯化亚砜（10eq）中，回流2小时，减压蒸馏除去氯化亚砜，得到化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯2.57g，产率92%（换一个值和产率）。见反应方程式（2）； 

c)8.1mmol（2.57g）化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯（1.0eq）溶于40ml异丙醇，加入12.2mmol(3.37g)化合物VI2-（5-氨基-2-甲基苯胺）-4-（4-吡啶）嘧啶（1.5eq），搅拌半小时，冰浴下滴加三乙胺吡啶溶液[三乙胺（2.0eq）16.2mmol溶于5ml吡啶]，25℃-50℃反应6-8小时，TLC检测，反应完全后，抽滤除去大部分盐，减压蒸馏，固体物质用50ml石油醚有机溶剂B溶解，加入80ml水，萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得粗品，用乙酸乙酯/甲醇重结晶得目标化合物I N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物2.26g,产率50%。 

4-（7-氯喹啉-4-氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺的核磁数据与实施例1相同。 

实施例3 

本实施例的一种N-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 

a)以10mmol(1.36g)化合物Ⅱ对氨基苯甲酸（1.0eq）为原料， 溶于10ml吡啶四氢呋喃中，加入12mmol(2.38g)化合物Ⅲ4,7-二氯喹啉（1.2eq）回流反应4小时，TLC检测反应完全后，将四氢呋喃减压蒸干，用30mL二氯甲烷洗涤2次，抽滤，得到黄色固体化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸2.74g,产率为92%。见反应方程式（1）： 

b)采用9.2mmol(2.74g)化合物Ⅳ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酸（1.0eq）溶于64.4mmol（7.66g）氯化亚砜中（7eq），回流2小时，减压蒸馏除去氯化亚砜，得到化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯2.74g，产率94%。见反应方程式（2）： 

c)8.6mmol（2.74g）化合物Ⅴ4-（7-氯喹啉-4-氨基）苯甲酰氯（1.0eq）溶于40ml四氢呋喃，加入10.3mmol(2.84g)化合物VI2-（5-氨基-2-甲基苯胺）-4-（4-吡啶）嘧啶（1.2eq），搅拌半小时，冰浴下滴加含有40ml乙醇三乙胺四氢呋喃溶液（2.0eq）17.2mmol，25℃-50℃反应6-8小时，TLC检测，反应完全后，抽滤除去大部分盐，减压蒸馏，固体物质用50ml二氯甲烷有机溶剂B溶解，加入80ml 水，萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得粗品，用氯仿/甲醇重结晶得目标化合物IN-取代-4-（7-氯喹啉-4-氨基）-苯甲酰胺衍生物2.88g,产率60%。 

4-（7-氯喹啉-4-氨基）-N-{4-甲基-3-[4-（4-吡啶）嘧啶-2-氨基]苯基}苯甲酰胺的核磁数据与实施例1相同。