脂水两亲性香豆素染料及其制备方法与在制备光动力治疗光敏药物中的应用

摘要

本发明属于光动力治疗领域，特别是涉及一类脂水两亲性香豆素染料及其制备方法与在光动力治疗中的用途。本发明中的脂水两亲性的香豆素染料结构简单、分子量小，具有确定的化学结构，具有脂水两亲的特点，易于制备、纯化和进一步修饰，满足临床用药的基本要求。本发明的脂水两亲性的香豆素染料在400～650nm波段范围的光源和650～1000波段范围的超快激光照射下都能产生单线态氧和超氧负离子，在制备光动力药物方面具有很好的应用前景。

说明书

技术领域

本发明属于光动力治疗领域，特别是涉及一类脂水两亲性香豆素染料及其 制备方法与在制备单光子和双光子光动力治疗光敏药物中的应用。

背景技术

光动力治疗是一种新兴的治疗肿瘤和其它组织病变的方法，其治疗原理是 通过在系统或局部应用光敏染料后，用特定波长的激光照射病变部位，在生物 组织中氧的参与下发生光化学反应产生单线态氧和(或)活性氧自由基，破坏 组织和细胞中的多种生物大分子，最终引起照射处细胞死亡，从而达到治疗目 的。根据对光敏染料激发方式的不同，光动力治疗可以分为单光子光动力治疗 和双光子光动力治疗。对同一个光敏剂，使用双光子光动力治疗的光源波长通 常是使用单光子光动力治疗的光源波长的两倍，从而可以提供更深的穿透深 度，有利于对实体肿瘤和其他非表皮病变的治疗。

香豆素衍生物用于光动力治疗已经有很长的历史，如8-甲氧基补骨脂素(一 种香豆素衍生物)在长波紫外线照射下用于治疗白癜风已有数十年时间(8-甲 氧基补骨脂素用于治疗白癜风的临床与实验研究，JOURNAL OF INVESTIGATIVE  DERMATOLOGY，vol.20，299-314)。随后研究表明多种呋喃香豆素衍生物可以 用于光动力治疗，并把治疗范围扩大到银屑病、白血病等。然而使用长波紫外 线照射具有明显的缺陷，首先大剂量紫外线照射会增加皮肤癌发生的几率，其 次长波紫外线对组织的穿透深度不足1mm，只能用于体表病变的治疗，而目前 临床使用的呋喃香豆素衍生物的双光子吸收截面很小，无法有效使用双光子光 动力治疗技术来增加穿透深度。

现有技术已经公开了一系列的新型香豆素染料，例如中国发明专利ZL 200310122499.5和ZL200510135231.4；中国专利申请公开号CN101759815A； 以及李雪等人的题为“具有大双光子吸收截面的香豆素衍生物”(“Coumarin  derivatives with enhanced two-photon absorption cross-sections”，Dyes  and Pigments，2007，vol.74，pp108-112)的文章。这些染料具有分子结构 简单、容易合成、在可见光波段(400～650nm)具有强吸收、在近红外波段 (650～1000nm)双光子吸收截面大、活性氧量子产率高的特点，在双光子光 动力治疗领域具有很大的应用潜力。然而，这些染料的水溶性很差，不能直接 应用于双光子光动力治疗。因此，需要对上述染料进行化学修饰使其具有一定 的水溶性并使其具有合理的脂水分配比。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题在于提供脂水两亲性香豆素染料；这些染 料分子结构中均含有香豆素基团和水溶性基团，具有水溶性好、分子结构简单、 且容易合成的特点。

本发明要解决的第二个技术问题在于提供脂水两亲性香豆素染料的合成 方法；该方法具有操作简单、可放量合成、产品产率高、纯度高等特点。

本发明要解决的第三个技术问题在于提供脂水两亲性香豆素染料在制备 单光子光动力治疗光敏药物中的应用；这类染料在400～650nm波长范围内具 有较强的吸收，在400～650nm波长范围内的光源照射下能快速的产生单线态 氧、超氧自由基等活性氧物种，能作为光敏药物用于单光子光动力治疗。

本发明要解决的第四个技术问题在于提供脂水两亲性香豆素染料在制备 双光子光动力治疗光敏药物中的应用，这些染料在650～1000nm波长范围内具 有较大的双光子吸收截面，在650～1000nm的超快激光照射下能快速的产生单 线态氧、超氧自由基等活性氧物种，能作为光敏药物用于双光子光动力治疗。

为解决上述第一个技术问题，本发明脂水两亲性香豆素染料是具有如下式 M1、M2、M3、M4、M5或M6分子结构的化合物：

式中：

A₁、A₂为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、 乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、-NR₁R₂、 -NR₃-(C₂H₄O)_m-R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_p-R₄；

A₁、A₂可以是相同或不同的取代基团；但A₁或A₂中至少有一个取代基选自 -NR₃-(C₂H₄O)_m-R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_p-R₄；

A₃为-NR₃-(C₂H₄O)_m-R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_p-R₄；

A₄为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙 氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、二甲胺基、二乙 胺基、二丙胺基或二丁胺基；

为环丁酮、环戊酮、环己酮、环庚酮或环辛酮；

所述的-NR₁R₂和-NR₃-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₁、R₂为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基或叔丁基；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、 叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基；所述-(C₂H₄O)_m-R₄中， m＝3、4、5、6、7或8；

R₁、R₂可以是相同或不同的取代基团；

所述的-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_p-R₄中n＝0、1、2、3或4；p＝2、3、4、5、6或7； R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基。

为解决上述第二个技术问题，本发明的脂水两亲性的香豆素染料的合成方 法如下：

具有所述结构式M1的脂水两亲性香豆素染料的制备方法，包括如下步骤：

1)合成E，反应方程式如下：

式中：x＝2、3、4、5、6或7；R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基；

具体步骤：

参照文献，即Arthur Snow等人的题为“使用对甲苯磺酰氯将羟基转变为 硫醇基”(“Conversion of alcohols to thiols via tosylate intermediates”， Synthesis，2003，vol.4，pp509-512)文章中的合成方法，向三口反应器中 加入NaOH和质量为其5～20倍的水，搅拌均匀；然后，按PEG与NaOH摩尔比 1∶1～5的比例向上述NaOH水溶液中加入PEG和四氢呋喃(以后简称：THF) 的混合溶液，所述PEG∶THF体积比为1∶1～10；用冰浴控温，在0～5℃下搅 拌0.5～2小时并通氮气以充分除氧后，将摩尔量是PEG量0.5～1倍的对甲苯 磺酰氯溶于体积为PEG体积1～5倍的THF中，将该THF溶液缓慢滴加到上述 已加入了PEG、THF和NaOH水溶液的三口反应容器中；在0～10℃下反应2～ 6小时后，撤去冰浴，室温下继续反应4～12小时；反应液用乙醚萃取，乙醚 萃取液用水洗涤至中性，经干燥、过滤、旋蒸除去乙醚得到相应的连接有PEG 基团的对甲苯磺酸酯(简称：E)，备用；

2)合成Q2，反应方程式如下：

式中：

B₁为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_n-OH；

B₂为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄；

所述的-NR₅-C₂H₄OH、-(CH₂)_n-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄中， x＝2、3、4、5、6或7；n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异 丙基，m＝3、4、5、6、7或8；

具体步骤如下：

将1～30毫摩尔取代基团B₁位于香豆素环的6位或7位的香豆素衍生物 C2溶于质量为其10～30倍的THF中，然后缓缓加入摩尔量是C2的1～5倍的 碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛下搅拌0.5～2小时后，加热回流1～5小时， 得到中间反应液；将摩尔量是C2的1～5倍的E缓慢滴加入前述中间反应液中， 继续加热回流12～48小时，冷却，将最终反应液用酸中和至中性，用二氯甲 烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸去除二氯甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯 得到油状液体，即中间产物Q2；

3)合成Q3，反应方程式如下：

式中：

B₃为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_n-OH；

B₄为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄；

所述的-NR₅-C₂H₄OH、-(CH₂)_n-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄中， x＝2、3、4、5、6或7；n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异 丙基，m＝3、4、5、6、7或8；

具体步骤：将1～30毫摩尔D1，溶于质量为其10～30倍的THF中，然后 加入摩尔量是D1的1～5倍的碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛下搅拌0.5～ 2小时后，加热回流1～5小时，得到中间反应液；将摩尔量是D1的1～5倍的 中间产物E缓慢滴加入中间反应液中，继续加热回流12～48小时，冷却，将 最终反应液用酸中和至中性，用二氯甲烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸除去二氯 甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯得到黄色油状液体，即中间产物Q3；

5)合成M1，反应方程式如下：

式中：

B₅、B₆为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、 乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基或-NR₁R₂；所述 的-NR₁R₂中，R₁、R₂为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；

具体步骤如下：

将步骤2)制得的Q2和步骤3)制得的Q3按摩尔比为1∶1的比例加入到反 应器中，然后用摩尔比是Q2的100～500倍的溶剂将其溶解，加入摩尔比是Q2 的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流4～24小时，冷却后旋蒸去除溶剂，以 柱色谱分离得目标染料M1；或

将现有技术已经存在的Q4和步骤3)制得的Q3按摩尔比为1∶1的比例加入 到反应器中，然后用摩尔比是Q4的100～500倍的溶剂将其溶解，加入摩尔比 是Q4的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流4～24小时，冷却后旋蒸去除溶剂， 以柱色谱分离得目标染料M1；或

将步骤2)制得的Q2和现有技术已经存在的Q5按摩尔比为1∶1的比例加入 到反应器中，然后用摩尔比是Q2的100～500倍的溶剂将其溶解，加入摩尔比 是Q2的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流4～24小时，冷却后旋蒸去除溶剂， 以柱色谱分离得目标染料M1。

具有所述结构式M2的脂水两亲性香豆素染料的制备方法，包括如下步骤：

1)合成E，反应方程式如下：

式中：x＝2、3、4、5、6或7；R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基；

2)合成Q2，反应方程式如下：

式中：

B₁为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_n-OH；

B₂为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄；所述的-NR₅-C₂H₄OH、 -(CH₂)_n-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄中，x＝2、3、4、5、6或7； n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁 基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或 -(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基，m＝3、4、5、 6、7或8；

具体步骤如下：

将1～30毫摩尔取代基团B₁位于香豆素环的6位或7位的香豆素衍生物 C2溶于质量为其10～30倍的THF中，然后缓缓加入摩尔量是C2的1～5倍的 碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛下搅拌0.5～2小时后，加热回流1～5小时， 得到中间反应液；将摩尔量是C2的1～5倍的E缓慢滴加入前述中间反应液中， 继续加热回流12～48小时，冷却，将最终反应液用酸中和至中性，用二氯甲 烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸去除二氯甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯 得到油状液体，即中间产物Q2；

4)合成M2，反应方程式如下：

式中：

A₄为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙 氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、二甲胺基、二乙 胺基或二丙胺基二丁胺基；

具体步骤如下：

将步骤2)制得的Q2和对苯二甲醛按摩尔比为1∶1～5的比例加入到反应器 中，然后用摩尔比是Q2的100～500倍的溶剂将其溶解，加入摩尔比是Q2的 0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流4～24小时，冷却后去除溶剂，以柱色谱分 离得中间产物F1；取F1溶于摩尔比是F1的100～500倍的溶剂中，再加入摩 尔比是F1的10～200倍的氢氧化钠水溶液，室温下滴加与F1等摩尔量的Q6， 回流1-10小时；反应结束后冷却至室温，取有机相旋蒸去除溶剂，经柱色谱 分离得目标染料M2。

具有所述结构式M3的脂水两亲性香豆素染料的制备方法，包括如下步骤：

1)合成E，反应方程式如下：

式中：x＝2、3、4、5、6或7；R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基；

2)合成Q1，反应方程式如下：

式中：

B₁为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_n-OH；

B₂为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄；

所述的-NR₅-C₂H₄OH、-(CH₂)_n-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR_m中， x＝2、3、4、5、6或7；n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异 丙基，m＝3、4、5、6、7或8；

具体步骤如下：

将1～30毫摩尔取代基团B₁位于香豆素环的6位或7位的香豆素衍生物 C1溶于质量为其10～30倍的THF中，然后缓缓加入摩尔量是C1的1～5倍的 碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛下搅拌0.5～2小时后，加热回流1～5小时， 得到中间反应液；将摩尔量是C1的1～5倍的E缓慢滴加入前述中间反应液中， 继续加热回流12～48小时，冷却，将最终反应液用酸中和至中性，用二氯甲 烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸去除二氯甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯 得到油状液体，即中间产物Q1；

3)合成Q3，反应方程式如下：

式中：

B₃为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_n-OH；

B₄为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄；

所述的-NR₅-C₂H₄OH、-(CH₂)_n-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄中， x＝2、3、4、5、6或7；n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异 丙基，m＝3、4、5、6、7或8；

具体步骤：将1～30毫摩尔苯甲醛衍生物D1，溶于质量为其10～30倍的 THF中，然后加入摩尔量是D1的1～5倍的碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛 下搅拌0.5～2小时后，加热回流1～5小时，得到中间反应液；将摩尔量是D1 的1～5倍的中间产物E缓慢滴加入中间反应液中，继续加热回流12～48小时， 冷却，将最终反应液用酸中和至中性，用二氯甲烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸 除去二氯甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯得到黄色油状液体，即中间产 物Q3；

4)合成M3，反应方程式如下：

式中：

为环丁酮、环戊酮、环己酮、环庚酮或环辛酮；

B₅、B₆为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、 乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基或-NR₁R₂；所述 的-NR₁R₂中，R₁、R₂为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基； R₁、R₂可以是相同或不同的取代基团；

具体步骤如下：

将环烷烃酮和步骤3)制得的Q3按摩尔比1～6∶1的比例加入到反应容器 中，然后加入摩尔比是所述环烷烃酮50～500倍溶剂，再加入摩尔比是所述环 烷烃酮0.01～0.40倍的碱性催化剂，在25℃～80℃条件下反应5～40小时， 去除溶剂，然后采用硅胶柱分离得到中间产物F2；将F2与Q1或Q7按摩尔比 为1∶1的比例加入到反应器中，然后用摩尔比是F2的100～500倍的溶剂将其 溶解，加入摩尔比是F2的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流0.5～6小时， 冷却后去除溶剂，采用硅胶柱分离得到目标染料M3；或

将环烷烃酮和现有技术已经存在的Q5按摩尔比1～6∶1的比例加入到反应 容器中，然后加入摩尔比是所述环烷烃酮50～500倍溶剂，再加入摩尔比是所 述环烷烃酮0.01～0.40倍的碱性催化剂，在25℃～80℃条件下反应5～40小 时，去除溶剂，然后采用硅胶柱分离得到中间产物F3；将F3与Q1按摩尔比为 1∶1的比例加入到反应器中，然后用摩尔比是F3的100～500倍的溶剂将其溶 解，加入摩尔比是F3的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流0.5～6小时，冷 却后去除溶剂，采用硅胶柱分离得到目标染料M3。

具有所述结构式M4的脂水两亲性香豆素染料的制备方法，包括如下步骤：

1)合成E，反应方程式如下：

式中：x＝2、3、4、5、6或7；R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基；

2)合成Q1，反应方程式如下：

式中：

B₁为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_m-OH；

B₂为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_x-O-(C₂H₄O)_xR₄；

所述的-NR₅-C₂H₄OH、-(CH₂)_m-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_m-O-(C₂H₄O)_xR₄中， x＝2、3、4、5、6或7；n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异 丙基，m＝3、4、5、6、7或8；

具体步骤如下：

将1～30毫摩尔C1溶于质量为其10～30倍的THF中，然后缓缓加入摩尔 量是C1的1～5倍的碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛下搅拌0.5～2小时后， 加热回流1～5小时，得到中间反应液；将摩尔量是C1的1～5倍的E缓慢滴 加入前述中间反应液中，继续加热回流12～48小时，冷却，将最终反应液用 酸中和至中性，用二氯甲烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸去除二氯甲烷后得到粗 产品，用色谱柱分离提纯得到油状液体，即中间产物Q1；

3)合成M4，反应方程式如下：

式中：

为环丁酮、环戊酮、环己酮、环庚酮或环辛酮；

B₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙 氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基或-NR₁R₂；

R₁、R₂为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；

具体步骤如下：

将环烷烃酮和步骤2)制得的Q1按摩尔比1～6∶1的比例加入到反应容器 中，然后加入摩尔比是所述环烷烃酮50～500倍溶剂，再加入摩尔比是所述环 烷烃酮0.01～0.40倍的碱性催化剂，在25℃～80℃条件下反应5～40小时， 去除溶剂，然后采用硅胶柱分离得到中间产物F4；将F4与Q1或Q7按摩尔比 为1∶1的比例加入到反应器中，然后用摩尔比是F4的100～500倍的溶剂将其 溶解，加入摩尔比是F4的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流0.5～6小时， 冷却后去除溶剂，采用硅胶柱分离得到目标染料M4。

具有所述结构式M5的脂水两亲性香豆素染料的制备方法，包括如下步骤：

1)合成E，反应方程式如下：

式中：x＝2、3、4、5、6或7；R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基；

2)合成Q1，反应方程式如下：

式中：

B₁为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_n-OH；

B₂为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄；

所述的-NR₅-C₂H₄OH、-(CH₂)_n-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄中， x＝2、3、4、5、6或7；n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异 丙基，m＝3、4、5、6、7或8；

具体步骤如下：

将1～30毫摩尔C1溶于质量为其10～30倍的THF中，然后缓缓加入摩尔 量是C1的1～5倍的碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛下搅拌0.5～2小时后， 加热回流1～5小时，得到中间反应液；将摩尔量是C1的1～5倍的E缓慢滴 加入前述中间反应液中，继续加热回流12～48小时，冷却，将最终反应液用 酸中和至中性，用二氯甲烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸去除二氯甲烷后得到粗 产品，用色谱柱分离提纯得到油状液体，即中间产物Q1；

3)合成M5，反应方程式如下：

式中：

B₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙 氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基或-NR₁R₂；

R₁、R₂为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；

具体步骤如下：

将丙酮与Q1按摩尔比1～6∶1的比例加入到反应容器中，然后加入摩尔比 是所述丙酮50～500倍溶剂，再加入摩尔比是所述丙酮0.01～0.40倍的碱性 催化剂，在20℃～60℃条件下反应1～24小时，去除溶剂，然后采用硅胶柱分 离得到中间产物F5；将F5与Q1或现有技术已经存在的Q7按摩尔比为1∶1的 比例加入到反应器中，然后用摩尔比是F5的100～500倍的溶剂将其溶解，加 入摩尔比是F5的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流1～24小时，冷却后去除 溶剂，采用硅胶柱分离得到目标染料M5。

具有所述结构式M6的脂水两亲性香豆素染料的制备方法，其特征在于， 包括如下步骤：

1)合成E，反应方程式如下：

式中：x＝2、3、4、5、6或7；R₄为甲基、乙基、丙基或异丙基；

2)合成Q2，反应方程式如下：

式中：

B₁为-NR₅-C₂H₄OH或-(CH₂)_n-OH；

B₂为-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄或-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄；

所述的-NR₅-C₂H₄OH、-(CH₂)_n-OH、-NR₃-(C₂H₄O)_x+1R₄和-(CH₂)_n-O-(C₂H₄O)_xR₄中， x＝2、3、4、5、6或7；n＝0、1、2、3或4；R₅为甲基、乙基、丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基或-C₂H₄OH；R₃为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、叔丁基或-(C₂H₄O)_m-R₄；在-(C₂H₄O)_m-R₄中，R₄为甲基、乙基、丙基或异 丙基，m＝3、4、5、6、7或8；

具体步骤如下：

将1～30毫摩尔取代基团B₁位于香豆素环的6位或7位的香豆素衍生物 C2溶于质量为其10～30倍的THF中，然后缓缓加入摩尔量是C2的1～5倍的 碱性催化剂，反应混合液在N₂气氛下搅拌0.5～2小时后，加热回流1～5小时， 得到中间反应液；将摩尔量是C2的1～5倍的E缓慢滴加入前述中间反应液中， 继续加热回流12～48小时，冷却，将最终反应液用酸中和至中性，用二氯甲 烷萃取，经干燥、过滤、旋蒸去除二氯甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯 得到油状液体，即中间产物Q2；

3)合成M6，反应方程式如下：

具体步骤如下：

将步骤2)制得的Q2和三(4-甲酰苯基)胺按摩尔比为3∶1的比例加入到反 应器中，然后用摩尔比是Q2的100～500倍溶剂将其溶解，加入摩尔比是Q2 的0.01～0.40倍的碱性催化剂，回流4～24小时，冷却后旋蒸去除溶剂，以 柱色谱分离得目标染料M6。

其中，上述干燥操作中用到的干燥剂为无水硫酸钠、无水硫酸镁、无水氯 化钙中的一种或几种的组合。

上述碱性催化剂可以是氢氧化钠、氢氧化钾、无水碳酸钠、无水碳酸钾、 六氢吡啶中的一种或它们中任意两种以上的混合物。

所述的溶剂包括水、甲苯、二甲苯、乙醇、正丁醇、乙腈、1，4-二氧六 环、四氢呋喃、冰醋酸中的一种或它们的任意混合物。

本发明的脂水两亲性的香豆素染料都具有脂水双亲的性质，随着PEG基团 数量的增加以及链长的增长，染料的亲水性增加。

本发明的脂水两亲性的香豆素染料在400～650nm波长范围具有较强的单 光子吸收。

本发明的脂水两亲性的香豆素染料在650～1000nm波长范围具有较强的双 光子吸收。

本发明的脂水两亲性的香豆素染料在400～650nm波长范围内的光源照射 下能快速的产生单线态氧、超氧负离子等活性氧物种，在制备单光子光动力治 疗药物方面具有很好的应用前景。

本发明的脂水两亲性的香豆素染料在650～1000nm波长范围内的激光照 射下能快速的产生单线态氧、超氧负离子等活性氧物种，在制备双光子光动力 药物方面具有很好的应用前景。

本发明具有如下有益效果：

1.本发明中的脂水两亲性香豆素染料结构简单、分子量小，具有确定的 化学结构，易于制备、纯化和进一步修饰，满足临床用药的基本要求。

2.本发明中的脂水两亲性香豆素染料具有脂水双两亲的特点，并且其脂 水分配比能够满足临床光动力治疗的使用要求。

3.本发明中脂水两亲性的香豆素染料的合成方法具有操作简单、产品产 率高、纯度高的特点，可以放量合成。

4.本发明中的脂水两亲性的香豆素染料在400～650nm和650～1000nm 波长范围具有较高的生物光动力活性，在制备光动力药物方面具有很好的应用 前景。

附图说明

图1示出实施例1中染料M1-1在正辛醇中的双光子吸收光谱；

图2示出通过ESR检测到的实施例2中染料M1-2在二甲基亚砜中产生的 单线态氧信号；

图3示出通过ESR检测到的实施例3中染料M6-1在二甲基亚砜中产生的 超氧负离子自由基信号；

图4示出实施例4中染料M4-1在正辛醇中的双光子吸收光谱；

图5示出实施例5中染料M2-1在正辛醇和PBS缓冲溶液中的吸收光谱；

图6示出实施例6中染料M3-1在正辛醇和PBS缓冲溶液中的吸收光谱；

图7示出通过ESR检测到的实施例10中染料M5-1在二甲基亚砜中产生的 单线态氧信号；

图8示出实施例12的细胞实验结果：染料M4-2用于单光子光动力实验的 细胞存活率；

图9示出实施例13的细胞实验结果：染料M5-2用于双光子光动力实验的 细胞照射前后变化图片；

图10示出实施例14的细胞实验结果：染料M1-2用于单光子光动力实验 的细胞存活率；

图11示出实施例15的细胞实验结果：染料M2-1用于单光子光动力实验 的细胞存活率；

图12示出实施例16的细胞实验结果：染料M2-1用于双光子光动力实验 的细胞照射前后变化图片；

图13示出实施例17的细胞实验结果：染料M3-3用于单光子光动力实验 的细胞存活率；

图14示出实施例18的细胞实验结果：染料M3-3用于双光子光动力实验 的细胞照射前后变化图片；

图15示出实施例19的细胞实验结果：染料M6-1用于单光子光动力实验 的细胞存活率；

图16示出实施例20的细胞实验结果：染料M6-1用于双光子光动力实验 的细胞照射前后变化图片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施 例。

实施例1：

具有通式M1结构的染料M1-1的合成

(I)向一个250毫升三口烧瓶中加入8克(0.2mol)NaOH，80毫升水，搅 拌使其溶解均匀；将19.7克(0.12mol)三聚乙二醇单甲醚加入50毫升THF中溶 解均匀，然后加入上述三口烧瓶中与NaOH溶液混合均匀；将22.88克(0.12mol) 对甲苯磺酰氯和40毫升THF混合均匀，然后缓慢滴加入上述三口烧瓶中，滴加 过程保持反应液温度不超过10℃，滴加完毕后，继续搅拌反应6小时，停止反 应。反应液用乙醚萃取三次，乙醚萃取液用水洗至中性后加入无水硫酸镁干燥， 经过滤、旋蒸除去乙醚，得到34.7克相应的对甲苯磺酸酯E-1(产率：91％)；

(II)将2.75克(0.013mol)4-(N，N-二(2-羟基-乙基)氨基)苯甲醛溶于 50毫升经过干燥重蒸的THF中，然后缓缓加入1.68克(0.03mol)KOH和50毫升 THF混合而成的溶液，滴加完毕，反应液在N2气氛下搅拌0.5小时后再加热回流 1小时，得到中间反应液；将9.54克(0.03mol)对甲苯磺酸酯E-1溶于20毫升 THF中，缓慢滴加入上述中间反应液中，继续加热回流48小时，冷却后，将最 终反应液用稀盐酸中和至中性，用二氯甲烷萃取，萃取掖经无水硫酸镁干燥、 过滤、旋蒸除去二氯甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯得到4.88克黄色油 状液体Q3-1(产率75％)；

(III)将2.04克(0.01mol)7-羟基香豆素溶于50毫升经过干燥重蒸的四 氢呋喃中，然后缓缓加入1.20克(0.03mol)氢氧化钠和30毫升四氢呋喃混合 而成的溶液，滴加完毕，反应液在N₂气氛下搅拌2小时后再加热回流1小时，得 到中间反应液。将4.80克(0.015mol)对甲苯磺酸酯(E-1)溶于20m1四氢呋喃 中，缓慢滴加入上述中间反应液中，继续加热回流48小时，冷却后，将最终反 应液用稀盐酸中和至中性，用二氯甲烷萃取，萃取液经无水硫酸镁干燥、过滤、 旋蒸除去二氯甲烷后得到粗产品，用色谱柱分离提纯得到2.98克中间产物Q2-1 (产率85％)；

(IV)将1.75克(0.005mol)Q2-1和2.50克(0.005mol)Q3-1溶解于20毫 升正丁醇中，再向反应体系内加入0.6毫升六氢吡啶，加热回流4小时，旋蒸去 除溶剂，用柱色谱分离提纯得到2.92克本发明的目标染料M1-1(产率70％)；

元素分析  计算值(C₄₃H₆₃NO₁₅)：C，61.93；H，7.61；N，1.68；

          测定值：C，61.95；H，7.60；N，1.68；

质谱[M+H]+：833。

(V)用pH值7.4的磷酸盐缓冲液(简称：PBS缓冲液)检测目标染料M1-1 在水体系中的溶解度，25℃其溶解度大于5mg/mL；将染料配成2×10^-4M的正辛 醇溶液，使用1×10^-4M罗丹明B(Rhodamine B)为参比，采用上转换荧光法测 试双光子吸收截面，结果如附图1所示，染料在650-900波长范围有较大的双光 子吸收截面，可以使用双光子激发产生光动力作用。

实施例2：

具有通式M1结构的M1-2的合成

(I)参照实施例1中(I)的操作，用摩尔量为1∶1的四聚乙二醇单甲 醚与对甲苯磺酰氯反应，得到中间产物E-2(产率：69％)；

(II)参照实施例1中(II)的操作，用摩尔量为1∶1的对甲苯磺酸酯E-2 与4-(N-乙基-N-(2-羟基-乙基)氨基)苯甲醛反应，得到中间产物Q3-2(产率： 75％)；

(III)参照实施例1中(IV)的操作用摩尔量为1∶1的4-乙酰基-6-二乙胺 基香豆素与Q3-2反应，得到目标染料M1-2(产率：62％)；

元素分析  计算值(C₃₅H₄₈N₂O₈)，67.29；H，7.74；N，4.48；

          测定值：C，67.27；H，7.75；N，4.47；

质谱[M+H]+：624。

(IV)用PBS缓冲溶液检测目标染料M1-2在水体系中的溶解度，25℃其溶 解度大于0.03mg/mL；使用5，5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(DMPO)作为单线态 氧(¹O2)自旋捕获剂，在532nm激光激发下测试上述目标染料M1-2在二甲基亚 砜(DMSO)中的顺磁共振谱图，得到如图2所示的等高三重峰，其超精细分裂 常数α和g因子(g＝2.0056，αN＝16.3G，)与DMPO-¹O2加合物吻合，说明染 料M1-2在光照下与氧气作用产生了单线态氧。

实施例3：

具有通式M6结构的M6-1的合成

(I)参照实施例(1)中(III)的操作，用3-乙酰基-6-羟基-香豆素和 实施例2中制得的E-2反应，得到中间产物Q2-2(产率：79％)；

(II)取2.9毫摩尔Q2-2和0.6毫摩尔三(4-甲酰苯基)胺置于一100毫升三 口瓶中，用15毫升甲苯溶解，加热至回流，然后滴加4滴六氢吡啶，回流48小 时后冷却，去除溶剂，柱色谱分离，得目标产物M6-1(产率：35％)；

元素分析  计算值(C₂₇H₂₉NO₈)：C，65.44；H，5.90；N，2.83；

          测定值：C，65.43；H，5.89；N，2.83；

质谱[M+H]+：496；

(III)用PBS缓冲溶液检测目标染料M6-1在水体系中的溶解度，25℃其溶 解度大于2mg/mL；使用2，2，6，6-四甲基-4-哌啶酮(TEMP)作为超氧自由基(O^2-·)自旋捕获剂，在532nm激光激发下测试上述目标染料M6-1在二甲基亚砜(DMSO) 中的顺磁共振谱图，得到如图3所示的四重峰，其超精细分裂常数α和g因子 (g＝2.0056，αN＝12.48G，)与TEMP-O^2-·加合物吻合， 说明染料M6-1在光照下与氧气作用产生了超氧自由基。

实施例4：

具有通式M4结构的M4-1的合成

(I)参照实施例1中(I)的操作，用摩尔量为1∶1的二聚乙二醇单甲 醚与对甲苯磺酰氯反应，得到中间产物E-3(产率：65％)；

(II)参照实施例1中(III)的操作，4-醛基-7-羟基-香豆素和对甲苯磺 酸酯E-3反应，得到中间产物Q1-1(产率：75％)；

(III)取2.5毫摩尔Q1-1和1毫摩尔环丁酮溶于30毫升甲苯中，向其中加入 0.01克氢氧化钾，氮气保护下加热回流24小时，冷却后滴入适量稀盐酸溶液中 和反应液，旋蒸去除溶剂，柱色谱分离，得目标染料M4-1(产率：80％)；

元素分析  计算值(C₃₄H₃₄O₁₁)：C，66.01；H，5.54；O，28.45；

          测定值：C，66.03；H，5.53；O，28.46；

质谱[M+H]+：619；

(IV)用PBS(pH＝7.4)缓冲溶液检测目标染料M4-1在水体系中的溶解度， 25℃其溶解度大于3mg/mL；参照实施例1中步骤(V)的操作，得到M4-1的双 光子吸收截面，如图4所示，染料M4-1在650-1000nm波长范围有较强的双光子 吸收。

实施例5：

具有通式M2结构的M2-1的合成

(I)在100ml三口瓶中加入10毫摩尔实施例3中所得Q2-2、20毫摩尔对 苯二甲醛和50m1冰醋酸，搅拌均匀后加入0.3ml六氢吡啶，加热至120℃回流 12小时。反应物冷却后，去除溶剂，柱色谱分离得到中间产物F1-1(产率：62％)；

(II)在100ml三口瓶中加入1毫摩尔F1-1和20ml二氯甲烷，溶解后加入 40ml 2M的氢氧化钠水溶液，室温下滴加1毫摩尔4-N，N-二甲胺基苄基碘膦盐 的二氯甲烷溶液20ml，加完后，加热至40℃回流2小时。反应结束后冷却至室温， 将有机相和水相分开，水相用氯仿萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥， 旋蒸得到粗产品油状物。粗产品经柱色谱分离得目标染料M2-1(产率：61％)；

元素分析  计算值(C₃₇H₄₁NO₈)：C，70.79；H，6.58；N，2.23；

          测定值：C，70.75；H，6.56；N，2.24；

质谱[M+H]+：627；

用PBS(pH＝7.4)缓冲溶液检测目标染料M2-1在水体系中的溶解度，25℃其溶解 度大于2mg/ml。将目标染料M2-1分别溶于正辛醇和PBS缓冲溶液中，测试其吸 收光谱，如图5所示，染料M2-1在400-600波长范围有较强的吸收峰。

实施例6：

具有通式M3结构的M3-1的合成

(I)参照实施例1中(II)的方法，由4-(N，N-二(2-羟基-乙基)氨基)苯 甲醛和E-3反应，得到中间产物Q3-3(产率：72％)；

(II)取1毫摩尔环庚酮溶于20毫升乙醇中，再加入氢氧化钠0.01克，加 热回流，逐步向反应液中滴加1毫摩尔Q3-3在20毫升乙醇中的溶液，1小时滴加 完毕，继续反应1小时后停止，去除溶剂，柱色谱分离得中间产物F2-1(产率： 76％)；

(III)取1毫摩尔实施例4中的Q1-1和1毫摩尔F2-1溶于20毫升甲苯中， 向其中加入3滴六氢吡啶，氮气保护下回流48小时，冷却后去除溶剂，柱色谱 分离，得目标染料M3-1(产率：25％)；

元素分析  计算值(C₄₃H₅₉NO₁₂)：C，66.05；H，7.61；N，1.79；

          测定值：C，66.03；H，7.60；N，1.79；

质谱[M+H]+：782；

(IV)用PBS缓冲液检测目标染料M3-1在水体系中的溶解度，25℃其溶解 度大于5mg/ml。将目标染料M3-1分别溶于正辛醇和PBS缓冲溶液中，测试其吸 收光谱，如图6所示，染料M3-1在400-650波长范围有较强的吸收峰。

实施例7：

具有通式M3结构的M3-2的合成

(I)取1毫摩尔环己酮溶于20毫升乙醇中，再加入氢氧化钠0.01克，加 热回流，逐步向反应液中滴加1毫摩尔对二丙氨基苯甲醛在20毫升乙醇中的溶 液，1小时滴加完毕，继续反应1小时后停止，冷却后过滤析出的固体，使用甲 苯重结晶，得中间产物F3-1(产率：68％)；

(II)取1毫摩尔实施例4中的Q1-1和1毫摩尔F3-1溶于20毫升甲苯中，向 其中加入3滴六氢吡啶，氮气保护下回流48小时，冷却后去除溶剂，柱色谱分 离，得目标染料M3-2(产率：57％)；

元素分析  计算值(C₃₂H₃₇NO₆)：C，72.96；H，7.38；N，2.50；

            测定值：C，72.65；H，7.22；N，2.63；

质谱[M+H]+：560；

(III)用PBS缓冲液检测目标染料M3-2在水体系中的溶解度，25℃其溶解 度大于0.04mg/ml。

实施例8：

具有通式M3结构的M3-3的合成

(I)参照实施例1中步骤(II)的方法，用摩尔量为1∶1的实施例1中的 E-1和对羟基苯甲醛反应，得中间产物Q3-4(产率：79％)；

(II)参照实施例6中步骤(II)的方法，由环己酮和Q3-4反应得中间产 物F2-2(产率：65％)；

(III)参照实施例1中(III)的方法，由3-醛基-7-羟基-香豆素和对甲苯 磺酸酯E-3反应，得到中间产物Q1-2(产率：75％)；

(IV)参照实施例6中步骤(III)的方法，由上述的F2-2和Q1-2反应， 得目标染料M3-3(产率：61％)；

元素分析  计算值(C₃₅H₄₂O₁₀)：C，67.51；H，6.80；O，25.69；

          测定值：C，67.55；H，6.80；O，25.68；

质谱[M+H]+：623；

(V)用PBS缓冲液检测目标染料M3-3在水体系中的溶解度，25℃其溶解度 大于3mg/ml。

实施例9：

具有通式M4结构的M4-2的合成

(I)取1毫摩尔实施例8中所得Q1-2和1毫摩尔环戊酮溶于30毫升甲苯中， 向其中加入0.01克氢氧化钾，氮气保护下加热回流24小时，冷却后滴入适量稀 盐酸溶液中和反应液，旋蒸去除溶剂，柱色谱分离，得中间产物F4-1(产率： 76％)；

(II)取1.1毫摩尔实施例4中所得Q1-1和1毫摩尔F4-1溶于40毫升甲苯 中，向其中加入0.01克氢氧化钾，氮气保护下加热回流24小时，冷却后滴入适 量稀盐酸溶液中和反应液，旋蒸去除溶剂，柱色谱分离，得目标染料M4-2(产 率：69％)；

元素分析  计算值(C₃₅H₃₆O₁₁)：C，66.45；H，5.74；O，27.82；

          测定值：C，66.45；H，5.74；O，27.82；

质谱[M+H]+：633；

(III)用PBS缓冲液检测目标染料M4-2在水体系中的溶解度，25℃其溶解 度大于3mg/ml。

实施例10：

具有通式M5结构的M5-1的合成

(I)取3毫摩尔实施例4中制得的Q1-1和1.5毫摩尔丙酮溶于50毫升乙醇 中，向其中加入0.01克氢氧化钾，加热至50摄氏度反应24小时，冷却后滴入适 量稀盐酸溶液中和反应液，旋蒸去除溶剂，柱色谱分离，得目标染料M5-1(产 率：78％)；

元素分析  计算值(C₃₃H₃₄O₁₁)：C，65.34；H，5.65；O，29.01；

          测定值：C，65.39；H，5.65；O，29.03；

质谱[M+H]+：607；

(II)用PBS(pH＝7.4)缓冲溶液检测目标染料M5-1在水体系中的溶解度， 25℃其溶解度大于3mg/ml。参照实施例2中(IV)的操作，测试单线态氧的产 生，结果如图7所示，染料M5-1能有效产生单线态氧。

实施例11：

(I)取1.5毫摩尔实施例4中制得的Q1-1和1.5毫摩尔丙酮溶于20毫升乙 醇中，向其中加入0.02克氢氧化钾，加热至50摄氏度反应24小时，冷却后滴入 适量稀盐酸溶液中和反应液，旋蒸去除溶剂，柱色谱分离，得产物F5-1(产率： 82％)；

(II)取2毫摩尔实施例8中所得Q1-2和2毫摩尔F5-1溶于50毫升甲苯中， 向其中加入0.03克氢氧化钾，氮气保护下加热回流24小时，冷却后滴入适量稀 盐酸溶液中和反应液，旋蒸去除溶剂，柱色谱分离，得产物M5-2(产率：69％)；

元素分析  计算值(C₃₃H₃₄O₁₁)：C，65.34；H，5.65；O，29.01；

          测定值：C，65.39；H，5.65；O，29.03；

质谱[M+H]+：607；

(III)用PBS(pH＝7.4)缓冲溶液检测目标染料M5-2在水体系中的溶解度， 25℃其溶解度大于3mg/ml。

实施例12：

将实施例9中制得的染料M4-2用于单光子光动力实验

(I)体外培养的人直肠癌1116细胞，按1.0×10⁵个/毫升的细胞密度接种 于96孔细胞培养板，培养液为含5％小牛血清(FBS)的RPMI 1640，在37℃下孵 育24小时后，加入染料M4-2，使染料浓度为2μg/mL，继续孵育4小时；

(II)取出96孔板，用457nm二极管激光器(功率密度为20mW/cm2)照射 样品1000秒，照射后继续孵育24小时，采用CCK-8测试细胞活性。对照空白试 验为不含光敏剂孵育的细胞，将其作为100％细胞存活率的基线。通过测试结果 计算细胞杀伤率，结果如附图8。

实施例13：

将实施例11中制得的染料M5-2用于双光子光动力实验

(I)体外培养的人直肠癌1116细胞，按1.0×10⁵个/毫升的细胞密度接种 于2毫升细胞培养皿，培养液为含5％小牛血清(FBS)的RPMI 1640，在37℃下孵 育24小时后，加入染料M5-2，使染料浓度为2μg/mL，继续孵育4小时；

(II)使用飞秒激光系统，mode-locked Tsunami Ti：sapphire laser  (720-880nm，80MHz，＜130fs)，将培养皿至于电脑控制的三维微移平台上， 通过物镜(10×，数值孔径0.4，日本奥林巴斯公司)观察双光子细胞杀伤实验。 在光照之前，调节激光焦点至细胞中心位置，激光波长为800nm，光照能量为 16mW，照射时间为5分钟，照射前后细胞的变化如附图9。

实施例14：

将实施例2中制得的染料M1-2用于单光子光动力实验

(I)参照实施例12中的操作，将染料M1-2用于单光子光动力实验，测试 结果如附图10。

实施例15：

将实施例5中制得的染料M2-1用于单光子光动力实验

(I)参照实施例12中的操作，将染料M2-1用于单光子光动力实验，测试 结果如附图11。

实施例16：

将实施例5中制得的染料M2-1用于双光子光动力实验

(I)参照实施例13中的操作，将染料M2-1用于双光子光子光动力实验， 照射前后细胞的变化如附图12。

实施例17：

将实施例8中制得的染料M3-3用于单光子光动力实验

(I)参照实施例12中的操作，将染料M3-3用于单光子光动力实验，测试 结果如附图13。

实施例18：

将实施例8中制得的染料M3-3用于双光子光动力实验

(I)参照实施例13中的操作，将染料M3-3用于双光子光动力实验，照射 前后细胞的变化如附图14。

实施例19：

将实施例3中制得的染料M6-1用于单光子光动力实验

(I)参照实施例12中的操作，将染料M6-1用于单光子光动力实验，测试 结果如附图15。

实施例20：

将实施例3中制得的染料M6-1用于双光子光动力实验

(I)参照实施例13中的操作，将染料M6-1用于双光子光动力实验，照射 前后细胞的变化如附图16。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而 并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上 述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实 施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变 动仍处于本发明的保护范围之列。