一种台湾长寿菜的快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种台湾长寿菜的快速繁殖方法，主要通过对初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽、后期管理的步骤，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、苗生长旺盛的优良效果，愈伤组织的萌动率达到了96%，增殖倍数达到了4.7倍，生根率达到了100%，最终的成活率达到了96%。

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种植物的培养方法，尤其涉及一种台湾长寿菜的快速繁殖方法。

背景技术

长寿菜，又名叶用甘薯，俗称白薯叶、番薯叶、地瓜叶，是甘薯的叶、叶柄和芽梢部，学名Ipomoea atatas (L.) Lam.，为旋花科(Convolvulaceae)牵牛花属草本匍匐性蔓生植物。在热带为多年生。原产于热带美洲。现广泛栽培于全世界热带和亚热带地区。我国南北各地都有栽培，以收获地下块根为主，叶蔓作饲料，民间也有采食叶作为粗菜。近年发现，薯叶中含丰富的营养物质，是维生素历、矿物质钾、钙之来源，而且其病虫害甚少，很少使用农药，比其他叶菜类较抗暴风雨，生长迅速，为良好的夏季叶菜。它在人们追求享受自然的风味中获得重视，在台湾省它作为一种优良的深绿色蔬菜发展很快。，利用组培技术繁育长寿菜的技术尚未有人研究，组织培养体系尚未建立，优良品种的推广普及尚未完成，供求矛盾日益加剧，严重影响了长寿菜的应用和推广。

发明内容

本发明针对现有的不足提供了一种台湾长寿菜的快速繁殖方法。

本发明通过以下方法实现上述目的。

一种台湾长寿菜的快速繁殖方法，该方法包括下列步骤：

（1）外植体的选择：于5～7月采取生长健壮的长寿菜叶片或块茎作外植体；

（2）材料处理方法：先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗1 h后用紫外灯照射10 min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡20-50秒，然后用无菌水冲洗，再转入滴加了2～3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡5-7min，依时间长短用无菌水冲洗3～4次，最后在无菌条件下分割材料。茎段切割成0. 1～0. 6 cm长，叶片分割成约0. 3 cm ×0. 3 cm的小片； 

（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤（2）得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的2,4-D、0.4mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.5mg/L的GA，PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2000-2200lux，待培养25天左右后，新芽长至3.0cm左右时，即开始下一个阶段；

（4）继代培养：将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT，PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2000-2200lux，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；

（5）生根培养：将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在1/3MS常规培养基中添加了0.6mg/L的IBA、0.6mg/L的NAA，0.3mg/L的KT，0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，待新苗长至2.5cm时，即开始下一个阶段；

（6）炼苗：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后解开封口膜，炼苗4d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的50%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩：蛭石=3∶3∶1：2 的混合基质中，温度控制在29℃，前7d 湿度控制在85%左右，以后逐渐降低湿度;

(7) 移栽:移栽时间10月12-22日将扦插播种成活的小苗移栽到预先准备好的苗圃地，选择地势平坦，排水良好，土层深厚肥沃的土地建立苗圃地；

移栽方法　移栽前将苗圃地做成长5m、宽2.5ｍ的低床，施足底肥，然后将扦插苗按15cm×25 cm株行距进行移栽，移栽深度2.5 cm，移栽后及时浇透水；

移栽苗管理 生长期每隔15ｄ叶面喷施有机复合肥100倍溶液，大田苗移栽后，移植苗成活率达到96%以上；

所述的有机复合肥的制备方法为：

该复合肥按照如下方法制备：

（a）按所述重量份数选取配方量的原料；所述原料为：尿素5-20%，磷酸一铵2-5%，硫酸钾4-5%，磷酸二氢钾4-6%，腐植酸10-15%，木质素5-7%,BA3-5%，水5-10%，壳聚糖1-5%，硼砂3-7%，氯化锌0.5-1%，钼酸钠0.05-0.3%，硫酸锰0.05-0.1%，十二烷基苯磺酸钠0.05-0.3%，硫酸亚铁0.8-2%，硫酸镁0.03-0.8%，硫酸铜0.01-0.05%，二甲基亚砜0.2-2%；大田作物秸秆2-10%，禽畜粪便2-3%；

所述禽畜粪便为猪粪、牛粪、羊粪、鸡鸭粪中的一种或任意几种混合；

（b）将所述植物纤维粉碎为粉末；

（c）将所述禽畜粪便、植物纤维粉末混合、拌匀，在发酵池中堆置湿料发酵，上覆保湿保温材料，经过60小时后，堆内温度达到50-70℃时第一次翻堆，并每隔24小时翻堆一次，经过3次翻堆后，发酵结束；

（d）将发酵产物与所述的尿素，磷酸一铵，硫酸钾，磷酸二氢钾，纳米硫酸亚铁，纳米碳，腐植酸，木质素,BA，水，壳聚糖，硼砂，氯化锌，钼酸钠，硫酸锰，十二烷基苯磺酸钠，硫酸亚铁，硫酸镁，硫酸铜，二甲基亚砜混合放入反应釜中，用水溶解，在100-120℃下搅拌混合反应2小时；待混合工艺完成后，用200目筛过滤溶液，去掉残渣。 

有益效果：本发明对长寿菜采用组织培养技术，以茎段和叶片为外植体，经外植体灭菌、初代培养、继代培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽步骤，研究培养过程中试管苗的营养需求、激素对苗木生长分化的调控，解决盘叶忍冬的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，建立了完善的盘叶忍冬组织培养体系，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，并具体具有一下优点：

1、本发明针对盘叶忍冬原产地的气候特点，降低了组培过程中的培养温度，并且延长了光照周期，增强了光强度，从而使培养环境更接近其原生地的气候；

2、本发明通过对初代培养基、继代培养基、增殖培养基、生根培养基配方的精确筛选，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果。

3、在炼苗移栽中通过逐渐提高光照强度，并且在移栽过程中，逐渐降低湿度、严格控制温度，采用合适的基质配方，最终提高了生根试管苗的成活率。

4、后期管理中采用了复合有机肥，降低了药残，复合无公害蔬菜的生菜要求。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述实施例仅用于说明本发明，对本发明并没有限制。

一种台湾长寿菜的快速繁殖方法，该方法包括下列步骤：

（1）外植体的选择：于5～7月采取生长健壮的长寿菜叶片或块茎作外植体；

（2）材料处理方法：先用软毛刷将外植体表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗1 h后用紫外灯照射10 min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡20-50秒，然后用无菌水冲洗，再转入滴加了2～3滴土温80的0. 1 %的升汞溶液中浸泡5-7min，依时间长短用无菌水冲洗3～4次，最后在无菌条件下分割材料。茎段切割成0. 1～0. 6 cm长，叶片分割成约0. 3 cm ×0. 3 cm的小片； 

（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤（2）得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的2,4-D、0.4mg/L的BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.5mg/L的GA，PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2000-2200lux，待培养25天左右后，新芽长至3.0cm左右时，即开始下一个阶段；

（4）继代培养：将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-BA、0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT，PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2000-2200lux，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；

（5）生根培养：将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在1/3MS常规培养基中添加了0.6mg/L的IBA、0.6mg/L的NAA，0.3mg/L的KT，0.4mg/L的NAA、 0.5mg/L 蛋白酪、PH 6.0，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，待新苗长至2.5cm时，即开始下一个阶段；

（6）炼苗：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后解开封口膜，炼苗4d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的50%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩：蛭石=3∶3∶1：2 的混合基质中，温度控制在29℃，前7d 湿度控制在85%左右，以后逐渐降低湿度;

(7) 移栽:移栽时间10月12-22日将扦插播种成活的小苗移栽到预先准备好的苗圃地，选择地势平坦，排水良好，土层深厚肥沃的土地建立苗圃地；

移栽方法　移栽前将苗圃地做成长5m、宽2.5ｍ的低床，施足底肥，然后将扦插苗按15cm×25 cm株行距进行移栽，移栽深度2.5 cm，移栽后及时浇透水；

移栽苗管理 生长期每隔15ｄ叶面喷施有机复合肥100倍溶液，大田苗移栽后，移植苗成活率达到96%以上；

所述的有机复合肥的制备方法为：

该复合肥按照如下方法制备：

（a）按所述重量份数选取配方量的原料；所述原料为：尿素5-20%，磷酸一铵2-5%，硫酸钾4-5%，磷酸二氢钾4-6%，腐植酸10-15%，木质素5-7%,BA3-5%，水5-10%，壳聚糖1-5%，硼砂3-7%，氯化锌0.5-1%，钼酸钠0.05-0.3%，硫酸锰0.05-0.1%，十二烷基苯磺酸钠0.05-0.3%，硫酸亚铁0.8-2%，硫酸镁0.03-0.8%，硫酸铜0.01-0.05%，二甲基亚砜0.2-2%；大田作物秸秆2-10%，禽畜粪便2-3%；

所述禽畜粪便为猪粪、牛粪、羊粪、鸡鸭粪中的一种或任意几种混合；

（b）将所述植物纤维粉碎为粉末；

（c）将所述禽畜粪便、植物纤维粉末混合、拌匀，在发酵池中堆置湿料发酵，上覆保湿保温材料，经过60小时后，堆内温度达到50-70℃时第一次翻堆，并每隔24小时翻堆一次，经过3次翻堆后，发酵结束；

（d）将发酵产物与所述的尿素，磷酸一铵，硫酸钾，磷酸二氢钾，纳米硫酸亚铁，纳米碳，腐植酸，木质素,BA，水，壳聚糖，硼砂，氯化锌，钼酸钠，硫酸锰，十二烷基苯磺酸钠，硫酸亚铁，硫酸镁，硫酸铜，二甲基亚砜混合放入反应釜中，用水溶解，在100-120℃下搅拌混合反应2小时；待混合工艺完成后，用200目筛过滤溶液，去掉残渣。