存活预后分析

摘要

本发明提供了用于测定对象存活可能性的分析试剂盒和分析方法。本发明还提供了用于测定样品中游离轻链(FLC)的总量的分析试剂盒。本发明还提供了整体健康筛选方法，包括检测获自对象的样品中游离轻链(FLC)的量，其中较低量的FLC与对象的存活增加和/或更好的整体健康有关，且较高水平的FLC表明可能存在未检测到的医学问题。

说明书

技术领域

本发明涉及用于测定对象或个体可能存活的预后分析和试剂盒。

背景技术

有多个先前已确定的因子，当这些因子在诸如人类个体等对象中测量 时可预示所述个体可能长期存活。这些因子包括例如胆固醇、C-反应蛋白 (CRP)和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C(cystatin C)。这些化合物的水平升高与糖 尿病、高血压和心血管疾病和肾损伤有关。

对于作为分析患者中宽范围单克隆免疫球蛋白病(monoclonal  gammopathies)的途径，申请人已研究游离轻链多年。这样的游离轻链在诊 断中的应用在书籍“Serum Free Light Chain Analysis，Fifth Edition(2008)A.R. Bradwell等，ISBN 0704427028”中有详细综述。

抗体包括重链和轻链。它们通常具有双重对称并且包含两个相同的重 链和两个相同的轻链，各自包含可变区和恒定区结构域。每个轻链/重链对 的可变区结构域结合形成抗原结合部位，使得两个链都有助于抗体分子的 抗原结合特异性。轻链为两种类型：κ和λ，任何给定的抗体都是由任一轻 链产生，但从不由两种轻链一起产生。人体中产生的κ分子大约为λ分子 的两倍，但这在一些哺乳动物中不同。轻链通常与重链连接。然而，在个 体的血清或尿中可检测到一些未连接的“游离的轻链”。游离轻链可通过产 生抗游离轻链表面的抗体来特异地鉴定，所述游离轻链表面通常因轻链与 重链的结合而被隐藏。在游离轻链(FLC)中此表面被暴露，使得其可以通过 免疫学检测。用于检测κ或λ游离轻链的可商购试剂盒包括例如The Binding  Site Limited，Birmingham，United Kingdom生产的“Freelite^TM”。申请人先前 已确定，测量游离κ、游离λ的量和/或游离κ/游离λ比例能够检测患者中 的单克隆免疫球蛋白病。其已被用作辅助例如完整免疫球蛋白型多发性骨 髓瘤(MM)、轻链MM、非分泌MM、AL淀粉样变性病、轻链沉淀疾病(light  chain deposition disease)、潜伏性MM(smouldering MM)、浆细胞瘤和 MGUS(未确定临床意义的单克隆免疫球蛋白病)的诊断。还已将FLC的检 测用作例如辅助其他B-细胞恶液质(B-cell dyscrasia)的诊断，且甚至用作通 常用于诊断单克隆免疫球蛋白病的尿Bence Jones蛋白分析的可选方案。

常规地，期望增加λ或κ轻链中的一种。例如，多发性骨髓瘤由恶性 浆细胞的单克隆增殖导致，其引起产生单一类型免疫球蛋白的单一类型细 胞的增加。这导致在个体中观察到λ或κ游离轻链的量增加。此浓度增加 可以被测定，并且通常测定游离κ与游离λ的比例并与正常范围相比较。 这有助于单克隆疾病的诊断。此外，游离轻链分析还可以用于患者中随后 的疾病治疗。例如在治疗AL淀粉样变性病后，可以进行患者的预后。

Katzman等(Clin.Chem.(2002)；48(9)：1437-1944)讨论了在单克隆免疫 球蛋白病的诊断中游离κ和游离λ免疫球蛋白的血清参考区间和诊断范围。 通过免疫分析研究了年龄为21-90岁的个体，并与通过免疫固定获得的结 果相比较，以优化用于检测患有B-细胞恶液质的个体中单克隆游离轻链 (FLC)的免疫分析。

记录κ和λFLC的量和κ/λ比例，以允许测定用于B-细胞恶液质检测 的参考区间。

发明内容

申请人现已确定对于FLC、特别是总FLC的分析可以用于预测个体的 长期存活，即使当个体是明显健康的对象时也是如此。他们已发现FLC浓 度在统计学上显著地与长期存活相关。此外，此关系似乎与现有的长期存 活预后标志物例如胆固醇、肌酸酐(creatinine)、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C 和C-反应蛋白的关系相似或优于这些关系。

来自明显健康的个体血清中的FLC浓度在某种程度上受到个体肾过滤 和排泄FLC能力的影响。在其中FLC清除受限制的个体中，发现血清中 FLC水平增加。结果，目前认为FLC是肾功能的良好标志物。由于单体FLC κ分子(25kDa)的大小与二聚λ分子(50kDa)的大小不同，因此它们一起是优 于例如抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C(10kDa)的肾小球过滤的更好的标志物。然 而，与抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C相比较，在B-细胞增殖期间产生FLC是多 种疾病的结果，因此血清FLC通常不被单独地用作肾功能标志物。数据显 示即使在患有慢性肾病(CKD)的患者中，FLC仍给出存活的可能性，与肾 功能无关。

然而，B-细胞增殖/活性的标志物是重要的，并且由于B-细胞负责产生 FLC，因此其在临床上是有用的。FLC生成是B-细胞上调的早期指标。就 此而言，其可以与炎性反应的T-细胞介导的标志物CRP的使用互为补充。

高FLC浓度可能是慢性肾疾病、B-细胞激活或B-细胞增殖的指标。因 此，不正常的FLC分析结果可能是多种病症的标志物，这些病症目前需要 若干测试的组合。相反，当FLC分析结果正常时，表明肾功能良好且没有 B-细胞激活或增殖。因此，FLC浓度目前已被公认为是个体全身健康的良 好指标。

本发明提供了全身健康筛选方法，包括检测获自对象的样品中游离轻 链(FLC)的量，其中较低的量与存活增加和/或更好的全身健康有关，且较 高水平的FLC表明可能存在未检测到的医学问题。例如此分析可被用作作 为对象全身健康检查一部分的全身健康筛选的一部分。可选地，其可被用 于持续出现非特异性“全身不适”、“身体不适”或“全身不舒服”类症状的患者 中。可选地，其可被用在患者中，以在感觉不舒服的患者中区分出因心理 原因的不舒服和因难以确定症状的生理原因的不舒服。

可以将FLC的量与预定FLC的正常范围相比较，以显示FLC的量是 高于正常范围还是低于正常范围。

FLC可以为κFLC或λFLC。然而，优选地测量总FLC浓度，这是由 于单独测量κFLC或λFLC可能会遗漏例如患者中例如单克隆地产生的一 种或另一种FLC的不正常的高水平。

总游离轻链是指样品中游离κ轻链加游离λ轻链的总量。

优选地，对象为明显健康的对象。

本文中使用的术语“明显健康的对象”应理解为是指没有威胁生命的疾 病或病症(例如下述的那些)的明显症状的对象。

优选地，所述方法提供了对象中整体存活预后的方法。这可以是在例 如没有诊断出或没有患有B-细胞相关疾病(B-cell associated disease)或恶液 质(dyscrasia)特异症状的对象中。

优选地，明显健康的对象不必具有B-细胞相关疾病的症状。所述症状 可以包括多发性感染、骨痛和疲劳。这样的B-细胞相关的疾病优选地不是 骨髓瘤(例如完整免疫球蛋白型骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌骨髓瘤)、 MGUS、AL淀粉样变性病、巨球蛋白血症、Hodgkin淋巴瘤、 滤泡中心细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、前-B-细胞白 血病或急性淋巴细胞白血病。此外，所述个体通常不具有降低的骨髓功能。 所述个体通常不具有通常在许多这样的疾病中发现的异常的λ∶κFLC比 例。

术语“总游离轻链”指获自对象的样品中κ和λ游离轻链的量。

样品通常为获自对象的血清样品。然而，也可能使用全血、血浆、尿 或组织或流体的其他样品。

通常，FLC例如总FLC通过免疫分析例如ELISA分析测定，或使用荧 光标记的小球例如Luminex^TM小球测定。

例如ELISA使用抗体来检测特异的抗原。分析中使用的抗体中的一种 或多种可以用能够将底物转化为可检测的分析物的酶标记。这样的酶包括 辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和本领域中已知的其他酶。可选地，可以使 用其他可检测的标签或标记来代替所述酶，或与所述酶一起使用。这些包 括放射性同位素，本领域中已知的大量有色和荧光标记，包括荧光素、Alexa 氟石、Oregon Green、BODIPY、罗丹明红、Cascade Blue、Marina Blue、 Pacific Blue、Cascade Yellow、金；以及缀合物例如生物素(可获自例如 Invitrogen Ltd，United Kingdom)。也可使用染料溶胶、金属溶胶、化学发 光标记、或有色的乳胶。这些标记中的一种或多种可以用于本文所述各发 明的ELISA分析中，或可选地用于本文所述的其他分析、标记的抗体或试 剂盒中。

ELISA类型分析的构建本身是本领域公知的。例如，对于FLC特异性 的“结合抗体”被固定化在底物上。“结合抗体”可以通过本领域中公知的方 法被固定化在底物上。样品中的FLC通过结合FLC的“结合抗体”被结合至 底物上。

未结合的免疫球蛋白可以被洗去。

在ELISA分析中，结合免疫球蛋白的存在可以通过使用标记的“检测抗 体”来确定，所述“检测抗体”相对于结合抗体而言特异于所关注FLC的不同 部分。

流式细胞仪可用于检测所关注的FLC的结合。对于例如细胞分选而言， 此技术是公知的。然而，其也可以被用于检测标记的颗粒例如小球，以及 用于测量它们的大小。大量的教科书中描述了流式细胞仪，例如Practical  Flow Cytometry，第三版(1994)，H.Shapiro，Alan R.Liss，New York和Flow  Cytometry，First Principles(第二版)2001，A.L.Given，Wiley Liss。

诸如FLC特异性抗体等结合抗体之一与诸如聚苯乙烯或乳胶小球等小 球结合。将小球与样品以及第二种检测抗体混合。检测抗体优选地用可检 测的标记来标记，其与样品中待检测的FLC结合。当存在待分析的FLC时， 这产生经标记的小球。

也可使用对于本文所述的其他分析物特异性的其他抗体，以允许对于 那些分析物的检测。

随后可以通过流式细胞仪检测经标记的小球。对于例如抗游离λ抗体 和抗游离κ抗体，可以使用不同的标记，例如不同的荧光标记。在此分析 中或本文所述的其他分析中也可以使用对于本文所述的其他分析物特异性 的其他抗体，以对那些分析物进行检测。这允许同时测定结合的各类型的 FLC的量或允许测定其他分析物的存在。

可选地，或额外地，对于不同抗体，例如对于不同标志物特异性抗体， 可以使用不同大小的小球。流式细胞仪可以辨别不同大小的小球，并且因 此可以迅速地确定样品中各FLC或其他分析物的量。

可选的方法使用与例如荧光标记的小球例如可商购的Luminex^TM小球 结合的抗体。不同的小球与不同的抗体一起使用。不同的小球用不同的荧 光团混合物标记，由此允许通过荧光波长测定不同的分析物。Luminex小 球可获自Luminex Corporation，Austin，Texas，United States of America。

优选地，使用的分析是浊度法(nephelometric method)或混浊度法 (turbidimetric method)。用于检测λ-FLC或κ-FLC的浊度分析和浑浊度分析 是本领域中公知的，但对于总FLC分析却并非如此。对于分析而言，它们 具有最佳的灵敏度水平。可以分别地测定λFLC和κFLC浓度，或单次分 析总FLC。这样的分析通常包含50∶50比例的抗-κFLC抗体和抗-λFLC抗 体。

也可以产生针对于游离λ和游离κ轻链的混合物的抗体。

可以将总FLC的量与标准的预定值相比较，以确定总量是高于正常值 还是低于正常值。

如下文所详细讨论的，申请人已发现，高于正常浓度的血清FLC与存 活降低可能性的显著增加相关。对于例如具有较低血清FLC水平的人而言 更是如此。由本文中所示的数据，血清FLC的正常水平通常为约15-35mg/L 或20-35mg/L、26-35mg/l、或优选地25-32、或24-33mg/l总FLC。高于 33、例如高于34、高于36、高于40、高于42、高于48、高于50、高于52、 高于55、高于70mg/l的总血清FLC显示较早死亡的可能性增加。个体的 血清中33mg/ml或低于30、低于28、低于26或低于25mg/l与对象的存 活的显著增加有关。存活的可能性的增加可以是在2年、4年、6年、8年、 10年、12年、14年、16年或更多年的时间段中。申请人已确定较低的FLC 浓度与存活可能性的增加之间的关系在超过160个月的时间段内是显著的。 参见例如图1。

历史上，已制备用于分别地测量κFLC和λFLC的分析试剂盒，以允 许计算比例。它们已被常规地用于已显示出疾病症状的个体中。

优选地，分析能够测定样品中约1mg/L-100mg/L或1mg/L-80mg/L 的FLC，例如总FLC。预期其检测绝大多数个体中的血清FLC浓度，而不 需要以不同的稀释度重新分析样品。

当前强调关注较低浓度是指优选地所述诊断分析能够检测低于30 mg/L的FLC，更优选低于20mg/L或低于10mg/L，低于4mg/L或1mg/L 的血清FLC。

优选地，所述方法包括使用免疫分析，例如通过使用抗游离κ轻链和 抗游离λ轻链抗体或其片段的混合物来检测样品中总游离轻链的量。这样 的抗体可以为50∶50比例的抗κ∶抗λ抗体。结合至FLC的抗体或片段可以 通过使用经标记的抗体或片段直接地检测，或使用经标记的抗所述抗游离λ 的抗体或抗所述抗游离κ抗体的抗体间接地检测。

抗体可以为多克隆的或单克隆的。可以使用多克隆抗体，由于它们是 针对相同链的不同部分而产生的，所以其能够检测相同类型轻链之间的一 些变化。多克隆抗体的产生描述于例如WO97/17372中。

优选地，确定的并发现对于显示整体存活可能性增加而言显著的血清 FLC例如总FLC的量为低于33，低于32，低于31，低于30，低于28，低 于26，低于25或低于24mg/ml，低于20mg/L或低于15mg/L。

相反地，认为高于33mg/L，特别是大于34、36、38、40、50、55、 60，或高于70mg/ml的水平表明对象的整体死亡的可能性增加。所述方法 可以用于在看似健康的对象中显示不良的预后。或用于突显可能存在未检 测到的医学问题，为进一步的研究提供证明。

还可以对样品中的一种或多种其他标志物进行测试。这些标志物包括 胆固醇、肌酸酐(肾功能的标志物)、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C或CRP。总 体而言，这样的分析的应用是本领域已知的。预期使用其他标志物能够提 供进一步的数据并且改善预后的准确度或者辅助潜在疾病/医学问题的诊 断。

还提供了用于总TLC的分析试剂盒，例如用于本发明方法中的分析试 剂盒。所述试剂盒可以检测样品中总FLC的量。这样的分析试剂盒可适于 检测样品中低于25mg/L，最优选地，低于20mg/L或约10mg/L，低于5 mg/L或4mg/L的总游离轻链(FLC)的量。分析试剂盒可以为例如浊度分析 试剂盒。优选地，试剂盒为包含一种或多种抗FLC的抗体的免疫分析试剂 盒。通常，试剂盒包括抗κ和抗λFLC抗体的混合物。通常，使用50∶50 抗游离κ和抗游离λ抗体的混合物。试剂盒可适于检测样品中1-100mg/L 或优选地1-80mg/L量的总游离轻链。

也可以使用能够结合FLC的抗体片段，例如(Fab)₂或Fab抗体的片段。

可以例如使用上述的标记将抗体或片段标记。可以提供经标记的抗免 疫球蛋白结合抗体或其片段以检测结合至FLC的抗游离λ或抗游离κ。

试剂盒可以形成包含用于测试如上所述的其他标志物例如胆固醇、肌 酸酐等的成分的测试分析试剂盒的一部分。可以提供用于这样的标志物的 抗体。

试剂盒可以包含校准流体，以允许测试在所示范围校准。校准流体优 选地包含预定浓度的FLC，例如低于25mg/ml，低于20mg/ml，低于10 mg/ml，低于5mg/L或低至1mg/L。通过优化抗体的量和“阻滞”涂布在乳 胶颗粒上的蛋白且例如通过优化补充试剂的浓度例如聚乙二醇(PEG)浓度， 所述试剂盒也可适用。

试剂盒可以包含例如可能被分析的FLC或甚至其他化合物例如胆固 醇、肌酸酐、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C或CRP(c-反应蛋白)的多种标准对照。 标准对照可以被用于证实待产生的FLC或其他成分的浓度的标准曲线。这 样的标准对照确认先前校准的标准曲线对于所使用的试剂和条件是有效 的。它们通常与获自对象的样品的分析基本上同时使用。标准可以包含一 种或多种低于20mg/L的用于FLC的标准，更优选地低于15mg/L，低于 约10mg/L或低于5mg/L，以允许所述分析能够用于检测较低浓度的游离 轻链。

分析试剂盒可以为浊度试剂盒或混浊度试剂盒。其可以为ELISA、流 式细胞仪、荧光、化学发光或小球类分析或纤维素试纸。这样的分析通常 是本领域已知的。

试剂盒还可以包括用于本发明方法的使用说明。使用说明可以包括对 于被认为是正常值的总游离轻链的浓度的指示，低于所述值或甚至高于所 述值表明个体存活可能性增加或降低的指示。这样的浓度可以如上所定义。

附图说明

参考以下附图，将仅通过实施例的方式描述本发明：

图1显示基于其总FLC浓度而被分为三分位数(tertiles)的研究群体的存 活可能性。图表由上至下显示：线1：具有约20mg/l总FLC的中间浓度的 个体；线2：具有28.2mg/l的中间浓度的个体；和线3(下方的线)：约42mg/l 的中间浓度。所述存活图表中有16554人。

图2显示存活图表图1中显示的三分位数的总FLC浓度的范围(以mg/ 分升表示)。

图3显示以十分位数(deciles)表示的数据的进一步的分析，使用150月 时的十分位数顺序的图表，从第一个十分位数最上方的线至最下方的第十 个十分位数。

图4显示除去MGUS和/或异常FLC患者的数据，使用150月时的十 分位数顺序的图表，从第一个十分位数最上方的线至最下方的第十个十分 位数。

图5是使用分离的、可商购的抗游离κ和抗游离λ分析试剂盒获得的 总FLC浓度之间的比较，与使用组合的抗λ和抗κ游离轻链抗体的总FLC 分析试剂盒相比较。

图6(a-h)显示获自患者血清中c-反应蛋白(CRP)水平和FLC水平的比 较，表明它们互相之间没有关联。

具体实施方式

美国的Mayo Clinic已监测了Olmsted County，Minnesota的＞20000名年 龄为50岁或更高的居民。使用获自The Binding Site Group Limited， Birmingham，United Kingdom的用于游离κ和λ轻链的“Freelite^TM分析，在 存档的冷冻的血清中追溯性地测量FLC浓度。Freelite分析是可商购的浊度 分析和浑浊度分析，其被FDA批准作为辅助浆细胞病症例如多发性骨髓瘤 和AL淀粉样变性病的诊断和监测。这些病症通常产生升高浓度的λ或κ FLC以及异常的FLC比例。

Mayo Clinic的研究者测量存档血清中FLC的意图是确定是否有对象具 有异常的FLC比例和一种或两种FLC的浓度升高。随后对具有这样的FLC 异常但没有单克隆完整免疫球蛋白产生的证据的对象进行研究，以确定他 们是否具有升高的恶性浆细胞病症的风险。然而，申请人推测，对于具有 较低的总FLC水平的那些对象，对于没有任何单克隆免疫球蛋白或单克隆 FLC产生的证据的对象的分析将表明存活增加。上述数据证明这是正确的。

图1显示基于其总血清FLC浓度而被分为三分位数的群体的存活图表。 三分位数，一、二、三(从顶部至底部)的特性列于下表中。

数据的散布示于图2中。

对数据进行进一步分析，从而以十分位数的形式呈现所有对象和未显 示出MGUS和/或异常FLC比例的那些对象的数据。十分位数水平示于下 表中：

十分位数分割的总和κ和λ游离轻链水平(mg/L)

图3和图4显示所有患者的数据和除去MGUS和/或异常FLC比例患 者后的数据，表明存活因具有MGUS和/或异常FLC比例而并不显著。FLC 的水平越高，存活越低。在150月标记处的由图的顶部至底部的线分别显 示十分位数1、2、3、4、5、6、7、8、9、和10，显示存活和FLC浓度之 间的良好关系。

分析试剂盒

本发明的方法可以使用以下分析试剂盒。分析试剂盒将患者样品例如 血清中存在的总游离κ加λ轻链定量。这可以通过用抗游离κ和抗游离λ 轻链绵羊抗体的50∶50共混物涂布100nm羧基修饰的乳胶颗粒而实现。在 下述分析中，总游离轻链的测量范围为1-80mg/L。然而，可以同等地考虑 其他测量范围。

使用本领域中公知的技术制备抗游离κ和抗游离λ抗血清，在此具体 的情况中是在绵羊中制备。通用的免疫方法描述于WO 97/17372中。

使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)将抗κ和抗λ抗血清稀释至相同的浓度。将 这些抗体组合以产生包含50％抗κ抗体和50％抗λ抗体的抗血清。

以10mg/批次的涂布负荷将抗体涂布于羧基修饰的乳胶上。这使用标准 步骤完成。参见例如“Microparticle Reagent Optimization：A laboratory  reference manual from the authority on microparticles”Eds：Caryl Griffin，Jim  Sutor，Bruce Shull.Copyright Seradyn Inc，1994(P/N 0347835(1294)。

此参考文献还提供了使用聚乙二醇(PEG)优化分析试剂盒的详细内容。

将组合的抗体与使用可商购的κ和λFreelite^TM试剂盒(获自Binding Site  Group Limited，Birmingham，United Kingdom)获得的结果相比较。这样的试 剂盒在分离的分析中确定κ游离轻链和λ游离轻链的量。使用总FLC试剂 盒生成曲线，其使用对照的浓度确认。对于总游离轻链，在1和80mg/l 之间能够获得校准曲线。在以下结果表中，使用κFreeliteTM、λFreeliteTM 和总游离轻链分析获得κ游离轻链(KFLC)、λ游离轻链(LFLC)和总FLC的 结果。显示15个不同的正常血清样品的这些结果。通过浊度测定法测量的 结果示于下表和图5中。

结果显示使用基于抗-κ和抗-λ游离轻链抗体的总游离轻链分析的原则 是可行的。

结果

C-反应蛋白(CRP)和FLC浓度受不同因子的影响

介绍

C-反应蛋白(CRP)是阳性急性期蛋白，并且在炎性反应期间和响应某些 肿瘤时被发现在血清中的浓度升高。由于人们认为免疫球蛋白游离轻链 (FLC)以免疫球蛋白合成的“副产物”的形式产生，因此可能在两种蛋白的血 清浓度之间存在相关度。以下研究的目的是确定两种蛋白在获自重症监护 室的患者的一系列血清中的浓度，通常，预期这些患者在他们在重症监护 室停留的期间显示出CRP浓度的显著变化。

患者和方法

出于各种原因，所有患者都经历研究和干预(在重症监护室内)。在他们 在重症监护室内期间的整个时间内收集一系列的血液样品，并且通过免疫 浊度法测量CRP和FLC的浓度。如上所述测定FLC。使用获自Roche的 可商购的试剂盒(CRPL3 Tima-quant C-Reactive Protein)测量CRP。

结果

结果示于附图中(参见图6)。

对于FLC和CRP两者浓度的变化而言，一些患者显示出相当好的一致 性。对于监测期的一部分而并非全部而言，其他患者显示出相似的趋势。 在许多患者中，FLC浓度的变化与CRP所显示的变化相反。

结论

尽管一些患者显示出CRP和FLC浓度之间一定程度的相似性，但其他 患者显示出截然不同的变化方式。这表明不同的因子控制两种蛋白的浓度， 且不能认为它们是可互换的。

其他数据

使用获自世界各处的患者的不同样品重复对于存活的数据分析。来自 德国Essen的超过4000名的一群患者显示出与上述结果相似的结果。对来 自New Cross Hospital，Wolverhampton，UK的约500名患者进行存活随访， 所述患者已进行了除要求血清蛋白电泳外的血清游离轻链测量。观察到相 似的存活差异，60个月之后，第一个十分位数有约98％存活且第五个十分 位数有50％存活(数据未示出)。

还研究了Queen Elizabeth Hospital，Birmingham，UK的1328名患有慢性 肾病(CKD)的患者。其中，897名患有不同病因的CKD，384名接受过肾移 植，且47名正在接受定期血液透析。对于基于血清肌酸酐浓度而被分组为 不同CKD阶段的患者进行存活研究，对于年龄、性别和种族进行校正(数 据未示出)。研究显示组合的游离κ加游离λ浓度仍为存活风险提供了指示， 而与CKD阶段无关。因此，FLC浓度和存活并非简单地由肾功能决定，而 是也由其他因子决定。