一种甜菜夜蛾病毒原药的制备方法

摘要

本发明公开了一种甜菜夜蛾病毒原药的制备方法，其步骤是：（1）健康甜菜夜蛾幼虫饲养；（2）制备甜菜夜蛾病毒感染液；（3）人工饲料定量接种病毒；（4）以人工饲料一定比例投放适龄幼虫至容器内；（5）恒温、恒湿培养72小时后将带病幼虫集中收获至另一容器内任其液化死亡；（6）待其完全死亡后收至冰箱内保存备用。每次收集的病毒含量可达到200亿PIB/克是原手工工艺的四倍，且纯度高。本发明方法易行，操作简便，效率高、大幅度减少劳动强度和重复劳动；成本低、投入小,工具简单易操作。通过多少试验解决了甜菜夜蛾病毒生产的瓶颈。用机械收集感病幼虫速度是手工收集速度的6-8倍。

说明书

技术领域

本发明涉及病毒原药技术领域，更具体涉及一种甜菜夜蛾病毒原药的高效 制备方法，适用于昆虫病毒生物农药制备及生物防治。

背景技术

甜菜夜蛾(Beet armyworm)学名Spodoptera exigua Hiibner俗称白菜褐夜 蛾，隶属于鳞翅目、夜蛾科，是一种世界性分布、间歇性大发生的以危害蔬菜 为主的杂食性害虫。对大葱、甘蓝、大白菜、芹菜、菜花、胡萝卜、芦笋、蕹 菜、苋菜、辣椒、豇豆、花椰菜、茄子、芥兰、番茄、菜心、小白菜、青花菜、 菠菜、萝卜等蔬菜都有危害。

甜菜夜蛾的发生规律、危害特点：初龄幼虫在叶背群集吐丝结网，食量小， 3龄后，分散为害，食量大增，昼伏夜出，危害叶片成孔缺刻，严重时，可吃 光叶肉，仅留叶脉，甚至剥食茎杆皮层。幼虫可成群迁飞，稍受震扰吐丝落地， 有假死性。3-4龄后，白天潜于植株下部或土缝，傍晚移出取食为害。一年发生 6-98代，7-8月发生多，高温、干旱年份更多，常和斜纹夜蛾混发，对叶菜类 威胁甚大。近年来，随着全球气候变暖和其它因素的影响，甜菜夜蛾的发生和 危害呈逐年加重的趋势。

甜菜夜蛾病毒是一种新型活体病毒杀虫剂，其杀虫机理是病毒经害虫取食 后直接作用于害虫幼虫的脂肪体和中肠细胞核，并迅速复制，导致幼虫染病死 亡。甜菜夜蛾感染病毒后，很快体色由青绿色逐渐变为黄绿色，最后变为灰白 色，体节肿胀，食欲不振，直至死亡，死亡后表皮脆弱，容易液化。该病毒通 过病虫粪便及死虫感染其他健康甜菜夜蛾，在田间引起“瘟疫”，导致大量幼虫 死亡。该病毒专一性强，只对靶标害虫有效，不影响害虫的天敌，不污染环境， 持效期长，是防治目标害虫的主要生物制剂之一，安全环保，不杀伤害虫天敌， 如草蛉、瓢虫、马蜂等，从而达到长期有效控制害虫种群增长的目的，持效期 长达10-15天。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种机械化高效制备甜菜夜蛾病毒原液的方 法。方法易行，操作简便，效率高(是手工工效的6-8倍)、大幅度减少劳动强 度和重复劳动；成本低、投入小，工具简单易操作。

为达到上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种甜菜夜蛾病毒原药的机械化高效制备方法，其步骤是：

(1)健康甜菜夜蛾幼虫饲养；将甜菜夜蛾蛹放入产卵箱内羽化、产卵，收 集产卵纸消毒后，放入孵化器内孵化，用优选法挑出健壮的幼虫于人工饲料盘 中，每孔2条幼虫。

(2)制备甜菜夜蛾病毒感染液；将挑选的典型病死虫经研磨、过滤、离心 提纯(镜检无杂质)后装入容器内作病毒原液置冰箱保存。用血球计数方法测 定病毒原液浓度，用公式：原液浓度÷所需浓度-1＝稀释倍数制备5万PIB/毫 升的感染液。

(3)人工饲料定量接种病毒；将制备好的病毒感染液用感染器械以每孔 0.05ml的剂量喷入幼虫饲料盘。

(4)以人工饲料一定比例(0.5-1g饲料/虫)投放适龄幼虫至饲料盘内；

(5)恒温(23-25℃)、恒湿(60-70％)培养72小时后将带病幼虫集中 收获至另一容器内任其液化死亡；

(6)待其完全死亡后收至冰箱内保存备用。

作为优选方案，其中所述甜菜夜蛾病毒感染液浓度为5万PIB/毫升。

作为优选方案，其中所述定量接种病毒的量为10毫升(200头甜菜夜蛾幼 虫为标准)。

作为优选方案，其中所述人工饲料按一定比例投放，此比例为0.8g饲料/ 虫。

作为优选方案，其中所述集中收集器为真空收集器；

作为优选方案，其中所述冰箱保存温度为4℃左右。

本发明具有以下有益效果：

本发明根据甜菜夜蛾幼虫在感染病毒死亡后表皮脆弱容易液化不好收集的 特点，特发明了一套用于专门机械化高效收集甜菜夜蛾病毒的方法便于得到大 量的感病幼虫，让其在收集器内直接液化从而获得高含量的病毒原液，因此， 本发明的高效制备甜菜夜蛾病毒的方法在获得大量甜菜夜蛾病毒原液的同时减 少了劳动强度和重复劳动；成本低、投入小工具简单易操作；并可获得高达200 亿PIB/克的病毒原液，为制备病毒原药节省时间和成本，是手工工艺工效的6-8 倍。每次收集的病毒含量可达到200亿PIB/克是原手工工艺的四倍，且纯度高。 本发明效率高、大幅度减少劳动强度和重复劳动；成本低、投入小工具简单易 操作，通过多少试验解决了甜菜夜蛾病毒生产的瓶颈。用机械收集感病幼虫速 度是手工收集速度的6-8倍。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步描述。

实施例1：

一种甜菜夜蛾病毒原药的机械化高效制备方法，其步骤是：

A、健康甜菜夜蛾幼虫饲养；

将甜菜夜蛾蛹放入产卵箱内羽化、产卵，收集产卵纸消毒后，放入孵化器 内孵化，用优选法挑出健壮的幼虫于人工饲料盘中，每孔2条幼虫。

B、制备甜菜夜蛾病毒感染液；

将挑选的典型病死虫经研磨、过滤、离心提纯(镜检无杂质)后装入容器 内作病毒原液置冰箱保存。用血球计数方法测定病毒原液浓度，用公式：原液 浓度÷所需浓度-1＝稀释倍数制备5万PIB/毫升的感染液。

C、人工饲料定量接种病毒；

(将制备好的病毒感染液用感染器械以每孔0.05ml的剂量喷入幼虫饲料 盘)

D、以人工饲料一定比例(0.5-1g饲料/虫)投放适龄幼虫至容器内；

E、恒温23-25℃)、恒湿(60-70％)培养72小时后将带病幼虫集中收获 至另一容器内任其液化死亡；

F、待其完全死亡后收至冰箱内保存备用。

实施例2：

(1)健康甜菜夜蛾幼虫饲养；

(2)制备甜菜夜蛾病毒感染液5万PIB/毫升；

(3)人工饲料定量接种病毒10毫升；

(4)以人工饲料0.8克饲料/虫投放适龄幼虫至容器内；

(5)恒温、恒湿培养72小时后将带病幼虫用真空收集器集中收获至另一 容器内任其液化死亡；

(6)待其完全死亡后收至冰箱内4℃保存备用。

表1：不同方法生产甜菜夜蛾病毒效果对照表

  方法   收集效果(亿PIB/克)   用时   手动收集   50   12小时   真空收集器收集   200   1-2小时

从表1中可以看出，用真空收集器收集的甜菜夜蛾病毒浓度达到200亿PIB/ 克，是手工收集的4倍，用时是手工收集的6倍。

以上仅为本发明所列举的较佳实施例，并非用以限制本发明的保护范围， 所属技术领域中的普通技术人员运用本发明所作的等效修饰或变化，均同理应 属于本发明的专利保护范围。