百日咳杆菌69KD外膜蛋白的纯化方法

摘要

本发明属于蛋白分离纯化领域，涉及百日咳杆菌的69KD外膜蛋白的工业化大规模分离纯化方法。所述方法包括：a.将百日咳杆菌CS菌体用含1mol/L至2mol/L氯化钠的pH8.8的缓冲液在40至60℃浸提30分钟至3小时，离心，收集上清，得到含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清；b.在含有所述69KD外膜蛋白的菌体裂解物上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到15％重量/体积至25％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，收集上清；c.在步骤b收集的上清中加入硫酸铵使硫酸铵浓度达到30％重量/体积至38％重量/体积，静置1小时至8小时，离心，弃上清，收集沉淀；d.以Tris-HCl缓冲液溶解步骤c中收集的沉淀并透析除去硫酸铵；e.过DEAE sepharose离子交换柱，用线性梯度氯化钠浓度从0mol/L至1mol/L的缓冲液洗脱，收集目的蛋白。本发明的方法可以快速、简便、低成本纯化天然构象69KD外膜蛋白，从而可用于大规模工业制备天然构象69KD外膜蛋白。