从远志中分离制备细叶远志皂苷的方法

摘要

本发明涉及一种细叶远志皂苷化学对照品的分离制备方法。是以干燥的远志药材为原料，获得纯度大于98%的细叶远志皂苷化学对照品。工艺步骤如下：将干燥的远志药材粉碎，加入乙醇水溶液回流提取，减压浓缩提取液得膏状物，加入溶剂超声提取，弃去提取液，将残渣挥干试剂，加入10%的氢氧化钠溶液加热回流，冷却后加入浓盐酸调pH至1~5，静置至析出沉淀，对沉淀物进行柱层析，即得高纯度细叶远志皂苷。本发明所用原料廉价易得，对环境污染小，工艺简单易行，所获得的细叶远志皂苷成本较低、纯度高。

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分的分离制备，具体是从远志中分离制备细叶远志皂苷化学对照品的方法。

技术背景

细叶远志皂苷，全称远志皂苷元--3--O--β--D--吡喃葡萄糖苷 ，英文名为tenuifolin，其结构式如下，是一类五环三萜类化合物，为远志总皂苷的碱水解物，从2010版《中国药典》开始作为中药化学对照品用于远志药材的质量评价。

目前文献报道已有学者对细叶远志皂苷提取分离。董晓兵等（远志皂苷对照品细叶远志皂苷的制备．董晓兵等．中药新药与临床药理，第18卷第1期．2007）主要采用以下步骤：药材提取—大孔柱层析—碱水解—乙酸乙酯萃取—水饱和正丁醇萃取—硅胶柱层析—重结晶。此方法较为繁琐，成本较大，且在制备过程中需要多种有机材料及化学试剂，对环境污染较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从远志中分离制备细叶远志皂苷的方法，该方法操作步骤简单，对环境污染较小，细叶远志皂苷纯度在98%以上，可以作为化学对照品。

本发明提供的一种从远志中分离制备细叶远志皂苷的方法，包括如下步骤：

步骤1、将干燥的远志药材粉碎，加入5~10倍量的50~90%的乙醇溶液回流提取，提取液经过滤，浓缩，得浸膏；

步骤2、将步骤1所得浸膏加入1~5倍量石油醚超声或搅拌提取2~3次，每次1.5~4小时，静置分层，取下层挥干试剂，得干粉；

步骤3、将步骤2所得的干粉中加入20~300倍量质量百分浓度为10%的氢氧化钠溶液，加热回流1.5~4小时，冷却后加入浓盐酸调节pH至1~5，静置至析出沉淀，过滤，滤渣干燥，得干粉；

步骤4、对步骤3所得干粉过硅胶柱，以乙酸乙酯:甲醇:水=15~20:2:1体积比的混合液洗脱，薄层层析检测，合并含细叶远志皂苷的部分，浓缩，得细叶远志皂苷粗品；

步骤5、对步骤4所得粗品进行重结晶，所得白色晶体即为高纯度的细叶远志皂苷。其可以作为化学对照品。

所述步骤2中1~5倍量石油醚优选2倍量。

所述步骤4中乙酸乙酯:甲醇:水的体积比优选为15:2:1。

所述步骤4中所述薄层层析的条件为：乙酸乙酯:甲醇:水=11:2:1或氯仿:甲醇:水=75:25:2，显色剂为硫酸香草醛溶液，105℃加热至出现蓝紫色斑点，出现蓝紫色斑点表明含细叶远志皂苷。

本发明的优点是：操作步骤简单，所用有机材料及化学试剂较少，对环境污染较小，所获得的细叶远志皂苷成本较低，纯度高，经高效液相色谱法检测纯度可达98%以上，可作为化学对照品用来控制有关远志药材及制剂的质量。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的细叶远志皂苷的纯度分析色谱图。

图2为本发明实施例1制备的细叶远志皂苷的¹H NMR图。

具体实施方式

通过以下实施例进一步详细说明本发明，但本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。

实施例1

将干燥的远志药材粉碎，取150g加入1200ml 75%的乙醇溶液浸泡半小时后，加热回流提取3小时，3小时后过滤得滤液，重复3次，合并3次提取液，减压浓缩得浸膏。向浸膏中加入300ml石油醚，超声提取3小时，3小时后过滤得滤渣，滤渣挥干试剂得干粉。向干粉中加入4500ml为10%的氢氧化钠溶液，加热回流2小时，冷却后加入浓盐酸调节pH，使pH值为3.5，充分搅拌，静置至析出沉淀，过滤得滤渣，滤渣干燥，得干粉。对所得干粉进行硅胶柱层析（1:40，g/g），以乙酸乙酯:甲醇:水=15:2:1进行洗脱，并进行薄层层析检测，薄层层析条件为乙酸乙酯:甲醇:水=11:2:1，显色剂为硫酸香草醛溶液，合并105℃下加热后出现蓝紫色斑点的部分，减压浓缩，即得细叶远志皂苷粗品（干重2.5g，细叶远志皂苷含量为90%）。对其进行重结晶，得白色晶体2.25g。1H-NMR（600MHz，C5D5N）δ：5.89（1 H，m，H-12），5.10（1 H，d，J=7.5Hz，H-1 of Glc），1.99，1.54，1.05，1.00，0.85（each 3 H，s）。经高效液相色谱法检测其纯度99.9%。

高效液相色谱（HPLC）

定量方法为面积归一法

检测波长为203nm

HPLC条件：

柱子条件Diamonsil C18(2) 5u （200×4.6mm）

流速：1.0ml/min

进样量：20μL

流动相为甲醇:0.2%磷酸溶液=60:40

实施例2    

将干燥的远志药材粉碎取150g，加入1000ml的50%的乙醇溶液浸泡半小时后，加热回流提取3小时，3小时后过滤得滤液，重复3次，合并3次提取液，减压浓缩，得浸膏。向浸膏中加入200ml石油醚，超声提取4小时后，过滤得滤渣，滤渣挥干试剂得干粉。向干粉中加入4000ml10%的氢氧化钠溶液，加热回流3小时，冷却后加入浓盐酸调节pH，使pH值为2.0，充分搅拌，静置至析出沉淀，过滤得滤渣，滤渣干燥，得干粉。对所得干粉进行硅胶柱层析（1:30，g/g），得细叶远志皂苷粗品（干重2.3g，细叶远志皂苷含量为87%）。对其进行重结晶，得白色晶体2.0g,即为细叶远志皂苷。经高效液相色谱法检测其纯度99.7%。

实施例3

将干燥的远志药材粉碎取150g，加入900ml 70%的乙醇溶液浸泡半小时后，加热回流提取4小时，4小时后过滤得滤液，重复3次，合并3次提取液，减压浓缩，得浸膏。向浸膏中加入260ml石油醚，超声提取4小时后，过滤得滤渣，滤渣挥干试剂得干粉。向干粉中加入3500ml10%氢氧化钠溶液，加热回流3小时，冷却后并加入浓盐酸调节pH，使pH值为1，充分搅拌，静置至析出沉淀，过滤得滤渣，滤渣干燥，得干粉。对所得干粉进行硅胶柱层析（1:35，g/g），即得细叶远志皂苷粗品（干重2.65g，细叶远志皂苷含量为79.2%）。对其进行重结晶，得白色晶体2.1g,即细叶远志皂苷。经高效液相色谱法检测其纯度99.5%。

实施例4

将干燥的远志药材粉碎取150g，加入1400ml 60%的乙醇溶液浸泡半小时后，加热回流提取2.5小时，2.5小时后过滤得滤液，重复4次，合并4次提取液，减压浓缩，得浸膏。向浸膏中加入450ml石油醚，搅拌1.8小时，1.8小时后过滤得滤渣，滤渣挥干试剂得干粉。向干粉中加入3000ml10%的氢氧化钠溶液，加热回流2小时，冷却后加入浓盐酸调节pH，使pH值为4.0，充分搅拌，静置至析出沉淀，过滤得滤渣，滤渣干燥，得干粉。对所得干粉进行硅胶柱层析（1:50，g/g），即得细叶远志皂苷粗品（干重2.80g，细叶远志皂苷含量为79.3%）。对其进行重结晶，得白色晶体2.22g,即得细叶远志皂苷。经高效液相色谱法检测其纯度99.0%。

实施例5

将干燥的远志药材粉碎取150g，加入750ml 85%的乙醇溶液浸泡半小时后，加热回流提取3小时，3小时后过滤得滤液，重复3次，合并3次提取液，减压浓缩，得浸膏。向浸膏中加入500ml石油醚，搅拌3小时，3小时后过滤得滤渣，滤渣挥干试剂得干粉。向干粉中加入4000ml10%的氢氧化钠溶液，加热回流3小时，冷却后加入浓盐酸调节pH，使pH值为2.0，充分搅拌，静置至析出沉淀，过滤得滤渣，滤渣干燥，得干粉。对所得干粉进行硅胶柱层析（1:50，g/g），即得细叶远志皂苷粗品（干重2.3g，细叶远志皂苷含量为86%）。对其进行重结晶，得白色晶体1.98g,即为细叶远志皂苷。经高效液相色谱法检测其纯度98.7%。

上述实施例从远志中分离制备的细叶远志皂苷，经高效液相色谱法检测其纯度均在98%以上，可以作为化学对照品。