一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法

摘要

本发明涉及一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，该方法包括以下步骤：(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末用乙醇溶液回流提取，经过滤，合并提取液并回收溶剂；(2)将所述提取液稀释得到混浊液，该混浊液静置后，过滤，得到澄清溶液；(3)将非极性大孔吸附树脂用乙醇溶液溶胀后经水洗脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将所述湿树脂转入层析柱中形成树脂柱；(4)将所述步骤(2)所得的澄清溶液流过所述步骤(3)所得的树脂柱，并保留吸附1～4h；(5)将所述步骤(4)所得的树脂柱依次用水、乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；(6)将所述洗脱液经浓缩、干燥后，即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。本发明工艺简单、重复性良好，适于工业化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中草药有效成分的提取方法，尤其涉及一种从川西獐芽 菜植物中提取高纯度利胆、抗炎有效成分(龙胆苦苷、獐芽菜苦苷)的方法。

背景技术

川西獐芽菜(Swertia mussotii Franch)属龙胆科獐芽菜属植物，是藏医药 治疗肝胆系统疾病的常用药材，泛称“藏茵陈”的一种。研究资料表明，川西 獐芽菜中主要化学成分为含三萜类(如齐墩果酸)、酮类、芒果苷、龙胆苦苷、 獐芽菜苦苷、当要素等成分【<中华本草>藏药卷(M)2002，68-69】。龙胆苦 苷、獐芽菜苦苷具有促进胃液分泌、抗菌、利胆及抗炎等作用【梁向艳、田 琼等，中成药，2006，28(4)：548-552】；同时对各种原因导致的肝损伤、 胆囊炎、胆管阻塞具有良好的治疗作用。

目前，提取龙胆苦苷和獐芽菜苦苷的方法主要有微波提取，回流提取， 超声提取，冷浸提取等方法，提取溶剂有甲醇以及乙醇水等。微波提取、超 声提取法及溶剂甲醇多使用于有效成分含量分析方面【张兴旺，陶燕铎等， 中国野生植物资源，2010，29(2)：38-40；孙菁，陈桂琛等，分析试验室， 2006，25(5)：28-30】，不适合大生产。在分离纯化方面，多使用乙醇水系 统提取【才谦，刘涛等，中成药，2003，25(4)：271-272；王良贵，时珍国 医国药，2007，18(11)：2723-2724】，大孔树脂法分离。综合考虑生产实际， 本发明采用回流提取、大孔树脂分离、乙醇水作为提取和洗脱溶剂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、安全性良好的从川西 獐芽菜植物中提取有效成分的方法。

为解决上述问题，本发明所述的一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分 的方法，包括以下步骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末用质量浓度为50～80％的乙醇溶液按1∶ 5～1∶20的固液质量比在60～85℃下回流提取2～4次，每次1～4小时，经过滤 后，合并提取液并回收溶剂；

(2)将所述提取液稀释至质量浓度为10～30％，得到混浊液，该混浊液静置 6～48小时后，过滤，得到澄清溶液；

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为85～95％的乙醇溶液溶胀后经水 洗脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将所述100g～50kg湿树脂转入内 径为1.0～32.5cm的层析柱中形成树脂柱；所述大孔吸附树脂与所述乙醇的质 量体积比为1∶5～1∶15；

(4)将所述步骤(2)所得的澄清溶液以0.5～1.0BV/h的流速流过所述步骤(3) 所得的树脂柱，并保留吸附1～4h；

(5)将所述步骤(4)所得的树脂柱依次用水、质量浓度为10～75％的乙醇溶液 洗脱，收集洗脱液；

(6)将所述洗脱液经浓缩、干燥后，即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙 胆苦苷和獐芽菜苦苷。

所述步骤(1)中的干燥川西獐芽菜植物粉末是指长度≤5mm的干燥川西獐 芽菜植物全草寸段，或将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得到的长度≤5mm 的粉末。

所述步骤(2)中混浊液静置是指采用室温条件下静置或采用1～4℃冷藏静 置。

所述步骤(5)中乙醇溶液洗脱的流速为0.5～1.0BV/h。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明以川西獐芽菜植物全草为原料，以亲水性溶剂——乙醇溶液回 流提取，并利用对水溶性成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富 集，从而得到含量大于70％的有效成分——龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

2、由于本发明所用溶剂为亲水性溶剂，因此，具有良好的安全性。

3、由于本发明采用回流提取、大孔树脂分离、乙醇水作为提取和洗脱溶 剂，因此，工艺简单、重复性良好，适于工业化生产。

4、本发明设备投资小、操作方便，且成本低廉。

具体实施方式

实施例1一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全 草寸段用质量浓度为50％的乙醇溶液按1∶5的固液质量比(kg/kg)在60℃ 下采用TN-100提取回流浓缩机组(浙江华联制药机械股份有限公司)回流提 取2次，每次1小时，经过滤后，合并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为10％，得到混浊液，该混浊液在室温条件 下静置6小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为95％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将100g湿树脂转入内径为1.0cm的 层析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶15(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.5BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附1h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为10％的乙醇溶 液以0.5BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪(上海慧析精密仪器有限公司)浓缩 后，在85℃温度下干燥至恒重后，即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦 苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 73.89％和2.14％。

实施例2一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全 草寸段用质量浓度为80％的乙醇溶液按1∶20的固液质量比(kg/kg)在85℃ 下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取4次，每次4小时，经过滤后，合 并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为30％，得到混浊液，该混浊液在室温条件 下静置48小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为90％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将10kg湿树脂转入内径为10cm的 层析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶8(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以1.0BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附4h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为20％的乙醇溶 液以1.0BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后，在60℃温度下干燥至恒重后， 即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 74.95％和2.31％。

实施例3一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全 草寸段用质量浓度为60％的乙醇溶液按1∶10的固液质量比(kg/kg)在75℃ 下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取3次，每次2小时，经过滤后，合 并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为15％，得到混浊液，该混浊液在室温条件 下静置12小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为92％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将20kg湿树脂转入内径为10cm的 层析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶5(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.8BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附2h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为30％的乙醇溶 液以0.8BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后，在60℃温度下干燥至恒重后， 即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 79.76％和2.39％。

实施例4一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得 到的长度≤5mm的粉末用质量浓度为70％的乙醇溶液按1∶15的固液质量比 (kg/kg)在80℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取2次，每次3小 时，经过滤后，合并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为22％，得到混浊液，该混浊液在4℃冷藏 静置24小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为91％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将5kg湿树脂转入内径为5cm的层 析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶9(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.6BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附3h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为40％的乙醇溶 液以0.6BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后，在60℃温度下干燥至恒重后， 即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 78.62％和2.35％。

实施例5一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得 到的长度≤5mm的粉末用质量浓度为50％的乙醇溶液按1∶12的固液质量比 (kg/kg)在65℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取4次，每次1小 时，经过滤后，合并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为28％，得到混浊液，该混浊液在4℃冷藏 静置36小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为94％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将35kg湿树脂转入内径为18cm的 层析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶14(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.9BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附4h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为50％的乙醇溶 液以0.9BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后，在60℃温度下干燥至恒重后， 即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 78.23％和2.30％％。

实施例6一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——将干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得 到的长度≤5mm的粉末用质量浓度为75％的乙醇溶液按1∶18的固液质量比 (kg/kg)在70℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取3次，每次3小 时，经过滤后，合并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为26％，得到混浊液，该混浊液在3℃冷藏 静置30小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为88％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将15kg湿树脂转入内径为10cm的 层析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶9(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.7BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附4h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为60％的乙醇溶 液以0.8BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后，在60℃温度下干燥至恒重后， 即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 76.91％和2.14％。

实施例7一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末——长度≤5mm的干燥川西獐芽菜植物全 草寸段用质量浓度为83％的乙醇溶液按1∶8的固液质量比(kg/kg)在72℃ 下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取4次，每次1小时，经过滤后，合 并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为20％，得到混浊液，该混浊液在1℃冷藏 静置20小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为85％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将12kg湿树脂转入内径为10cm的 层析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶13(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以0.5BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附1h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为70％的乙醇溶 液以0.5BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后，在60℃温度下干燥至恒重后， 即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 74.26％和2.37％。

实施例8一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步 骤：

(1)将干燥川西獐芽菜植物粉末用质量浓度为65％的乙醇溶液按1∶10的 固液质量比(kg/kg)在80℃下采用TN-100提取回流浓缩机组回流提取2次， 每次4小时，经过滤后，合并提取液并回收溶剂。

(2)将提取液稀释至质量浓度为18％，得到混浊液，该混浊液在2℃冷藏 静置40小时后，过滤，得到澄清溶液。

(3)将非极性大孔吸附树脂用质量浓度为89％的乙醇溶液溶胀后经水洗 脱，使其逐渐过渡至水相，得到湿树脂；将50kg湿树脂转入内径为32.5cm 的层析柱中形成树脂柱；大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1∶7(g/ml)。

(4)将步骤(2)所得的澄清溶液以1.0BV/h的流速流过步骤(3)所得的树脂柱， 并保留吸附4h。

(5)将步骤(4)所得的树脂柱先用水洗脱，然后用质量浓度为75％的乙醇溶 液以1.0BV/h的流速洗脱，收集洗脱液。

(6)将洗脱液经N-1000D旋转蒸发仪浓缩后，在60℃温度下干燥至恒重后， 即得棕黄色或黄色粉末状有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷。

该有效成分龙胆苦苷和獐芽菜苦苷经高效液相色谱法测定，含量分别为 75.98％和2.32％。