一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法

摘要

一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法涉及粗肋草育种技术。包括如下步骤：丛生芽诱导，秋水仙素处理，低温处理，变异植株扩繁，多倍体鉴定，生根移栽。将变异植株经过5代繁殖后，再进行多倍体检测，可以有效降低嵌合体的比例；多倍体植株比对照茎干粗壮，矮化，株型更加美观；多倍体植株具有抗寒性，能耐5℃低温不出现冻伤，降低了冬季温室大棚加温费用，经济效益大大提高。

说明书

技术领域

本发明涉及粗肋草育种技术，尤其涉及一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法。

背景技术

粗肋草是天南星科粗肋草属（Aglaonema）植物的通称，又名广东万年青、亮丝草，原产于我国广东、广西、云南及东南亚的印度、泰国、越南、菲律宾、马来西亚、印尼和新几内亚等地，为多年生常绿草本植物。其叶片、叶柄和叶脉具有多姿多彩的颜色搭配，具有很强的欣赏价值，深受人们的喜爱，在国际上被列为理想的室内观叶植物。但是，粗肋草普遍在15℃以下即会出现冻伤现象，影响其冬季生产、销售。为此，通过诱导多倍体，培育出具有抗寒性的粗肋草新品种，对满足市场需要具有重要意义。

发明内容

本发明旨在克服粗肋草普遍在15℃以下即会出现冻伤现象、影响其冬季生产的不足，满足市场需求，提供一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法。

本发明一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法的技术方案是：

本发明一种抗寒粗肋草多倍体的诱导方法，包括如下步骤：

步骤一、丛生芽诱导：取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用洗衣粉溶液擦洗，流水冲洗掉洗衣粉，在超净工作台上将外植体置于含有吐温-20的0.1%升汞溶液中浸泡15～30min，无菌水冲洗，用灭菌滤纸吸干表面水分，插入丛芽诱导培养基内，置于温度为25±2℃，光照10～12h·d-1，光照强度为60～100μmol m^-2s^-1的培养室内诱导丛生芽；丛生芽诱导培养基为： MS+2-IP1～3mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+白糖25～35g/L+卡拉胶6～7g/L，pH值为6±0.5；

步骤二、秋水仙素处理：将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0.2%～0.3%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养48～72h，无菌水冲洗，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于25±2℃温室内，光照条件下恢复培养；恢复培养基为：MS+2-IP1～3mg/L+6-BA 2～4mg/L +白糖25～35g/L+卡拉胶6～7g/L，pH值为6±0.5；

步骤三、低温处理：将恢复培养15-20d的处理材料，置于0℃的培养箱内继续培养24～48 h。将处理材料重新转到25±2℃培养室内恢复培养；

步骤四、变异植株扩繁：将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基：MS+2-IP1 ～3mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+白糖25～35g/L+卡拉胶6～7g/L，PH值为6±0.5上进行扩繁；每30d继代一次，继代5次；

步骤五、多倍体鉴定：选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目；在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体；

步骤六、生根移栽：鉴定为多倍体的株系，长到3-4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根；生根培养基为：MS+2IP1～2mg/L+IAA1～2mg/L+IBA0.5～1mg/L+白糖25～35g/L+卡拉胶6～7g/L，PH值为6±0.5；生根苗转到日光温室大棚炼苗7-10d；把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩的基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和阴网，14～16d后掀开阴网和薄膜正常管理。

步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。

本发明是一种诱导抗寒性粗肋草多倍体植株的方法，具有突出的特点，其有益效果是：其一，将变异植株经过5代繁殖后，再进行多倍体检测，可以有效降低嵌合体的比例；其二，多倍体植株比对照茎干粗壮，矮化，株型更加美观；其三，多倍体植株具有抗寒性，能耐5℃低温不出现冻伤，降低了冬季温室大棚加温费用，经济效益大大提高。

 

具体实施方式

下面，介绍本发明的具体实施方式。

实施例一

步骤一、丛生芽诱导：取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用饱和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水冲洗掉洗衣粉后，在超净工作台上将外植体置于含有几滴吐温-20的0.1%升汞溶液中浸泡15-30min，无菌水冲洗4-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分后，插入丛芽诱导培养基内，置于温度为23℃，光照10h·d-1，光照强度为60μmol m^-2s^-1的培养室内诱导丛生芽。丛生芽诱导培养基为： MS+2-IP1mg/L+NAA0.2mg/L+白糖25g/L+卡拉胶6g/L，pH5.5。

步骤二、秋水仙素处理：将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0.2%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养48h，无菌水冲洗4-5次后，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于23℃温室内，光照条件下恢复培养。恢复培养基为：MS+2-IP1mg/L+6-BA 2mg/L +白糖25g/L+卡拉胶6g/L，pH5.5。

步骤三、低温处理：将恢复培养15-20d的处理材料，置于0℃的培养箱内继续培养24 h。将处理材料重新转到23℃培养室内恢复培养。

步骤四、变异植株扩繁：将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基：MS+2-IP1mg/L+NAA0.2mg/L+白糖25g/L+卡拉胶6g/L,pH5.5上进行扩繁。每30d继代一次，继代5次。

步骤五、多倍体鉴定：选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目。在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体。

步骤六、生根移栽：鉴定为多倍体的株系，长到3-4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根。生根培养基为：MS+2IP1mg/L+IAA1mg/L+IBA0.5mg/L+白糖25g/L+卡拉胶6g/L，pH5.5。生根苗转到日光温室大棚炼苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和单层阴网，15d后掀开阴网和薄膜正常管理。

步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。

实施例二

步骤一、丛生芽诱导：取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用饱和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水冲洗掉洗衣粉后，在超净工作台上将外植体置于含有几滴吐温-20的0.1%升汞溶液中浸泡15-30min，无菌水冲洗4-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分后，插入丛芽诱导培养基内，置于温度为25℃，光照11h·d-1，光照强度为80μmol m^-2s^-1的培养室内诱导丛生芽。丛生芽诱导培养基为： MS+2-IP2mg/L+NAA0.3mg/L+白糖30g/L+卡拉胶6.5g/L，pH5.8。

步骤二、秋水仙素处理：将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0.3%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养60h，无菌水冲洗4-5次后，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于25℃温室内，光照条件下恢复培养。恢复培养基为：MS+2-IP2mg/L+6-BA3mg/L +白糖30g/L+卡拉胶6.5g/L，pH5.8。

步骤三、低温处理：将恢复培养15-20d的处理材料，置于0℃的培养箱内继续培养36 h。将处理材料重新转到25℃培养室内恢复培养。

步骤四、变异植株扩繁：将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基：MS+2-IP2mg/L+NAA0.4mg/L+白糖30g/L+卡拉胶6.5g/L,pH5.8上进行扩繁。每30d继代一次，继代5次。

步骤五、多倍体鉴定：选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目。在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体。

步骤六、生根移栽：鉴定为多倍体的株系，长到3-4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根。生根培养基为：MS+2IP2mg/L+IAA2mg/L+IBA1mg/L+白糖30g/L+卡拉胶6.5g/L，pH5.8。生根苗转到日光温室大棚炼苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和单层阴网，15d后掀开阴网和薄膜正常管理。

步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。

实施例三

步骤一、丛生芽诱导：取无病虫害及健壮的粗肋草植株茎段或顶芽作为外植体，先用饱和洗衣粉溶液擦洗一遍，流水冲洗掉洗衣粉后，在超净工作台上将外植体置于含有几滴吐温-20的0.1%升汞溶液中浸泡15-30min，无菌水冲洗4-5次，用灭菌滤纸吸干表面水分后，插入丛芽诱导培养基内，置于温度为27℃，光照12h·d-1，光照强度为100μmol m^-2s^-1的培养室内诱导丛生芽。丛生芽诱导培养基为： MS+2-IP3mg/L+NAA0.5mg/L+白糖35g/L+卡拉胶7g/L，pH6.5。

步骤二、秋水仙素处理：将丛芽去顶连同下面的愈伤一起，置于含0.3%秋水仙素的溶液中黑暗条件下振荡培养72h，无菌水冲洗4-5次后，转入不含秋水仙素的恢复培养基上，置于27℃温室内，光照条件下恢复培养。恢复培养基为：MS+2-IP3mg/L+6-BA4mg/L +白糖30g/L+卡拉胶7g/L，pH6.5。

步骤三、低温处理：将恢复培养15-20d的处理材料，置于0℃的培养箱内继续培养48 h。将处理材料重新转到27℃培养室内恢复培养。

步骤四、变异植株扩繁：将外观与对照有变异的新长出的植株，转到继代培养基：MS+2-IP3mg/L+NAA0.5mg/L+白糖350g/L+卡拉胶7g/L,pH6.5上进行扩繁。每30d继代一次，继代5次。

步骤五、多倍体鉴定：选择外观表现稳定的变异株系，随机挑选5株进行根尖压片，观察染色体数目。在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确定该变异株系为多倍体。

步骤六、生根移栽：鉴定为多倍体的株系，长到3-4cm长时，从基部切下，转到生根诱导培养基上诱导生根。生根培养基为：MS+2IP2mg/L+IAA2mg/L+IBA1mg/L+白糖35g/L+卡拉胶7g/L，pH6.5。生根苗转到日光温室大棚炼苗7-10d。把生根苗取出，洗掉培养基后，移栽到泥炭及珍珠岩基质上，置于温室大棚中，盖上薄膜和单层阴网，15d后掀开阴网和薄膜正常管理。

步骤六中的所述基质中泥炭与珍珠岩的体积比为3:1。