一种高效结合IgG的重组蛋白A及其工程菌的构建方法

摘要

本发明公开了一种高效结合IgG的重组蛋白A及其工程菌的构建方法。根据NCBI公布的基因序列对金黄色葡萄球菌蛋白A的IgG抗体结合区E、D、A、B、C区域设计重组蛋白A引物，并在C端引物中添加一个半胱氨酸密码子。以金黄色葡萄球菌的基因组为模板，扩增得到编码重组蛋白A抗体结合区的基因(spa)，将其与质粒pMD18-T连接，转化感受态E.coil JM109，得到大量重组质粒pMD18-T-spa，从而保存基因和增加基因的拷贝数。提取重组质粒，用Noc I和BamH I对重组质粒和质粒pET-28a进行双酶切，连接重组质粒pET-28a-spa，转化感受态E.coil BL21，添加终浓度1mmol/L的IPTG于30℃诱导表达，经SDS-PAGE验证表达成功。