具有双光子激发控制释放功能的囊泡、制备方法及其用途

摘要

本发明公开了一种双光子激发控制释放功能囊泡、制备方法及用途；所述囊泡的制备方法为：合成通式为式(I)所示的双光子敏感性两亲分子：

说明书

技术领域

本发明涉及一种光敏感性的可控释放囊泡、制备方法及其用途；特别是涉及一种具有 双光子激发控制释放功能的囊泡、制备方法及其用途。

背景技术

长期以来，环境响应性药物载体是广大医药科研人员所关注的研究热点之一。与传统 药物载体相比，环境响应性药物载体不仅可增加药物在体内的稳定性，延长药物在人体的 循环时间，更为重要的是，它是一种主动给药方式，可以根据人体内各个部位pH、温度的 不同，或者引入光、电场或磁带等外界刺激引起载体结构发生变化，负载的药物分子得以 释放，从而降低药物的毒副作用和提高药物利用度。

随着激光技术和双光子材料的发展，近年来人们一直致力于将双光子技术应用到响应 性药物载体中。相比其它响应方式，双光子响应具有独特的优越性。首先双光子激发过程 使用的激光波长在生物光学窗口的范围内(600～900nm)，有效避免了生命体系的紫外光损 伤；其次生物组织对这一波段的光的线性吸收与Rayleigh散射均比较小，光波的穿透能力 强；由于分子双光子吸收几率与入射光强度的平方成正比，样品受激范围限制在λ³体积内 (λ为激发波长)，具有高度的空间选择性。

由于双光子激发具有生物损伤性小、穿透性强、空间选择性高等优点，具有双光子响应 的药物载体在生物体内药物可控释放方面具有很好的应用前景。但是，目前的双光子响应 性药物载体普遍存在双光子吸收截面小，响应效率低，或制备成本高昂等问题，因此设计 具有良好双光子响应的药物载体对于实现利用双光子控制释放药物具有重要的意义。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题在于提供一种具有双光子激发控制释放功能的囊泡； 该囊泡尺寸规整，具有良好的双光子响应性和生物相容性，且光解产物对人体无毒副作用， 它可以同时负载疏水性和水溶性底物分子，当用红光或近红外脉冲激光对其进行照射，双 光子敏感性基团发生断裂反应，导致囊泡被破坏，同时释放出包裹在囊泡里的底物分子， 通过改变光照时间和功率可实现对底物分子释放速度的控制。

本发明要解决的第二个技术问题在于提供一种具有双光子激发控制释放功能的囊泡的 制备方法。该方法工艺简单，适宜大量制备。

本发明要解决的第三个技术问题在于提供具有双光子激发控制释放功能的囊泡在双光 子控制释放底物分子方面的用途。

为解决上述第一个技术问题，本发明提供了一类具有双光子激发控制释放功能的囊泡， 包括如下结构式(I)的双光子敏感性两亲分子：

式中：

R₁为氢、卤素、少于3个碳原子的直链或支链烷基或烷氧基、羟基、氨基、硝基、氰基 或醛基；

R₂，R₃，R₄为氢、卤素、少于3个碳原子的直链或支链烷基或烷氧基、羟基、氨基、硝 基、氰基或醛基；R₂，R₃，R₄取代基可相同或不同；

R₅，R₅’为氢、10个以上碳原子的直链或支链饱和烷基；R₅和R₅’至少一个为具有10个以 上碳原子的直链或支链饱和烷基，其中碳原子可被卤素或苯基取代；

R₆为季铵盐、吡啶盐、羧酸盐、磺酸盐或结构单元大于4的聚乙二醇基团。

为解决上述第二个技术问题，本发明提供了一种具有双光子激发控制释放功能的囊泡的 制备方法，包括如下步骤：

1)将式(I)双光子敏感性两亲分子加入到水中；

2)超声波作用20分钟以上，使两亲分子在水中完全分散，然后在10～50℃下静置30 分钟以上，即可得到具有双光子激发控制释放功能的的囊泡；

所述双光子敏感性两亲分子与水的比例为0.1～5mg∶1mL。

得到的双光子激发控制释放功能的囊泡直径为50～500nm。

为解决上述第三个技术问题，本发明提供了一种用双光子激发控制释放囊泡中疏水性底 物分子的方法，包括如下步骤：

1)根据上述方法制备具有双光子激发控制释放功能的囊泡；

2)将疏水性底物分子加入到囊泡水溶液中，超声波作用10分钟以上，使底物分子包裹 进囊泡里；所述疏水性底物分子和囊泡水溶液的比例不高于0.5mg∶1mL；

3)用波长700～900nm的脉冲激光照射包裹了底物分子的囊泡水溶液，通过改变光照时 间和功率控制囊泡释放底物分子的快慢，并且根据底物分子吸收光谱的变化程度或利用高 效液相色谱检测来衡量释放量。

进一步地，本发明提供了一种用双光子激发控制释放囊泡中水溶性底物分子的方法，包 括如下步骤：

1)在制备具有双光子激发控制释放功能的囊泡的步骤1)中，同时加入水溶性底物分 子，超声波作用20分钟以上，使底物分子包裹在囊泡的内部水相中，得混合液；所述水溶 性底物分子和囊泡水溶液的比例不高于10mg∶1mL；

2)将混合液置于透析袋中，在水中透析除去未被包裹进囊泡的底物分子；

3)将包裹了底物分子的囊泡水溶液置于透析袋中，用波长700～900nm的脉冲激光对其 进行照射，通过改变光照时间和功率控制囊泡释放底物分子的快慢，并且根据透析液中底 物分子吸收光谱的变化程度来衡量释放量。

本发明具有如下有益效果：

本发明具有双光子激发控制释放功能的囊泡，具有良好的双光子响应性和生物相容性， 且光解产物对人体无毒物作用；组成囊泡的两亲分子合成简单，成本低廉；囊泡制备工艺 简单，尺寸规整，重复性好，适宜大量制备；该囊泡可以同时负载疏水性和水溶性底物分 子，当用红光或近红外脉冲激光对其进行照射，双光子敏感性基团发生断裂反应，导致囊 泡被破坏，同时释放出包裹在囊泡里的底物分子，通过改变光照时间和功率可实现对底物 分子释放速度的控制；由于双光子激发控制释放底物分子所采用的红光或近红外脉冲激光 具有生物损伤性小、穿透性强、空间选择性高等优点，本发明提供的双光子响应性囊泡有 望应用于生物体内的药物可控释放。

附图说明

图1，本发明制备的双光子激发控制释放功能囊泡光控释放底物分子的示意图。

图2，本发明实施例7制备的双光子激发控制释放功能囊泡的透射电镜照片。

图3，本发明实施例9制备的双光子激发控制释放功能囊泡的透射电镜照片。

图4，本发明实施例7制备的包裹了喜树碱的囊泡在近红外脉冲激光照射下喜树碱释放 量随光照时间的变化曲线。

图5，本发明实施例14制备的包裹了阿霉素的囊泡在近红外脉冲激光照射下阿霉素释 放量随光照时间的变化曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例详细介绍本发明，但以下的实施例仅限于解释本发明，本发明的保 护范围应包括权利要求的全部内容，通过以下实施例本领域技术人员即可以实现本发明权 利要求的全部内容。

下列实施例1～5为制备双光子敏感性两亲分子的实施例。

实施例1

制备双光子敏感性两亲分子，其结构如式(A)所示。

式(A)

其反应路线如下：

将1当量的4-羟甲基-7-氨基香豆素和6当量的溴代正十二烷以及8当量的碳酸钾加入 到干燥的DMF中，使完全溶解；在氮气保护保护下回流反应36小时；待反应结束后，冷却， 抽滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)， 7.35(d，1H)，6.68(dd，1H)，6.58(s，1H)，6.30(s，1H)，4.88(s，2H)，3.32(t， 4H)，1.59(m，4H)，1.31～1.28(m，36H)，0.89(t，6H)。MALDI-TOF MS(m/z)：[M+H]⁺528.4；

将1当量的前面所得到化合物和1当量的溴乙酸以及催化剂量的4-二甲氨基吡啶(DMAP) 加入到干燥的二氯甲烷中，使完全溶解；将1当量的N，N-二环己基碳酰亚胺(DCC)溶于适量 的二氯甲烷中，在冰水浴条件下，将其滴加到反应液中，大约30分钟滴加完成；室温反应 24小时；待反应结束后，加入少量水猝灭反应，将反应液过滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱 层析分离纯化得到黄色固体。将得到的到产物和过量的三乙胺加入到少量干燥的丙酮中， 加热到40℃；反应2天，待反应液冷却至室温后，将其倒入适量甲苯中，析出沉淀，抽滤 后得粉末状固体，将固体溶于乙腈，用乙醚沉淀，如此反复三次以上，真空干燥后得到结 构为式(A)的两亲分子。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)，7.35(d，1H)，6.68(dd，1H)， 6.58(s，1H)，6.30(s，1H)，5.25(s，2H)，4.21(s，2H)，3.55-3.45(m，6H)，3.32 (t，4H)，1.59(m，4H)，1.31～1.28(m，36H)，1.25(t，9H)，0.89(t，6H)。MALDI-TOF MS(m/z)：[M-Br]⁺669.5。

实施例2

制备双光子敏感性两亲分子，其结构如式(B)所示。

式(B)

其反应路线如下：

将1当量的3-甲基-4-羟甲基-6-氯-7-氨基香豆素和6当量的溴代正十二烷以及8当量 的碳酸钾加入到干燥的DMF中，使完全溶解；在氮气保护保护下回流反应36小时；待反应 结束后，冷却，抽滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体产物。¹H NMR(400 MHz，CDCl₃)δ(ppm)，7.03(s，1H)，6.71(s，1H)，4.88(s，2H)，3.32(t，4H)，2.01 (s，3H)，1.59(m，4H)，1.31～1.28(m，36H)，0.89(t，6H)。MALDI-TOF MS(m/z)：[M+H]⁺576.4；

将1当量的前面所得到化合物和1当量的溴乙酸以及催化剂量的4-二甲氨基吡啶(DMAP) 加入到干燥的二氯甲烷中，使完全溶解；将1当量的N，N-二环己基碳酰亚胺(DCC)溶于适量 的二氯甲烷中，在冰水浴条件下，将其滴加到反应液中，大约30分钟滴加完成；室温反应 24小时；待反应结束后，加入少量水猝灭反应，将反应液过滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱 层析分离纯化得到黄色固体。将得到的到产物和过量的三乙胺加入到少量干燥的丙酮中， 加热到40℃；反应2天，待反应液冷却至室温后，将其倒入适量的甲苯中，析出沉淀，抽 滤后得粉末状固体，将固体溶于乙腈，用乙醚沉淀，如此反复三次以上，真空干燥后得到 结构为式(B)的两亲分子。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)，7.03(s，1H)，6.71(s，1H)， 5.25(s，2H)，4.21(s，2H)，3.55-3.45(m，6H)，3.32(t，4H)，2.01(s，3H)，1.59 (m，4H)，1.31～1.28(m，36H)，1.25(t，9H)，0.89(t，6H)。MALDI-TOF MS(m/z)：[M-Br]⁺717.5。

实施例3

制备双光子敏感性两亲分子，其结构如式(C)所示。

式(C)

其反应路线如下：

将1当量的4-羟甲基-6-甲氧基-7-氨基香豆素和6当量的溴代正十二烷以及8当量的 碳酸钾加入到干燥的DMF中，使完全溶解；在氮气保护保护下回流反应36小时；待反应结 束后，冷却，抽滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体。¹H NMR(400MHz， CDCl₃)δ(ppm)，6.55(s，1H)，6.49(s，1H)，6.21(s，1H)，4.88(s，2H)，3.79(s， 3H)，3.32(t，4H)，1.59(m，4H)，1.31～1.28(m，36H)，0.89(t，6H)。MALDI-TOF MS (m/z)：[M+H]⁺558.2；

将1当量的前面所得到化合物和1当量的溴乙酸以及催化剂量的4-二甲氨基吡啶(DMAP) 加入到干燥的二氯甲烷中，使完全溶解；将1当量的N，N-二环己基碳酰亚胺(DCC)溶于适量 的二氯甲烷中，在冰水浴条件下，将其滴加到反应液中，大约30分钟滴加完成；室温反应 24小时；待反应结束后，加入少量水猝灭反应，将反应液过滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱 层析分离纯化得到黄色固体。将得到的到产物和过量的吡啶加入到少量干燥的丙酮中，加 热到50℃；反应2天，待反应液冷却至室温后，将其倒入适量的甲苯中，析出沉淀，抽滤 后得粉末状固体，将固体溶于乙腈，用乙醚沉淀，如此反复三次以上，真空干燥后得到结 构为式(C)的两亲分子。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)，9.10(t，2H)，8.62(d，1H)， 8.18(t，2H)，6.55(s，1H)，6.49(s，1H)，6.21(s，1H)，5.25(s，2H)，4.44(s，2H)， 3.79(s，3H)，3.33(t，4H)，1.59(m，4H)，1.31～1.28(m，36H)，0.89(t，6H)。MALDI-TOF MS(m/z)：[M-Br]⁺677.4。

实施例4

制备双光子敏感性两亲分子，其结构如式(D)所示。

式(D)

其反应路线如下：

将1当量的4-羟甲基-7-氨基香豆素和1当量的溴代正十四烷以及2当量的碳酸钾加入 到干燥的DMF中，使完全溶解；在氮气保护保护下回流反应36小时；待反应结束后，冷却， 抽滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体产物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃) δ(ppm)，7.35(d，1H)，6.68(dd，1H)，6.58(s，1H)，6.30(s，1H)，4.88(s，2H)， 3.32(t，2H)，1.59(m，2H)，1.31～1.28(m，22H)，0.89(t，3H)。MALDI-TOF MS(m/z)： [M+H]⁺388.2；

将1当量的前面所得到化合物加入到干燥的四氢呋喃中，使完全溶解；将1当量的羰 基二咪唑(CDI)溶于适量干燥的四氢呋喃中，在冰水浴条件下，将其滴加到反应液中，大约 30分钟滴加完成；升温至室温，再加入1当量的聚乙二醇600单甲醚，继续反应约4小时； 待反应结束后，加入少量水猝灭反应，将反应液过滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱层析分离 纯化得到结构为式(D)的两亲分子。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)，7.35(d，1H)，6.68 (dd，1H)，6.55(s，1H)，6.30(s，2H)，5.34(s，2H)，4.79(t，2H)，3.39(s，3H)， 3.33(t，2H)，1.59(m，2H)，1.31～1.28(m，22H)，0.89(t，3H)。

实施例5

制备双光子敏感性两亲分子，其结构如式(E)所示。

式(E)

其反应路线如下：

将1当量的4-羟甲基-6-甲氧基-7-氨基香豆素和1当量的溴代正辛烷烷以及2当量的 碳酸钾加入到干燥的DMF中，使完全溶解；在氮气保护保护下回流反应12小时；待反应结 束后，冷却，抽滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱层析分离纯化得到产物。将1当量所得到的 产物和1当量的苯基取代的溴代十四烷以及2当量的碳酸钾加入到干燥的DMF中，使完全 溶解；在氮气保护保护下回流反应36小时；待反应结束后，冷却，抽滤，滤液水洗、干燥， 硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体产物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)，6.55(s，1H)， 6.49(s，1H)，6.21(s，1H)，4.88(s，2H)，3.79(s，3H)，3.32(t，4H)，2.55，(t， 2H)，1.59(m，4H)，1.31～1.28(m，32H)，0.89(t，3H)。MALDI-TOF MS(m/z)：[M+H]⁺593.3；

将1当量的前面所得到化合物加入到干燥的四氢呋喃中，使完全溶解；将1当量的羰 基二咪唑(CDI)溶于适量干燥的四氢呋喃中，在冰水浴条件下，将其滴加到反应液中，大约 30分钟滴加完成；升温至室温，再加入1当量的聚乙二醇600单甲醚，继续反应约4小时； 待反应结束后，加入少量水猝灭反应，将反应液过滤，滤液水洗、干燥，硅胶柱层析分离 纯化得到结构为式(E)的两亲分子。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)，6.56(s，1H)，6.48 (s，1H)，6.21(s，1H)，5.32(s，2H)，4.79(t，2H)，3.78(s，3H)，3.39(s，3H)，3.32 (t，4H)，2.55，(t，2H)，1.59(m，4H)，1.31～1.28(m，31H)，0.89(t，3H)。

实施例6～15为制备双光子敏感性囊泡及双光子激发控制释放染料及药物分子的实施 例。

实施例6

1)将10mg式(A)化合物加入到50mL的去离子水中；

2)超声20分钟后，10℃下静置半小时，即可得到具有双光子激发控制释放功能的囊泡；

3)将100μL尼罗红的二氯甲烷溶液(4×10^-3mol·L^-1)加入到2)中的囊泡水溶液，超 声10分钟，静置过夜；

4)用旋转蒸发仪除去残留的二氯甲烷，得到包裹了尼罗红的囊泡；

5)取5mL包裹了尼罗红的囊泡水溶液，用Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激 光对其进行照射，波长800nm，通过改变光照时间和功率控制囊泡释放尼罗红分子的快慢， 根据尼罗红吸收光谱的变化来衡量释放量。

实施例7

1)将40mg式(B)化合物加入到50mL的去离子水中；

2)超声30分钟后，25℃下静置1小时，即可得到具有双光子激发控制释放功能的囊泡， 如图2所示，所得囊泡的直径为200～250nm；

3)将200μL抗癌药喜树碱的二氯甲烷溶液(6×10^-3mol·L^-1)加入到2)中的囊泡水溶 液，超声20分钟，静置过夜；

4)用旋转蒸发仪除去残留的二氯甲烷，得到包裹了喜树碱的囊泡；

5)取10mL包裹了喜树碱的囊泡水溶液，用Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激 光对其进行照射，波长800nm，通过改变光照时间和功率控制囊泡释放喜树碱的快慢，利用 高效液相色谱(HPLC)检测来衡量释放量。如图4所示，在黑暗条件，没有喜树碱释放出来， 而随着光照时间增加，喜树碱的释放量增加，表明本囊泡可以通过双光子激发控制其负载 的疏水性药物分子的释放过程。

实施例8

1)将100mg式(C)化合物加入到50mL的去离子水中；

2)超声60分钟后，40℃下静置2小时，即可得到具有双光子激发控制释放功能的囊 泡；

3)将300μL抗癌药紫杉醇的二氯甲烷溶液(5×10^-3mol·L^-1)加入到2)中的囊泡水溶 液，超声30分钟，静置过夜；

4)用旋转蒸发仪除去残留的二氯甲烷，得到包裹了紫杉醇的囊泡；

5)取10mL包裹了紫杉醇的囊泡水溶液，用Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激 光对其进行照射，波长820nm，通过改变光照时间和功率控制囊泡释放紫杉醇的快慢，利用 高效液相色谱(HPLC)检测来衡量释放量。

实施例9

1)将5mg式(D)化合物加入到50mL的去离子水中；

2)超声20分钟后，25℃下静置半小时，即可得到具有双光子激发控制释放功能的囊泡， 如图3所示，所得囊泡的直径为350～400nm；

3)将50μL抗癌药紫杉醇的二氯甲烷溶液(4×10^-3mol·L^-1)加入到2)中的囊泡水溶液， 超声10分钟，静置过夜；

4)用旋转蒸发仪除去残留的二氯甲烷，得到包裹了紫杉醇的囊泡；

5)取10mL包裹了紫杉醇的囊泡水溶液，用Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激 光对其进行照射，波长800nm，通过改变光照时间和功率控制囊泡释放紫杉醇的快慢，利用 高效液相色谱(HPLC)检测来衡量释放量。

实施例10

1)将20mg式(E)化合物加入到50mL的去离子水中；

2)超声30分钟后，50℃下静置1小时，即可得到具有双光子激发控制释放功能的囊泡；

3)将100μL抗癌药喜树碱的二氯甲烷溶液(4×10^-3mol·L^-1)加入到2)中的囊泡水溶 液，超声10分钟，静置过夜；

4)用旋转蒸发仪除去残留的二氯甲烷，得到包裹了喜树碱的囊泡；

5)取10mL包裹了喜树碱的囊泡水溶液，用Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激 光对其进行照射，波长820nm，通过改变光照时间和功率控制囊泡释放喜树碱的快慢，利用 高效液相色谱(HPLC)检测来衡量释放量。

实施例11

1)将20mg式(A)化合物加入到50mL的罗丹明6G水溶液(10^-4mol·L^-1)中，超声20分钟 后，10℃下静置半小时；

2)透析除去未包裹进囊泡的罗丹明6G，透析液为去离子水；

3)取5mL包裹了罗丹明6G的囊泡水溶液置于透析袋中，透析液为去离子水。用 Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激光对其进行照射，波长800nm，通过改变光照时 间和功率控制囊泡释放罗丹明6G的快慢，根据透析液中罗丹明6G吸收光谱的变化来衡量 释放量。

实施例12

1)将80mg式(B)化合物加入到50mL的阿霉素水溶液(10^-4mol·L^-1)中，超声60分钟后， 40℃下静置2小时；

2)透析法除去未包裹进囊泡的阿霉素，透析液为去离子水；

3)取10mL包裹了阿霉素的囊泡水溶液置于透析袋中，透析液为去离子水。用 Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激光对其进行照射，波长800nm，通过改变光照时 间和功率控制囊泡释放阿霉素的快慢，根据透析液中阿霉素吸收光谱的变化来衡量释放量

实施例13

1)将10mg式(C)化合物加入到50mL的罗丹明6G溶液(10^-4mol·L^-1)中，超超声20分 钟后，20℃下静置1小时；

2)透析除去未包裹进囊泡的罗丹明6G，透析液为去离子水；

3)取5mL包裹了罗丹明6G的囊泡水溶液置于透析袋中，透析液为去离子水。用 Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激光对其进行照射，波长820nm，通过改变光照 时间和功率控制囊泡释放罗丹明6G分子的快慢，根据透析液中罗丹明6G吸收光谱的变化 来衡量释放量。

实施例14

1)将20mg式(D)化合物加入到50mL的阿霉素水溶液(10^-4mol·L^-1)中，超声40分钟后， 30℃下静置2小时；

2)透析除去未包裹进囊泡的阿霉素，透析液为去离子水；

3)取10mL包裹了阿霉素的囊泡水溶液置于透析袋中，透析液为去离子水。用 Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激光对其进行照射，波长800nm，通过改变光照时 间和功率控制囊泡释放阿霉素的快慢，根据透析液中阿霉素吸收光谱的变化来衡量释放量。 如图5示，在黑暗条件下没有阿霉素释放出来，而在近红外脉冲激光的照射下，阿霉素的 释放量随光照时间增加而逐步增加。表明本囊泡可以通过双光子激发控制其负载的水溶性 药物分子的释放过程。

实施例15

1)将40mg式(E)化合物加入到50mL的阿霉素水溶液(10^-4mol·L^-1)中，超声60分钟后， 30℃下静置2小时；

2)透析除去未包裹进囊泡的阿霉素，透析液为去离子水；

3)取10mL包裹了阿霉素的囊泡水溶液置于透析袋中，透析液为去离子水。用 Ti-sapphire飞秒激光器产生的飞秒脉冲激光对其进行照射，波长820nm，通过改变光照时 间和功率控制囊泡释放阿霉素的快慢，根据透析液中阿霉素吸收光谱的变化来衡量释放量。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明 的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出 其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技 术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。