金鸡菊提取物保肝和抗氧化作用的应用

摘要

本发明涉及医药技术和保健食品领域，是金鸡菊提取物用于制备保肝和抗氧化药物和保健食品的新用途。其制备方法如下：金鸡菊头状花絮经粉碎过50目筛，分别用体积分数为95％的乙醇回流提取2次和用50％的乙醇回流提取1次，合并提取液，蒸干，得金鸡菊总提物，上D-101大孔吸附树脂进行梯度洗脱，用30％-95％乙醇洗脱，收集各洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，恒温干燥箱干燥，得到棕色粉末，其收率在0.07-1.3％之间，经过动物实验，发现30％-95％乙醇洗脱物有保肝作用和抗氧化作用，可以用于制备保肝和抗氧化药物和保健食品。

说明书

技术领域

本发明涉及金鸡菊提取物在制备保肝和抗氧化作用的药物和保健食品中的应用。 

技术背景

金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)又名雪菊，系菊科(Compositae)金鸡菊属(Coreopsis)的干燥头状花序，单瓣、重瓣或半重瓣，舌状花黄色或金黄色，花期6～9月。大花金鸡菊属于北温带植物，原产于北美，弗罗里达州及墨西哥州，我国1936年作为观赏植物引种子至庐山、南岳等地栽培，目前各地除供观赏外，还用全草入药，而且从花中提取的食用色素，具有清热解毒和降压之功效。目前在新疆和田地区种植较为广泛，其维语名称为古里恰依(Gulqai)，商品名“雪菊”。当地居民多选用雪菊当茶引用，有着非常好的民间使用基础，。 

发明内容

本发明的目的是提供金鸡菊提取物的新用途，即在制备保肝、抗氧化作用的药物和保健食品中的应用。 

金鸡菊头状花絮500g，粉碎过50目筛，分别用体积分数为95％的乙醇回流提取2次和用50％的乙醇回流提取1次，料液比1∶10，每次2h，合并3次的提取液，蒸干，得金鸡菊总提物，上D-101大孔吸附树脂进行梯度洗脱，分别用水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇洗脱，收集各洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，恒温干燥箱干燥，得到棕色粉末，其收率分别为：总提物，16.8％、水洗脱物，3.57％、10％醇洗脱物，0.95％、30％醇洗脱物，1.30％、50％醇洗脱物，0.09％、70％醇洗脱物，0.06％、95％醇洗脱物，0.07％。 

金鸡菊提取物可用于制备保肝、抗氧化作用的药物和保健食品，在剂型方面可采用各种剂型，如片剂、颗粒剂、散剂、或丸剂等剂型。 

金鸡菊提取物可用于制备保肝、抗氧化作用的药物和保健食品，其形状为普通形状或特殊形状，也可以是片剂、胶囊或丸剂等剂型。 

金鸡菊提取物实验研究： 

1、金鸡菊提取物抗氧化作用实验研究 

1.2金鸡菊提取物对羟自由基(-OH)的清除作用试验方法 

采用Fenton反应原理法，取1mL 0.5mmol/L邻二氮菲溶液于试管中，加入2mL 0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)，充分混匀，再加入1mL新配制的0.5mmol/L硫酸亚铁溶液，混匀后加入1mL新配制的0.1％双氧水，于37℃水浴反应60min后，在510nm处测吸光度值， 所测吸光值为损伤管的吸光值；未损伤管以1mL蒸馏水代替损伤管中双氧水，操作方法同损伤管；样品管以1mL样品代替损伤管中的蒸馏水，操作方法同损伤管。 

清除率＝[(A₂-A₁)/(A₀-A₁)]×100％ 

式中：A₀为未损伤管的吸光值；A₁为损伤管的吸光值；A₂为样品管的吸光值。 

1.3金鸡菊提取物对超氧阴离子自由基(O^-₂)的清除作用试验方法 

采用邻苯三酚自氧化法，取50mmol/L Tris-HCl缓冲溶液(pH＝8.2)4.5mL，置于25℃水浴中预热20min，分别加入1mL样品和0.4mL 25mmol/L邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min后，加入8mol/LHCl 0.8mL终止反应。自氧化管以1mL蒸馏水代替样品管中样品，操作方法同样品管，在325nm处测定吸光值，以等体积pH值8.2的Tris-HCl缓冲液作为空白。 

超氧阴离子的清除率＝(A₀-A₁)/A₀×100％ 

式中，A₀为自氧化管的吸光值；A₁为样品管的吸光值。 

1.4金鸡菊提取物对DPPH自由基的清除作用试验方法 

将金鸡菊各提取物和VC配成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g/L浓度的溶液备用。分别取各浓度的试样1mL于试管中，编号后，每支试管各加入6.5×10^-5mol/LDPPH·无水乙醇溶液4.0ml均匀混合，在室温下避光静置30min。以无水乙醇调零，于517nm处测定其吸光度A。空白对照组采用无水乙醇替代DPPH溶液，其他试剂与样品组相同。各个实验组均做5次平行，取均值。DPPH·自由基清除率按下式计算。清除率(％)＝[1-(Ai-Aj)/A0]×100％ 

A0  4.0mL6.5×10-5mol/LDPPH·无水乙醇溶液+1mL样品溶剂 

Ai  4.0mL6.5×10^-5mol/LDPPH·无水乙醇溶液+1mL样品 

Aj  4.0mL无水乙醇+1mL样品 

2、实验结果 

2.1金鸡菊提取物对-OH自由基的清除作用 

羟自由基是最活泼的自由基，其反应速率极快，它是机体危害最大的自由基。实验利用Fenton反应原理法，Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H₂O₂的量和Fenton反应产生的·OH的量成正比，当给予电子受体后，用gress试剂显色，形成红色物质，其呈色与·OH的量成正比关系。由图1可以看出金鸡菊提取物对-OH自由基有明显的清除作用，并且随着提取物浓度的增加，清除能力增强，表明金鸡菊提取物对-OH自由基的清除能力与提取物浓度有明显的量效关系。30％乙醇提取物(清除率为91.19％)50％乙醇提取物(清除率为86.19％)在浓度为1.0g/L时清除自由基的能力与V_C(清除率为96.73％)相当。 

2.2金鸡菊提取物对O^-₂自由基的清除作用 

以空白对照组作参比，测各浓度样品的吸光值，得出金鸡菊提取物对超氧阴离子自由基的清除效果(图2)。由图2可知，金鸡菊提取物浓度为0.2～1.0g/L时，随溶液浓度的增加对超氧阴离子自由基的清除率也随之增加；当浓度达1.0g/L时，其中30％乙醇提取物与50％乙醇提取物对超氧阴离子自由基的清除率分别为55.65％和97.90％，50％乙醇提取物对超氧阴离子自由基的清除率尤为显著，明显强于阳性对照药V_C(在浓度1.0g/L时，清除率为68.89％)。说明金鸡菊提取物在一定的浓度条件下对超氧阴离子自由基有较好的清除效果。 

2.3金鸡菊提取物对DPPH·自由基的清除作用 

DPPH·是一种很稳定的以N为中心的自由基，在517nm处有强吸收峰，DPPH·通常被用来检测抗氧化剂的抗氧化活性。当有自由基清除剂存在时，DPPH·会和清除剂提供的质子结合形成DPPH-H，从而使溶液颜色由紫色变为黄色。从图3可以看出，30％乙醇提取物、50％乙醇提取物和70％乙醇提取物在浓度为1.0g/L时，对自由基的清除率均超过了70％这表明金鸡菊提取物具有很强的清除DPPH·的能力且有明显的剂量依赖性，实验结果说明金鸡菊提取物是良好的质子供体，具有显著的抗氧化作用。 

实验结果表明，金鸡菊提取物具有清除羟自由基的作用，并且随着提取物浓度的增加，对羟自由基的清除作用增强，呈明显的量效关系；通过邻苯三酚自氧化体系表明，金鸡菊提取物能够明显清除体系中的氧自由基，表现出极强的抗氧化活性。此外，金鸡菊提取物对DPPH·自由基也表现出较强的抗氧化作用。通过对自由基的清除作用证实金鸡菊提取物是一种有效的自由基清除剂，在试验质量浓度范围内，其中30％乙醇提取物和50％乙醇提取物对DPPH·和·OH自由基的清除率与V_C相当，50％乙醇提取物对O^-₂·自由基的清除率明显强于V_C。表明金鸡菊提取物是有效的外源性天然有机抗氧剂。 

3、金鸡菊提取物对四氯化碳肝损伤的的影响 

空白对照组和模型组分别灌胃给予0.2ml/10g的蒸馏水；阳性对照组灌胃给予400mg/kg联苯双酯；给药组，每天灌胃给予金鸡菊提取物，连续5天。末次给药1小时后，除空白对照组外其余各组腹腔注射0.1％的CCl4(植物油配制)0.2ml/10g。禁食不禁水，24小时后摘眼球取血，用全自动生化仪测定ALT和AST活性。 

注：#与空白组比较p＜0.01，*与模型组比p＜0.05 

模型组血清中ALT、AST活性明显升高(p＜0.01)，说明造模成功。给药组血清中ALT、AST水平降低(p＜0.05)，表明金鸡菊提取物能抑制因CCl₄引起的小鼠体内转氨酶活性升高。 

附图说明

图1是金鸡菊提取物对-OH自由基的清除作用图； 

图2是金鸡菊提取物对O^-₂自由基的清除作用图； 

图3是金鸡菊提取物对DPPH·自由基的清除作用图。