一种组织培养总统铁线莲的方法

摘要

本发明涉及一种组织培养总统铁线莲的方法，摘取铁线莲‘总统’嫩芽为原材料，经过无菌处理、嫩芽的分化和增殖、不定芽的壮苗培养、根系的生根培养、植株炼苗与移栽等步骤后，获得铁线莲‘总统’植株。与现有技术相比，本发明通过组培技术，提高苗木繁殖速度和苗的整齐度，且更好地保持原有的母本性状，实现育苗工厂化，从而能够保证市场供应需求。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组培方法，尤其是涉及一种组织培养‘总统’铁线莲 的方法。

背景技术

铁线莲为毛茛科铁线莲属植物，原产中国，广布于北半球，原种200余种， 经多年的人工杂交出现大量园艺品种，花色清爽淡雅、花大色鲜，花期长、因 品种不同可从5月陆续开到11月。开花场面壮观受世人欢迎，是目前国内十 分热销的庭院藤本材料。

铁线莲‘总统’为园艺品种，木质藤本长约1-2米。茎棕色或紫红色，单 叶，常对生；花单生，紫色。花期6-9月。是通过人工选育获得的优异新品种， 因为其分株速度慢，扦插繁殖率低，品种易退化，无法满足市场大量的需求。 一些企业直接从国外进口裸根苗进行销售，成本高，利润小，因此，如何提高 产量并降低培养用成本是现在亟待解决的一个难题。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种持原有 的母本性状，实现育苗工厂化的组织培养‘总统’铁线莲的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种组织培养总统铁线莲的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)获取无菌原材料：摘取铁线莲‘总统’嫩芽后用自来水冲洗2h，在 超净工作台上依次用浓度为75wt％的乙醇浸泡25-35s，1w‰的升汞浸泡 10-15min，用无菌水冲洗5-6次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成1cm长后 接种于芽诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基5周后，芽基部开始膨 大并出现黄绿色突起，继续培养3周后可见明显的愈伤组织，再培养1个月， 切下带芽的愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上；

(3)不定芽的壮苗培养：在不定芽增殖培养基上诱导出的丛生芽，每丛 有2-3株伸长，将其分成小丛或单芽后接种于壮苗培养基上，不定芽20天后 可以长到2-3cm；

(4)生根培养：取2-3cm的不定芽植株，将其转接入生根培养基中诱导 生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后根原基长至4-6cm；

(5)植株炼苗与移栽：步骤(4)得到的根原基继续生根培养20-30天， 选择根系发达生长健壮的无菌苗于室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后移栽室外并给予肥水管理，即可得到铁线莲‘总统’植 株。

所述的芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、 MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L或MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。

所述的不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L、 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L或MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

所述的壮苗培养基的成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L或MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。

所述的生根培养基的成分为MS+NAA0.1mg/L+IBA1.0mg/L、 MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L或MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L。

所述的培养基成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的pH值为 5.6-6.0，培养温度为24-26℃，光照条件采用70-90μmol/ms。

此外，所述的芽诱导培养基的成分优选MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

所述的不定芽增殖培养基的成分优选MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

所述的壮苗培养基的成分优选MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。

所述的生根培养基的成分优选MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L。

与现有技术相比，本发明通过组培技术，提高苗木繁殖速度和苗的整齐度， 且更好地保持原有的母本性状，实现育苗工厂化，从而能够保证市场供应需求。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

一种组织培养‘总统’铁线莲的方法，该方法包括以下步骤：

(1)获取无菌原材料：摘取铁线莲‘总统’嫩芽后用自来水冲洗2h，在 超净工作台上依次用浓度为75wt％的乙醇浸泡25s，1w‰的升汞浸泡10min， 用无菌水冲洗5次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成1cm长后接种于芽诱导 培养基上，芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；

(2)芽的分化和增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基5周后，芽基部开始膨 大并出现黄绿色突起，继续培养3周后可见明显的愈伤组织，再培养1个月， 切下带芽的愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上，不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，基部虽然愈伤组织比较多，但不影响不定芽 的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；

(3)不定芽的壮苗培养：在不定芽增殖培养基上诱导出的丛生芽，每丛 有2株伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后接种于壮苗培养基上， 不定芽20天后可以长到2cm，壮苗培养基的组成为MS+6-BA1.0mg/L+ NAA0.1mg/L；

(4)生根培养：取2cm的不定芽植株，将其转接入生根培养基中诱导生 根，该生根培养基的成分为MS+NAA0.1mg/L+IBA1.0mg/L，10天后幼苗基部 分化出许多白色的根原基，30天后根原基长至4cm，须根众多；

(5)植株炼苗与移栽：步骤(4)得到的根原基继续生根培养20天，选 择根系发达生长健壮的无菌苗于室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在 温室中驯化40天后移栽室外并给予肥水管理，即可得到铁线莲‘总统’植株。

以上培养基成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的pH值为5.6， 使用时控制培养温度为24℃，光照条件采用70μmol/ms。

实施例2

一种组织培养‘总统’铁线莲的方法，该方法包括以下步骤：

(1)获取无菌原材料：摘取铁线莲‘总统’嫩芽后用自来水冲洗2h，在 超净工作台上依次用浓度为75wt％的乙醇浸泡35s，1w‰的升汞浸泡15min， 用无菌水冲洗6次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成1cm长后接种于芽诱导 培养基上，芽诱导培养基的成分为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L；

(2)芽的分化和增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基5周后，芽基部开始膨 大并出现黄绿色突起，继续培养3周后可见明显的愈伤组织，再培养1个月， 切下带芽的愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上，不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L，基部虽然愈伤组织比较多，但不影响不定芽 的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；

(3)不定芽的壮苗培养：在不定芽增殖培养基上诱导出的丛生芽，每丛 有3株伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后接种于壮苗培养基上， 不定芽20天后可以长到3cm，壮苗培养基的组成为MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.2mg/L；

(4)生根培养：取3cm的不定芽植株，将其转接入生根培养基中诱导生 根，该生根培养基的成分为MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L，10天后幼苗基部 分化出许多白色的根原基，30天后根原基长至6cm，须根众多；

(5)植株炼苗与移栽：步骤(4)得到的根原基继续生根培养30天，选 择根系发达生长健壮的无菌苗于室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在 温室中驯化40天后移栽室外并给予肥水管理，即可得到铁线莲‘总统’植株。

以上培养基成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的pH值为5.6， 使用时控制培养温度为26℃，光照条件采用90μmol/ms。

实施例3

一种组织培养‘总统’铁线莲的方法，该方法包括以下步骤：

(1)获取无菌原材料：摘取铁线莲‘总统’嫩芽后用自来水冲洗2h，在 超净工作台上依次用浓度为75wt％的乙醇浸泡30s，1w‰的升汞浸泡15min， 用无菌水冲洗6次后吸干表面水份，取嫩芽基部，切成1cm长后接种于芽诱导 培养基上，芽诱导培养基的成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L；

(2)芽的分化和增殖：嫩芽接种于芽诱导培养基5周后，芽基部开始膨 大并出现黄绿色突起，继续培养3周后可见明显的愈伤组织，再培养1个月， 切下带芽的愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上，不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，基部虽然愈伤组织比较多，但不影响不定芽 的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；

(3)不定芽的壮苗培养：在不定芽增殖培养基上诱导出的丛生芽，每丛 有3株伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛或单芽后接种于壮苗培养基上， 不定芽20天后可以长到3cm，壮苗培养基的组成为MS+6-BA0.5mg/L+ NAA0.1mg/L；

(4)生根培养：取3cm的不定芽植株，将其转接入生根培养基中诱导生 根，该生根培养基的成分为MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L，10天后幼苗基部 分化出许多白色的根原基，30天后根原基长至6cm，须根众多；

(5)植株炼苗与移栽：步骤(4)得到的根原基继续生根培养25天，选 择根系发达生长健壮的无菌苗于室内开瓶炼苗5天，取出后洗净根部琼脂，在 温室中驯化40天后移栽室外并给予肥水管理，即可得到铁线莲‘总统’植株。

以上培养基成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的pH值为5.68， 使用时控制培养温度为25℃，光照条件采用80μmol/ms。