以腐熟牛粪为原料生产生物肥料接种剂的工业方法

摘要

本发明公开了以腐熟牛粪为原料生产生物肥料接种剂的工业方法。该方法包括配料、灭菌、发酵、造粒、干燥、包衣，所述的配料步骤是将腐熟牛粪20～70重量份，田土20～80重量份，米糠2～10重量份，豆粕2～10重量份，滑石粉0～5重量份混合，用生石灰调节pH值至6.5～7.5，加入相当于前述原料总质量30～40％的水，搅拌均匀。本发明方法所用原料来源广泛，发酵条件不苛刻，有利于工业化大规模生产。发酵生产过程不产生废液，并能利用各种废弃物，符合可持续农业的发展。本发明方法生产的接种剂用途广泛，有明显增加农产品产量和品质的作用。

说明书

技术领域

本发明属于农业生物肥料生产技术领域，涉及以腐熟牛粪为原料生产生物肥料接种剂的工业方法。

技术背景

为了减少化肥的使用量和化肥给环境带来了的危害。随着环保意识的增强，国内外都在积极发展绿色农业。欧洲的许多国家已普遍使用生物肥料，其生物肥料使用已达到农业用肥的45％～60％，美国使用生物肥料达到农业用肥的60％～70％。生物肥料，不仅能使土壤有机养分得到有效补充，而且能提高土壤的保肥保水能力，减少土壤板结沙化，是促进农业增产增收和提高农产品质量的有效措施，因此，开发新型高效的生物肥料是当前农业技术的发展趋势。

生物肥料不仅可补充肥源的不足，而且有可能列为绿色食品用肥进入商品市场，成为新兴的“绿色产业”，在农业生产中发挥其应有的经济效益、社会效益和生态效益。

目前国际上已有70多个国家生产、应用和推广生物肥料，我国目前也有250家企业年产约数十万吨生物肥料应用于生产。这虽与同期化肥产量和用量不能相比，但确已开始在农业生产中发挥作用，取得了一定的经济效益和社会效应。技术力量强的企业都有自己的菌种生产体系，产品也能到保障。但生物肥料的生产多是采用生物资源的再利用的方式，如城市垃圾的肥料化处理，农业废弃物的再利用，工业中有机排废物的利用的形式来生产有机肥。多数情况下是就地取材，就地生产，就地应用的方法。因此这种多元化的有机肥生产方式就需要大量的功能性稳定的保存期长的微生物菌种。就必须建立技术和设备完善的工厂来生产各种特制微生物(菌种剂)供应于堆肥厂(场)，再对各种农牧业物料进行堆制，以加快其发酵过程，缩短堆肥的周期，同时还提高堆肥质量及成熟度。菌种得到保障，加上推广完善的有机肥生产技术。生物肥料的质量也能得到保证。

目前，我国微生物肥料加工工业十分落后，设备简陋，工艺不完善和质量意识不强。许多微生物肥料存在许多质量问题。微生物肥料加工工业是微生物肥料产业化发展的第一线，只有加工工业得到发展，才能为市场提供大量优质的微生物肥料。发展微生物肥料加工工业必须采用先进的生产工艺和设备及完善质量控制体系及技术力量较强的职工队伍。从国内许多企业来看，采用标准的发酵设备生产液体接种剂一般都能达到标准规定的技术要求。但使用原有设备来生产符合质量要求的微生物复合肥，则难度很大。专用的微生物复合肥生产设备主要包括发酵设备、造粒设备及干燥设备等。只有专用设备的广泛采用，才能促进我国微生物肥料产业化水平。

目前，在农业上应用的微生物接种剂有单一菌种的接种剂和复合的微生物接种剂。在农业生产上微生物接种剂可以直接施入土壤或作为拌种剂接种于植物根际，还可以复配于各种肥料中。一般地，由微生物和各种有机质发酵或者混合制成的肥料称为微生物肥料(又称菌肥)，同时还有由微生物接种剂接种制成的生物有机肥或有机无机复混肥等产品。因为根据有益微生物与作物间有较强的选择性，对环境条件也有一定的要求，所以各类接种剂都应有系列产品，才能满足不同地区不同作物的需求。

根据植物根际微生物生态研究及其应用的发展趋势，微生物接种剂必然由单一菌种向复合菌种转变。在这个转变过程中，首先不再单纯地追求营养元素供应水平的提高，而要同时实现多功能，如抗病、避虫等。5406菌种是一种传统的发酵菌，可以增强作物的抗病能力，减少化学农药的使用，而与之相比，现在应用的复合菌种由于发挥了互惠、协同、共生、加强或者同位作用，因此使菌种的性能进一步提高。其次复合菌种的微生物接种剂延长了功能微生物在土壤中的存活时间，微生物存活的时间越长，微生物肥料的持效期越长。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种以腐熟牛粪为原料生产生物肥料接种剂的工业方法。

以腐熟牛粪为原料生产生物肥料接种剂的工业方法，包括配料、灭菌、发酵、造粒、干燥、包衣步骤，所述的配料步骤是将腐熟牛粪20～70重量份，田土20～80重量份，米糠2～10重量份，豆粕2～10重量份，滑石粉0～5重量份混合，用生石灰调节pH值至6.5～7.5，加入相当于前述原料总质量30～40％的水，搅拌均匀。

所述的腐熟牛粪、田土、米糠、豆粕、滑石粉、生石灰和水的用量按照发酵菌种的类型不同，采用不同的比例加入拌料罐中。

所述的发酵菌种为芽孢杆菌或放线菌。

所述的芽孢杆菌选自枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶胨样芽孢杆菌或固氮类芽孢杆菌中的一种或多种；所述的放线菌选自细黄链霉菌和/或泾阳链霉菌。

当所述的发酵菌种为芽孢杆菌时，所述的配料步骤采用的原料比例是：腐熟牛粪60～70重量份，田土20～30重量份，米糠2～10重量份，豆粕2～10重量份，滑石粉0～2重量份，用生石灰调节pH值为6.0～6.5，加入相当于前述原料总质量30～40wt％的水；当所述的发酵菌种为放线菌时，所述的配料步骤采用的原料比例是：腐熟牛粪20～50重量份，田土30～70重量份，米糠8～10重量份，豆粕2～10重量份，滑石粉为0～2重量份，用生石灰调节pH值为7.0～7.5，加入相当于前述原料总质量30～32wt％的水。

所述的发酵步骤中菌种的接种总量为灭菌固体培养基总重量的15～25wt％，发酵温度为28～33℃。

所述的发酵步骤中当发酵菌种为芽孢杆菌时，发酵转速为45～55r/min，发酵时间为1～2天，发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上；当所述的发酵菌种为放线菌时，发酵转速为25～35r/min，发酵时间为3～5天，发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

所述的造粒粒径为2.5～4.0mm；所述的烘干步骤的烘干温度为35～45℃，将颗粒烘干至恒重；所述的造粒步骤和烘干步骤可依次进行，也可以边造粒边烘干。

所述的包衣步骤采用喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为2～3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1400～1500倍。

所述的腐熟牛粪是经60～70℃堆制或加入促腐微生物充分腐熟后经粉碎的粉状物；田土为农田中上层25～35cm的土壤，过30目筛。

本发明所用菌种为生产微生物肥料的农业部认定的具有功能的标准菌株。每样菌种根据其特性和培养要求，严格按照微生物学的实验技术和农业部微生物肥料菌种要求进行菌种复壮和菌种扩繁。

本发明每类菌种发酵的配料比例是经过工业发酵培养基的筛选方法，先采用单因子试验找出菌种发酵的最佳氮源和最佳碳源的方法，优化出发酵的原料成分；又通过正交试验和正交分析找出各种原料的配比，综合发酵的菌体数量和原料成本以及生产接种剂的活性(促生和抑菌)优化出上述两类微生物的发酵原料配比和发酵条件。

发酵料的菌种检测方法是根据农业部微生物肥料标准中规定的检测方法操作。

本发明的有益效果：

(1)本发明以腐熟牛粪为原料通过对发酵培养基和发酵条件的优化生产生物肥料接种剂，所得产品微生物活菌数多，菌体活性高，且菌体活性保持时间长达2-3年。

(2)本发明方法所用原料来源广泛，价格低廉，发酵条件不苛刻，易于控制，有利于工业化大规模生产。

(3)发酵生产过程不产生废液，无废液排放和环境污染问题，并能充分利用各种有机质的废弃物，符合可持续农业的发展。

(4)本发明方法生产的接种剂用途广泛，可以直接应用于农作物，又可以作为接种剂生产各种类型的生物有机肥，有明显增加农产品产量和品质的作用，并能预防植物病害的发生。

附图说明

图1、以腐熟牛粪为原料生产生物肥料接种剂工业方法的技术流程图。

具体实施方式

下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

实施例1枯草芽孢杆菌防病促生接种剂的生产

(1)取经提纯复壮的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis；购自中国农业菌种保藏中心ACCC10167)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中31℃，转速为50r/min，发酵48h制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到液体发酵罐(常规保温型液体发酵罐70L和250L两种类型)中发酵48h，为二级菌种。种子液体发酵配方为：牛肉膏0.3％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，自然pH值。

(2)腐熟牛粪70重量份，田土20重量份，米糠2重量份，豆粕8重量份，用生石灰调拌料的pH值为6.5，加入相当于前述原料总质量40％的水，搅拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

(3)将(1)中的二级菌种按照(2)中灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量接入(2)中的灭菌固体培养基中。

(4)发酵温度为31℃，转速为50r/min，发酵2天；发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(5)检验合格菌料进行造粒，所得颗粒粒径为2.5-4.0mm。

(6)制造的菌种颗粒转入烘干箱，烘干温度为40℃，鼓风烘干至恒重。

(7)在旋转烘干箱中喷入包衣液进行喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(8)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境，预防植物土传病害。

(9)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段结束，含水量在30％时，开始保肥的阶段使用，衡量指标是堆肥温度下降到40℃左右。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为30-20℃，发酵时间2-5天。抽样检测芽孢杆菌数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的功能有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用，能改善土壤板结的环境，预防植物病害发生。

(10)枯草芽孢杆菌接种剂和功能有机肥促生实验：土壤经消毒后装花盆，每盆装200g田土，分别拌入4g本实施例制备的接种剂和4g功能有机肥作为底肥，移栽2～3叶期的辣椒苗，每盆4株苗，每处理9盆，3次重复，设接种剂发酵前未拌入菌种的配料和空白为对照。温室内培养，25d后测量辣椒苗株高，根长，鲜重和干重，计算干重增加率。促生效果见表1。

干重增加率＝(处理-空白)/空白×100％。

表1枯草芽孢杆菌接种剂和生产的有机肥对盆栽辣椒苗的促生效果

注：同列的相同字母表示S-N-K检验差异不显著(P＞0.05)。

(11)枯草芽孢杆菌接种剂和生产的有机肥防病实验：试验设计同(10)每个设计包括对照均设接种病原菌和不接种病原菌的处理。栽苗20d后伤根法接种辣椒疫霉孢子悬液，每株接1mL，25～28℃保湿14d后调查发病情况，计算病情指数，发病率和防治效果。辣椒疫霉病在辣椒苗上发病情况分级标准见参考文献(毛爱军，胡洽，耿三省.辣椒疫霉菌接种鉴定技术研究[J].北京农业科学，1998，16(2)：21-24)。病情指数，发病率和防治效果按如下公式计算：

病情指数＝[∑(病级株数×代表数值)/(株数总和×发病最重级的代表数值)]×100

发病率(％)＝发病株数/株数总和×100

防治效果(％)＝[(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数]×100

防病效果见表2。

表2枯草芽孢杆菌接种剂和生产的有机肥对辣椒疫霉病的防治效果

实施例2解磷类微生物接种剂的生产

(1)取经提纯复壮的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium；来源中国农业菌种保藏中心ACCC10010)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中31℃，转速为50r/min，发酵48h制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到发酵罐中发酵48h，为二级菌种。种子液体发酵配方为：牛肉膏0.3％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，自然pH值。

(2)腐熟牛粪65重量份，田土25重量份，米糠2重量份，豆粕8重量份，用生石灰调拌料的pH值为6.0，加入相当于前述原料总质量40％的水，拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

(3)将(1)中的二级菌种按照(2)中灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量接入(2)中的灭菌固体培养基中。

(4)发酵温度为31℃，转速为50r/min，发酵2天；发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(5)检验合格菌料进行造粒，所得颗粒粒径为2.5-4.0mm。

(6)制造的菌种颗粒转入烘干箱，烘干温度为40℃，鼓风烘干至恒重.

(7)喷入包衣液进行喷雾包衣或者烘干后喷入包衣液后再烘干，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(8)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境，预防植物土传病害。

(9)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段结束。含水量在30％时，开始保肥的阶段使用。衡量指标是堆肥温度下降到40℃左右。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为25-30℃，发酵时间3天。抽样检测芽孢杆菌数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用，能改善土壤板结的环境，预防植物病害发生。

实施例3硅酸盐微生物接种剂的生产

(1)取经提纯复壮的胶胨样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus；来源中国农业菌种保藏中心ACCC10013)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中31℃发酵48h制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到发酵罐中发酵48h，为二级菌种。种子液体发酵配方为：牛肉膏0.3％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，碳酸钙0.1％，自然pH值。

(2)腐熟牛粪60重量份，田土25重量份，米糠5重量份，豆粕8重量份，滑石粉2重量份，用生石灰调拌料的pH值为6.0，加入相当于前述原料总质量40％的水，搅拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

(3)将(1)中的二级菌种按照(2)中灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量接入(2)中的灭菌固体培养基中。

(4)发酵温度为31℃，转速为50r/min，发酵2.5天；发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(5)检验合格菌料进行造粒，所得颗粒粒径为2.5-4.0mm。

(6)制造的菌种颗粒转入烘干箱，烘干温度为40℃，鼓风烘干至恒重。

(7)在旋转烘干箱中喷入包衣液进行喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(8)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境。

(9)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段结束。含水量在30％时，开始保肥的阶段使用，衡量指标是堆肥温度下降到40℃左右。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为25-30℃，发酵时间3天。抽样检测芽孢杆菌数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用，能改善土壤板结的环境。实施例4防病促生放线菌微生物接种剂的生产

(1)取经提纯复壮的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus；来源中国农业菌种保藏中心ACCC40027)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中31℃发酵48h制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到发酵罐中发酵48h，为二级菌种。种子发酵配方：可溶性淀粉2.0％，硝酸钾0.1％，氯化钠0.01％，硫酸镁0.5％，磷酸二氢钾0.5％，pH7.5。

(2)腐熟牛粪20重量份，田土70重量份，米糠8重量份，豆粕4重量份，滑石粉2重量份，用生石灰调拌料的pH值为7.5，加入相当于前述原料总质量30％的水，搅拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

(3)将(1)中的二级菌种按照(2)中灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量接入(2)中的灭菌固体培养基中。

(4)发酵温度为31℃，转速为30r/min，发酵5天；发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(5)检验合格菌料进行造粒，所得颗粒粒径为2.5-4.0mm。

(6)制造的菌种颗粒转入烘干箱，烘干温度为40℃，鼓风烘干至恒重。

(7)在旋转烘干箱中喷入包衣液进行喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(8)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境，预防植物土传病害，减少农药使用量。

(9)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段结束。含水量在30％时，开始保肥的阶段使用，衡量指标是堆肥温度下降到40℃左右。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为38-35℃，发酵时间5天。抽样检测菌体数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用，预防病害的发生。

(10)促生实验：土壤经消毒后装花盆，每盆装200g田土，按照10‰，5‰，1‰的三个比例拌入接种剂作为底肥，播种发芽完好的黄瓜种子，每盆4粒，每处理9盆，3次重复，设不拌入接种剂空白为对照。温室内培养，25d后测量黄瓜苗株高，根长，鲜重和干重，计算干重增加率。干重增加率＝(处理-空白)/空白×100％。促生效果见表3。

表3细黄链霉菌接种剂不同剂量对黄瓜苗生长的影响

注：同列的相同字母表示S-N-K检验差异不显著(P＞0.05)。

(11)防病效果：试验方法同实施例1中的(11)，防病效果见表4。

表4细黄链霉菌接种剂和功能有机肥对接种辣椒疫霉的防病效果

实施例5固氮促生微生物接种剂的生产

(1)取经提纯复壮的固氮类芽孢杆菌(Paenibacillus azotofixans；来源中国农业菌种保藏中心ACCC11008)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中31℃，50r/min，发酵48h制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到发酵罐中发酵48h，为二级菌种。种子发酵配方：甘露醇2.0％，磷酸二氢钾0.05％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.02％，硫酸铜0.01，碳酸钙0.5％，硫酸钙0.01％。pH7.0。

(2)腐熟牛粪40重量份，田土50重量份，米糠8重量份，豆粕3重量份，滑石粉2重量份，用生石灰调拌料的pH值为6.5，加入相当于前述原料总质量30％的水，搅拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

(3)将(1)中的二级菌种按照(2)中灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量接入(2)中的灭菌固体培养基中。

(4)旋转发酵，发酵温度为31℃，转速为50r/min，发酵时间为2天；发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(5)检验合格菌料进行造粒，所得颗粒粒径为2.5-4.0mm。

(6)制造的菌种颗粒转入烘干箱，烘干温度为40℃，鼓风烘干至恒重。

(7)在旋转烘干箱中喷入包衣液进行喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(8)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境，减少化肥使用量。

(9)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段结束。含水量在30％时，开始保肥的阶段使用，衡量指标是堆肥温度下降到40℃左右。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为25-30℃，发酵时间3天。抽样检测芽孢杆菌数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用。实施例6联合固氮促生微生物接种剂的生产

(1)取经提纯复壮的泾阳链霉菌(streptomyces jingyangensis；来源中国农业菌种保藏中心ACCC40021)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中28℃，30r/min，发酵4天制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到发酵罐中发酵5天，为二级菌种。种子发酵培养基配方：黄豆粉2％，蛋白胨0.5％，可溶性淀粉2％，葡萄糖0.5％，氯化钠0.1％，磷酸氢二钠0.025％，硫酸镁0.025％。碳酸钙0.5％，pH7.5。

(2)腐熟牛粪45重量份，田土45重量份，米糠8重量份，豆粕6重量份，滑石粉2重量份，用生石灰调拌料的pH值为7.0，加入相当于前述原料总质量30％的水，搅拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

(3)将(1)中的二级菌种按照(2)中灭菌固体培养基总重量的，25wt％的接种量接入(2)中的灭菌固体培养基中。

(4)旋转发酵，发酵温度为28℃，转速为30r/min，发酵时间为5天；发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(5)在旋转烘干箱中喷入包衣液进行喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(6)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境，减少化肥使用量。

(7)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段。含水量在30％时，开始保肥的阶段使用。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为25-30℃，发酵时间3天。抽样检测菌体数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用，减少氮肥的使用量。

实施例7防病促生复合微生物接种剂的生产(细菌和放线菌混合型)

(1)取经提纯复壮的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus；来源中国农业菌种保藏中心ACCC40027)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis；来源中国农业菌种保藏中心ACCC10167)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中，细黄链霉菌31℃，30r/min，发酵4天，枯草芽孢杆菌31℃发酵2天制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到发酵罐中细黄链霉菌发酵5天，枯草芽孢杆菌发酵2天，为二级菌种。

(2)细黄链霉菌培养基：腐熟牛粪40重量份，田土50重量份，米糠8重量份，滑石粉2重量份，豆粕4重量份，用生石灰调拌料的pH值为7.5，加入相当于前述原料总质量30％的水，拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

按照该灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量接入细黄链霉菌二级菌种至该固体培养基。31℃，30r/min发酵5天，发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(3)枯草芽孢杆菌培养基：腐熟牛粪70重量份，田土20重量份，米糠2重量份，豆粕8重量份，用生石灰调拌料的pH值为6.5，加入相当于前述原料总质量40％的水，搅拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

按照该灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量接入枯草芽孢杆菌二级菌种至该固体培养基。31℃，50r/min发酵2天，发酵结束抽样检测菌体数量，菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(4)检验合格菌料转入拌料罐中，两种发酵料按照1∶1体积比混合造粒(粒径2.5-4.0mm)。

(5)在旋转烘干箱中喷入包衣液进行喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(7)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境，减少土传病害的发生。

(8)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段。含水量在30％时，开始保肥的阶段使用，衡量指标是堆肥温度下降到40℃左右。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为28-30℃，发酵时间5天。抽样检测每样微生物菌体数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用，预防植物病害，减少农药的使用量。

(9)促生效果：将A(本实施例生产的复合微生物接种剂)、B(实施例1生产的只含枯草芽孢杆菌的接种剂)和C(实施例4生产的只含细黄链霉菌的接种剂)三种菌剂分别按照2％的量拌入消毒土壤中后装花盆，移栽2～3叶期的辣椒(或番茄)苗，每盆4株苗，每处理6盆，3次重复，设空白为对照，温室内培养，25d后测量辣椒(或番茄)苗株高，根长，鲜重和干重。对辣椒的促生效果见表5；对番茄的促生效果见表6。

表5复合菌剂对辣椒的促生效果

表6复合菌剂对番茄的促生效果

注：同列的相同字母表示S-N-K检验差异不显著(P＞0.05)。

实施例8防病促生固氮复合微生物接种剂的生产(细菌和细菌混合型)

(1)取经提纯复壮的固氮类芽孢杆菌(Paenibacillus azotofixans；来源中国农业菌种保藏中心ACCC11008)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis；来源中国农业菌种保藏中心ACCC10167)的斜面菌种，分别接种到三角瓶中，31℃发酵2天制成种子液，为一级菌种；一级菌种接种到发酵罐中发酵2天，为二级菌种。

(2)配制两份相同培养基：腐熟牛粪70重量份，田土25重量份，米糠3重量份，豆粕2重量份，用生石灰调拌料的pH值为6.5，加入相当于前述原料总质量40％的水，搅拌均匀，通入100℃以上蒸汽，灭菌2h。

(3)将(1)中的两种二级菌种按照(2)中灭菌固体培养基总重量的20wt％的接种量分别接入(2)中的灭菌固体培养基中。

(4)两种菌种分别旋转发酵，发酵温度为31℃，转速为50r/min发酵时间为2天；发酵结束分别抽样检测菌体数量，每个发酵罐菌体数量保持在10⁸cfu/g以上。

(5)检验合格菌料按照1∶1的体积比混合造粒(直径2.5-4.0mm)，颗粒烘干至恒重，喷入包衣液进行喷雾包衣，包衣液为含聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的混合水溶液，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮的质量比为3∶1，溶剂水的质量为聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮总质量的1500倍。包衣的颗粒在干燥的条件下，可保存菌种的活性2-3年。

(6)生产的颗粒型接种剂可直接接种到植物根际，使用量为5Kg/亩，能促进植物生长，改良土壤环境，减少土传病害的发生。

(7)生产的颗粒型接种剂可接种到生物有机肥(即腐熟牛粪)中，一般在生物有机肥发酵到第二阶段。含水量在30％时，开始保肥的阶段使用，衡量指标是堆肥温度下降到40℃左右。接种量为每立方米堆肥接种15-20g，搅拌均匀，堆制发酵，发酵温度为28-30℃，发酵时间5天。抽样检测每样菌体数量在10⁶cfu/g以上，即得功能有机肥。该技术生产的有机肥使用量为25-50Kg/亩，有明显增加农产品产量和品质的作用，预防植物病害，减少农药和化肥的使用量。