一种尿液有形成份质量控制品组合物及其制备方法

摘要

本发明涉及一种尿液有形成份质量控制品组合物及其制备方法，本发明所提供的尿液有形成份质量控制品组合物至少包括有形成份红细胞、白细胞、上皮细胞和管型，既保持了尿液的天然属性，又具有较好的不精密度。本发明的尿有形成份质量控制品组合物有较好的稳定期，不但适用于不同检测原理的有形成份分析仪，且适用于尿有形成份显微镜检查的质量控制。

说明书

技术领域

本发明涉及临床体液学检验质量控制领域，具体涉及一种尿液有形成份质量控制品组合物及其制备方法。

背景技术

尿液检查因取材方便，病人无痛苦等特点，对泌尿系统疾病及某些与泌尿系统相关的疾病具有诊断、疗效观察和预后判断的价值，被临床作为常规检验项目广泛应用。通过对尿理化检查可观察尿一般性状和化学成分，通过对尿中有形成份如红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、结晶、吞噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子等观察，可识别尿中病理成分。尿液有形成份检查常可为临床医生提供有关病人疾病状况必须信息。

为了减少检验人员尿液有形成份镜检的负荷、改善检验流程、减少人为因素引起的误差、推动尿有形成份检查的标准化，自动化有形成份分析仪相继问世。随着自动化仪器的不断应用，如何使仪器发挥最大效用，为临床实验室提供快速、准确、及时的过筛试验，提高工作效率，做好仪器的质控工作显得非常重要。然而，尿液有形成份质控仍缺乏好的质控品，目前国际上所用尿液有形成分质控品有：日本Sysmex公司使用不同直径大小的微粒子质控品，美国IRIS公司、长春迪瑞公司使用固定人红细胞质控品，美国伯乐公司的含红白细胞的尿质控品。这些质控品中微粒子质控品非细胞成分，只能用于计数而不能用于形态观察；其余质控品所含成分较少，只有红细胞或红、白细胞，不能对尿液有形成份分析仪的主要检测参数进行有效监控。故尿液有形成份检验的质量控制是目前一个比较困难的问题。

美国临床实验室标准研究院(CLSI)有关尿液分析的指导性文件GP16-A3指出，尿有形成份的质量控制应采用商品化质控品每日进行。我国《尿液沉渣检查标准化的建议》及推广全自动尿液沉渣分析仪的目的，旨在减少方法和技术差异导致的检验结果误差，合适的质控品已成为提高实验室检验可靠性的关键。目前，国际所用尿液形成份质控品，按GP16-A3的要求所能监测的有形成份太少，不能全面对日常尿有形成份分析的进行质量控制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题之一是克服目前尿液有形成分质控品监测成分太少或不能用于形态观察的不足，提供一种含各种有形成分且能进行形态观察的尿液有形成分质量控制品组合物。

本发明所提供的尿液有形成分质控品组合物包括下列组成：红细胞、白细胞、管型及上皮细胞。

所述的尿液有形成分质控品组合物还包括细菌。

本发明所要解决的另一技术问题是提供一种尿液有形成分质控品组合物的制备方法。本发明所提供的制备方法包括如下步骤：

(1)将10％生理盐水甲醛溶液与尿液之比为1∶20的比例加入高压灭菌的塑料瓶，收集12h尿液；

(2)将尿液充分混匀后，倒入加有过滤膜的布氏漏斗中进行抽滤，将留在滤膜上的成份用生理盐水反复洗涤；

(3)收集所有洗脱液，离心弃上清液取沉渣；

(4)将沉渣用中性甲醛溶液按1∶2～1∶5的比例进行固定，加入100～2000uL抑菌剂proclin300混匀，2～8℃冰箱保存。

步骤(1)中所述高压灭菌的塑料瓶为带盖，无粒子的塑料瓶。

步骤(4)中所述的中性甲醛溶液的配制包括下列步骤：

a、配制PH7.0磷酸盐缓冲液；

b、在(a)中加入5-35g甲醛混匀。

步骤(4)中所述的沉渣与中性甲醛溶液的比例为1∶4。

本发明提供的尿有形成份质量控制品组合物中含有红细胞、白细胞、上皮细胞和管型等有形成份且形态保持良好，易于辨认；在不同检测原理的尿液有形成份分析仪，无论是流式细胞技术加荧光染色技术，还是流式细胞技术加自动扫描成像技术的分析仪，或是显微镜均检出了红、白细胞、上皮细胞、管型、细菌等有形成份，能满足日常尿液有形成份质量控制的需要，不但适用于不同检测原理的有形成份分析仪，且适用于尿有形成份显微镜检查的质量控制。不同参数不同浓度的质量控制品重复性较好，红细胞RBC18～586个/μL，CV 4.4～7.8％；白细胞WBC16～127个/μL，CV4.3～14.2％；上皮细胞EC9～61个/μL，CV4.8～14.4％；管型CAST3～9个/μL，CV17～23％；与新鲜尿标本(红细胞CV2.4～31％；白细胞CV8.5～14％；上皮细胞CV7.0～18％；管型CV17～45％)做批内精密度的结果基本一致，也与微粒子质控品(红细胞CV 2.93～16.28％；白细胞CV2.07～22.31％；上皮细胞CV6.18～11.36％；管型CV12.38～35％)的批内精密度相一致，既保持了尿液的天然属性，又具有与粒子计数相当的不精密度。且本发明的尿有形成份质量控制品组合物有较好的稳定期，至少可达8周。

附图说明

图1为实施例1在尿液分析仪UF500监测后的截图；

图2为实施例1在尿液分析仪IQ200监测后不同有形成份的组图；

图示中1～5红细胞，6～10白细胞，11～15上皮细胞，16～19管型，20～22细菌

图3为实施例1在尿液分析仪Combi XS监测后的截图；

图示中1红细胞，2白细胞，3上皮细胞，4管型，5细菌

图4为实施例1在尿液分析仪FUS100检测后不同有形成份的组图；

图示中1～5红细胞，6～9白细胞，10～15上皮细胞，16～21管型，22～26细菌

图5为实施例1在相差显微镜下不同有形成份的形态；

图示中1红细胞，2白细胞，3上皮细胞，4管型，5细菌

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

尿有形成份质量控制品的制备

1、选择体积2升左右，带盖，无粒子的塑料瓶，高压蒸汽灭菌备用。

2、10％生理盐水甲醛溶液配制

甲醛100mL加生理盐水900mL混匀。

3、PH7.0磷酸盐缓冲液的配制

Na₂HPO₄·2H₂O 108.61g+NaH₂PO4·2H₂O 60.86g溶解，定容至1L。

4、PH7.0中性甲醛溶液配制

在上述3中加入20g甲醛混匀。

5、将10％生理盐水甲醛溶液与尿液之比为1∶20的比例加入高压灭菌的塑料瓶，留取12h尿液。

6、收集尿液，按生物安全要求转运。

7、将尿液充分混匀后，倒入已准备好的加有过滤膜的布氏漏斗中进行抽滤。

8、将留在滤膜上的成份，用生理盐水反复洗涤。

9、收集所有洗脱液，离心1500r*5分钟，弃上清液取沉渣。

10、将沉渣用上述中性甲醛溶液按1∶4的比例进行固定，加入1000uL proclin300混匀，2～8℃冰箱保存。

所制备的尿液有形成分质控品，适用于UF系列仪器、IQ200、Combi XS和FUS100等尿有形成份分析仪。见图1～5

实施例2

尿有形成份质控品重复性的监测

1、用中性磷酸盐缓冲液将按实施例1制备的尿有形成份质控品进行适当的稀释。

2、使红细胞低浓度为10～20个/μL，中浓度为20～50个/μL，高浓度为＞100个/μL；

使白细胞低浓度为10～20个/μL，中浓度为20～50个/μL，高浓度为＞100个/μL；

使上皮细胞低浓度为＜10个/μL，中浓度为10～20个/μL，高浓度为＞20个/μL；

使上皮细胞低浓度为＜10个/μL，中浓度为10～20个/μL，高浓度为＞20个/μL；

使管型低浓度为2～3个/μL，中浓度为3～5个/μL，高浓度为＞5个/μL。

3、在日本希森美康UF500尿有形成份分析仪上重复测定12次，计算各自均值，标准差(s)和不精密度(cv％)。

4、UF500监测的不精密度为RBC18～586个/μL，CV 4.4～7.8％；WBC16～127个/μL，CV4.3～14.2％；EC9～61个/μL，CV4.8～14.4％；CAST3～9个/μL，CV17～23％。见表1。

表1UF500监测的四种主要参数高、中、低三种不同浓度浓度的不精密度

实施例3

尿有形成份质控品稳定性监测

1、将按实施例1制备的尿有形成份质控品充分混匀后，分装，每管2mL。

2、将分装的尿有形成份质控品每周在日本希森美康UF500尿有形成份分析仪上监测1次。共测8周。

3、我们制作的尿有形成份质控品不同参数随时间变化情况见回归拟合曲线分析结果，见表2。

结果显示8周内尿液有形成份无显著改变。

表2不同参数监测值SPSS13.0回归拟合曲线分析结果