含有氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂、抗疲劳剂或疲劳恢复剂

摘要

本发明的课题在于特定氨基酸组合物中对提高耐力、抗疲劳或恢复疲劳有效的氨基酸成分及浓度以及降低溶解度低的氨基酸成分。本申请发明人等首次鉴定出有利于提高耐力的氨基酸为酪氨酸，并且在对水中溶解度低的酪氨酸为了提高耐力等所需的浓度进行了探讨，然后发现了一种溶解度高、在提高耐力等方面优异的氨基酸组合物。

说明书

技术领域

本申请发明属于用于提高耐力、抗疲劳、或恢复疲劳的组合物的技术领域。更具体而言，本申请发明涉及一种提高耐力、防止疲劳、或使疲劳恢复的氨基酸组合物。

背景技术

糖尿病等生活习惯病会引起动脉硬化等，伴随着人口老龄化，生活习惯病的预防和克服成为重大的课题。例如据说上述生活习惯病的潜在人群仅在我国就有2000万人。因此，作为生活习惯病的对策，已经进行了应用了代谢综合症概念的体检·保健指导。运动对上述代谢综合症的预防是有效的，耐力的提高是一个大的问题。

另外，不仅可以通过运动训练，还可以通过摄取食品、保健品(supplement)或含有其他有效成分的药物等，来尝试提高耐力。例如据说苹果酸及柠檬酸具有耐力增强效果(非专利文献1)。进而，有报道指出从蜂王浆中分离的特定分子量(57KDa)的蛋白质中存在对提高心肺功能及提高耐力有效的促进有氧运动的成分(专利文献1)。

另外，作为提高耐力的有效成分，已知有可可豆肉及/或其加工物(专利文献2)、含有辅酶Q10及(-)-羟基柠檬酸的食品组合物(专利文献3)、硫辛酸或含有硫辛酸及肌酸的组合物(专利文献4)等。而且，公开了含有双泛酰硫乙胺类及支链氨基酸的组合物具有防止耐力降低的作用(专利文献5)。

另一方面，一直以来已知氨基酸组合物具有多种作用。来自班胡蜂的氨基酸组合物可以作为肌力保持剂、滋养强壮剂、输液用剂、营养补充剂、疲劳恢复剂或乳酸生成调节剂使用(专利文献6)。进而，WO2003-011056号(专利文献7)中公开了以天冬氨酸作为有效成分的疲劳恢复用组合物。另外，日本特开2008-105954(专利文献8)中公开了以丙氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、天冬酰胺中的至少1种作为有效成分的骨髓红细胞前体细胞的分化促进剂及贫血治疗剂，而且，日本特开2008-081498(专利文献9)中公开了以苏氨酸及亮氨酸作为有效成分的脂肪蓄积抑制用组合物。

专利文献1：日本特开2001-172195号

专利文献2：日本特开2006-282576号

专利文献3：日本特开2004-81010号

专利文献4：日本特开2007-131609号

专利文献5：日本特开2006-16358号

专利文献6：日本专利第2518692号

专利文献7：WO2003-011056号

专利文献8：日本特开2008-105954号

专利文献9：日本特开2008-081498号

非专利文献1：日本血液流变学学会志、第6卷、第2号(2003年)83-88页

发明内容

一直以来，已知氨基酸组合物具有多种活性，但最适于提高耐力、抗疲劳或恢复疲劳的组成尚属未知，进而，例如即使对于来自班胡蜂的氨基酸组合物，也没有能够特定氨基酸组合物(混合物)中究竟何种氨基酸对提高耐力等特别有效、何种程度的氨基酸浓度对提高耐力等有效。

另外，氨基酸组合物例如大多用作液体饮料或液体制剂，但由于每种氨基酸的溶解度不同，所以氨基酸组合物中也存在溶解成为问题的成分。例如由于酪氨酸对水的溶解度低，所以期望尽可能降低其使用量。

因此，本申请发明实现下述目的：限定氨基酸组合物中对提高耐力、抗疲劳、或恢复疲劳有效的氨基酸成分及浓度，同时降低溶解度低的氨基酸成分。

一直以来，本申请发明人等对来自班胡蜂的氨基酸组合物的各种作用进行了研究。通过深入研究氨基酸组合物中的组成，首次鉴定出有利于提高耐力的氨基酸为酪氨酸，进而在针对水中溶解度低的酪氨酸提高耐力所需的浓度进行探讨后，发现了一种溶解度高、且在提高耐力方面优异的氨基酸组合物。

本说明书包含作为本申请优先权基础的日本专利申请2008-259678号的说明书及/或附图中记载的内容。

本申请发明首次提供了提高耐力、抗疲劳或恢复疲劳的氨基酸成分。

附图说明

[图1]表示实验过程中的体重变化(值为平均值±SE)。各组体重之间没有显著性差异。

[图2]表示单次给与对游泳时间的影响(值为平均值±SE)。

[图3]表示反复给与对游泳时间的影响(V值为平均值±SE)。*p＜0.05、**：p＜0.01相对于对照。

[图4]表示血液中的葡萄糖(值为平均值±SE)的测定值。

[图5]表示血液中的乳酸(值为平均值±SE)的测定值。*：p＜0.05相对于对照。

[图6]表示血液中的游离脂肪酸(值为平均值±SE)的测定值。***：p＜0.005相对于对照。

[图7]表示羟基丁酸(值为平均值±SE)的测定值。*：p＜0.05相对于对照。

[图8]表示肌酸激酶(值为平均值±SE)的测定值。

[图9]表示肝脏和肌肉(腓肠肌)的糖原(值为平均值±SE)的测定值。*：p＜0.05相对于对照。

[图10]表示睾丸周围的脂肪组织重量(值为平均值±SE)的测定值。**：P＜0.01相对于对照。

[图11]表示腓肠肌·大腿四头肌的肌肉重量(值为平均值±SE)的测定值。*：p＜0.05相对于对照。

将本说明书中引用的全部出版物、专利及专利申请作为参考直接引入本说明书中。

具体实施方式

1.提高耐力·抗疲劳·恢复疲劳

本申请发明包括用于提高耐力的氨基酸组合物、及以上述氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂。本申请发明的用于提高耐力的氨基酸组合物，也可以制成食用或医疗用或健康食品用氨基酸组合物。本申请发明的耐力提高剂对局部耐力及全身耐力的提高均有效。

耐力的测定中，例如也可以使用以下实施例所述的方法，通过动物实验来测定，例如，在全身耐力的测定中，也可以通过最大氧摄取量(VO2max)的呼气气体分析来进行测定。可以从运动的受试者体内、经由气体面罩直接采集气体来进行测定。

进而，本申请发明还包括下述氨基酸组合物：在希望防止疲劳时通过事前摄取(给与)也可以用作抗疲劳剂的氨基酸组合物；及感到疲劳时通过事后摄取(给与)也可以用作疲劳恢复剂的氨基酸组合物。

2.耐力提高剂、及具有耐力提高作用的氨基酸组合物

本申请发明包括耐力提高剂、抗疲劳剂、及疲劳恢复剂，其特征在于，至少含有酪氨酸作为有效成分。更具体而言，本申请发明包括仅由酪氨酸构成的耐力提高剂、抗疲劳剂、及疲劳恢复剂，以及还含有除酪氨酸之外的氨基酸的耐力提高剂、抗疲劳剂、及疲劳恢复剂。作为除酪氨酸之外的氨基酸，例如可以为支链氨基酸(BCAA)等，具体而言，可以为选自缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、赖氨酸、及苯丙氨酸中的任意1种以上的氨基酸。

更具体而言，可以举出下述耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂：(1)作为氨基酸组合物，以仅由酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、赖氨酸及苯丙氨酸构成的氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂；以及(2)以仅由酪氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、甘氨酸、丝氨酸、蛋氨酸、组氨酸及色氨酸构成的氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂。

另外，本申请发明还包括：(3)以由下述比例构成的氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂：酪氨酸3～5摩尔、缬氨酸4～8摩尔、亮氨酸2～12摩尔、异亮氨酸3～9摩尔、精氨酸0.1～5摩尔、谷氨酸0.1～4摩尔、天冬氨酸0.1～5摩尔、丙氨酸0.1～12摩尔、脯氨酸4～30摩尔、赖氨酸5～11摩尔、及苯丙氨酸0.5～5摩尔；以及(4)以由下述比例构成的氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂：酪氨酸3～4摩尔、缬氨酸4～8摩尔、亮氨酸2～12摩尔、异亮氨酸3～9摩尔、精氨酸0.1～5摩尔、谷氨酸0.1～4摩尔、天冬氨酸0.1～5摩尔、丙氨酸0.1～12摩尔、脯氨酸4～30摩尔、赖氨酸5～11摩尔、苯丙氨酸0.5～5摩尔、苏氨酸2～15摩尔、甘氨酸15～25摩尔(或20.5～25摩尔)、丝氨酸0.1～5摩尔、蛋氨酸0.1～5摩尔、组氨酸0.1～5摩尔、及色氨酸0.1～5摩尔。

本申请发明中还包括：(5)以由下述比例构成的氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂：酪氨酸3.5～4摩尔、缬氨酸5～7摩尔、亮氨酸6～8摩尔、异亮氨酸4～6摩尔、精氨酸3～5摩尔、谷氨酸3～5摩尔、天冬氨酸0.1～1摩尔、丙氨酸6～8摩尔、脯氨酸15～20摩尔、赖氨酸8～10摩尔、及苯丙氨酸3～5摩尔；以及(6)以由下述比例构成的氨基酸组合物作为有效成分的耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂：酪氨酸3.8～4摩尔、缬氨酸5.8～6摩尔、亮氨酸6.2～6.4摩尔、异亮氨酸4.5～4.7摩尔、精氨酸3.5～3.7摩尔、谷氨酸3.2～3.4摩尔、天冬氨酸0.15～0.17摩尔、丙氨酸6.1～6.3摩尔、脯氨酸18～19摩尔、赖氨酸8.7～8.9摩尔、苯丙氨酸3.8～4摩尔、苏氨酸7.2～7.4摩尔、甘氨酸19～21摩尔(或20.5～21摩尔)、丝氨酸2.5～2.7摩尔、蛋氨酸0.53～0.55摩尔、组氨酸2.6～2.8摩尔、及色氨酸2.2～2.4摩尔。

此时，更具体而言，与现有来自班胡蜂的氨基酸组合物(V.A.A.M.)相比，酪氨酸的浓度优选为50～90％、较优选为70～90％、更优选为75～85％、特别优选为约80％，可以举出下述水溶液：优选将酪氨酸的浓度设定为2.4～4.3摩尔％(3.5～6.3重量％)、较优选3.3～4.3摩尔％(4.8～6.3重量％)、更优选3.6～4.1摩尔％(5.2～5.9重量％)，且酪氨酸以0.05～0.065摩尔％含在水溶液中。

作为更优选的氨基酸组合物，可以举出由下述氨基酸构成的氨基酸组合物，即，约3.9摩尔(约5.5重量份)的酪氨酸、约6.0摩尔(约5.6重量份)的缬氨酸、约6.3摩尔(约6.5重量份)的亮氨酸、约4.6摩尔(约4.8重量份)的异亮氨酸、约3.6摩尔(约5.0重量份)的精氨酸、约3.3摩尔(约3.8重量份)的谷氨酸、约0.16摩尔(约0.22重量份)的天冬氨酸、约6.3摩尔(约4.4重量份)的丙氨酸、约18.4摩尔(约16.8重量份)的脯氨酸、约8.8摩尔(约12.8重量份)的赖氨酸、约3.9摩尔(约5.1重量份)的苯丙氨酸、约7.3摩尔(约6.9重量份)的苏氨酸、约19.5摩尔(约11.6重量份)的甘氨酸、约2.5摩尔(约2.1重量份)的丝氨酸、约0.54摩尔(约0.64重量份)的蛋氨酸、约2.6摩尔(约3.2重量份)的组氨酸、及约2.2摩尔(约3.6重量份)的色氨酸。

3.本申请发明的耐力提高剂、抗疲劳剂、及/或疲劳恢复剂的使用形态

本申请发明的耐力提高剂、抗疲劳剂、或疲劳恢复剂的使用形态，没有特别限定，可以用于医疗，也可以用于饮食、营养辅助饮食。

用于医疗的情况下，可以通过口服给与、直肠给与、注射或输液给与等通常的给与途径进行使用。口服给与的情况下，可以将上述组合物本身或药学上允许的载体、赋形剂、稀释剂等一并混合，制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、锭剂、糖浆剂等。另外，作为注射剂，例如可以添加合适的缓冲剂、等渗剂等，溶解于灭菌蒸馏水进行使用即可。

本申请发明的耐力提高剂、抗疲劳剂、或疲劳恢复剂可以采用散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体制剂等合适的剂型。在制剂化时可以添加赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等制剂化中常用的助剂。作为赋形剂，包括淀粉、乳糖、白糖、甲基纤维素、羧甲基纤维素、藻酸钠、磷酸氢钙、合成硅酸铝、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟丙基淀粉(HPS)等。另外，作为粘合剂，包括淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、阿拉伯胶粉末、明胶、葡萄糖、白糖等的水溶液、或它们的水·乙醇溶液等。作为崩解剂，包括淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、微晶纤维素、羟丙基淀粉、磷酸钙等。作为润滑剂，包括巴西棕榈蜡、轻质无水硅酸、合成硅酸铝、天然硅酸铝、合成硅酸镁、氢化油、氢化植物油衍生物(Sterotex HM)、芝麻油、白蜡、氧化钛、干燥氢氧化铝·胶化硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸镁、滑石、磷酸氢钙、十二烷基硫酸钠等。

本申请发明的含有氨基酸组合物的耐力提高剂、抗疲劳剂、或疲劳恢复剂是非常安全的，所以可以在非常广泛的范围内设定其给与量。通常情况下，可以考虑给与途径、包括人在内的给与对象动物的年龄、体重、症状等各种因素，进行适当设定。本申请发明不限定于此，作为合适的有效成分，优选0.3g～8g/kg/天，较优选0.4g～5g/kg/天，更优选0.5g～3g/kg/天。

本申请发明的耐力提高剂、抗疲劳剂、或疲劳恢复剂，可以以0.3～60重量％溶液、优选1.0～2.0重量％溶液的形式每1天给与100～500ml，1～3次。为注射剂时，以0.3～6.0重量％溶液的形式每1次给与100～400ml、优选150～300ml。另外，本申请发明的耐力提高剂、抗疲劳剂、或疲劳恢复剂，可以采用口服给与或非口服给与(肌肉内、皮下、静脉内、栓剂、经皮等)中的任一种方式。

作为食用的情况下，本申请发明的耐力提高剂、抗疲劳剂、或疲劳恢复剂可以直接食用，也可以制成添加到各种食品中的添加物。另外，也可以将本申请发明的氨基酸组合物溶解于水制成饮料，在上述情况下，还可以进一步添加其他营养成分，例如水溶性维生素类、牛磺酸等。为了改善嗜好性，可以加入氯化钠等盐类、柠檬酸等酸类(酸味料)及/或其他适当的风味制成饮料。此时，为了提高稳定性，也可以进一步添加pH调节剂、螯合剂。

本申请发明的耐力提高剂、抗疲劳剂、或疲劳恢复剂连续给与较为理想，优选给与1周以上。

实施例

以下实施例中，使用下述实验试样。

(A)实验试样：混悬于蒸馏水，如下所述地配制。

(1)DW(蒸馏水)＝对照(control)

(2)来自班胡蜂的氨基酸组合物的水溶液(V.A.A.M.的水溶液)：500mg/kg。需要说明的是，其组成如下所示。

约4.8摩尔(约6.9重量份)的酪氨酸、约6.0摩尔(约5.6重量份)的缬氨酸、约6.3摩尔(约6.5重量份)的亮氨酸、约4.6摩尔(约4.8重量份)的异亮氨酸、约3.6摩尔(约5.0重量份)的精氨酸、约3.3摩尔(约3.8重量份)的谷氨酸、约0.16摩尔(约0.22重量份)的天冬氨酸、约6.3摩尔(约4.4重量份)的丙氨酸、约18.4摩尔(约16.8重量份)的脯氨酸、约8.8摩尔(约12.8重量份)的赖氨酸、约3.9摩尔(约5.1重量份)的苯丙氨酸、约7.3摩尔(约6.9重量份)的苏氨酸、约19.5摩尔(约11.6重量份)的甘氨酸、约2.5摩尔(约2.1重量份)的丝氨酸、约0.54摩尔(约0.64重量份)的蛋氨酸、约2.6摩尔(约3.2重量份)的组氨酸、及约2.2摩尔(约3.6重量份)的色氨酸。

(3)仅将酪氨酸减少到80％的来自班胡蜂的氨基酸组合物的水溶液：500mg/kg。需要说明的是，在以下内容及附图中，有时将其记作Tyr 80％。

(4)仅将酪氨酸减少到20％的来自班胡蜂的氨基酸组合物的水溶液：500mg/kg。需要说明的是，在以下内容及附图中，有时将其记作Tyr 20％。

(B)耐力试验根据Jpn.J.Phys.Fitness Sports Med.1995，44：225-238中记载的方法进行。概括而言，在室温下使小鼠(各组10只)禁食16小时后，将氨基酸组合物制成1.8重量％的水溶液，以37.5μl/g体重进行口服给与，接着，在室温下让其休息30分钟。将小鼠放入流水池(在直径32cm、深30cm的圆筒型水槽中加入水，保持在35℃，利用循环装置制作速度为8m/分钟的水流)中并将以下规定的铅坠(重物)装在小鼠尾巴上，使其游泳，测定临界游泳时间。

(C)实验方法：按照下述顺序实施。

(1)将4周龄的ddY雄性小鼠驯化12天后，以耐力的评价作为指标，分成4组(分组、1组：n＝10)。需要说明的是，设定该时间点为-1week(-1周)。在整个实验期间中的体重变化示于图1。各组体重没有显著性差异。

在以下(2)～(4)的耐力评价中，将相当于体重5％的铅坠装在小鼠尾巴上，测定临界游泳时间。

(2)自游泳分组开始1周后，开始口服给与上述实验试样，在开始给与后的第1天，测定游泳时间(单次给与试验)。需要说明的是，设定该时间点为0week(0周＝0天)。此时，对各组口服给与上述实验试样即对照、来自班胡蜂的氨基酸组合物的水溶液(V.A.A.M.水溶液)、仅将酪氨酸减少到80％的来自班胡蜂的氨基酸组合物的水溶液(Tyr 80％)、或仅将酪氨酸减少到20％的来自班胡蜂的氨基酸组合物的水溶液(Tyr 20％)。

上述结果示于图2。如图2所示，单次给与时，没有确认到游泳时间延长。

(3)之后，继续进行实验试样的口服给与，每日1次、共7周。在该期间内，基本自由摄取普通的固态食物(Labo MR Stock：日本农产工业)。但是，在游泳时间的测定、采血、解剖中，从前一晚(22时)开始对其禁食。

(4)每1周进行游泳时间的测定，直到5week(第5周)。在游泳时间的测定日，在游泳开始30分钟前，口服给与实验试样。

其结果示于图3。酪氨酸(Tyr)100％组和80％组与对照组相比，从给与开始的第1周，确认到游泳时间显著地延长。在Tyr100％组与80％组之间没有确认到差异。Tyr20％组与对照组相比，即使在给与开始的第5周也没有确认到游泳时间的延长。

(5)在开始口服给与实验试样后的6week(第6周)，将相当于体重5％的铅坠装在小鼠尾巴上，使其游泳15分钟，之后，进行采血，测定血糖值、血中乳酸值、血中游离脂肪酸(NEFA、Non-esterified fatty acid))值。需要说明的是，在给与前、给与30分钟后(即将运动前)也进行采血，与上述同样地进行测定。测定血糖值时使用Glucose CII-Test Wako(和光纯药株式会社制)，测定乳酸值时使用Detamina-LA(协和Medex株式会社制)，测定游离脂肪酸值时使用NEFA C-Test Wako(和光纯药株式会社制)。

血糖值的测定结果示于图4。各组的血中的葡萄糖值没有确认到显著性差异。

血中乳酸值的测定结果示于图5。在给与前、给与30分钟后(即将运动前)，各组的血中乳酸值中没有确认到显著性差异。Tyr 100％组与Tyr 80％组与对照组相比，在刚运动后，确认到乳酸值显著地降低，抑制伴随运动的乳酸升高。

血中游离脂肪酸(NEFA)值的测定结果示于图6。Tyr 100％组、Tyr 80％组、Tyr 20％组与对照组相比，均确认到在刚运动后游离脂肪酸(NEFA)值显著地升高。

(6)同样地在7week(第7周)，同样地进行采血，测定酮(3-羟基丁酸、3-Hydroxybutylic acid)值、肌酸激酶(CK、Creatine kinase)值。酮的测定时使用Ketolex“三和”(三和化学株式会社制)，肌酸激酶的测定时使用CPKII-Test Wako(和光纯药株式会社制)。

酮的测定结果示于图7。随着运动，羟基丁酸(酮)值全部升高，Tyr 100％组和Tyr 80％组与对照组相比，可以确认在刚运动后酮显著地升高。

肌酸激酶的测定结果示于图8。随着运动，肌酸激酶(CK)值全部升高，但各组的肌酸激酶值之间没有确认到显著性差异。

(7)在开始给与的8week(第8周)，将各组分成非运动组和运动组(游泳)。

同样地在第8周，解剖小鼠，测定脏器重量(肝脏·肾脏·脾脏·附睾周围脂肪·腓肠肌·大腿四头肌)。肝脏和腓肠肌中，也测定糖原的量。测定糖原时使用Glucose CII-Test Wako(和光纯药株式会社制)。

将相当于体重5％的铅坠装在一半小鼠的尾巴上，使其游泳15分钟后立即对其进行解剖(运动组＝有运动)。对于剩余一半的小鼠，不进行游泳直接解剖(非运动组＝没有运动)。

糖原量的测定结果示于图9。在非运动组(无运动)中，各组的肝脏和肌肉的糖原量没有确认到差异。另一方面，在运动组(有运动)中，Tyr 100％组和80％组与对照组相比，确认到肝脏和肌肉的糖原量显著地升高。

另外，脏器重量的测定结果示于图10及图11。Tyr 100％组与对照组相比，在睾丸周围确认到脂肪组织重量显著地降低。另外，Tyr 100％组与对照组相比，确认到腓肠肌重量和大腿四头肌重量显著地增加。没有确认到其他脏器(肝脏·肾脏·脾脏)的差异。

产业上的可利用性

本申请发明可以用作有利于运动竞赛者、体力劳动者及家畜等提高耐力、恢复疲劳、抗疲劳等的药物、保健健康食品、饮料或饲料。