一种崇明水仙组培快速繁殖育苗法

摘要

本发明公开了一种崇明水仙组培快速繁殖育苗方法，包括外植体选择和消毒、诱导培养、增殖培养、根诱导培养、移栽生根。本发明完成了崇明水仙组培扩繁方法的从外植体选择到移栽的完整技术流程，并首次提出将增殖培养后的鳞茎经过短时间生根诱导后直接移栽到珍珠岩基质中生根，以使崇明水仙试管苗无需离体生根，简化了诱导生根和移栽的步骤，缩短了生产周期，降低了成本，移栽成活率到达92％以上。本发明针对性强，简单易行，增殖率高，生产的种球一致性高，病虫害少，节约成本、能够满足崇明水仙种苗的工厂化生产要求。

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种崇明水仙组培快速繁殖育苗法。

背景技术

崇明水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)作为上海特有的水仙品种，曾与漳州水仙齐名，是我国两大水仙品系之一。崇明已有400多年栽培水仙的历史，作为商品花卉生产也有100多年。崇明水仙的特点是球根自然分株较少，花瓣润白似玉，状如圆盘，心呈金黄，宛如酒盏，故有“金盏银台”之美称。花香芳香浓郁，且经月不散，为他地水仙所不及。崇明水仙是崇明地区的主要栽培花卉品种。然而，由于崇明水仙生产上一直以分株繁殖为主，繁殖系数低(年繁殖系约为3～4)、繁育速度慢、生产周期长，且整齐度差，难以实现大规模生产。长期的无性繁殖还会导致病毒积累，使鳞茎退化，严重影响了崇明水仙的品质及其市场化发展。

崇明水仙的组培扩繁技术可在短时间内获得大批量、一致性的优质鳞茎，不仅为工厂化生产提供优质种苗，而且为崇明水仙的科研育种、资源保存等科研工作奠定良好的研究基础。目前国内外对崇明水仙优质种苗快繁技术体系的研究比较欠缺，且研究的重点多集中在不同外植体的分化能力和不同激素对鳞茎诱导的影响，对工厂化育苗的完整流程、生产周期、生产成本的控制关注较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种崇明水仙组培快速繁殖育苗法，以克服崇明水仙传统繁殖方式的繁殖系数低、生产周期长、病虫害传播严重的现状。本发明不仅能大幅提高繁殖效率，而且能够生产无病虫害、一致性较强的种球、节约成本、可操作性强，能够实现种苗的工厂化快速育苗生产。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种崇明水仙组培快速繁殖育苗法，包括外植体选择和消毒、诱导培养、增殖培养、根诱导培养与移栽生根，具体步骤如下：

1)外植体选择生长健壮、无病虫害的崇明水仙鳞茎，消毒。

2)诱导培养：将消毒好的鳞茎带鳞茎盘切分成0.5～1.0cm×1.0cm大小，每块保留2～3层鳞茎片，接种在诱导培养基上，诱导出小鳞茎。培养条件是：温度为23～25℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为10～12小时/天。

3)增殖培养：将诱导出的小鳞茎切分后接种在增殖培养基上，有小鳞茎产生。培养条件是：温度为23～25℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为10～12小时/天。

4)根诱导培养：从增殖培养出的小鳞茎中选择直径0.5～1.0cm的鳞茎，切分成单个鳞茎，接种在MS基本培养基上生根诱导。培养条件是：温度为23～25℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为10～12小时/天。

5)移栽生根：鳞茎在MS基本培养基上生根诱导培养后，移栽至园艺珍珠岩基质的苗床上生根培养。每天浇水1～2次，每周施肥一次。2个月成活率在90％以上。

所述诱导培养基为：

MS基本培养基以及

所述增殖培养基为：

MS基本培养基以及

其中，步骤1)中所述崇明水仙鳞茎在3～5℃下储存4～6周，然后进行消毒。

所述外植体消毒过程为：除去干缩的鳞茎表皮及根，加入洗洁精搓洗2～3次，在流水下冲洗20-40min。将种球横1/2～1/3处切后消毒，先用75％(v/v)酒精消毒70-100s，然后用0.1％升汞消毒5-20min，接着用无菌水清洗，再用0.1wt％升汞消毒5-20min，最后用无菌水清洗3～5次。

所述诱导培养基和增殖培养基中各组分的浓度是相对于1L MS基本培养基进行计算。

所述诱导培养基和增殖培养基中的蔗糖可以用白砂糖替换，使用白砂糖作为碳源能大幅降低生产成本，增殖效率无显著差异。

所述园艺珍珠岩基质经高温消毒后可重复使用。

本发明所用培养基的配制方法均按常规植物组织培养培养基的配制方法配制，其中常规配制过程中使用的蒸馏水可以用自来水替换。

经试验验证，本发明所述崇明水仙组培快速繁殖育苗法培育出的水仙年增殖系数达到4000以上，移栽成活率达到92％以上，从鳞茎增殖到移栽成苗生产周期缩短为3个月左右。

本发明的有益效果：

1、本发明首次提出将增殖培养后的鳞茎经过短时间生根诱导后直接移栽到珍珠岩基质中生根，以使崇明水仙试管苗无需离体生根，简化了生产步骤，并大幅缩短了生产周期，提高了生产效率，优化了水仙壮苗、生根、炼苗、移栽等技术环节，完善了崇明水仙的组织培养和工厂化快繁育苗的技术体系。

2、本发明每个外植体的年增殖系数在4000以上，移栽成活率在92％以上，从鳞茎增殖到移栽成苗生产周期缩短为3个月以下，大大提高了崇明水仙鳞茎增殖系数，大幅缩短了生产周期。

3、本发明从生产实际出发，在种球生产过程中使用白砂糖代替蔗糖；用自来水代替蒸馏水；以MS基本培养基为生根的诱导培养基；珍珠岩基质经消毒后可重复使用，且本发明较常规组培方法生产周期短，能大幅节约生产成本。

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案。

实施例1

1)外植体的选择和消毒。选择生长健壮、无病虫害、无病毒症状的2年生以上的崇明水仙鳞茎，在4℃低温条件下储藏6周。除去干缩的鳞茎表皮及根，加入洗洁精搓洗2～3次，在流水下冲洗30min。将种球横沿着1/2～1/3处切后消毒，先用75％(v/v)酒精消毒90s，然后用0.1wt％升汞消毒10min，接着用60℃无菌水清洗3次，再次用0.1％升汞消毒15min，接着无菌水清洗3～5次，备用。

2)诱导培养：在无菌条件下，将已经灭菌的鳞茎切分成0.5～1.0cm×1.0cm大小，每块保留2～3层鳞茎片，接种在诱导培养基上。培养条件是：温度为24±1℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12小时/天。诱导培养基为：MS基本培养基(Murashige & Skoog，1962)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)5.0mg/L、萘乙酸(NAA)1.0mg/L、蔗糖40g/L、琼脂6.0g/L、蒸馏水定容、pH 5.8。培养50～60天可见小鳞茎。

3)增殖培养：在无菌条件下将步骤2)诱导出来的小鳞茎纵切一分为二，接种在增值培养基上。培养条件是：温度为24±1℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12小时/天。诱导培养基为：MS基本培养基、6-苄氨基嘌呤(6-BA)1.0mg/L、萘乙酸(NAA)1.0mg/L、2，4二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.1mg/L、蔗糖40g/L、琼脂6.0g/L、蒸馏水定容、pH5.8。30～40天，有小鳞茎产生。月繁殖系数为3～4。

4)根诱导培养：在无菌条件下将步骤3)中增殖出的小鳞茎中选择直径0.5～1.0cm的鳞茎，切分成单个鳞茎接种在MS基本培养基上生根诱导。培养条件是：温度为24±1℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12小时/天。诱导时间20天左右，尚无根生成。

5)移栽及生根：将在步骤4)中到的经过生根诱导的根鳞茎直接移栽到园艺珍珠岩苗床中生根培养。每天视水分情况浇水1～2次，每周施薄肥一次。15～20天有根产生。30-45天后种球健壮，根系发达可以为商品球，可供春秋两季定植。移栽成活率为92％。本实施例生产的种球一致性高，病虫害少，能够满足工厂化育苗的要求。

实施例2：工厂化育苗操作方法

1)外植体的选择和消毒。选择生长健壮、无病虫害、无病毒症状的2年生以上崇明水仙鳞茎，在4℃低温条件下储藏6周。除去干缩的鳞茎表皮及根，加入洗洁精搓洗2～3次，在流水下冲洗30min。将种球横沿着1/2～1/3处切后消毒，先用75％(v/v)酒精消毒90s，然后用0.1wt％升汞消毒10min，接着用60℃无菌水清洗3次，再次用0.1％升汞消毒15min，接着无菌水清洗3～5次，备用。

2)诱导培养：将已经灭菌的鳞茎切分成0.5～1.0cm×1.0cm大小，每块保留2～3层鳞茎片，接种在诱导培养基上。培养条件是：温度为24±1℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12小时/天。诱导培养基为：MS基本培养基(Murashige & Skoog，1962)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)5.0mg/L、萘乙酸(NAA)1.0mg/L、白砂糖40g/L、琼脂6.0g/L、自来水定容、pH 5.8。培养50～60天可见小鳞茎。

3)增殖培养：将步骤2)诱导出来的小鳞茎纵切一分为二，接种在增值培养基上。培养条件是：温度为24±1℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12小时/天。诱导培养基为：MS基本培养基、6-苄氨基嘌呤(6-BA)1.0mg/L、萘乙酸(NAA)1.0mg/L、2，4二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.1mg/L、白砂糖40g/L、琼脂6.0g/L、自来水定容、pH5.8。30～40天，有小鳞茎产生。月繁殖系数为3～4。

4)根诱导培养：在无菌条件下将步骤3)中增殖出的小鳞茎中选择直径0.5～1.0cm的鳞茎，切分成单个鳞茎接种在MS基本培养基上生根诱导。培养条件是：温度为24±1℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12小时/天。诱导时间20天左右，尚无根生成。

5)移栽及生根：将在步骤4)中到的经过生根诱导的根鳞茎直接移栽到园艺珍珠岩苗床中生根培养。每天视水分情况浇水1～2次，每周施薄肥一次。15～20天有根产生。30-45天后种球健壮，根系发达可以为商品球，可供春秋两季定植。移栽成活率为92％。本实施例生产的种球一致性高，病虫害少，能够满足工厂化育苗的要求。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。