一种逍遥散抗抑郁症提取物的制备方法

摘要

本发明提供了一种逍遥散抗抑郁症提取物的制备方法，按逍遥散处方重量比例称取柴胡、当归、茯苓、白芍、白术、炙甘草、薄荷、生姜，加乙酸乙酯回流提取，过滤，干燥，得逍遥散提取物。本发明制得的逍遥散提取物与逍遥散原复方相比，化学成分相对明确，工艺稳定，质量可控，可减少服用量，增强药物顺应性，方便贮藏和运输；与201010110283.7专利申请相比，抗抑郁活性相当，但工艺简化，生产成本及时间显著缩减，使用溶剂绿色环保，最重要的是便于实现工业化。经分析该提取物含有的化学成分主要为藁本内酯、白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III、棕榈酸等。本发明不仅工艺简单，提取物质量可控，而且所采用溶剂对人体安全，适于工业化生产。

说明书

技术领域

本发明涉及中药复方提取物的制备方法，具体涉及一种逍遥散抗抑郁症提取物的制备方法。

背景技术

抑郁症是一种常见的精神疾病，具有发病率高、复发率高和高致残的特点。据WHO预测：到2020年，单项抑郁症将成为第二大致残性疾病，其危害已越来越引起医药卫生界的重视。

逍遥散为经典名方，至今已有近千年的应用历史。现代临床与药理研究已证实其具有明显的抗抑郁作用，且未发现毒副作用。目前虽有散剂、丸剂、浓缩丸、颗粒剂等多种剂型，但这些药品均以药材为原料，经简单加工，质量控制难，无效成分多，服药剂量大，顺应性差等缺陷。

前期，本课题组申请公开了一种逍遥散抗抑郁症有效部位及其提取方法(申请号为201010110283.7)，虽然可解决上述问题，但其存在工艺复杂、生产成本较高、生产周期长，所使用溶剂安全性较低，不易实现工业化生产。

发明内容

本发明目的在于提供一种逍遥散抗抑郁症提取物的制备方法。该方法所得提取物疗效与逍遥散有效部位相当，但是工艺简单，生产周期明显缩短，生产成本大大降低，质量可控，而且所采用溶剂对人体更安全，更重要的是能够实现工业化生产。

本发明提供的一种逍遥散抗抑郁症提取物的制备方法，包括如下步骤：药物组分按重量份数计：柴胡20-40，白术25-35，白芍25-35，当归25-35，茯苓25-35，甘草10-20，薄荷5-15，生姜5-15；按比例称取各药物，粉碎后混匀，按每千克药材加5-10升的乙酸乙酯，加热回流提取2-3次，每次1-2h，合并提取液，过滤，滤液浓缩至浸膏，60℃真空干燥，得提取物。药理实验证明该提取物具有明显的抗抑郁活性。

所述的药物组分按重量份数计可优选为：柴胡30，白术30，白芍30，当归30，茯苓30，甘草15，薄荷10，生姜10。

经过分析，提取物含有甘草苷、对伞花烃、薄荷脑、反式大茴香脑、莰烯、水芹烯、孑丁香烯、香木对烯、2，6-双(1，1-二甲基乙基)-4-甲基苯酚、香橙烯、石竹烯氧化物、胡椒烯、长叶蒎烯、β-石竹烯、愈创木烯、β-柏木烯、苍术酮、藁本内酯Z、藁本内酯E、亚油酸乙酯、二丁基-酞酸酯、邻苯二甲酸丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、十六酸乙酯、白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III、亚油酸甲酯、棕榈酸等。

本发明方法得到的逍遥散抗抑郁症提取物加入相应辅料混合后，即可制成各种制剂。所述制剂可以是颗粒剂、胶囊剂、片剂、滴丸、粉针剂、注射剂、缓释剂、冲剂、缓释微丸。辅剂为各种制剂的常规辅料。

本发明采用现代提取技术，以逍遥散整体复方为原料，在人体可使用的溶剂范围内，运用药理指标对提取溶剂和提取工艺进行筛选，确定最佳提取溶剂和工艺并筛选出药效物质含量高，且药理活性优于或相当于原方的提取物，其成分相对明确，疗效可靠，质量易控。与201010110283.7专利申请方法得到的逍遥散抗抑郁症有效部位相比，抗抑郁活性相当，但工艺简化，生产成本显著缩减，使用溶剂绿色环保，便于实现工业化。进一步以本发明提取物为组份制成的制剂，与现有制剂相比，可减少服用量，增强药物顺应性，方便贮藏和运输。总之，本发明方法不仅工艺简单，提取物质量可控，而且所采用溶剂对人体安全，适于工业化生产。

具体实施方式

实施例1  本发明逍遥散抗抑郁症提取物的制备

称取柴胡150g、白术150g、白芍150g、当归150g、茯苓150g、甘草75g、薄荷50g、生姜50g，粉碎后混匀，加乙酸乙酯6升，加热回流提取2次(每次2h)，合并提取液，过滤，回收溶剂，浓缩至浸膏，至真空干燥箱中(60℃)烘干，得提取物X₁。

对比例1

称取柴胡150g、白术150g、白芍150g、当归150g、茯苓150g、甘草75g、薄荷50g、生姜50g，粉碎后混匀，以甲醇为夹带剂，进行超临界提取。萃取温度：40℃；萃取压力：25Mpa；萃取时间：1.5h；分离温度：35℃；分离压力：7Mpa。得芳香油状物，为提取物X₂。

对比例2

称取柴胡150g、白术150g、白芍150g、当归150g、茯苓150g、甘草75g、薄荷50g、生姜50g，粉碎后混匀，加95％乙醇6升，加热回流提取2次(每次2h)，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至310ml，加水620ml，继续浓缩至310ml。向其中加入310ml乙酸乙酯，超声萃取3次(每次30min)，合并乙酸乙酯萃取液，回收溶剂，浓缩至浸膏，至真空干燥箱中(60℃)烘干，得提取物X₃。

对比例3(201010110283.7专利申请方法)

称取柴胡150g、白术150g、白芍150g、当归150g、茯苓150g、甘草75g、薄荷50g、生姜50g，粉碎后混匀，加无水乙醇6升，加热回流提取2次(每次2h)，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至310ml，加水620ml，继续浓缩至310ml。向其中加入310ml石油醚(60-90℃)，超声提取3次(每次30min)，合并石油醚提取液，回收溶剂，浓缩至浸膏，至真空干燥箱中(60℃)烘干，得部位A₁。

将310ml剩余液过D101大孔吸附树脂，依次用60％，95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，浓缩至浸膏，至真空干燥箱中(60℃)烘干，粉碎得部位A₂。

将部位A₁与部位A₂混合均匀，做为逍遥散抗抑郁提取物X₄。

对比例4

称取柴胡150g、白术150g、白芍150g、当归150g、茯苓150g、甘草75g、薄荷50g、生姜50g，粉碎后混匀，加石油醚(60-90℃)6升，加热回流提取2次(每次2h)，合并石油醚提取液，回收溶剂，浓缩至浸膏，至真空干燥箱中(60℃)烘干，得部位B₁。

滤渣加95％乙醇6升，加热回流提取2次(每次2h)，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至310ml，加水620ml，继续浓缩至310ml。310ml剩余液过D101大孔吸附树脂，依次用60％，95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得部位B2。

将部位B₁与部位B₂混合均匀，做为逍遥散抗抑郁提取物X₅。

实施例2  逍遥散不同提取溶剂和工艺下提取物抗抑郁活性筛选

2.1药物配制

逍遥散不同提取工艺下抗抑郁提取物给药剂量均相当于46g生药材/Kg动物。用时均溶于0.5％吐温80(w/v)1％cmc-Na溶液。

2.2实验方法

小鼠悬尾实验。实验动物按相应剂量连续给药2周，给药前一天测定小鼠5min内的自主活动。于末次灌胃1h后先测定小鼠5min内的自主活动，然后将单个小鼠尾端(距尾端2cm处)用胶布粘在纸箱上部，使其成倒挂状态，头部离箱底15cm，中间以隔板隔离小鼠视线。观察6min，记录后4min内小鼠累计不动时间为绝望时间。每次平行做6只小鼠。

2.3动物分组及给药

ICR小鼠(雄性)20±2g，每组12只。空白对照组每天给予0.5％吐温80(w/v)1％cmc-Na溶液0.2mL/10g，阳性对照组每天给予文拉法辛50mg/kg，其它组给予相应浓度的药液。

2.4实验结果

如表1所示。

表1逍遥散各抗抑郁提取物对小鼠悬尾不动时间的影响(n＝12)

注：与空白对照组比较：*：P＜0.05，**：P＜0.01。

采用上述绝望模型对逍遥散各提取部位的抗抑郁作用进行体内活性筛选。为了避免出现假阳性的结果，本实验同时测定了小鼠自主活动，结果显示各给药组都能在一定程度上减少小鼠悬尾的不动时间，并对自主活动无影响，表明抗抑郁作用是由药物引起的，而非中枢神经兴奋所致，体现了一定的抗抑郁效果。由实验结果可见，实施例1得到的提取物X₁具有抗抑郁活性，其活性与对比例3(201010110283.7专利申请方法)所得到的逍遥散有效部位相当，接近阳性药文拉法辛。

实施例3  逍遥散提取物X₁化学成分分析

利用HPLC、GC-MS等先进分析手段和现代分离技术，通过计算机质谱库检索并与标准图谱对照，结合标品及逍遥散复方中各单味药材化学成分的研究基础，确定提取物X₁含有下列成分：甘草苷、对伞花烃、薄荷脑、反式大茴香脑、莰烯、水芹烯、孑丁香烯、香木对烯、2，6-双(1，1-二甲基乙基)-4-甲基苯酚、香橙烯、石竹烯氧化物、胡椒烯、长叶蒎烯、β-石竹烯、愈创木烯、β-柏木烯、苍术酮、藁本内酯Z、藁本内酯E、亚油酸乙酯、二丁基-酞酸酯、邻苯二甲酸丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、十六酸乙酯、白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III、亚油酸甲酯、棕榈酸等。

实验结论：

本发明将逍遥散复方采用现代提取技术进行提取，得到提取物X₁，经绝望模型体内活性筛选实验证明，提取物X₁具有抗抑郁活性，其活性与对比例3所得到的逍遥散有效部位相当，接近阳性药文拉法辛。本发明所提供的逍遥散提取物与逍遥散复方相比，化学成分相对明确，工艺稳定，质量可控，并且抗抑郁活性明显提高，可减少服用量，增强药物顺应性，方便贮藏和运输；与逍遥散抗抑郁有效部位相比，抗抑郁活性相当，但工艺简化，生产成本显著缩减，使用溶剂绿色环保，便于实现工业化，实现了中药复方安全、有效、稳定、可控、方便的目的，适宜开发成抗抑郁新药。