鸡β肌动蛋白基因内含子1的用途

摘要

本发明公开了鸡β肌动蛋白内含子1或其功能等同体作为增强子元件或表达“热点”序列的用途，用于构建或重组哺乳动物表达载体以便极高地表达重组蛋白。本发明还公开了一套极强的基因表达载体的组成。

说明书

相关申请

本申请要求2007年1月25日提交的序列号No.60/897,394的美国临时申请的优先权，其内容在此全部纳入作为参考。

发明领域

本发明涉及鸡β肌动蛋白基因内含子1(Intron-1)的用途，其作为哺乳动物基因表达启动子的5’或3’侧翼区上的基因表达增强子或基因表达“热点”以构建新的哺乳动物表达载体或重新构建既存的基因表达载体，用于重组蛋白的极高水平的表达和哺乳动物细胞系的产生，该哺乳动物细胞系生产极高水平的重组蛋白。

发明背景

重组蛋白可通过首先将编码该重组蛋白的表达载体引入宿主细胞，然后在该宿主细胞内表达该重组蛋白来制备。传统的宿主细胞包括未被选择用于无血清悬浮培养基中最佳强劲增长的原始CHO、NSO和293细胞。传统的表达载体可用SV40或CMV基启动子以控制重组蛋白的表达。常规表达体系中采用的宿主细胞生长相对缓慢，倍增时间约24-36小时，并且最佳生长细胞浓度为3-5x10⁶细胞/ml。

为了增大重组蛋白的生产速度并维持高的生产率，本发明人发现可优选地使用某些具有较短倍增时间和较高细胞密度的强劲的宿主细胞。该强劲的细胞系通常是通过筛选快速和高密度生长的细胞系来选择，或者从基于快速和高密度生长的任何类型的细胞系中筛选。然而，对于高水平的基因表达来说，用于常规表达载体中的启动子在这些快速和高密度生长的细胞系中不够强壮。此外，并没有多少载体能普遍地用于大多数类型的细胞系。

因此，需要寻找极强的通用的基因表达载体，它们适合用于大部分强劲的快速生长的宿主细胞，该宿主细胞有较短的倍增时间和高密度生长。

已知植物基因5’调控区通常包含高的丰富的GC含量(CpG岛)。植物基因表达常常是在比哺乳动物表达更高的水平上构建的。或许，在5’调控区带有强DNA结构的高的丰富的GC含量作为一种通用的机制对所有基因表达起着关键作用。通过基因组DNA序列的研究和该领域中以往的实验室经验，鉴别出鸡β肌动蛋白基因内含子1(1.006kb片段，SEQ ID No：1)中极高的丰富的GC含量。这1006个碱基对序列包含平均74.8％的GC含量，具有的130个碱基对片段的最高GC含量90.8％。通过我们的实验方法，我们还发现该区域有极强的DNA二级结构，其通过无法对PCR通读的极困难的测序以及困难的连接反应而被证实。因此，假设带有强DNA结构的高度富含GC的基因组DNA，通过调控染色质浓缩和核小体形成，可能持有所有哺乳动物基因表达的高构建水平的秘密，其调控了基因转录。

本发明基于一个惊人的发现，即高度富含GC的鸡β肌动蛋白基因内含子1作为5’-和/或3’-侧翼基因表达增强子或基因表达“热点”位点的用途，以构建新的哺乳动物表达载体或修饰既存的载体，用于重组蛋白的高水平表达。令人惊讶地，鸡肌动蛋白基因内含子1修饰的哺乳动物表达载体在快速生长的CHO细胞系中产生极高的基因表达水平。

简单地说，鸡β肌动蛋白基因内含子1(1.006kb片段，SEQ ID No：1)被用作增强子元件或表达“热点”序列，并围绕给定的哺乳动物基因启动子构建，如下所示：

1)对照(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA(聚A))；

2)pMH1(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)；

3)pMH2(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)；

4)pMH3(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)；

5)pMH4(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA)；

6)pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)；

7)pMH6(p内含子1-CMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)；

8)pMH7(p内含子1-PGK启动子-多位点接头-polyA)；

9)pMH8(p富含GC的片段-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)；

10)pMH9(p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-富含GC的片段)。

发明概述

本发明公开了鸡β肌动蛋白内含子1或其功能等同体作为增强子元件或表达“热点”序列用于构建极强的哺乳动物表达载体的用途。本发明还公开了一套极强的基因表达载体的组成。

附图简要说明

图1：对照质粒，p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA，是天然的基于鸡β肌动蛋白启动子的表达载体。它是通过用全长鸡β肌动蛋白基因启动子的1.272kb XhoI/HindIII片段(SEQ ID No：2)插入SalI/HindIII开启的pBR322载体骨架而构成，该骨载体架上有EcoRI/NotI多位点接头，随后为polyA位点。

图2：内含子1修饰的质粒pMH1(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(SEQ ID No：4)，是通过将1.006kb SalI/PstI衔接子修饰的内含子1插到紧邻肌动蛋白启动子序列上游的SalI/PstI位点而构成。然后，将0.331kb间隔片段(无CMV启动子的CMV增强子)在正义方向上插到内含子1和肌动蛋白启动子之间的PstI位点。

图3：内含子1修饰的质粒pMH2(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)(SEQ ID No：5)，是通过将PstI/HindIII衔接子修饰的1.006kb内含子序列插到紧邻polyA信号序列下游的PstI/Hind III位点而构成。然后，将0.331kb间隔片段(无CMV启动子的CMV增强子)在正义方向上插到内含子1和肌动蛋白启动子之间的PstI位点。

图4：内含子1修饰的质粒pMH3(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)(SEQ ID No：6)，是通过将包含pMH1(SEQ IDNo：5)的肌动蛋白启动子的PvuI/NotI片段与包含pMH2(SEQ ID No：4)的pBR322骨架的PvuI/NotI片段相结合而构成。

图5：内含子1修饰的质粒pMH4(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA)(SEQ ID No：7)，是通过将带有SalI/PstI位点的PCR扩增的0.82kbCMV启动子序列与PstI/HindII修饰的内含子1片段结合在一起而构成。然后，将它插到SalI/HindIII开启的pBR322载体骨架的SalI/Hind III位点，该载体骨架上带有EcoRI/NotI多位点接头，随后为polyA位点。

图6：内含子1修饰的质粒pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)(SEQ ID No：8)，是通过将包含pMH4(SEQ ID No：7)的肌动蛋白启动子的PvuI/NotI片段与含有pMH2(SEQ ID No：5)的pBR322骨架的PvuI/NotI片段相结合而构成。

图7：内含子1修饰的质粒pMH6(p内含子1-CMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)(SEQ ID No：9)，是通过将SalI修饰的1.006kb内含子1序列在正义方向上插到pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)的CMV启动子上游的SalI位点而构成。

图8：内含子1修饰的质粒pMH7(p内含子1-PGK启动子-多位点接头-polyA)(SEQ ID No：10)，是通过将带有PstI/HindIII位点的0.572kb PCR扩增的PGK启动子序列插到PstI/HIndIII开启的pBR322载体骨架，该载体骨架带有EcoRI/NotI接头，随后有polyA位点。然后将带有衔接子修饰的SalI/PstI位点的内含子1序列插到紧邻PGK启动子上游的SalI/PstI位点。

图9：富含GC的DNA片段修饰的质粒pMH8(p富含GC的片段-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(SEQ ID No：11)，是通过将带有SalI/PstI位点的合成的1.337kb富含GC的片段(SEQ ID No：13)插到紧邻pBR322载体骨架的肌动蛋白启动子序列上游的SalI/PstI位点，该载体骨架带有EcoRI/NotI接头，随后有polyA位点。

图10：富含GC的DNA片段修饰的质粒pMH9(p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-富含GC的片段)(SEQ ID No：12)，是通过将PstI/HindIII衔接子修饰的合成的1.337kb富含GC的片段(SEQ ID No：13)插到polyA信号序列下游的PstI/HindIII位点而构成。

发明详细说明

本发明基于对鸡β肌动蛋白基因内含子1的用途的发现，其作为增强子元素或表达“热点”序列以构建哺乳动物表达载体，用于重组蛋白的极高水平的表达。简单地说，鸡β肌动蛋白基因内含子1(1.006kb片段SEQNo：1)被用作增强子序列或热点，并围绕给定的哺乳动物基因启动子构建，如下所示：

1)对照(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)；

2)pMH1(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)；

3)pMH2(肌动蛋白启动子-的多位点接头-polyA-内含子1)；

4)pMH3(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)

5)pMH4(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA)；

6)pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)；

7)pMH6(p内含子1-CMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)；

8)pMH7(p内含子1-PGK启动子-多位点接头-polyA)；

9)pMH8(p富含GC的片段-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)；

10)pMH9(p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-富含GC的片段)；

全长鸡β肌动蛋白基因5’侧翼调控元件来自Dr.N Fregien(ATCC37507)(Fregien N and Davidson N，1986)。它通过限制性酶定位测序和定性，并与公布的序列相匹配(Kost等人，1983)。1.494kb鸡肌动蛋白基因启动子片段是通过Pst I与Hind III消化，并通过SDS凝胶纯化。该1.494kbPst I/Hind III启动子片段进一步被HinfI消化以获得1.006kb内含子1，并且用磷酸化的Pst I/HinfI衔接子修饰以使内含子1(SEQ No：1)的5’端有Pst I以及在3’端有Hind III。

天然的基于鸡β肌动蛋白启动子的表达载体(图1)(SEQ ID NO：3)是通过将含有内含子1的全长鸡β肌动蛋白基因5’侧翼调控元件的1.272kbXho I/Hind III片段(SEQ ID No：2)插到SalI/HindIII开启的基于pBR322的载体骨架而构成，以形成对照(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(SEQ IDNO：3)，该载体骨架带有EcoRI/NotI位点，随后有polyA位点。

对照质粒，p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA(图1)是天然的基于鸡β肌动蛋白启动子的表达载体。它是通过用全长鸡β肌动蛋白基因启动子的1.272kb XhoI/HindIII片段(SEQ ID No：2)插到SalI/HindIII开启的pBR322载体骨架而构成，该载体骨架上有EcoRI/NotI多位点接头，随后为polyA位点。

内含子1修饰的质粒pMH1(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(图2)(SEQ ID No：4)是通过将1.006kb SalI/PstI衔接子修饰的内含子1插到紧邻肌动蛋白启动子序列上游的SalI/PstI位点而构成。然后，将0.331kb间隔片段(无CMV启动子的CMV增强子)在正义方向上插到内含子1和肌动蛋白启动子之间的PstI位点。

内含子1修饰的质粒pMH2(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)(图3)(SEQ ID No：5)是通过将PstI/HindIII衔接子修饰的1.006kb内含子序列插到紧邻polyA信号序列下游的PstI/Hind III位点而构成。然后，将0.331kb间隔片段(无CMV启动子的CMV增强子)在正义方向上插到内含子1和肌动蛋白启动子之间的PstI位点。

内含子1修饰的质粒pMH3(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)(图4)(SEQ ID No：6)是通过将包含pMH1(SEQ IDNo：5)的肌动蛋白启动子的PvuI/NotI片段与包含pMH2(SEQ ID No：4)的pBR322骨架的PvuI/NotI片段相结合而构成。

内含子1修饰的质粒pMH4(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA)(图5)(SEQ ID No：7)是通过将带有SalI/PstI位点的PCR扩增的0.82kb CMV启动子序列与PstI/HindII修饰的内含子1片段结合在一起而构成。然后，将它插到SalI/HindIII开启的pBR322载体骨架的SalI/Hind III位点，该载体骨架上带有EcoRI/NotI多位点接头，随后为polyA位点。

内含子1修饰的质粒pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)(图6)(SEQ ID No：8)是通过将包含pMH4(SEQ ID No：7)的肌动蛋白启动子的PvuI/NotI片段与含有pMH2(SEQ ID No：5)的pBR322骨架的PvuI/NotI片段相结合而构成。

内含子1修饰的质粒pMH6(p内含子1-CMV启动子-内含子-1-多位点接头-polyA-内含子1)(图7)(SEQ ID No：9)是通过将SalI修饰的1.006kb内含子1序列在正义方向上插到pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)的CMV启动子上游的SalI位点而构成。

内含子1修饰的质粒pMH7(p内含子1-PGK启动子-多位点接头-polyA)(图8)(SEQ ID No：10)，是通过将带有PstI/HindIII位点的0.572kb PCR扩增的PGK启动子序列插到PstI/HIndIII开启的pBR322载体骨架，该载体骨架带有EcoRI/NotI接头，随后有polyA位点。然后，将带有衔接子修饰的SalI/PstI位点的内含子1序列插到紧邻PGK启动子上游的SalI/PstI位点。

富含GC的DNA片段(SEQ ID No：13)修饰的质粒pMH8(p富含GC的片段-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(图9)(SEQ ID No：11)是通过将带有SalI/PstI位点的合成的1.337kb富含GC的片段(SEQ ID No：13)插到紧邻pBR322载体骨架的肌动蛋白启动子序列上游的SalI/PstI位点，该载体骨架带有EcoRI/NotI连接，随后有polyA位点。

富含GC的DNA片段(SEQ ID No：13)修饰的质粒pMH9(p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-富含GC的片段)(图10)(SEQ ID No：12)是通过将PstI/HindIII衔接子修饰的合成的1.337kb富含GC的片段(SEQ IDNo：13)插到polyA信号序列下游的PstI/HindIII位点而构成。

cDNA编码EcoRI位点-TNFR2-Fc-Not I位点(SEQ ID No：14)被从先前的质粒载体中除去(在内部)，并插到图1-10所示的上述构建的哺乳动物表达载体(SEQ ID No：3、4、5、6、7、8、9、10、11、12)的EcoRI/Not I位点。这些质粒cDNA通过PvuI线性化，并利用Gene Pulser(Bio-Rad)稳定地转染至快速增长的CHO亲代宿主系。通过共转染或通过将PGK-Neo抗性基因-pA盒插入到各个载体的SalI位点，将PGK启动子驱动的新霉素抗性基因用于稳定的细胞克隆筛选。

将该稳定的细胞克隆置于96孔板(NUNC)。重复转染。所有基因表达于37℃下在CO₂孵箱96孔板中在0.1ml新添加的无血清培养基中处理3小时。

利用点渍法(dot-blot)或Elisa检测新鲜的无血清培养基中3小时的TNFR2-Fc表达。与HRP(PIERCE)结合的抗-IgGl Fc片段抗体被用于特异性结合。从上述2x96孔板的两个转染的最佳克隆的表达滴度被用于比较各个构建物的表达滴度。

简单地说，收获的条件性培养基严格地在0、2、4、8、16、32倍下稀释。利用与HRP(PIERCE)结合的抗人Ig Fc抗血清对稀释的条件性培养基进行点渍法半定量检测。此外，用于标准Elisa的96孔微板利用0.1ml稀释的条件性培养基涂覆，接着用与HRP(PIERCE)结合的抗人Ig Fc抗血清孵育，冲洗，发色，并用酶标仪测数量。将商业上购买的TNFR2-Fc(Enbrel)添加到我们的无血清培养基中，并用作定量标准。

表1：

  载体  图/SEQ ID #筛选的克隆  最佳克隆的表达滴  度(pg/细胞/天)  对照  图1/SEQ ID No：3  96x2  7±2  pMH1  图2/SEQ ID No：4  96x2  53±4  pMH2  图3/SEQ ID No：5  96x2  52±4  pMH3  图4/SEQ ID No：6  96x2  67±5  pMH4  图5/SEQ ID No：7  96x2  56±3  pMH5  图6/SEQ ID No：8  96x2  60±5  pMH6  图7/SEQ ID No：9  96x2  69±7

  pMH7  图8/SEQ ID No：10  96x2  45±2  pMH8  图9/SEQ ID No：11  96x2  41±4  pMH9  图10/SEQ ID No：12  96x2  39±5

表1的结果显示，该1.006kb鸡β肌动蛋白基因内含子1可用作哺乳动物基因表达启动子的5’或3’侧翼的通用基因表达增强子元件或基因表达“热点”序列，以构建新的哺乳动物表达载体或重建既存的基因表达载体，用于重组蛋白的高水平表达和哺乳动物细胞系的产生，该细胞系生产高水平的重组蛋白。结果还显示它不仅是增强子元件，而且是“热点”序列，因为它在表达载体的不同位点都运作良好。此外还显示，合成的富含GC的片段也能用作哺乳动物基因表达启动子的5’或3’侧翼的通用基因表达增强子元件或基因“热点”序列。所有表达滴度均达到或超过当前工业水平的高端(15-45pg/细胞/天)，表明这些载体有巨大的商业价值。我们相信我们已经一次性解决了哺乳动物的基因表达，并大概发现了所有基因表达的通用方法或机制，即带有强的二级结构的、自然产生或合成的富含GC的DNA作为增强子或表达“热点”序列在高水平构建的哺乳动物基因表达中的用途。

如我们在本发明前面所讨论，植物基因5’调控区通常包含称作CpG岛的高的丰富的GC含量。植物基因表达通常是在更高水平上构建。表1的结果显示，自然产生的鸡β肌动蛋白基因的内含子1，带有极高的GC含量，并可能有强大的DNA结构，对CHO细胞基因表达起着关键作用。这表明，为真核基因表达寻找高GC含量的内含子或表达增强子或绝缘子将是构建或重建有效的基因表达载体的通用工具。其他选择是根据该通用机制来合成人工的富含GC的内含子、“热点”、增强子，用于构建和重建有效的基因表达载体。

表1的结果还显示，带有高GC含量并可能有强DNA结构的、非特异性合成的DNA片段的整合支持CHO细胞中高水平的构建基因表达，提示将来合成或修饰的基因表达增强子或“热点”序列作为通用工具，用于基因表达载体构建。我们的结论是，富含高GC的DNA序列可作为一种用于基因表达的通用方法，用于构造以重建基因表达载体。很可能，带有强DNA结构的高GC含量的DNA片段是调控染色质浓缩和核小体形成的通用机制，用于高水平的基因转录和表达。

本说明书全文中使用的术语“富含GC的片段”(除非另有规定)是指自然发生或合成的一段DNA(长度100-2000bp)，其中碱基数目的不低于百分之六十八(68％)是由胞嘧啶(C)和/或鸟嘌呤(G)组成，并且更优选地，百分之八十(80％)或更多的数目是由胞嘧啶和/或鸟嘌呤组成。

实施例1：鸡β肌动蛋白基因的5’侧翼区的测序

鸡β肌动蛋白基因的5’侧翼区是来自Dr.N Fregien(ATCC 37507)(Fregien N和Davidson N，1986)，并由商业服务提供商Laragen Inc.测序。完整序列如下：

CACCGGTGTTATTGCTGCTCGGTGCGTGCATGCACATCAGTGTCGCTGC

AGCTCAGTGCATGCACGCTCATTGCCCATCGCTATCCCTGCCTCTCCTGC

TGGCGCTCCCCGGGAGGTGACTTCAAGGGGACCGCAGGACCACCTCGG

GGGTGGGGGGAGGGCTGCACACGCGGACCCCGCTCCCCCTCCCCAACA

AAGCACTGTGGAATCAAAAAGGGGGGAGGGGGGATGGAGGGGCGCGT

CACACCCCCGCCCCACACCCTCACCTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCT

TCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTA

TTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCG

CGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGG

AGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCT

TTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCG

CGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCG

CCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACA

GGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTG

GTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGG

GCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGT

GCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGC

GGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGT

GCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGG

CTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTG

AGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACC

CCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCG

TGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCA

GGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTC

GGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCG

GCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGG

GACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGC

CGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGA

AGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCC

TTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGG

GGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATC

TTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTCATCCTGAGCGCTAAT

CGGGTATTGTTCGGTTCCATTTAACCGAAGAATTCATGCTAGCTCTGTTA

GCCAATGCGGCCGCATAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGA

CATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTT

ATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAG

GACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTT

TAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTT

GGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTC

CTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTT

GTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTT

TACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTC

CCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTGGCGTAATCATGGTCATAGCT

GTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGA

GCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAA

CTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCT

GTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGC

CCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCT

CCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCG

CCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGG

CCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTA

CAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCA

CTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGT

CTGGATCCGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGT

TTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTC

GGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATA

CGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCA

AAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCG

TTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCT

CAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGT

TTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTT

ACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCA

TAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAG

CTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTAT

CCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCC

ACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGG

CGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGA

AGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAA

AAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCG

GTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATC

TCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAAC

GAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCT

TCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAG

TATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAG

GCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACT

CCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCC

AGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTAT

CAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTG

CAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAG

AGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCT

ACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTC

CGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAA

AAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGG

CCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACT

GTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCA

AGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGC

GTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTC

ATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGC

TGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTC

AGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGG

CAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATA

CTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTG

TCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATA

GGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGG

实施例2：哺乳动物表达载体的构建

全长鸡β肌动蛋白基因的5’侧翼调控元件是来自Dr.N Fregien(ATCC37507)(Fregien N和Davidson N，1986)。它是通过限制性酶定位测序和定性，并且与公布的序列相匹配(Kost等人，1983)。1.494kb鸡肌动蛋白基因启动子片段通过Pst I和Hind III消化，并通过SDS凝胶纯化。该1.494kb Pst I/Hind III启动子片段进一步通过HinfI消化以获得1.006kb内含子1，并利用磷酸化Pst I/HinfI衔接子修饰，以使该内含子1(SEQ No：1)在5’端有Pst I并在3’端有Hind III。

天然的基于鸡β肌动蛋白启动子的表达载体(图1)(SEQ ID NO：3)是通过将含有内含子1的全长鸡β肌动蛋白基因5’侧翼调控元件的1.272kbXho I/Hind III片段插到SalI/HindIII开启的基于pBR322的载体骨架而构成，以形成对照(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(SEQ ID NO：3)，该载体骨架带有EcoRI/NotI位点，随后有polyA位点。

对照质粒，p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA(图1)是天然的基于鸡β肌动蛋白启动子的表达载体。它是通过用全长鸡β肌动蛋白基因启动子的1.272kb XhoI/HindIII片段(SEQ ID No：2)插到SalI/HindIII开启的pBR322载体骨架而构成，该骨载体架上有EcoRI/NotI多位点接头，随后为polyA位点。

内含子1修饰的质粒pMH1(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(图2)(SEQ ID No：4)是通过将1.006kb SalI/PstI衔接子修饰的内含子1插到紧邻肌动蛋白启动子序列上游的SalI/PstI位点而构成。然后，将0.331kb间隔片段(无CMV启动子的CMV增强子)在正义方向上插到内含子1和肌动蛋白启动子之间的PstI位点。

内含子1修饰的质粒pMH2(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)(图3)(SEQ ID No：5)是通过将PstI/HindIII衔接子修饰的1.006kb内含子序列插到紧邻polyA信号序列下游的PstI/Hind III位点而构成。然后，将0.331kb间隔片段(无CMV启动子的CMV增强子)在感觉方向上插到内含子1和肌动蛋白启动子之间的PstI位点。

内含子1修饰的质粒pMH3(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-内含子1)(图4)(SEQ ID No：6)是通过将包含pMH1(SEQ IDNo：5)的肌动蛋白启动子的PvuI/NotI片段与包含pMH2(SEQ ID No：4)的pBR322骨架的PvuI/NotI片段相结合而构成。

内含子1修饰的质粒pMH4(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA)(图5)(SEQ ID No：7)是通过将带有SalI/PstI位点的PCR扩增的0.82kb CMV启动子序列与PstI/HindII修饰的内含子1片段结合而构成。然后，将它插到SalI/HindIII开启的pBR322载体骨架的SalI/Hind III位点，该载体骨架上带有EcoRI/NotI接头，随后为polyA位点。

内含子1修饰的质粒pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)(图6)(SEQ ID No：8)是通过将包含pMH4(SEQ ID No：7)的肌动蛋白启动子的PvuI/NotI片段与含有pMH2(SEQ ID No：5)的pBR322骨架的PvuI/NotI片段相结合而构成。

内含子1修饰的pMH6的质粒(p内含子1-CMV启动子-内含子-1-多位点接头-polyA-内含子1)(图7)(SEQ ID No：9)是通过将SalI修饰的1.006kb内含子1序列在正义方向上插到pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接头-polyA-内含子1)的CMV启动子上游的SalI位点而构成。

内含子1修饰的质粒pMH7(p内含子1-PGK启动子-多位点接头-polyA)(图8)(SEQ ID No：10)，是通过将带有PstI/HindIII位点的0.572kb PCR扩增的PGK启动子序列插到PstI/HIndIII开启的pBR322载体骨架，该载体骨架带有EcoRI/NotI连接，随后有polyA位点。然后，将带有衔接子修饰的SalI/PstI位点的内含子1序列插到紧邻PGK启动子上游的SalI/PstI位点。

富含GC的DNA片段修饰的质粒pMH8(p富含GC的片段-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(图9)(SEQ ID No：11)是通过将带有SalI/PstI位点的合成的1.337kb富含GC的片段(SEQ ID No：13)插到紧邻pBR322载体骨架的肌动蛋白启动子序列上游的SalI/PstI位点，该载体骨架带有EcoRI/NotI连接，随后有polyA位点。

富含GC的DNA片段(SEQ ID No：13)修饰的质粒pMH9(p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-富含GC的片段)(图10)(SEQ ID No：12)是通过将PstI/HindIII衔接子修饰的合成的1.337kb富含GC的片段(SEQ IDNo：13)插到polyA信号序列下游的PstI/HindIII位点而构成。

实施例3：鸡β肌动蛋白基因内含子1的GC含量分析

下面列出鸡β肌动蛋白基因内含子1(SEQ ID No：1)：

CTGCAGTGACTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCG

CGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCA

CAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCT

TGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAA

GGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGC

GTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCG

GCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGT

GTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGG

GCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGT

GAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCAC

CCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCC

GTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGC

AGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCT

CGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGC

GGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAG

GGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCG

CCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGG

AAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCC

CTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCG

GGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATAT

CTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTT

鸡β肌动蛋白基因内含子1的高GC含量区被分析并总结于下表2中。

表2：

  位置  1-100  200-300  330-430  520-650  750-830  GC含量  78.0％  82.0％  80.0％  90.8％  80.0％

在最小DNA长度100个碱基对的内含子1中识别出高达90.8％的极高的GC含量。该极高的GC含量在哺乳动物基因组中是罕见的。这在鸡基因组的进化中如何发生是未知的。通过实验的方法，我们发现该区域有极强的DNA二级结构，其通过极困难的无法PCR通读的测序以及困难的连接反应被证实。我们假设带有强DNA结构的高度富含GC的基因组DNA，通过调控染色质浓缩和核小体形成，可能持有所有哺乳动物基因表达的高构建水平的秘密，其调控了基因转录。由此，我们合成了以下的非特异性高GC含量1337个碱基对的DNA片段(SEQ ID No：13)，用于证明这一概念。该富含GC的DNA片段包含类似量的GC含量(SEQ ID No：13)(表3)。因此，当整合到哺乳动物表达载体时，测试增强子或“热点”的活性是有用的。

合成的高GC含量的DNA片段如下所列(SEQ ID No：13)：

GGGGGCTGCGGAGGAACAGAGAAGGGAAGATATAAACCCCGCCGGCG

CCGACGAACCCCGCCCTGCCCCGTCCCCCCCGAAGGCAGCCGTCCCCCT

GCGGCAGCCCCGAGGCTGGAGATGGAGAAGGGGACGGCGGCGCGGCG

ACGCACGAAGGCCCTCCCCGCCCATTTCCTTCCTGCCGGCGCCGCACCG

CTTCGCCCGCGCCCGCTAGAGGGGGTGCGGCGGCGCCTCCCAGATTTCG

GCTCCGCCAGATTTGGGACAAAGGAAGTCCCTGCGCCCTCTCGCACGAT

TACCATAAAAGGCAATGGCTGCGGCTCGCCGCGCCTCGACAGCCGCCG

GCGCTCCGGGGCCGCCGCGCCCCTCCCCCGAGCCCTCCCCGGCCCGAGG

CGGCCCCGCCCCGCCCGGCACCCCCACCTGCCGCCACCCCCCGCCCGGC

ACGGCGAGCCCCGCGCCACGCCCCGCACGGAGCCCCGCACCCGAAGCC

GGGCCGTGCTCAGCAACTCGGGGAGGGGGGTGCAGGGGGGGGTTACAG

CCCGACCGCCGCGCCCACACCCCCTGCTCACCCCCCCACGCACACACCC

CGCACGCAGCCTTTGTTCCCCTCGCAGCCCCCCCGCACCGCGGGGCACC

GCCCCCGGCCGCGCTCCCCTCGCGCACACGCGGAGCGCACAAAGCCCC

GCGCCGCGCCCGCAGCGCTCACAGCCGCCGGGCAGCGCGGGCCGCACG

CGGCGCTCCCCACGCACACACACACGCACGCACCCCCCGAGCCGCTCCC

CCCCGCACAAAGGGCCCTCCCGGAGCCCTTTAAGGCTTTCACGCAGCCA

CAGAAAAGAAACGAGCCGTCATTAAACCAAGCGCTAATTACAGCCCGG

AGGAGAAGGGCCGTCCCGCCCGCTCACCTGTGGGAGTAACGCGGTCAG

TCAGAGCCGGGGCGGGCGGCGCGAGGCGGCGCGGAGCGGGGCACGGG

GCGAAGGCAACGCAGCGACGTCGAGCTGCAGCGGCCGATCCCTTCCTG

GGACTGGCCATGGCCAACTCACTTCTGAACCCCATCATCTACACGCTCA

CCAACCGCGACCTGCGCCACGCGCTCCTGCGCCTGGTCTGCTGCGGACG

CCACTCCTGCGGCAGAGACCCGAGTGGCTCCCAGCAGTCGGCGAGCGC

GGCTGAGGCTTCCGGGGGCCTGCGCCGCTGCCTGCCCCCGGGCCTTGAT

GGGAGCTTCAGCGGCTCGGAGCGCTCATCGCCCCAGCGCGACGGGCTG

GACACCAGCGGCTCCACAGGCAGCCCCGGTGCACCCACAGCCGCCCGG

ACTCTGGTATCAGAACCGGCTGCACTGCA

该富含GC的DNA片段(SEQ ID No：13)的高GC含量区被分析并总结于下表3中。

表3：

  位置  1-100  351-490  601-730  951-1100  1121-1335  GC含量  73.0％  88.6％  85.4％  68.7％  73.0％

通过利用该富含GC的DNA片段(SEQ ID No：13)，我们构建了pMH8(p富含GC的片段-肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA)(图9)(SEQ IDNo：11)和pMH9(p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-富含GC的片段)(图10)(SEQ ID No：12)(见实施例2)。表达结果在实施例4中被显示并且清楚地表明，它的强的增强子或“热点”活性与鸡β肌动蛋白基因内含子1类似。我们的结论是，高度富含GC的DNA序列可作为高度基因表达的通用方法，用于构造以重建基因表达载体。可能地，它是支配所有真核基因表达的通用机制。

本说明书全文中使用的术语“富含GC的片段”(除非另有规定)是指自然发生或合成的一段DNA(长度100-2000bp)，其中碱基数目的不低于百分之六十八(68％)是由胞嘧啶(C)和/或鸟嘌呤(G)组成，并且更优选地，百分之八十(80％)或更多的数目是由胞嘧啶和/或鸟嘌呤组成。

实施例4：表达TNFR2-Fc以比较表达载体的强度

cDNA编码EcoRI位点-TNFR2-Fc-Not I位点(SEQ ID No：14)被从先前的质粒载体中除去(在内部)，并插到图1-10所示的上述构建的哺乳动物表达载体(SEQ ID No：3、4、5、6、7、8、9、10、11、12)的EcoRI/Not I位点。这些质粒cDNA通过PvuI线性化，并利用Gene Pulser(Bio-Rad)稳定地转染至快速增长的CHO亲代宿主系。通过共转染或通过将PGK-Neo抗性基因-pA盒插入到各个载体的SalI位点，将PGK启动子驱动的新霉素抗性基因用于稳定的细胞克隆筛选。

将该稳定的细胞克隆置于96孔板(NUNC)。重复转染。所有基因表达于37℃下在CO₂孵箱96孔板中在0.1ml新添加的无血清培养基中处理3小时。

利用点渍法(dot-blot)或Elisa检测新鲜的无血清培养基中3小时的TNFR2-Fc表达。与HRP(PIERCE)结合的抗-IgGl Fc片段抗体被用于特异性结合。从上述2x96孔板的两个转染的最佳克隆的表达滴度被用于比较各个构建物的表达滴度。

简单地说，收获的条件性培养基严格地在0、2、4、8、16、32倍下稀释。利用与HRP(PIERCE)结合的抗人Ig Fc抗血清对稀释的条件性培养基进行点渍法半定量检测。此外，用于标准Elisa的96孔微板利用0.1ml稀释的条件性培养基涂覆，接着用与HRP(PIERCE)结合的抗人Ig Fc抗血清孵育，冲洗，发色，并用酶标仪测数量。将商业上购买的TNFR2-Fc(Enbrel)添加到我们的无血清培养基中，并用作定量标准。

表1中如下结果显示，该1.006kb鸡β肌动蛋白基因内含子1可用作哺乳动物基因表达启动子的5’或3’侧翼的通用基因表达增强子元件或基因表达“热点”序列，以构建新的哺乳动物表达载体或重建既存的基因表达载体，用于重组蛋白的高水平表达和哺乳动物细胞系的产生，该细胞系生产高水平的重组蛋白。

该结果还清楚地显示它不仅是增强子元件，而且是“热点”序列，因为它在表达载体的不同位点都运作良好。

此外还显示，合成的富含GC的片段也能用作哺乳动物基因表达启动子的5’或3’侧翼的通用基因表达增强子元件或基因“热点”序列。

所有表达滴度均达到或超过当前工业水平的高端(15-45pg/cell/day)，表明这些载体有巨大的商业价值。我们相信我们已经一次性解决了哺乳动物的基因表达，并大概发现了所有基因表达的通用方法或机制，即带有强的二级结构的、自然产生或合成的富含GC的DNA作为增强子或表达“热点”序列在高水平构建的哺乳动物基因表达中的用途。

表1：

  载体  图/SEQ ID #筛选的克隆  最佳克隆的表达滴  度(pg/细胞/天)  对照  图1/SEQ ID No：3  96x2  7±2  pMH1  图2/SEQ ID No：4  96x2  53±4  pMH2  图3/SEQ ID No：5  96x2  52±4  pMH3  图4/SEQ ID No：6  96x2  67±5  pMH4  图5/SEQ ID No：7  96x2  56±3  pMH5  图6/SEQ ID No：8  96x2  60±5  pMH6  图7/SEQ ID No：9  96x2  69±7  pMH7  图8/SEQ ID No：10  96x2  45±2  pMH8  图9/SEQ ID No：11  96x2  41±4  pMH9  图10/SEQ ID No：12  96x2  39±5

如我们在本发明前面所讨论，植物基因5’调控区通常包含称作CpG岛的高的丰富的GC含量。植物基因表达通常是在更高水平上构建。表1的结果显示，自然产生的鸡β肌动蛋白基因的内含子1带有极高的GC含量，并可能有强大的DNA结构，对CHO细胞基因表达起着关键作用。这表明，为真核基因表达寻找高GC含量的内含子或表达增强子或绝缘子将是构建或重建有效的基因表达载体的通用工具。其他选择是根据该通用机制来合成人工的富含GC的内含子、“热点”、增强子，用于构建和重建有效的基因表达载体。

表1的结果还显示，非特异性合成的富含GC的DNA片段的整合支持着CHO细胞中高水平的构建基因表达，表明富含GC的DNA序列的将来的用途，作为一种用于基因表达的通用方法，用于合成的基因表达增强子或“热点”。很可能，带有强DNA结构的高GC含量的DNA片段是调控染色质浓缩和核小体形成的通用机制，用于高水平的基因转录和表达。

实施例5：对照载体和pMH4的启动子强度分析

天然的基于鸡β肌动蛋白启动子的表达载体(图1)(SEQ ID NO：3)由于某种原因不足以用作商业目的，虽然它包含内含子(SEQ ID NO：1)。我们因此分析它的启动子序列如下：

鸡β肌动蛋白启动子序列

CTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTC

CCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGAT

GGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGC

GAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCA

GAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCG

GCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTT

GCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGG

CTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAG

它仅包含一个TATA盒和两个转录因子结合位点CAAT盒。很明显，它不是典型的强启动子。因此我们用典型的CMV启动子(pMH4)(图5)(SEQ ID NO：7)代替该肌动蛋白启动子。CMV启动子的序列如下所列供分析。

CMV启动子序列

ACGCGTCGACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTGCACTCTCA

GTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATCTGCTCCCTGC

TTGTGTGTTGGAGGTCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACA

ACAAGGCAAGGCTTGACCGACAATTGCATGAAGAATCTGCTTAGGGTT

AGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCGATGTACGGGCCAGATATACGCGTTGAC

ATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGT

TCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGC

CCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGA

CGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATG

GGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTAT

CATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCG

CCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCA

GTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGC

AGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAA

GTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCA

ACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATG

GGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCTCTGG

CTAACTAGAGAACCCACTGCTTACTGGCTTATCGAAATTAATACGACTC

ACTATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCGTTTAAACTCTGCAGAACCAA

TGCATTGGAT

两个TATA盒和十个CAAT盒被发现。当与肌动蛋白启动子比较时，不仅CAAT盒的数目增长，而且这些CAAT盒与富含GC的内含子1区之间的距离也增大。通过避免富含GC的内含子1形成强结构，该增大的距离可能使转录因子结合更有效。

表1显示出基因表达的8倍增长。这提示，鸡β肌动蛋白启动子在进化过程中由于某种原因变异到当前的强度，虽然它包含现代已知的最强的启动子元件，即内含子1。从全长β肌动蛋白基因启动子分离出的鸡β肌动蛋白内含子1的用途是构建和重建哺乳动物表达载体以产生重组蛋白的关键。

实施例6：3’侧翼区polyA位点的用途

与对照比较时，polyA位点的3’侧翼区的增加内含子1(pMH3)(图4)显著地增强了基因表达(表1)。该内含子1位置远离肌动蛋白启动子序列，因为之间存在重组的TNFR2-Fc编码基因和polyA序列。最有可能地，该内含子1不仅是增强子元件，而且是“热点”序列。它通过它的富含GC的DNA结构增强了基因表达水平，其打开基因组DNA结构或染色质，以增强核转录因子的可接近性。

序列表

基本信息：

(i)申请人：米祖·惠。

(ii)发明名称：鸡β肌动蛋白内含子1的用途。

(iii)序列编号：14

(iv)通讯地址：

(A)安普罗泰恩公司

(B)街道：355北兰塔纳大街220号

(C)市：卡马里奥

(D)州：加利福尼亚

(E)国家：美国

(F)邮编：93010

SEQ ID No：1的信息：

(i)序列特征：(A)长度：1006bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线性

(ii)分子类型：cDNA

(iii)序列说明：SEQ ID No：1：鸡β肌动蛋白内含子1(Pst I/HindIII片段)

CTGCAGTGACTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCG

CGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCA

CAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCT

TGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAA

GGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGC

GTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCG

GCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGT

GTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGG

GCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGT

GAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCAC

CCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCC

GTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGC

AGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCT

CGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGC

GGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAG

GGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCG

CCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGG

AAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCC

CTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCG

GGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATAT

CTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTT

SEQ ID No：2的信息：

(iv)序列特征：(A)长度：1272bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线性

(v)分子类型：cDNA

(vi)序列说明：SEQ ID No：2：全长鸡β肌动蛋白基因5’侧翼调控元件的

XhoI/HindIII片段

CTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTC

CCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGAT

GGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGC

GAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCA

GAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCG

GCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTT

GCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGG

CTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTT

CTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTT

CTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCG

GGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGC

GCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCG

GCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGG

GGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGC

GTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCG

GTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCAC

GGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTC

GCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCG

GGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCC

GGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTT

ATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGG

CGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCG

GGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCC

TTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGC

TGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGT

TCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGC

CCCCAAGCTT

SEQ ID No：3的信息：

(vii)序列特征：(A)长度：4324bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线

性

(viii)分子类型：cDNA

(ix)序列说明：SEQ ID No：3：对照(肌动蛋白启动子-多位点接头-

polyA)

GTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTC

CCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGAT

GGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGC

GAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCA

GAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCG

GCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTT

GCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGG

CTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTT

CTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTT

CTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCG

GGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGC

GCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCG

GCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGG

GGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGC

GTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCG

GTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCAC

GGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTC

GCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCG

GGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCC

GGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTT

ATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGG

CGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCG

GGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCC

TTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGC

TGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGT

TCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGC

CCCCAAGCTTCATCCTGAGCGCTAATCGGGTATTGTTCGGTTCCATTTAA

CCGAAGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCAATGCGGCCGCATAGATCTT

TTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATC

TGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGG

AATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATT

TAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCA

TATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTAT

ATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGA

CTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAAC

ATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTC

CTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCG

ACCTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCG

CTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCC

TGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCAC

TGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTC

AATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCC

TAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTT

TTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGA

AGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAAC

TTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAA

ATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCC

AAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCCGCTGCATTAATGAATC

GGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTT

CCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGT

ATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGA

TAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGA

ACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCC

TGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCC

GACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTG

CGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCT

CCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTC

AGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCC

CCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCC

AACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAAC

AGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAG

TGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCG

CTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATC

CGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAG

CAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTT

CTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTT

GGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAA

AAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTG

ACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCT

ATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGA

TACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGA

CCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGA

AGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGT

CTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAG

TTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGT

CGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGT

TACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCT

CCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTA

TGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTT

TCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGC

GGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCC

ACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGG

CGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAAC

CCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTT

TCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAAT

AAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATAT

TATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTG

AATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCG

AAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：4的信息：

(x)序列特征：(A)长度：5925bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线性

(xi)分子类型：cDNA

(xii)序列说明：SEQ ID No：4：pMH1(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点

接头-polyA)

TCGACATGACTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCG

CGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCA

CAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCT

TGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAA

GGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGC

GTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCG

GCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGT

GTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGG

GCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGT

GAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCAC

CCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCC

GTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGC

AGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCT

CGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGC

GGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAG

GGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCG

CCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGG

AAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCC

CTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCG

GGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATAT

CTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCTCACTGCAGATTGATTATTGA

CTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATA

TATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGA

CCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCA

TAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTT

ACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGT

ACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATG

CCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGT

ATTAGTCATCGCTATTCTGCAGCTCAGTGCATGCACGCTCATTGCCCATC

GCTATCCCTGCCTCTCCTGCTGGCGCTCCCCGGGAGGTGACTTCAAGGG

GACCGCAGGACCACCTCGGGGGTGGGGGGAGGGCTGCACACGCGGACC

CCGCTCCCCCTCCCCAACAAAGCACTGTGGAATCAAAAAGGGGGGAGG

GGGGATGGAGGGGCGCGTCACACCCCCGCCCCACACCCTCACCTCGAG

GTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACC

CCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGG

CGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGG

GCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCG

GCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCC

CTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGTTGCCTTC

GCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGA

CTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTC

CGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGG

CTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGG

GAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGC

GTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCG

GGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCG

GTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCG

GGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGG

GCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCC

GGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGT

GCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGC

CGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAG

CGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGG

TAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGA

GCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCG

AAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGT

GCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCC

GCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGT

CGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCC

AAGCTTCATCCTGAGCGCTAATCGGGTATTGTTCGGTTCCATTTAACCG

AAGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCAATGCGGCCGCATAGATCTTTTT

CCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGA

CTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAAT

TTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAA

AACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATAT

GCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATG

AAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTT

GAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACAT

CCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCT

GACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCGAC

CTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCT

CACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTG

GGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTG

CCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAA

TTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTA

ACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTT

TATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAG

TAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTT

GTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAAT

TTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAA

ACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCCGCTGCATTAATGAATCGG

CCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCC

TCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTAT

CAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATA

ACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAAC

CGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTG

ACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGA

CAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCG

CTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCC

CTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAG

TTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCC

GTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCA

ACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACA

GGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGT

GGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGC

TCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCC

GGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGC

AGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTC

TACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTG

GTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAA

AATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGA

CAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTA

TTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGAT

ACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGA

CCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGA

AGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGT

CTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAG

TTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGT

CGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGT

TACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCT

CCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTA

TGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTT

TCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGC

GGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCC

ACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGG

CGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAAC

CCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTT

TCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAAT

AAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATAT

TATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTG

AATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCG

AAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：5的信息：

(xiii)序列特征：(A)长度：5677bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线

性

(xiv)分子类型：cDNA

(xv)序列说明：SEQ ID No：5：pMH2(肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA

-内含子1)

TCGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCA

TTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAA

ATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAAT

AATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGT

CAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAG

TGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATG

GCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTT

GGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAG

CCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAA

TTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGG

GGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCG

GGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCG

CGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTA

TAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCG

CCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGA

CTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTC

CGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGG

CTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGG

AGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCG

TGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCG

GGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGC

GGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTG

CGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTC

GGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCC

CGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCG

TGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGG

CCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGG

AGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTAT

GGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGC

GGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGG

GCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCT

TCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCT

GTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGT

TCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGTAGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGT

TCCTCCGCAGGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCAATGCGGCCGCATAG

ATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGA

GCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGT

GTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAA

TCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATAT

GCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATC

AGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGC

CTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCT

TTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCT

CCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGAT

CCCTCGACCTCTGCAGTGACTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGC

CCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCG

TTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTA

ATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAA

AGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTC

GGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCC

GCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGT

GCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGC

GGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTG

CGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACC

CCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGG

TGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGG

GGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGC

CGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGG

CTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGC

GAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAAT

CTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTG

CGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCC

GCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGG

ACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCG

GCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTGG

GCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCAC

AATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGG

TGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCC

GCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTA

GTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACT

CCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTAT

TTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAG

TGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTT

TATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTC

ACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACT

CATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCCGCTGCATTAATGAATCGGCC

AACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTC

GCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCA

GCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAAC

GCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCG

TAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGAC

GAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACA

GGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCT

CTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCT

TCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTT

CGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGT

TCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAAC

CCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGG

ATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGT

GGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCT

GCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGC

AAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGA

TTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTAC

GGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTC

ATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAAT

GAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAG

TTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTC

GTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACG

GGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCA

CGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGG

GCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTA

TTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTT

GCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCG

TTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTA

CATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCC

GATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATG

GCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTC

TGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGG

CGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCAC

ATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCG

AAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCC

ACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTC

TGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAA

GGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTAT

TGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAAT

GTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAA

AGTGCCACCTGG

SEQ ID No：6的信息：

(xvi)序列特征：(A)长度：6557bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线

性

(xvii)分子类型：cDNA

(xviii)序列说明：SEQ ID No：6：pMH3(内含子1-肌动蛋白启动子-多位点

接头-polyA-内含子1)

TCGACTGACTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGC

GCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCAC

AGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTT

GGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAG

GGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCG

TGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGG

CGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTG

TGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGG

CTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTG

AGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACC

CCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCG

TGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCA

GGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTC

GGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCG

GCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGG

GACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGC

CGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGA

AGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCC

TTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGG

GGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATC

TTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTCTGCAGGTCAGTGCAT

GCACGCTCATTGCCCATCGCTATCCCTGCCTCTCCTGCTGGCGCTCCCCG

GGAGGTGACTTCAAGGGGACCGCAGGACCACCTCGGGGGTGGGGGGAG

GGCTGCACACGCGGACCCCGCTCCCCCTCCCCAACAAAGCACTGTGGAA

TCAAAAAGGGGGGAGGGGGGATGGAGGGGCGCGTCACACCCCCGCCCC

ACACCCTCACCTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCT

CCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTT

GTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGC

GGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGG

CAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCG

GCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGT

CGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGC

CCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGG

ACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTC

GTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCC

CTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCG

TGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTG

CGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGC

GCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACA

AAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGG

GCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTG

CTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCG

CGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGG

GCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGC

GGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCC

ATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTC

CCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCT

AGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGC

GGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCC

AGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGG

CAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTG

TTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTCATCCTGAGCGCTAATCGGGTATTGTTC

GGTTCCATTTAACCGAAGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCAATGCGGC

CGCATAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGC

CCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCA

ATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGA

GGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGC

AACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGA

GGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAG

AAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATT

TTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATT

TTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATG

GAGATCCCTCGACCTCTGCAGTGACTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCC

CCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTG

ACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGG

GCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTG

CGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAG

CGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTG

CGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGG

CTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTG

CCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGG

TGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCT

GTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGC

TTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCC

GGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGC

CTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGC

CGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAA

TCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCC

GAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAG

CGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCG

TCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCA

GGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGG

CGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAG

CTTGGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCG

CTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCC

TGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCAC

TGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTC

AATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCC

TAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTT

TTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGA

AGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAAC

TTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAA

ATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCC

AAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCCGCTGCATTAATGAATC

GGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTT

CCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGT

ATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGA

TAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGA

ACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCC

TGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCC

GACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTG

CGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCT

CCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTC

AGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCC

CCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCC

AACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAAC

AGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAG

TGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCG

CTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATC

CGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAG

CAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTT

CTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTT

GGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAA

AAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTG

ACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCT

ATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGA

TACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGA

CCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGA

AGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGT

CTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAG

TTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGT

CGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGT

TACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCT

CCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTA

TGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTT

TCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGC

GGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCC

ACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGG

CGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAAC

CCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTT

TCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAAT

AAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATAT

TATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTG

AATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCG

AAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：7的信息：

(xix)序列特征：(A)长度：4688bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线

性

(xx)分子类型：cDNA

(xxi)序列说明：SEQ ID No：6：pMH4(pCMV启动子-内含子1-多位点接

头-polyA)

GTCGACGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATT

AGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAAT

GGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAA

TGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCA

ATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTG

TATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGC

CCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGG

CAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTG

GCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCA

AGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATC

AACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAAT

GGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCTCTG

GCTAACTAGAGAACCCACTGCTTACTGGCTTATCGAAATTAATACGACT

CACTATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCGTTTAAACTCTGCAGTGACTC

GAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCG

CCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGG

CGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGAC

GGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGA

GGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTG

TGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGA

GCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAG

GGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGG

GGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGG

GTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCC

GAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGC

GTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGG

TGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGG

GGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCG

CAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCT

TTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCC

CTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATG

GGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATC

TCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACG

GGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCT

CTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCA

ATGCGGCCGCATAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATC

ATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTT

TCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACA

TATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGA

GTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCT

ATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTA

TTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTT

TGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACT

AGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTC

TTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTT

CCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCG

GAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCA

CATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTC

GTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCC

TAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCG

CCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTC

GGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTA

GGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAA

ATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTG

CATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTG

GATCCGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTG

CGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGT

CGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACG

GTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAA

AGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTT

TTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCA

AGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTT

CCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTAC

CGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATA

GCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCT

GGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCC

GGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCAC

TGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCG

GTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAG

AACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAA

AGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTG

GTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCA

AGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAA

AACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCA

CCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTAT

ATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCA

CCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCC

CGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGT

GCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAG

CAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAA

CTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTA

AGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAG

GCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGT

TCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAG

CGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGC

AGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCA

TGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTC

ATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCA

ATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCA

TTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTT

GAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCA

TCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAA

ATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCA

TACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTC

ATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGG

GTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：8的信息：

(xxii)序列特征：(A)长度：5695bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：

线性

(xxiii)分子类型：cDNA

(xxiv)序列说明：SEQ ID No：8：pMH5(pCMV启动子-内含子1-多位点接

头-polyA-内含子1)

GTCGACGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATT

AGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAAT

GGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAA

TGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCA

ATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTG

TATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGC

CCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGG

CAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTG

GCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCA

AGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATC

AACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAAT

GGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCTCTG

GCTAACTAGAGAACCCACTGCTTACTGGCTTATCGAAATTAATACGACT

CACTATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCGTTTAAACTCTGCAGTGACTC

GAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCG

CCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGG

CGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGAC

GGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGA

GGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTG

TGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGA

GCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAG

GGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGG

GGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGG

GTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCC

GAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGC

GTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGG

TGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGG

GGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCG

CAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCT

TTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCC

CTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATG

GGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATC

TCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACG

GGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCT

CTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCA

ATGCGGCCGCATAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATC

ATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTT

TCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACA

TATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGA

GTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCT

ATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTA

TTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTT

TGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACT

AGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTC

TTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTCTGCAGTGACTCGAGTCGCTGCGTT

GCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGG

CTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTT

CTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTT

CTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCG

GGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGC

GCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCG

GCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGG

GGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGC

GTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCG

GTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCAC

GGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTC

GCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCG

GGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCC

GGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTT

ATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGG

CGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCG

GGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCC

TTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGC

TGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGT

TCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGC

CCCCAAGCTTGGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATT

GTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTG

TAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTG

CGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCC

GCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATC

CCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACT

AATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTAT

TCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAA

GCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCA

TCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGT

TTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCCGCTGCATTAA

TGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTT

CCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCG

AGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCA

GGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGC

CAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGC

CCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGA

AACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCC

TCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCC

TTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTA

TCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAA

CCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGA

GTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGT

AACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTG

AAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCT

GCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTG

ATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAG

CAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATC

TTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGA

TTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAAT

TAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGT

CTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTG

TCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTA

CGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCG

AGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCC

GGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCC

AGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAA

TAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGC

TCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGC

GAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGG

TCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATG

GTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGAT

GCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTG

TATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACC

GCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTT

CGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGAT

GTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCA

GCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGG

GAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCA

ATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATA

TTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTC

CCCGAAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：9的信息：

(xxv)序列特征：(A)长度：6683bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线

性

(xxvi)分子类型：cDNA

(xxvii)序列说明：SEQ ID No：9：pMH6(p内含子1-CMV启动子-内含子

1-多位点接头-polyA-内含子1)

GGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGC

CGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGC

GGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACG

GCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAG

GGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGT

GTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAG

CGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGG

GGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGG

GAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGG

TGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCG

AGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGT

GGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTG

CCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGG

GCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGC

AGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTT

TGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCC

CTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATG

GGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATC

TCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACG

GGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCT

CTGTTCCTCCGCAGCCCCCAGTCGACGATTATTGACTAGTTATTAATAGT

AATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGT

TACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCC

CGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAG

GGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCA

CTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGAC

GTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCT

TATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATT

ACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGT

TTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAG

TTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAAC

TCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCT

ATATAAGCAGAGCTCTCTGGCTAACTAGAGAACCCACTGCTTACTGGCT

TATCGAAATTAATACGACTCACTATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCGT

TTAAACTCTGCAGTGACTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCC

GCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTA

CTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATT

AGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGC

CTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGG

GGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCG

CTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGC

TCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTG

CGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTG

GGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCC

CCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCG

GGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGG

TGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGG

GAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTC

GAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAG

GGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGA

GGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGC

CGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCG

CCGTCCCCTTCTCCATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCT

GCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGG

TTTATATCTTCCCTTCTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTGAATTCAT

GCTAGCTCTGTTAGCCAATGCGGCCGCATAGATCTTTTTCCCTCTGCCAA

AAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAA

TAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCT

CTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAA

TGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCC

ATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCC

CCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGAT

TTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTT

TCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCA

GTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTCTGCAGTGA

CTCGAGTCGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTC

GCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGC

GGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAAT

GACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCG

GGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGT

GTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGT

GAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCG

AGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGA

GGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGG

GGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCC

CCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGG

GCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGG

GGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGA

GGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGC

CGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTC

CTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACC

CCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAA

TGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCA

TCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGA

CGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTT

CTCTGTTCCTCCGCAGCCCCCAAGCTTGGGCGTAATCATGGTCATAGCT

GTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGA

GCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAA

CTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCT

GTCGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGC

CCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCT

CCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCG

CCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGG

CCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTA

CAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCA

CTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGT

CTGGATCCGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGT

TTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTC

GGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATA

CGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCA

AAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCG

TTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCT

CAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGT

TTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTT

ACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCA

TAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAG

CTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTAT

CCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCC

ACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGG

CGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGA

AGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAA

AAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCG

GTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATC

TCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAAC

GAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCT

TCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAG

TATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAG

GCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACT

CCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCC

AGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTAT

CAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTG

CAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAG

AGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCT

ACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTC

CGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAA

AAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGG

CCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACT

GTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCA

AGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGC

GTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTC

ATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGC

TGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTC

AGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGG

CAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATA

CTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTG

TCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATA

GGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：10的信息：

(xxviii)序列特征：(A)长度：4554bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：

线性

(xxix)分子类型：cDNA

序列说明：SEQ ID No：10：pMH7(p内含子1-PGK启动子-多位点接头-

polyA)

GTCGACGTGACGCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGC

CTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTG

AGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTT

AATGACGGCTCGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCT

CCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCG

TGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGC

TGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCG

CGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGC

GAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCA

GGGGGTGTGGGCGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCT

CCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGG

GGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGG

GGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGG

AGGGGCGCGGCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAG

CCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTT

CCTTTGTCCCAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCAC

CCCCTCTAGCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAA

ATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCC

ATCTCCAGCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGG

ACGGGGCAGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCT

TCTCTGTTCCTCCGCAGCCTGCAGGGATATCGAATTTCGAGGGCCCGTC

AATTCTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATG

CGCTTTAGCAGCCCCGCTGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGC

CTCGCACACATTCCACATCCACCGGTAGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTT

GGTGGCCCCTTCGCGCCACCTTCTACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCC

CCCCGCCCCGCAGCTCGCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGC

ACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGATGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAA

GCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATAGCAGCTTTGCTCCTTCGCT

TTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGGGCGGGCTCAGGG

GCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCGAAGGTCCTCCCGAGGCCCGGCA

TTCTCGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTCCT

CTCCGGCCTTTCAAGCTTACCAGCTTGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCC

AATGCGGCCGCATAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACAT

CATGAAGCCCCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATT

TTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGAC

ATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAG

AGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGC

TATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTT

ATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTT

TTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTAC

TAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCT

CTTCTCTTATGGAGATCCCTCGACCTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTT

TCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCC

GGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTC

ACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGT

CGTGCCAGCGGATCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCC

CTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCC

GCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCT

CGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCT

AGGCTTTTGCAAAAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACA

AATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACT

GCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCT

GGATCCGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTT

GCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGG

TCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACG

GTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAA

AGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTT

TTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCA

AGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTT

CCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTAC

CGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATA

GCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCT

GGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCC

GGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCAC

TGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCG

GTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAG

AACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAA

AGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTG

GTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCA

AGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAA

AACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCA

CCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTAT

ATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCA

CCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCC

CGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGT

GCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAG

CAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAA

CTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTA

AGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAG

GCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGT

TCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAG

CGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGC

AGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCA

TGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTC

ATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCA

ATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCA

TTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTT

GAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCA

TCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAA

ATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCA

TACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTC

ATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGG

GTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGGCCGGTATCGATG

SEQ ID No：11的信息：

(xxx)序列特征：(A)长度：5882bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：线

性

(xxxi)分子类型：cDNA

序列说明：SEQ ID No：11：pMH8(p富含GC的DNA片段-肌动蛋白启动

子-多位点接头-polyA)

GTCGACTGGGGGCTGCGGAGGAACAGAGAAGGGAAGATATAAACCCCG

CCGGCGCCGACGAACCCCGCCCTGCCCCGTCCCCCCCGAAGGCAGCCGT

CCCCCTGCGGCAGCCCCGAGGCTGGAGATGGAGAAGGGGACGGCGGCG

CGGCGACGCACGAAGGCCCTCCCCGCCCATTTCCTTCCTGCCGGCGCCG

CACCGCTTCGCCCGCGCCCGCTAGAGGGGGTGCGGCGGCGCCTCCCAG

ATTTCGGCTCCGCCAGATTTGGGACAAAGGAAGTCCCTGCGCCCTCTCG

CACGATTACCATAAAAGGCAATGGCTGCGGCTCGCCGCGCCTCGACAG

CCGCCGGCGCTCCGGGGCCGCCGCGCCCCTCCCCCGAGCCCTCCCCGGC

CCGAGGCGGCCCCGCCCCGCCCGGCACCCCCACCTGCCGCCACCCCCCG

CCCGGCACGGCGAGCCCCGCGCCACGCCCCGCACGGAGCCCCGCACCC

GAAGCCGGGCCGTGCTCAGCAACTCGGGGAGGGGGGTGCAGGGGGGG

GTTACAGCCCGACCGCCGCGCCCACACCCCCTGCTCACCCCCCCACGCA

CACACCCCGCACGCAGCCTTTGTTCCCCTCGCAGCCCCCCCGCACCGCG

GGGCACCGCCCCCGGCCGCGCTCCCCTCGCGCACACGCGGAGCGCACA

AAGCCCCGCGCCGCGCCCGCAGCGCTCACAGCCGCCGGGCAGCGCGGG

CCGCACGCGGCGCTCCCCACGCACACACACACGCACGCACCCCCCGAG

CCGCTCCCCCCCGCACAAAGGGCCCTCCCGGAGCCCTTTAAGGCTTTCA

CGCAGCCACAGAAAAGAAACGAGCCGTCATTAAACCAAGCGCTAATTA

CAGCCCGGAGGAGAAGGGCCGTCCCGCCCGCTCACCTGTGGGAGTAAC

GCGGTCAGTCAGAGCCGGGGCGGGCGGCGCGAGGCGGCGCGGAGCGG

GGCACGGGGCGAAGGCAACGCAGCGACGTCGAGCTGCAGCGGCCGATC

CCTTCCTGGGACTGGCCATGGCCAACTCACTTCTGAACCCCATCATCTA

CACGCTCACCAACCGCGACCTGCGCCACGCGCTCCTGCGCCTGGTCTGC

TGCGGACGCCACTCCTGCGGCAGAGACCCGAGTGGCTCCCAGCAGTCG

GCGAGCGCGGCTGAGGCTTCCGGGGGCCTGCGCCGCTGCCTGCCCCCGG

GCCTTGATGGGAGCTTCAGCGGCTCGGAGCGCTCATCGCCCCAGCGCGA

CGGGCTGGACACCAGCGGCTCCACAGGCAGCCCCGGTGCACCCACAGC

CGCCCGGACTCTGGTATCAGAACCGGCTGCACTGCAGCTCAGTGCATGC

ACGCTCATTGCCCATCGCTATCCCTGCCTCTCCTGCTGGCGCTCCCCGGG

AGGTGACTTCAAGGGGACCGCAGGACCACCTCGGGGGTGGGGGGAGGG

CTGCACACGCGGACCCCGCTCCCCCTCCCCAACAAAGCACTGTGGAATC

AAAAAGGGGGGAGGGGGGATGGAGGGGCGCGTCACACCCCCGCCCCA

CACCCTCACCTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTC

CCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTG

TGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCG

GGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGC

AGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGG

CGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTC

GCTGCGTTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCGCCGCCTCGCGCCGCC

CGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGA

CGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTCG

TTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTAAAGGGCTCCGGGAGGGCCC

TTTGTGCGGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGT

GGGGAGCGCCGCGTGCGGCCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGC

GGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCGTGTGCGCGAGGGGAGCG

CGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAA

AGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGG

CGCGGCGGTCGGGCTGTAACCCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGC

TGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTGCGGGGCGTGGCGC

GGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGG

CGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCG

GCGGCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCA

TTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCC

CAAATCTGGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTA

GCGGGCGCGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCG

GGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCATCTCCA

GCCTCGGGGCTGCCGCAGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGC

AGGGCGGGGTTCGTCGGCGCCGGCGGGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGTT

CCTCCGCAGCCCCCAAGCTTCATCCTGAGCGCTAATCGGGTATTGTTCG

GTTCCATTTAACCGAAGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCAATGCGGCC

GCATAGATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCC

CCTTGAGCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAA

TAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAG

GGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCA

ACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAG

GTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGA

AAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTT

TTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTT

TTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGG

AGATCCCTCGACCTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAA

ATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAA

GTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCG

TTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGA

TCCGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCC

ATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTG

ACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGC

TATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAA

AAAGCTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATA

GCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGT

GGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCCGCTGCAT

TAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGC

TCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCG

GCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGA

ATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAA

AGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCT

CCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTG

GCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAG

CTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGT

CCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGT

AGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGC

ACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCG

TCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCC

ACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAG

TTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTG

GTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAG

CTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTT

GCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTT

TGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTA

AGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTT

TTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAA

CTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGC

GATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGA

TAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGAT

ACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAG

CCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCT

CCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCC

AGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTG

TCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATC

AAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCC

TTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCAC

TCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTA

AGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAAT

AGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAA

TACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGT

TCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTT

CGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTC

ACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAA

AAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTT

TTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATAC

ATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACAT

TTCCCCGAAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：12的信息：

(xxxii)序列特征：(A)长度：6022bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：

线性

(xxxiii)分子类型：cDNA

序列说明：SEQ ID No：12：pMH9(p肌动蛋白启动子-多位点接头-polyA-富

含GC的DNA片段)

TCGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCA

TTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAA

ATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAAT

AATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGT

CAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAG

TGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATG

GCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTT

GGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAG

CCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAA

TTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGG

GGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCG

GGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCG

CGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTA

TAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGCGCTGCCTTCG

CCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGA

CTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTC

CGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGG

CTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGG

AGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCG

TGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCG

GGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGC

GGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTG

CGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTC

GGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCC

CGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCG

TGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGG

CCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGG

AGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTAT

GGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGC

GGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGG

GCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCT

TCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCT

GTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGT

TCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGTAGGTTTATATCTTCCCTTCTCTGT

TCCTCCGCAGGAATTCATGCTAGCTCTGTTAGCCAATGCGGCCGCATAG

ATCTTTTTCCCTCTGCCAAAAATTATGGGGACATCATGAAGCCCCTTGA

GCATCTGACTTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGT

GTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAA

TCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATAT

GCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATC

AGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGC

CTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCT

TTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCT

CCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGAT

CCCTCGACCTCTCTGCAGTGGGGGCTGCGGAGGAACAGAGAAGGGAAG

ATATAAACCCCGCCGGCGCCGACGAACCCCGCCCTGCCCCGTCCCCCCC

GAAGGCAGCCGTCCCCCTGCGGCAGCCCCGAGGCTGGAGATGGAGAAG

GGGACGGCGGCGCGGCGACGCACGAAGGCCCTCCCCGCCCATTTCCTTC

CTGCCGGCGCCGCACCGCTTCGCCCGCGCCCGCTAGAGGGGGTGCGGC

GGCGCCTCCCAGATTTCGGCTCCGCCAGATTTGGGACAAAGGAAGTCCC

TGCGCCCTCTCGCACGATTACCATAAAAGGCAATGGCTGCGGCTCGCCG

CGCCTCGACAGCCGCCGGCGCTCCGGGGCCGCCGCGCCCCTCCCCCGAG

CCCTCCCCGGCCCGAGGCGGCCCCGCCCCGCCCGGCACCCCCACCTGCC

GCCACCCCCCGCCCGGCACGGCGAGCCCCGCGCCACGCCCCGCACGGA

GCCCCGCACCCGAAGCCGGGCCGTGCTCAGCAACTCGGGGAGGGGGGT

GCAGGGGGGGGTTACAGCCCGACCGCCGCGCCCACACCCCCTGCTCAC

CCCCCCACGCACACACCCCGCACGCAGCCTTTGTTCCCCTCGCAGCCCC

CCCGCACCGCGGGGCACCGCCCCCGGCCGCGCTCCCCTCGCGCACACGC

GGAGCGCACAAAGCCCCGCGCCGCGCCCGCAGCGCTCACAGCCGCCGG

GCAGCGCGGGCCGCACGCGGCGCTCCCCACGCACACACACACGCACGC

ACCCCCCGAGCCGCTCCCCCCCGCACAAAGGGCCCTCCCGGAGCCCTTT

AAGGCTTTCACGCAGCCACAGAAAAGAAACGAGCCGTCATTAAACCAA

GCGCTAATTACAGCCCGGAGGAGAAGGGCCGTCCCGCCCGCTCACCTGT

GGGAGTAACGCGGTCAGTCAGAGCCGGGGCGGGCGGCGCGAGGCGGC

GCGGAGCGGGGCACGGGGCGAAGGCAACGCAGCGACGTCGAGCTGCA

GCGGCCGATCCCTTCCTGGGACTGGCCATGGCCAACTCACTTCTGAACC

CCATCATCTACACGCTCACCAACCGCGACCTGCGCCACGCGCTCCTGCG

CCTGGTCTGCTGCGGACGCCACTCCTGCGGCAGAGACCCGAGTGGCTCC

CAGCAGTCGGCGAGCGCGGCTGAGGCTTCCGGGGGCCTGCGCCGCTGC

CTGCCCCCGGGCCTTGATGGGAGCTTCAGCGGCTCGGAGCGCTCATCGC

CCCAGCGCGACGGGCTGGACACCAGCGGCTCCACAGGCAGCCCCGGTG

CACCCACAGCCGCCCGGACTCTGGTATCAGAACCGGCTGCACTGCACAA

GCTTGGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCC

GCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGC

CTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCA

CTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCGGATCCGCATCT

CAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCC

CTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTT

TTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAG

AAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTAA

CTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACA

AATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTC

CAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCCGCTGCATTAATGAAT

CGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCT

TCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGG

TATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGG

ATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGG

AACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCC

CTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACC

CGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGT

GCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTC

TCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTC

AGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCC

CCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCC

AACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAAC

AGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAG

TGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCG

CTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATC

CGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAG

CAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTT

CTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTT

GGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAA

AAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTG

ACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCT

ATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGA

TACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGA

CCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGA

AGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGT

CTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAG

TTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGT

CGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGT

TACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCT

CCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTA

TGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTT

TCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGC

GGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCC

ACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGG

CGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAAC

CCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTT

TCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAAT

AAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATAT

TATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTG

AATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCG

AAAAGTGCCACCTGG

SEQ ID No：13的信息：

(xxxiv)序列特征：(A)长度：1337bp；(B)类型：核酸；(c)拓扑：

线性

(xxxv)分子类型：cDNA

(xxxvi)序列说明：SEQ ID No：13：富含GC的DNA片段

GGGGGCTGCGGAGGAACAGAGAAGGGAAGATATAAACCCCGCCGGCG

CCGACGAACCCCGCCCTGCCCCGTCCCCCCCGAAGGCAGCCGTCCCCCT

GCGGCAGCCCCGAGGCTGGAGATGGAGAAGGGGACGGCGGCGCGGCG

ACGCACGAAGGCCCTCCCCGCCCATTTCCTTCCTGCCGGCGCCGCACCG

CTTCGCCCGCGCCCGCTAGAGGGGGTGCGGCGGCGCCTCCCAGATTTCG

GCTCCGCCAGATTTGGGACAAAGGAAGTCCCTGCGCCCTCTCGCACGAT

TACCATAAAAGGCAATGGCTGCGGCTCGCCGCGCCTCGACAGCCGCCG

GCGCTCCGGGGCCGCCGCGCCCCTCCCCCGAGCCCTCCCCGGCCCGAGG

CGGCCCCGCCCCGCCCGGCACCCCCACCTGCCGCCACCCCCCGCCCGGC

ACGGCGAGCCCCGCGCCACGCCCCGCACGGAGCCCCGCACCCGAAGCC

GGGCCGTGCTCAGCAACTCGGGGAGGGGGGTGCAGGGGGGGGTTACAG

CCCGACCGCCGCGCCCACACCCCCTGCTCACCCCCCCACGCACACACCC

CGCACGCAGCCTTTGTTCCCCTCGCAGCCCCCCCGCACCGCGGGGCACC

GCCCCCGGCCGCGCTCCCCTCGCGCACACGCGGAGCGCACAAAGCCCC

GCGCCGCGCCCGCAGCGCTCACAGCCGCCGGGCAGCGCGGGCCGCACG

CGGCGCTCCCCACGCACACACACACGCACGCACCCCCCGAGCCGCTCCC

CCCCGCACAAAGGGCCCTCCCGGAGCCCTTTAAGGCTTTCACGCAGCCA

CAGAAAAGAAACGAGCCGTCATTAAACCAAGCGCTAATTACAGCCCGG

AGGAGAAGGGCCGTCCCGCCCGCTCACCTGTGGGAGTAACGCGGTCAG

TCAGAGCCGGGGCGGGCGGCGCGAGGCGGCGCGGAGCGGGGCACGGG

GCGAAGGCAACGCAGCGACGTCGAGCTGCAGCGGCCGATCCCTTCCTG

GGACTGGCCATGGCCAACTCACTTCTGAACCCCATCATCTACACGCTCA

CCAACCGCGACCTGCGCCACGCGCTCCTGCGCCTGGTCTGCTGCGGACG

CCACTCCTGCGGCAGAGACCCGAGTGGCTCCCAGCAGTCGGCGAGCGC

GGCTGAGGCTTCCGGGGGCCTGCGCCGCTGCCTGCCCCCGGGCCTTGAT

GGGAGCTTCAGCGGCTCGGAGCGCTCATCGCCCCAGCGCGACGGGCTG

GACACCAGCGGCTCCACAGGCAGCCCCGGTGCACCCACAGCCGCCCGG

ACTCTGGTATCAGAACCGGCTGCACTGCA

SEQ ID No：14的信息：

(xxxvii)序列特征：(A)长度：1505bp；(B)类型：核酸；(c)拓

扑：线性

(xxxviii)分子类型：cDNA

(xxxix)序列说明：SEQ ID No：14：EcoRI-TNFR2-Fc-NotI

CCGGAATTCCCACCATGGCGCCCGTCGCCGTCTGGGCCGCGCTGGCCGT

CGGACTGGAGCTCTGGGCTGCGGCGCACGCCTTGCCCGCCCAGGTGGCA

TTTACACCCTACGCCCCGGAGCCCGGGAGCACATGCCGGCTCAGAGAAT

ACTATGACCAGACAGCTCAGATGTGCTGCAGCAAATGCTCGCCGGGCC

AACATGCAAAAGTCTTCTGTACCAAGACCTCGGACACCGTGTGTGACTC

CTGTGAGGACAGCACATACACCCAGCTCTGGAACTGGGTTCCCGAGTGC

TTGAGCTGTGGCTCCCGCTGTAGCTCTGACCAGGTGGAAACTCAAGCCT

GCACTCGGGAACAGAACCGCATCTGCACCTGCAGGCCCGGCTGGTACT

GCGCGCTGAGCAAGCAGGAGGGGTGCCGGCTGTGCGCGCCGCTGCGCA

AGTGCCGCCCGGGCTTCGGCGTGGCCAGACCAGGAACTGAAACATCAG

ACGTGGTGTGCAAGCCCTGTGCCCCGGGGACGTTCTCCAACACGACTTC

ATCCACGGATATTTGCAGGCCCCACCAGATCTGTAACGTGGTGGCCATC

CCTGGGAATGCAAGCATGGATGCAGTCTGCACGTCCACGTCCCCCACCC

GGAGTATGGCCCCAGGGGCAGTACACTTACCCCAGCCAGTGTCCACAC

GATCCCAACACACGCAGCCAACTCCAGAACCCAGCACTGCTCCAAGCA

CCTCCTTCCTGCTCCCAATGGGCCCCAGCCCCCCAGCTGAAGGGAGCAC

TGGCGACGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGC

CCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAA

AACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGT

GGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTA

CGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGA

GCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCAC

CAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA

GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAG

CCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGA

CCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAG

CGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTA

CAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTAC

AGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTC

TCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA

GCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGATAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA

参考文献

Fregien N and Davidson N(1986)Activating elements in the promoter region of

the chicken beta-actin gene.Gene，48：1-11.

Kost TA，Theodorackis N，Hughes SH(1983)The nucleotide sequence of the chick

cytoplasmic beta-actin gene.Nucleic Acids Research，11(23)：8287-8301.