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法律状态信息
法律状态
2015-08-26
授权
授权
2011-07-20
实质审查的生效 IPC(主分类):A61K45/06 申请日:20090429
实质审查的生效
2011-05-18
公开
公开
本发明涉及用于治疗阿尔茨海默病(AD)和相关病症的组合物和方法。
AD是原型皮层性痴呆，其特征为可归因于与皮层相关区域有关的记忆损伤并伴有言语困难(语言障碍，其中存在语言和语言理解受损)、运动障碍(在不存在运动或感觉缺损的情况下不能协调和执行某些有意的运动和姿势)以及认识失能(不能识别物体、人、声音、形状或气味)。也可能涉及特殊症状例如痉挛性截瘫(影响下肢的虚弱症)(1-4)。
阿尔茨海默病的发病率随着年龄急剧增加。目前，AD是最常见的痴呆症病因。它的临床特征是认知功能的整体下降，其缓慢发展，并最终使患者卧床不起、失禁并依赖于监护护理。平均来说，死亡发生在诊断后9年(5)。
阿尔茨海默病的发病率随着年龄急剧增加。联合国人口规划项目估计，到2050年超过80岁的人口数量将达到3亿7千万。目前，据估计年龄超过85岁的人中有50％患有AD。因此，在50年内，全世界将有超过1亿人患有痴呆症。需要经常性护理和其他服务的人口的巨大数量，将严重影响医疗、财政和人力资源(6)。
记忆损伤是疾病的早期特点，并涉及情景记忆(日常事件的记忆)。在疾病后期涉及语义记忆(言语和视觉意义的记忆)。相比较而言，工作记忆(涉及用于暂时储存和操作信息的结构和过程的短期记忆)和程序记忆(无意识记忆，是技术和过程的长期记忆)保留到更晚。随着疾病发展，出现了语言受损、视觉和空间缺损、认识失能和运用失能等其他特征。
阿尔茨海默病的经典描述具有足够的特征性，允许鉴定约80％的病例(7)。然而，确实存在着临床异质性，这不仅对于临床管理来说是重要的，而且为功能不同形式的特异性药物治疗提供了进一步的暗示(8)。
AD的病理标志物包括含有β-淀粉样蛋白(Aβ)的淀粉样蛋白斑块、含有Tau的神经原纤维缠结(NFT)以及神经元和突触机能障碍和丧失(9-11)。最近十年，关于AD的病因已经提出了两种主要假说：“淀粉样蛋白级联假说”，其陈述神经变性过程是由淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的异常加工所触发的一系列事件(12)，以及“神经元细胞骨架退化假说”(13)，其提出细胞骨架改变是触发事件。解释AD发展的最广泛接受的理论仍然是淀粉样蛋白级联假说(14-16)，AD研究人员主要聚焦于确定成为与Aβ蛋白相关的毒性的基础的机制。相比之下，由于基础和实践两方面的考虑，与淀粉样蛋白相比，Tau蛋白受到的制药工业的关注要少得多。此外，突触密度改变与其他两者相比是与认知受损最相关的病理损伤。研究显示，淀粉样蛋白病理学似乎以神经递质特异性的方式发展，其中胆碱能末梢表现得最易受伤害，其次是谷氨酸能末梢，最后是GABA能末梢(11)。
发明简述
本发明的目的是提供用于治疗AD和相关病症的新的治疗手段。
本发明人已经鉴定到参与AD发生的分子途径，并为开发改善AD和相关病症的新疗法、特别是开发使用新的或以前在其他适应症中使用过的已有分子的组合疗法，提供了新的靶。更具体来说，本发明人已经鉴定了几种药物，其单独或组合时能够有效影响这种途径，并代表了用于治疗AD和相关病症的新的和有效的疗法。
因此，本发明提供了用于治疗AD疾病和相关病症的新的组合物和方法。
更具体来说，本发明涉及适合用于在需要的对象中治疗阿茨海默病或相关病症的组合物，其中所述组合物包含增加血管发生的药物。
本发明的另一个目的涉及适合用于在需要的对象中治疗阿茨海默病或相关病症的组合物，其中所述组合物包含至少两种增加血管发生的药物的组合，用于组合、单独或顺序给药。
更具体来说，增加血管发生的一种或多种药物与由选自下列的基因编码的蛋白结合或调节该蛋白的活性：ABCA1、ACAT、ACC2、ADAMTS 12、ADCY2、ADIPOQ、ADIPOR1、ADIPOR2、ADRB2、AGPAT5、AIP4、AKAP2、AKR1C2、AMPK、ANG2、ANK1、ANXA1、APOA1、ARHGAP17、ATP10A、AUH、自分泌运动因子、BAI3、BCAR1、BIN1、BMP3A、CA10、CAMK1D、CAMKK2、CD36、CD44、CDC42、CDH13、CHAT、CNTFR、COL4A2、CPT、CSH1、CTNN、CUBN、CYP7B1、CYSLTR1、CYSLTR2、DGKB、DGKH、DGKZ、DHCR7、DHFR、DRD2、DRD5、EDG1、EDG2、EDG3、EDG4、EDG5、EDG6、EDG7、EDG8、EDNRA、EHHADH、ENPP6、ERBB4、ERK1、ERK2、ESRRG、ETFA、F2、FDPS、FGF2、FLNA、FLT4、FOXO1、FOXO3A、FTO、GABBR2、GATA3、GH1、GNA12、GNA13、GRK2、GRK5、GRM5、HAPLN1、HAS1、HAS2、HAS3、HCRTR2、HIF1A、HSD11B1、HYAL 1、HYAL2、HYAL3、IL20RA、IL20RB、IL6ST、IL8、ITGA6、ITGB1、KDR、LAMA1、LDLR、LEPR、LEPTIN、LIFR、LIPL2、LKB1、LRP、LTBP2、MAT2B、ME1、MEGALIN、MERLIN、MET、MGST2、MMP2、MMP9、MTOR、MTR、NCK2、NEDD9、NFKB1、NFKBIB、NOS2A、NOS3、NR1I2、NR3C2、NRG1、NRP1、NRP2、OPRS1、OSBPL10、OSBPL3、骨桥蛋白、P2RY1、P2RY12、PAI1、PAI2、PAK1、PAK6、PALLD、PAP1、PAR1、PAXILLIN、PC、PCTP、PDE11A、PDE1A、PDE3A、PDE4D、PDE5、PDGFA、PDGFB、PDGFRA、PDGFRB、PI3K、PITPNC1、PKA、PKCD、PLA1A、PLA2、PLAT、PLAU、PLCB1、PLD1、PLD2、PLG、PLXDC2、PPARA、PPARG、PPARGC1B、PRKG1、PRL、PTGS2、PTN、PTPN11、PYK2、RAC1、RAS、RHEB、RHOA、ROCK1、ROCK2、RPS6KA1、RPS6KB2、SCARB1、SCHIP1、SGPP2、SLC25A21、SMAD3、SMAD4、SNCA、SORBS2、SPLA2、SPOCK1、SRD5A1、SREBF 1、SREBF2、STAT3、TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3、THBS1、THBS2、THEM2、THRB、TIAM1、TIMP2、TLL2、TSC1、TSC2、TSPO、VEGFA、VEGFR1和YES1。
这些药物的具体和优选实例包括但不限于选自阿坎酸、沙丁胺醇、阿仑膦酸盐、安贝生坦、氨基己酸、阿加曲班、巴氯芬、巴柳氮、贝卡普勒明、卡麦角林、西洛他唑、氯吡格雷、地西卢定、双氢麦角胺、依普利酮、非诺多泮、氟氢可的松、氟硝西泮、吉非罗齐、橙皮素、伊马替尼、酮替芬、来氟米特、L-组氨酸、碘赛罗宁、马立马司他、美洛昔康、米帕林、醋甲唑胺、甲巯咪唑、米力农、孟鲁司特、奈替米星、硝酸甘油、硝普纳、哌加他尼.喷他佐辛、苯乙双胍、苯丁酸钠、乙胺嘧啶、磺胺异噁唑、舒尼替尼、他达拉非、替马西泮、特比萘芬、硫乙拉嗪、替罗非班、托吡酯、拓扑替康、阿糖腺苷和华法林或其组合的化合物。
在具体实施方案中，本发明的组合物进一步包含至少一种调节突触功能的药物，用于组合、单独或顺序使用。
可替选地或此外，本发明的组合物还可以包含至少一种调节细胞应激反应的药物，用于组合、单独或顺序使用。
典型情况下，本发明的组合物进一步包含可药用的载体或赋形剂。
本发明的另一个目的在于用于治疗阿茨海默病或相关病症的药物的生产方法，所述方法包括测试候选药物对血管发生的活性以及筛选增加血管发生的候选药物的步骤。
本发明还涉及用于治疗阿茨海默病或相关病症的组合物的生产方法，所述方法包括制备增加血管发生的药物与调节突触功能或细胞应激反应的药物的组合，以及配制所述药物组合，用于将其同时、单独或顺序给药于需要的对象。
本发明还涉及治疗阿茨海默病或相关病症的方法，所述方法包括向需要的对象同时、单独或顺序给药增加血管发生的一种或多种药物的组合。
本发明还涉及治疗阿茨海默病或相关病症的方法，所述方法包括向需要的对象同时、单独或顺序给药增加血管发生的药物和调节突触功能的药物和/或调节细胞应激反应的药物。
本发明还涉及增加血管发生的药物用于制造治疗阿茨海默病或相关病症的药物的用途。
本发明还涉及至少两种增加血管发生的药物的组合用于制造治疗阿茨海默病或相关病症的药物的用途，其中所述至少两种药物一起、单独或顺序给药。
正如在本申请中讨论的，上述疗法以及组合疗法为在人类对象中治疗AD提供了新的和有效的手段。
附图说明
图1：所选抗β-淀粉样肽毒性的药物对来自大鼠内皮脑细胞的LDH释放的保护性效应。p＜0.05：与介质显著不同。**：p＜0.01；***：p＜0.0001；****：p＜0.00001：与Aβ25-35显著不同。双侧Student′s t检验。Aβ25-3530μM产生中度但是明显的中毒(图1-A到D，红色)。这种中毒被来氟米特(图1A)、特比萘芬(图1B)、磺胺异噁唑(图1C)或巴氯芬(-)(图1D)显著地阻止。此外，来氟米特和特比萘芬不仅阻止淀粉样蛋白的有害效应，而且减少培养基中自发的细胞死亡。
发明详述
本发明提供了用于治疗AD或相关病症的新的治疗手段。本发明公开了药物或药物组合物的新用途，它们允许有效校正所述疾病，并可以用于患者治疗。
术语“AD相关病症”是指阿茨海默病(AD)、AD型老年痴呆(SDAT)、帕金森病、路易体痴呆、血管性痴呆、轻度认知功能障碍(MCI)、年龄相关记忆缺损(AAMI)以及与衰老相关的问题、脑炎后帕金森病候群、ALS和唐氏综合征。
在本文中使用时，障碍的“治疗”包括由障碍引起的症状的治疗、阻止、预防、延迟或减少。术语治疗具体来说包括疾病进展和相关症状的控制。
术语“增加”当指称血管发生时，包括与对象中现有水平相比血管发生的任何增加。这样的改善可以包括恢复、即到达正常水平，或较低的但仍然足以改善患者状况的增加。这样的增加可以使用已知的生物学测试来评估或验证，例如在实验部分中描述的。
此外，在本发明的文本中特定化合物的名称意味着不仅包括具体命名的分子，而且包括其任何可药用的盐、水合物、酯、醚、异构体、外消旋物、缀合物或前体药物。
术语“组合”是指其中至少两种或更多种药物被共同给药于对象以引起生物学效应的疗法。在本发明的组合疗法中，至少两种药物可以一起或单独地、在同时或顺序给药。此外，至少两种药物可以通过不同的途径和方案给药。因此，组合的药物尽管可以配制在一起，但它们也可以单独配制。
正如上面所讨论的，本发明涉及使用增加血管发生的药物或药物组合，在需要的对象中治疗阿茨海默病或相关病症的组合物和方法。
通过全面整合覆盖了描述阿尔茨海默病的不同方面的细胞生物学研究、表达情况实验和遗传关联性研究结果的实验数据，以及细胞信号传导和功能途径中存在的联系，本发明人已经揭示，突触功能代表了在患有AD的对象中发生改变的重要机制。位于所述功能网络中并与阿尔茨海默病有关的基因通过下述标准进行选择：
(1)-与作为原因造成了阿尔茨海默病的家族性病例的基因(APP、ApoE、早老素、tau蛋白)直接相互作用，
(2)-通过标准(1)选择的基因的功能性配偶体，
(3)-通过标准(2)选择的基因的最接近的功能性配偶体。
通过该过程，本发明人能够确定，负责突触功能的网络是在阿尔茨海默病中起作用的主要功能网络。
血管发生在确保组织体内平衡以及对环境和生理激惹例如低氧或创伤愈合的适应性应答中发挥基础性作用；其机能障碍造成了大量各类疾病的病理发生，其范围包括从心血管并发症到肿瘤生长和转移。
尽管阿茨海默病在传统上被当作伴有侧行血管病理的神经变性疾病，但我们的分析允许重新评估血管失调的病理影响，并认为血管发生途径在该疾病的病源学中起到重要并且可能成为原因的作用。我们发现，调节血管发生的基因在涉及阿茨海默病的信号传导网络中极为富集。该结论对于阿茨海默病的预防和治疗具有深远影响，并为这种复杂的神经变性疾病的组合治疗提供了新的指导方针。我们还发现，该网络可以正式细分成血管生成因子家族和来自与血管发生的调控紧密相关的两条途径(AMPK途径和LPA代谢途径)的蛋白家族。
Aβ淀粉样蛋白不仅强烈影响神经元的生物学，而且也具有强的血管发生活性(17)。与阿茨海默病家族病例因果关联的另一个基因——早老素，能够利用膜内蛋白水解作用的调控，通过由其功能性底物VEGFR1、ErbB4、Notch、DCC、CD44、ephrin受体和钙粘着蛋白介导的几条独立的信号传导途径，来调节血管发生(18-20)。
CD44基因编码透明质酸(HA)受体，其降解产物促进血管发生(21)。该受体参与形成中或新形成的血管内皮的组构和/或稳定化(22)。它也可以结合并调控伴随着新血管形成的蛋白的活性，所述蛋白例如骨桥蛋白、胶原蛋白和参与细胞外基质动力学的基质金属蛋白酶(MMP)(23)。
通过我们的数据开采鉴定到的其他膜受体包括IL20Rα、LEPTR、NRP1和NRP2，以及内皮素EDNRA受体。IL20Rα基因编码IL20、一种参与血管形成的多效细胞因子的受体(24)。瘦素、一种内分泌激素和LEPTR的配体，与成纤维细胞生长因子FGF-2和血管内皮生长因子(VEGF)这两种最有力和遍在表达的血管生成因子协同刺激血管发生。此外，它还参与血管通透性的增加(25)。NRP1和NRP2是调节VEGFR-2信号传导激活的跨膜辅助受体，其确保发育性血管发生(26)。
最后，我们还选择了一组参与细胞外基质的组构和重塑的基因(THBS2、LAMA1、COL4A2、ADAMTS12和ADAM10)或参与公知的血管生成调节物例如催乳素、生长激素和胎盘泌乳素的功能性加工的基因(TLL2)(27)。
AMP激活的蛋白激酶(AMPK)家族被识别为细胞内AMP∶ATP比率的感应器，并通过调控代谢过程、例如葡萄糖或脂肪酸代谢，在维持能量体内平衡中发挥重要作用。该丝氨酸/苏氨酸激酶家族被抑制ATP生产或刺激ATP消费的代谢压力激活(28)。
除了其在细胞能量平衡的控制中已经确立的功能之外，AMPK信号传导也是在缺氧条件下内皮细胞迁移和分化所需的血管发生的调节物(29)。该激酶是负责VEGF(30)、脂联素(31)、IGF-1以及可能的PPARγ受体的前血管生成效应的下游效应子之一。已发现，在双转基因APP/PS2小鼠、一种阿茨海默病体内模型中，AMPK被异常激活(32)。
我们已经鉴定到几个与阿茨海默病相关的基因，它们代表了AMP激活的激酶的上游调控子和下游效应子。在AMPK蛋白的上游调控子中，可以提到的是瘦素和CNTF受体CDH13(33)、一种推测的脂联素Acrp30和凝血酶信号传导途径的辅助受体，以及CAMKK2β激酶，其与LKB1激酶一起被认为是AMPK活性的主要直接调节物(28)。
对于AMPK的下游效应子来说，参与脂肪酸和胆固醇代谢的基因显得特别重要。值得注意的是，AMPK信号传导途径已确立的靶ACC2基因，编码乙酰辅酶A羧化酶(ACC)，其催化ATP依赖性的乙酰辅酶A羧化成丙二酰辅酶A，并由此控制了脂肪酸合成中的限速步骤。激活的AMPK磷酸化ACC2蛋白，降低其酶活性，从而增加了脂肪酸氧化。几个参与脂肪酸代谢的其他基因、主要是线粒体基因例如EFTA、AUH、SLC25A21、PC、ME1和EHHADH，在阿茨海默病的情况下也能参与由AMPK介导的细胞能量平衡的控制。其中，PC基因编码丙酮酸羧化酶并参与多个代谢途径，例如糖异生、脂肪生成和神经递质谷氨酸的合成。已经显示，PC活性的损伤可能与脑机能障碍相关(34-35)。有趣的是，GABA(B)受体也被鉴定为AMP激活的激酶的功能性靶。最近的研究证实，AMPK激活可能通过GABA(B)受体的磷酸化而具有神经保护性(36)，并因此可能参与靶向GABA能末梢的淀粉样蛋白病的发展(11)。
此外，AMPK信号传导途径可以通过影响胆固醇代谢而改变阿茨海默病相关病变的演化。AMPK能够通过降低SREBP转录因子的活性而影响胆固醇代谢(37)。SREBP蛋白是细胞内胆固醇水平的主要感应器和调控子；当胆固醇水平降低时通过蛋白水解切割被激活，SREBP结合于参与胆固醇生物合成的酶的编码基因的启动子区中的特异性甾类调控元件(SRE)上，并增强所述基因的转录。
胆固醇不仅用作神经保护性甾类生物合成的前体，而且也被认为是膜流动性的重要调控物，并在脂筏这种参与膜分拣、运输和信号传导的各种分子的集中平台的动力学中发挥关键作用。由法呢基-PP和香叶基香叶基-PP合酶产生的胆固醇生物合成的中间产物，在包括RhoA和Rac在内的小GTPase的活性调节中发挥关键作用，这些小GTPase是血管发生和轴突生长的主要调控物。
参与胆固醇代谢和运输的几种其他基因也能影响阿茨海默病的发生。DHCR7、SRD5A1和CYP7B1蛋白参与甾类合成，这些甾类能够保护神经元细胞抵抗与阿茨海默病相关的毒性攻击(38)。编码ATP结合盒式元件(ABC)转运蛋白家族的一个成员的ABCA1基因也显得特别重要，因为它控制了阿茨海默病发生的主要素因风险因子ApoE脂蛋白的分泌(39)。
磷脂酸(PA)、溶血磷脂酸(LPA)和鞘氨醇-1-膦酸(S1P)是具有强的信号传导性质的天然磷脂。值得注意的是，这些磷脂生长因子对内皮细胞的血管生成潜力表现出不同的效应，并且能够以互补、组合的方式有效地诱导新生血管化作用。S1P主要参与促进内皮细胞的趋化性迁移，而LPA与血管发生晚期阶段中内皮单层阻挡层的稳定化更加相关(40)。
LPA通过调节RhoA GTPase的活性或通过增加几种血管生成因子VEGF、PDGFB和IL-8的表达来影响血管发生(41-45)。除了其与血管发生的紧密牵连之外，LPA还被认为是一种细胞外脂类信号，刺激轴突生长锥萎陷并影响发育过程中早期有丝分裂后神经元的迁移(46)。
LPA可以由分泌的溶血磷脂酶D(自分泌运动因子)合成，并通过特异性G蛋白偶联的EDG2、EDG4和EDG7受体发挥作用，影响细胞增殖、存活和移动性(47)。最可能的是，LPA控制细胞形态学和移动性的能力由RhoA-ROCK信号传导模块通过G12/13蛋白的活化所介导(48)。
一些实验数据表明了LPA介导的信号传导在阿茨海默病的病理发生中的重要作用。已经证实，在阿茨海默病类型的痴呆症患者的前部皮层中，自分泌运动因子的表达增加(49)，并且在分化的人类成神经细胞瘤细胞中，由LPA体外诱导的轴突退缩伴有tau蛋白的阿茨海默病样磷酸化样式的增加(50)。此外，使用APP和早老素蛋白的遗传操作影响了转基因小鼠的脑中自分泌运动因子酶的表达(51-52)。
使用我们的数据开采手段，我们鉴定到大量参与LPA代谢或受到LPA信号传导调节或可能与阿茨海默病的发展相关的基因(MTR、MAT2B、CUBN、ATP10A、THEM2、PITPNC1、ENPPG、SGPP2、AGPAT、DGKH、DGKB、MGST2、PLD2和DRD2)。在它们当中，CUBN基因编码内在因子维生素B12的受体，而以前已经将叶酸和钴铵素(维生素B9和B12)生物可利用性的缺乏与阿茨海默病的病理发生相关联(53)。
在本发明中，本发明人提出了新的组合物，其可用于增加在阿茨海默病和其他神经变性疾病中改变的血管发生。
在特定实施方案中，本发明的治疗AD的组合物和方法使用了药物，所述药物通过它们与如上列出的一个基因或蛋白的相互作用或调节如上列出的一个基因或蛋白来增加血管发生。
更具体来说，本发明的组合物包含一种或多种药物，它们通过与由选自下列的基因编码的蛋白结合或调节该蛋白的活性来增加血管发生：ABCA1、ACAT、ACC2、ADAMTS 12、ADCY2、ADIPOQ、ADIPOR1、ADIPOR2、ADRB2、AGPAT5、AIP4、AKAP2、AKR1C2、AMPK、ANG2、ANK1、ANXA1、APOA1、ARHGAP17、ATP10A、AUH、自分泌运动因子、BAI3、BCAR1、BIN1、BMP3A、CA10、CAMK1D、CAMKK2、CD36、CD44、CDC42、CDH13、CHAT、CNTFR、COL4A2、CPT、CSH1、CTNN、CUBN、CYP7B 1、CYSLTR1、CYSLTR2、DGKB、DGKH、DGKZ、DHCR7、DHFR、DRD2、DRD5、EDG1、EDG2、EDG3、EDG4、EDG5、EDG6、EDG7、EDG8、EDNRA、EHHADH、ENPP6、ERBB4、ERK1、ERK2、ESRRG、ETFA、F2、FDPS、FGF2、FLNA、FLT4、FOXO1、FOXO3A、FTO、GABBR2、GATA3、GH1、GNA12、GNA13、GRK2、GRK5、GRM5、HAPLN1、HAS1、HAS2、HAS3、HCRTR2、HIF1A、HSD11B1、HYAL1、HYAL2、HYAL3、IL20RA、IL20RB、IL6ST、IL8、ITGA6、ITGB 1、KDR、LAMA1、LDLR、LEPR、LEPTIN、LIFR、LIPL2、LKB1、LRP、LTBP2、MAT2B、ME1、MEGALIN、MERLIN、MET、MGST2、MMP2、MMP9、MTOR、MTR、NCK2、NEDD9、NFKB1、NFKBIB、NOS2A、NOS3、NR1I2、NR3C2、NRG1、NRP1、NRP2、OPRS1、OSBPL10、OSBPL3、骨桥蛋白、P2RY1、P2RY12、PAI1、PAI2、PAK1、PAK6、PALLD、PAP1、PAR1、PAXILLIN、PC、PCTP、PDE11A、PDE1A、PDE3A、PDE4D、PDE5、PDGFA、PDGFB、PDGFRA、PDGFRB、PI3K、PITPNC1、PKA、PKCD、PLA1A、PLA2、PLAT、PLAU、PLCB1、PLD1、PLD2、PLG、PLXDC2、PPARA、PPARG、PPARGC1B、PRKG1、PRL、PTGS2、PTN、PTPN11、PYK2、RAC1、RAS、RHEB、RHOA、ROCK1、ROCK2、RPS6KA1、RPS6KB2、SCARB1、SCHIP1、SGPP2、SLC25A21、SMAD3、SMAD4、SNCA、SORBS2、SPLA2、SPOCK1、SRD5A1、SREBF 1、SREBF2、STAT3、TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3、THBS1、THBS2、THEM2、THRB、TIAM1、TIMP2、TLL2、TSC1、TSC2、TSPO、VEGFA、VEGFR1和YES1。
所有上面列出的基因和蛋白的序列可以从基因文库获得，并可以通过本技术领域已知的技术分离。此外，这些基因和蛋白的活性可以通过其本身在本技术领域中已知的技术来评估，正如在实验部分中讨论的。
本发明还描述了可用于调节这些靶基因和蛋白的药物。本发明公开了单独但优选组合地调节上述途径并可用于治疗所述疾病的特定药物的鉴定和活性。具体来说，我们鉴定了在文献中已经存在但在人类对象中正用于治疗其他疾病的小分子。
就此而言，在最优选实施方案中，本发明的组合物至少包含ACAT的抑制剂(优选为橙皮素)、ADCY2的调节剂(优选为阿糖腺苷)、AMPK的调节剂(优选选自苯乙双胍和阿糖腺苷)、自分泌运动因子的调节剂(优选为L-组氨酸)、CA10的抑制剂(优选为醋甲唑胺)、CYSLTR1和CYSLTR2的拮抗剂(优选为孟鲁司特)、DHFR的抑制剂(优选为乙胺嘧啶)、DRD2的调节剂(优选选自双氢麦角胺和卡麦角林)、多巴胺受体DRD5的激动剂(优选为非诺多泮)、EDNRA的拮抗剂(优选为磺胺异噁唑)、F2的调节剂(优选为华法林)、FDPS的抑制剂(优选为阿仑膦酸盐)、GABBR2的调节剂(优选选自巴氯芬和阿坎酸)、HAS1-3透明质酸合成酶的调节剂(优选为来氟米特)、HIF1A的调节剂(优选选自拓扑替康和美洛昔康)、MGST2的调节剂(优选为巴柳氮)、MMP2和MMP9的调节剂(优选为马立马司他)、NOS2A的调节剂(优选选自吉非罗齐、沙丁胺醇和硫乙拉嗪)、NOS3的调节剂(优选为酮替芬)、NR1I2的激动剂(优选为托吡酯)、NR3C2的调节剂(优选选自依普利酮和氟氢可的松)、OPRS1的激动剂(优选为喷他佐辛)、P2RY1和P2RY12的调节剂(优选选自氯吡格雷和替罗非班)、凝血酶受体PAR1的抑制剂(优选为阿加曲班)、PDE11A的抑制剂(优选为他达拉非)、PDE3A的抑制剂(优选为西洛他唑)、PDE4D的抑制剂(优选为米力农)、PDGFRA和PDGFRB的调节剂(优选选自贝卡普勒明和伊马替尼)、磷脂酶PLA1A和PLA2的抑制剂(优选选自奈替米星和米帕林)、PLAT的调节剂(优选为苯基丁酸)、PLD2的调节剂(优选选自安贝生坦和非诺多泮)、PLG的调节剂(优选为氨基己酸)、PPARA的激动剂(优选为吉非罗齐)、PPARG的激动剂(优选为苯丁酸钠)、PRKG1的激活剂(优选选自硝普纳、硝酸甘油、他达拉非和西洛他唑)、RHOA的调节剂(优选选自阿仑膦酸盐和特比萘芬)、THRB的调节剂(优选选自碘赛罗宁和甲巯咪唑)、凝血酶的抑制剂(优选为地西卢定)、TSPO的调节剂(优选选自氟硝西泮和替马西泮)，和/或VEGFR1的拮抗剂(优选选自舒尼替尼和哌加他尼)。
正如上面所讨论的，本发明具体提出了设计针对AD和相关病症的机制的组合疗法。就此而言，最优选的靶和药物组合的实例在下文公开。
更优选情况下，组合物包含下述药物组合中的至少一种，用于组合、单独或顺序给药：
-GABBR2受体的调节剂(优选为巴氯芬)和RHOA的调节剂(优选为特比萘芬)，
-GABBR2受体的调节剂(优选为巴氯芬)和EDNRA内皮素受体的拮抗剂(优选为磺胺异噁唑)，
-GABBR2受体的调节剂(优选为巴氯芬)和HAS1-3透明质酸合成酶的调节剂(优选为来氟米特)，
-RHOA的调节剂(优选为特比萘芬)和EDNRA内皮素受体的拮抗剂(优选为磺胺异噁唑)，
-RHOA的调节剂(优选为特比萘芬)和HAS1-3透明质酸合成酶的调节剂(优选为来氟米特)，
-RHOA的调节剂(优选为特比萘芬)和多巴胺受体DRD5的激动剂(优选为非诺多泮)，
-RHOA的调节剂(优选为特比萘芬)和磷脂酶PLA1A和PLA2的抑制剂(优选为米帕林)，
-RHOA的调节剂(优选为特比萘芬)和AMPK的调节剂(优选为苯乙双胍)，
-RHOA的调节剂(优选为特比萘芬)和嘌呤能受体P2RY1和P2RY12的调节剂(优选为氯吡格雷)，
-GABBR2受体的调节剂(优选为巴氯芬)和AMPK的调节剂(优选为苯乙双胍)，
-GABBR2受体的调节剂(优选为巴氯芬)和嘌呤能受体P2RY1和P2RY12的调节剂(优选为氯吡格雷)，
-EDNRA内皮素受体的拮抗剂(优选为磺胺异噁唑)和AMPK的调节剂(优选为苯乙双胍)，
-HAS1-3透明质酸合成酶的调节剂(优选为来氟米特)和多巴胺受体DRD5的激动剂(优选为非诺多泮)，或
-HAS1-3透明质酸合成酶的调节剂(优选为来氟米特)和磷脂酶PLA1A和PLA2的抑制剂(优选为米帕林)。
本发明的组合物的最优选的实例包括选自阿坎酸、沙丁胺醇、阿仑膦酸盐、安贝生坦、氨基己酸、阿加曲班、巴氯芬、巴柳氮、贝卡普勒明、卡麦角林、西洛他唑、氯吡格雷、地西卢定、双氢麦角胺、依普利酮、非诺多泮、氟氢可的松、氟硝西泮、吉非罗齐、橙皮素、伊马替尼、酮替芬、来氟米特、L-组氨酸、碘赛罗宁、马立马司他、美洛昔康、米帕林、醋甲唑胺、甲巯咪唑、米力农、孟鲁司特、奈替米星、硝酸甘油、硝普纳、哌加他尼、喷他佐辛、苯乙双胍、苯丁酸钠、乙胺嘧啶、磺胺异噁唑、舒尼替尼、他达拉非、替马西泮、特比萘芬、硫乙拉嗪、替罗非班、托吡酯、拓扑替康、阿糖腺苷和华法林或其组合的化合物。
在另一个优选实施方案中，本发明的组合物包含至少一种化合物，所述化合物选自来氟米特、磺胺异噁唑、特比萘芬、巴氯芬、氯吡格雷、非诺多泮、米帕林和苯乙双胍，或其盐或前体药物或衍生物或持续释放制剂，用于同时、单独或顺序给药。
在更优选实施方案中，本发明的组合物包含至少两种化合物的组合，所述化合物选自来氟米特、磺胺异噁唑、特比萘芬、巴氯芬、氯吡格雷、非诺多泮、米帕林和苯乙双胍，或其盐或前体药物或衍生物或持续释放制剂，用于同时、单独或顺序给药。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含至少两种化合物的组合，所述化合物选自来氟米特、磺胺异噁唑、特比萘芬、巴氯芬、氯吡格雷、非诺多泮、米帕林和苯乙双胍，或其盐或前体药物或衍生物或持续释放制剂，其中所述组合物增加在神经变性疾病中改变的血管发生反应，所述神经变性疾病选自阿茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)和多发性硬化(MS)。
在另一个优选实施方案中，本发明的组合物包含至少两种化合物的组合，所述化合物选自来氟米特、磺胺异噁唑、特比萘芬、巴氯芬、氯吡格雷、非诺多泮、米帕林和苯乙双胍，或其盐或前体药物或衍生物或持续释放制剂，用于治疗阿茨海默病(AD)。
优选情况下，用于在需要的对象中治疗阿茨海默病或相关病症的组合物，包含下述药物组合中的至少一种，用于组合、单独或顺序给药：
-巴氯芬和特比萘芬，
-巴氯芬和磺胺异噁唑，
-巴氯芬和来氟米特，
-特比萘芬和磺胺异噁唑，
-特比萘芬和来氟米特，
-特比萘芬和非诺多泮，
-特比萘芬和米帕林，
-特比萘芬和苯乙双胍，
-特比萘芬和氯吡格雷，
-巴氯芬和苯乙双胍，
-巴氯芬和氯吡格雷，
-磺胺异噁唑和苯乙双胍，
-来氟米特和非诺多泮，或
-来氟米特和米帕林。
在最优选实施方案中，本发明的组合物包含至少两种化合物的组合，所述化合物选自来氟米特、特比萘芬、磺胺异噁唑和巴氯芬氨，或其盐或前体药物或衍生物或持续释放制剂，用于同时、单独或顺序给药。
在另一个优选实施方案中，本发明的组合物包含一种或多种化合物，所述化合物选自来氟米特、特比萘芬、磺胺异噁唑和巴氯芬氨，或其盐或前体药物或衍生物或持续释放制剂，用于治疗阿茨海默病或相关病症。
在另一个实施方案中，本发明的组合物进一步包含至少一种增加血管发生的药物，用于组合、单独或顺序使用。
优选情况下，所述附加的增加血管发生的药物选自ACAT的抑制剂(优选为橙皮素)、ADCY2的调节剂(优选为阿糖腺苷)、AMPK的调节剂(优选为阿糖腺苷)、自分泌运动因子的调节剂(优选为L-组氨酸)、CA10的抑制剂(优选为醋甲唑胺)、CYSLTR1和CYSLTR2的拮抗剂(优选为孟鲁司特)、DHFR的抑制剂(优选为乙胺嘧啶)、DRD2的调节剂(优选选自双氢麦角胺和卡麦角林)、F2的调节剂(优选为华法林)、FDPS的抑制剂(优选为阿仑膦酸盐)、GABBR2的调节剂(优选为阿坎酸)、HIF1A的调节剂(优选选自拓扑替康和美洛昔康)、MGST2的调节剂(优选为巴柳氮)、MMP2和MMP9的调节剂(优选为马立马司他)、NOS2A的调节剂(优选选自吉非罗齐、沙丁胺醇和硫乙拉嗪)、NOS3的调节剂(优选为酮替芬)、NR1I2的激动剂(优选为托吡酯)、NR3C2的调节剂(优选选自依普利酮和氟氢可的松)、OPRS1的激动剂(优选为喷他佐辛)、P2RY1和P2RY12的调节剂(优选为替罗非班)、凝血酶受体PAR1的抑制剂(优选为阿加曲班)、PDE11A的抑制剂(优选为他达拉非)、PDE3A的抑制剂(优选为西洛他唑)、PDE4D的抑制剂(优选为米力农)、PDGFRA和PDGFRB的调节剂(优选选自贝卡普勒明和伊马替尼)、PLA1A和PLA2的抑制剂(优选为奈替米星)、PLAT的调节剂(优选为苯基丁酸)、PLD2的调节剂(优选为安贝生坦)、PLG的调节剂(优选为氨基己酸)、PPARA的激动剂(优选为吉非罗齐)、PPARG的激动剂(优选为苯丁酸钠)、PRKG1的激活剂(优选选自硝普纳、硝酸甘油、他达拉非和西洛他唑)、RHOA的调节剂(优选为阿仑膦酸盐)、THRB的调节剂(优选选自碘赛罗宁和甲巯咪唑)、凝血酶的抑制剂(优选为地西卢定)、TSPO的调节剂(优选选自氟硝西泮和替马西泮)，和/或VEGFR1的拮抗剂(优选选自舒尼替尼和哌加他尼)。
在其他实施方案中，所述附加的增加血管发生的药物选自与由选自下列的基因编码的蛋白结合或调节该蛋白的活性的一种或多种药物：ABCA1、ACAT、ACC2、ADAMTS12、ADCY2、ADIPOQ、ADIPOR1、ADIPOR2、ADRB2、AGPAT5、AIP4、AKAP2、AKR1C2、AMPK、ANG2、ANK1、ANXA1、APOA1、ARHGAP17、ATP10A、AUH、自分泌运动因子、BAI3、BCAR1、BIN1、BMP3A、CA10、CAMK1D、CAMKK2、CD36、CD44、CDC42、CDH13、CHAT、CNTFR、COL4A2、CPT、CSH1、CTNN、CUBN、CYP7B 1、CYSLTR1、CYSLTR2、DGKB、DGKH、DGKZ、DHCR7、DHFR、DRD2、DRD5、EDG1、EDG2、EDG3、EDG4、EDG5、EDG6、EDG7、EDG8、EDNRA、EHHADH、ENPP6、ERBB4、ERK1、ERK2、ESRRG、ETFA、F2、FDPS、FGF2、FLNA、FLT4、FOXO1、FOXO3A、FTO、GABBR2、GATA3、GH1、GNA12、GNA13、GRK2、GRK5、GRM5、HAPLN1、HAS1、HAS2、HAS3、HCRTR2、HIF1A、HSD11B1、HYAL1、HYAL2、HYAL3、IL20RA、IL20RB、IL6ST、IL8、ITGA6、ITGB1、KDR、LAMA1、LDLR、LEPR、LEPTIN、LIFR、LIPL2、LKB1、LRP、LTBP2、MAT2B、ME1、MEGALIN、MERLIN、MET、MGST2、MMP2、MMP9、MTOR、MTR、NCK2、NEDD9、NFKB1、NFKBIB、NOS2A、NOS3、NR1I2、NR3C2、NRG1、NRP1、NRP2、OPRS1、OSBPL10、OSBPL3、骨桥蛋白、P2RY1、P2RY12、PAI1、PAI2、PAK1、PAK6、PALLD、PAP1、PAR1、PAXILLIN、PC、PCTP、PDE11A、PDE1A、PDE3A、PDE4D、PDE5、PDGFA、PDGFB、PDGFRA、PDGFRB、PI3K、PITPNC1、PKA、PKCD、PLA1A、PLA2、PLAT、PLAU、PLCB 1、PLD1、PLD2、PLG、PLXDC2、PPARA、PPARG、PPARGC1B、PRKG1、PRL、PTGS2、PTN、PTPN11、PYK2、RAC1、RAS、RHEB、RHOA、ROCK1、ROCK2、RPS6KA1、RPS6KB2、SCARB1、SCHIP1、SGPP2、SLC25A21、SMAD3、SMAD4、SNCA、SORBS2、SPLA2、SPOCK1、SRD5A1、SREBF1、SREBF2、STAT3、TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3、THBS1、THBS2、THEM2、THRB、TIAM1、TIMP2、TLL2、TSC1、TSC2、TSPO、VEGFA、VEGFR1和YES1。
本发明人已经确立，上述药物和药物组合提供了改进和协同的生物学效应，使得引起AD和相关病症的功能性调节异常得到有效校正或正常化。
上面提到的化合物名称与它们的CAS编号一起列于下面的表中。正如前面讨论过的，应该理解，本发明涵盖了上述化合物及其任何可药用盐、水合物、酯、醚、异构体、外消旋物、缀合物或前体药物的使用。可以制备前体药物(例如通过将药物与适合的载体偶联)以提供对治疗的药物动力学参数的更好的控制。
表1
可药用盐的实例包括可药用酸加成盐、可药用碱加成盐、可药用金属盐、铵和烷基化铵盐。酸加成盐包括无机酸以及有机酸的盐。适合的无机酸的代表性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、硝酸等。适合的有机酸的代表性实例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、乙醇酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗坏血酸、扑酸、双亚甲基水杨酸、乙二磺酸、葡糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、高氯酸盐、硼酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、羟基萘甲酸盐、甘油磷酸盐、酮戊二酸盐等。可药用无机酸加成盐或有机酸加成盐的其他实例列于例如J.Pharm.Sci.1977，66，2中，其在此引为参考。金属盐的实例包括锂、钠、钾、镁的盐等。铵和烷基化铵盐的实例包括铵、甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、乙基铵、羟乙基铵、二乙基铵、丁基铵、四甲基铵的盐等。有机碱的实例包括赖氨酸、精氨酸、胍、二乙醇胺、胆碱等。
本发明的疗法可以单独或作为药物组合执行，和/或与靶向相同途径或具有不同作用方式的任何其他疗法结合执行。它可以提供在家里、医生办公室、诊所、医院的门诊部或医院，以便医生可以密切观察疗法的效应并做出任何需要的调整。
在特定实施方案中，本发明的组合物进一步包含至少一种调节突触功能、优选改善突触功能的药物，用于组合、单独或顺序使用。更优选情况下，所述至少一种调节突触功能的药物选自阿芬太尼、阿米洛利、氨氯地平、氨曲南、布克力嗪、布美他尼、丁丙诺啡、利多卡因、氯唑沙宗、西那卡塞、达沙替尼、二羟丙茶碱、依来曲普坦、麦角胺、磷苯妥英、苯巴比妥、普瑞巴林、丙硫氧嘧啶、噻加宾、氨苯蝶啶、氨已烯酸和唑尼沙胺(参见下面表2)。
表2
可替选地，或除了前述实施方案之外，本发明的组合物可以进一步包含至少一种调节细胞应激反应、优选抑制细胞应激反应的药物，用于组合、单独或顺序使用。调节细胞应激反应的最优选药物选自阿拉伯糖醇、甘露醇、间羟胺、奥美拉唑、丙胺卡因、雷帕霉素、利福布汀、硫鸟嘌呤、海藻糖和阿糖腺苷(参见下面表3)。
表3
在特定实施方案中，本发明涉及组合物，其包含增加血管发生的药物、改善突触功能的药物和抑制细胞应激反应的药物，用于同时、单独或顺序给药。
本发明的组合物典型地包含一种或几种可药用的载体或赋形剂。疗法的持续时间取决于被治疗的疾病的阶段、使用的组合、患者的年龄和状况以及患者对治疗如何反应。
组合的每种组分的给药剂量、频率和方式可以独立地控制。例如，一种药物可以口服给药，而第二种药物可以肌肉内给药。组合疗法可以包含恢复期的断续循环方式提供，以便患者的身体有机会从任何尚无法预料的副作用恢复。药物也可以配制在一起以便一次给药投送所有药物。
组合中的每种药物的给药可以通过任何适合的方式，使得与其他组分组合的药物的浓度能够校正AD所涉及的途径的功能。
尽管组合的活性成分可以作为纯的化学物质给药，但优选情况下将它们作为药物组合物、在本文中也称为药物制剂提供。可能的组合物包括适合于经口、直肠、局部(包括透皮、经颊和舌下)或非肠道(包括皮下、肌肉内、静脉内和真皮内)给药的组合物。
更通常情况下，这些药物制剂以“患者包”的形式开给患者，所述患者包在单一包装、通常为泡罩包装中含有定量投配单元或其他在不同治疗期间使用的用于给药计量单位药剂的手段。患者包与药剂师从散料供应中分出患者的药物供应的传统处方相比的优势在于，患者总是能够得到患者包中包含的包装标签，而这在传统处方中一般是缺失的。已经显示，包含包装标签增加了患者对医生指导的顺从性。因此，本发明还包括本文前述的药物组合物，其与适合于所述制剂的包装材料组合。在这样的患者包中，用于组合治疗的制剂的预期使用方法，可以从说明书、器具、附文、适应症和/或用于帮助制剂最适合地用于治疗的其他手段推断出来。这样的措施使患者包特别适合于和适用于使用本发明的组合进行治疗。
药物可以以任何适合的量被包含在任何适合的载体物质中，并且可以以组合物总重量的1-99重量％的量存在。组合物可以提供在适合于经口、非肠道(例如静脉内、肌肉内)、直肠、皮肤、鼻、阴道、吸入、皮肤(贴片)或眼给药途径的剂型中。因此，组合物可以采用例如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒、混悬剂、乳液、溶液、包括水凝胶在内的凝胶剂、糊剂、软膏、霜剂、膏药、浸液、渗透投送装置、栓剂、灌肠剂、注射剂、植入物、喷剂或气雾剂的形式。
药物组合物可以按照常规药物实践进行配制(参见例如《Remington：药物科学与实践》(第20版)(Remington：The Science and Practice of Pharmacy(20th ed.))，A.R.Gennaro主编，Lippincott Williams&Wilkins，2000和《制药技术百科全书》(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology)，J.Swarbrick和J.C.Boylan主编，1988-1999，Marcel Dekker，New York)。
本发明的药物组合物可以配制成在给药后基本上立即地或在给药后任何预定的时间或时期内释放活性药物。
受控释放制剂包括(i)在较长时期内在体内产生基本上恒定的药物浓度的制剂；(ii)在预定延迟期后在较长时期内在体内产生基本上恒定的药物浓度的制剂；(iii)通过在体内维持相对恒定、有效的药物水平同时使得与活性药物的血浆水平波动相关的不想要的副作用最小化，在预定时期内维持药物作用的制剂；(iv)通过例如将受控释放组合物在空间上放置在患病组织或器官附近或其中，使药物作用局部化的制剂；以及(v)通过使用将药物投送到特定靶细胞类型的载体或化学衍生物发挥定向药物作用的制剂。
采用受控释放制剂形式的药物的给药，在药物单独或组合地具有下述特征的情况下是特别优选的：(i)狭窄的治疗指数(即产生有害副作用或毒性反应的血浆浓度与产生疗效的血浆浓度之间的差值小；一般来说，治疗指数TI被定义为中值致死剂量(LD50)与中值有效剂量(ED50)的比)；(ii)在胃肠道中狭窄的吸收窗口；或(iii)非常短的生物半衰期，使得为了将血浆水平维持在治疗水平需要在一天中频繁用药。
可以采取许多策略中的任一种以便获得受控释放，其中所研究的药物的释放速率超过其代谢速率。受控释放可以通过适当选择各种配制参数和成分、包括例如各种类型的受控释放组合物和涂层来获得。因此，使用适合的赋形剂将药物配制成药物组合物，其在给药后以受控的方式释放药物(单一或多个单位片剂或胶囊组合物、油溶液、混悬剂、乳液、微胶囊、微球、纳粒、贴片和脂质体)。
用于经口使用的固体剂型
用于经口使用的剂型包括在与无毒性的可药用赋形剂的混合物中包含活性成分的片剂。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂或填充剂(例如蔗糖、微晶纤维素、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、碳酸钙、氯化钠、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；造粒剂和崩解剂(例如包括微晶纤维素在内的纤维素衍生物、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、交联羧甲基纤维素钠、藻酸盐或藻酸)；粘合剂(例如阿拉伯树胶、藻酸、藻酸钠、明胶、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；和润滑剂、助流剂和抗粘附剂(例如硬脂酸、二氧化硅或滑石粉)。其他可药用赋形剂可以是着色剂、调味剂、增塑剂、保湿剂、缓冲剂等。
片剂可以是未包衣的，或它们可以通过已知技术包衣，以任选地延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时期内提供持续作用。包衣可以适合于以预定样式释放活性药物(例如以便获得受控释放制剂)，或者它可以适用于直到通过胃之后才释放活性药物(肠溶包衣)。包衣可以是糖包衣、薄膜包衣(例如基于羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、丙烯酸酯类共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮)或肠溶包衣(例如基于甲基丙烯酸共聚物、乙酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、虫胶和/或乙基纤维素)。可以使用延时材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
固体片剂组合物可以包括包衣，其适用于保护组合物免于不想要的化学变化(例如在活性药物释放前的化学降解)。包衣可以以与《制药技术百科全书》(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology)中描述的相似的方式被施用于固体剂型上。
在片剂中，几种药物可以混合在一起，也可以分区。例如，第一种药物包含在片剂内部，第二种药物位于外部，使得主要部分的第二种药物在第一种药物释放之前释放。
用于经口使用的制剂也可被提供成可咀嚼片剂，或作为其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如马铃薯淀粉、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合的硬明胶胶囊，或作为其中活性成分与水或油介质例如液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊。粉剂和颗粒可以使用在上面关于片剂和胶囊下所提到的成分以常规方式制备。
用于经口使用的受控释放组合物可以被构建成例如通过控制活性药物的溶出和/或扩散来释放活性药物。
溶解或扩散受控释放可以通过药物的片剂、胶囊、丸粒或颗粒制剂的适合包衣，或通过将药物掺入到适合的基质中来实现。受控释放包衣可以包括一种或多种上面提到的包衣物质，和/或例如虫胶、蜂蜡、glycowax、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羟基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1，3-丁二醇、甲基丙烯酸乙二醇酯和/或聚乙二醇。在受控释放基质制剂中，基质材料也可以包括例如水合甲基纤维素、巴西棕榈蜡和硬质醇、卡巴浦尔934、硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或卤代氟烃。
含有一种或多种要求保护的药物组合的受控释放组合物，也可以采用漂浮片剂或胶囊的形式(即在口服给药后，在胃内容物顶部漂浮一段时间的片剂或胶囊)。药物的漂浮片剂制剂可以通过将药物与赋形剂和20-75％w/w的水凝胶剂例如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素的混合物成粒来制备。然后可以将获得的颗粒压制成片剂。在与胃液接触后，片剂在其表面周围形成基本上不透水的凝胶剂阻挡层。这种凝胶剂阻挡层参与维持密度小于1，从而允许片剂保持漂浮在胃液中。
用于经口给药的液体
适合于通过添加水制备水性混悬剂的粉剂、可分散粉剂或颗粒，是用于经口给药的方便剂型。作为混悬剂的制剂提供了活性成分与分散或润湿剂、助悬剂和一种或多种防腐剂的混合物。适合的助悬剂是例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、藻酸钠等。
非肠道组合物
药物组合物也可以通过注射、输注或植入(静脉内、肌肉内、皮下等)，以剂型、制剂或通过适合的投送装置或含有常规的无毒的可药用载体和佐剂的植入物的形式非肠道给药。这样的组合物的配制和制备对于药物制剂领域的专业人员来说是众所周知的。
用于非肠道使用的组合物可以提供成单位剂量形式(例如在单剂安瓿中)或提供成含有几份剂量小管，并且其中可以添加适合的防腐剂(参见下文)。组合物可以采取溶液、混悬剂、乳液、输注装置或用于植入的投送装置的形式，或者它可以作为干粉存在，在使用前用水或其他适合的介质重构。除了活性药物之外，组合物可以包含适合的非肠道可接受的载体和/或赋形剂。活性药物可被掺入到微球、微胶囊、纳粒、脂质体等中，用于受控释放。组合物可以包含助悬剂、增溶剂、稳定剂、pH调节剂和/或分散剂。
本发明的药物组合物可以采取适合于无菌注射的形式。为了制备这样的组合物，将适合的活性药物溶解或悬浮在非肠道可接受的液体介质中。在可以使用的可接受介质和溶剂中包括水、通过加入适量的盐酸、氢氧化钠或适合的缓冲液调整到适合pH的水、1，3-丁二醇、林格液和等渗氯化钠溶液。水性制剂也可以包含一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸的甲酯、乙酯或正丙酯)。在其中一种药物仅仅少量或微溶于水的情况下，可以加入溶解增强剂或增溶剂，或溶剂可以包含10-60％w/w的丙二醇等。
受控释放非肠道组合物可以采取水性混悬剂、微球、微胶囊、磁性微球、油溶液、油混悬剂或乳液的形式。可替选地，活性药物可被掺入到可生物相容的载体、脂质体、纳粒、植入物或输注装置中。用于制备微球和/或微胶囊的材料是例如可生物降解/可生物蚀刻的聚合物，例如聚催乳素、聚(氰基丙烯酸异丁酯)、聚(2-羟基乙基-L-谷氨酰胺)。在配制受控释放非肠道制剂时可以使用的生物相容载体是糖类(例如葡聚糖)、蛋白(例如白蛋白)、脂蛋白或抗体。用于植入物的材料可以是不可生物降解的(例如聚二甲基硅氧烷)或可生物降解的(例如聚己内酯、聚乙醇酸或聚原酸酯)。
直肠组合物
对于直肠使用来说，适用于组合物的剂型包括栓剂(乳液或混悬剂类型)和直肠明胶胶囊(溶液或混悬剂)。在典型的栓剂制剂中，活性药物与适合的可药用栓剂基质组合，所述基质为例如可可脂、酯化的脂肪酸、甘油化的明胶以及各种水溶性的或水可分散的基质例如聚乙二醇。可以掺入各种添加剂、增强剂或表面活性剂。
经皮和局部组合物
药物组合物也可以在含有常规的无毒的可药用载体和赋形剂、包括微球和脂质体的剂型或制剂中，局部给药于皮肤上，用于经皮吸收。制剂包括霜剂、软膏、洗剂、搽剂、凝胶剂、水凝胶剂、溶液、混悬剂、棒剂、喷剂、糊剂、膏药和其他类型的经皮药物投送系统。可药用的载体或赋形剂可以包括乳化剂、抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、保湿剂、渗透增强剂、螯合剂、成凝胶剂、软膏基质、香料和皮肤保护剂。
乳化剂可以是天然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或黄蓍树胶)。
防腐剂、保湿剂、渗透增强剂可以是对羟苯甲酸酯例如对羟基苯甲酸的甲酯或丙酯，以及苯扎氯铵、甘油、丙二醇、脲等。
上面描述的用于局部给药于皮肤上的药物组合物，也可以用于局部给药在身体待治疗部分上或其附近的情况中。组合物可以适用于直接施用或利用特制的药物投送装置施用，例如敷料或可替选的石膏、衬垫、海绵、条板或其他适合的柔性材料形式。
治疗的剂量和持续时间
应该理解，组合的药物可以在相同或不同的药物制剂中同时或顺序给药。如果进行顺序给药，在给药第二种(或附加)活性成分时的延迟不应该导致活性成分组合的有效效果的益处的丧失。对本发明的组合的最低要求是，该组合应该意欲用于组合使用活性成分的组合的有效效果的益处。组合的意欲使用，可以通过器具、附文、适应症和/或用于帮助使用本发明的组合的其他手段推断出来。
尽管本发明的活性药物可以以分剂量给药，例如每日2到3次，但组合中的每种药物的单一日剂量是优选的，在单一药物组合物中所有药物的单一日剂量(单位剂量形式)是最优选的。
术语“单位剂量形式”是指适合作为人类对象的单一剂量的物理离散的单位(例如胶囊、片剂或装药的注射器筒)，每个单位包含根据计算能够产生所需疗效的预定量的活性物质或多种活性物质，以及所需的药物载体。
给药可以是每日一次到几次，持续几日到几年，甚至可以持续患者的一生。在大多数情况下指示长期或至少周期性重复的长期给药。
此外，关于特定患者的药物基因组学(基因型对药物动力学、药效学或治疗效能情况的影响)信息可以影响使用的剂量。
除了当对应于特别受损的AD疾病病例时可能需要较高剂量之外，组合中每种药物的优选剂量通常将在不高于长期维持性治疗所通常开出的或在大型3期临床研究中被证明是安全的剂量范围内。
最优选的剂量将对应于用于长期维持性治疗所开出的剂量的1％到最高10％的量。
例如用于本发明的特别优选的组合疗法的可能剂量可以是：
-口服依普利酮从约0.25到5mg，每天一次或两次，口服马立马司他从约0.1到1mg/天，
-口服吉非罗齐从约12到120mg，以两个分剂量在早餐和晚餐前30分钟给药，口服马立马司他从约0.1到1mg/天，
-口服马立马司他从约0.1到1mg/天，口服特比萘芬从约2.5到25mg，每天一次或两次，
-口服拓扑替康从约0.025到0.25mg/天，口服醋甲唑胺从约1到10mg，每天2-3次，
-口服依普利酮从约0.25到5mg，每天一次或两次，口服他达拉非从约0.05到0.5mg/天，
-口服依普利酮从约0.25到5mg，每天一次或两次，口服西洛他唑从约1到10mg/天，
-口服舒尼替尼从约0.5到5mg/天，口服特比萘芬从约2.5到25mg，每天一次或两次，
-口服苯乙双胍从约0.5到5mg/天，口服巴氯芬从约0.4到8mg/天，以2或3个分剂量给药，
-口服苯乙双胍从约0.5到5mg/天，口服特比萘芬从约2.5到25mg，每天一次或两次，
-口服他达拉非从约0.05到0.5mg/天，口服阿仑膦酸盐从约0.7到7mg，每周一次，或0.7到7mg，每天一次，
-口服西洛他唑从约1到10mg/天，口服阿仑膦酸盐从约0.7到7mg，每周一次，或0.7到7mg，每天一次，
-口服米帕林从约3到30mg/天，口服特比萘芬从约2.5到25mg，每天一次或两次，
-口服米帕林从约3到30mg/天，口服巴柳氮从约7到75mg，一天分三次服用，
-口服特比萘芬从约2.5到25mg，每天一次或两次，口服伊马替尼从约4到60mg/天。
应该理解，实际给药的药物的量将由医生根据相关的情况确定，所述情况包括待治疗的病症或多种病症、所给药的具体组合物、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重性以及所选的给药途径。因此，上述剂量范围只是打算为本文中的讲授提供一般性指导和支持，而不是打算限制本发明的方法。
给出了下列实施例，它们是用于说明的目的而不是限制。
实施例
使用体外测定法进行药物验证
体外测定法是用于改进作用于涉及AD的途径的药物及其组合的有力工具。本发明的药物及其组合，通过在按照本发明中鉴定到的AD网络而改造的特定体外测定法上的作用而进行了最适化。随后在AD体内模型中对这些分子或其组合进行了测试。
这些体外实验从药物对暴露于Aβ蛋白毒性效应的内皮细胞的保护潜力的研究开始。对所涉及途径中的药物进行单独测试，然后测定它们的组合作用。在随后的阶段中，将作用于单独途径中的靶最有效的组合进行组合，并在用于细胞应激、轴突生长和血管毒性的测定法中再次进行测试。
细胞培养
对传代0次的大鼠内皮脑细胞原代培养物(Vect-Horus SAS，Marseille)进行培养。在合生时，用胰蛋白酶EDTA(Pan Biotech，目录号：P 10-023100)将内皮细胞解离。将细胞以25000个细胞/孔的密度接种在96孔板中(孔用30μl浓度为1.5mg/ml的I型大鼠胶原蛋白包被，Vect-Horus SAS，Marseille)，并在补充有1％微血管生长增补剂(MVGS，S-005-25，Invitrogen)的MCBD 131培养基(M-131-500，Invitrogen)中培养。细胞在37℃下，在加湿空气(95％)/CO2(5％)气氛下培养。每隔一天将一半的培养基用新鲜培养基更换。
4天后，以不同浓度向细胞培养基中添加溶解在0.1％DMSO或水中的药物。在培养基中进行1小时的预温育，所述培养基含有Dulbecco改性的Eagle培养基(DMEM，Pan Biotech目录号：P04-03600)，并补充有2％胎牛血清(FBS；Invitrogen目录号：16000-036)、1％L-谷氨酰胺(Pan Biotech目录号：P04-80100)、1％青霉素-链霉素(PS；Pan Biotech目录号：P06-07100)、0.1mg/ml肝素(Sigma)、10ng/ml表皮生长因子(EGF，Invitrogen)和10ng/ml血管内皮生长因子(VEGF，PHG0146，Invitrogen)。
然后在同样的培养基中通过30μM β-淀粉样蛋白(25-35；Sigma)与药物一起使细胞中毒。然后使细胞中毒3天。
乳酸脱氢酶(LDH)活性测定
对于每种培养物，在中毒3天后收集上清液，并用细胞毒性检测试剂盒(LDH，Roche Applied Sciences)进行分析。该用于定量细胞死亡的比色测定法是基于从损伤细胞的胞液释放到上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)活性的测量。使用多重扫描装置(Thermo，Ref Ascent)通过分光光度法在492nm波长处评估光密度(DO)。
结果
图1中显示的结果是从两批独立的培养物中提取出来的，每种条件6个孔。所有值表示成平均值±标准误差平均值。对原始数据进行了双侧Student′st检验分析。结果表示成与对照(介质)相比的细胞存活的百分率。
将药物与大鼠原代脑内皮细胞温育1小时，然后使用30μM Aβ25-35进行中毒，持续3天。
在该温育后3天，对反映出细胞死亡水平的培养基中LDH的释放进行定量。本发明人观察到4种药物明显发挥了对这种Aβ25-35中毒作用的保护效应(图1)。
体内试验
在体外测试中有活性的化合物及其组合，在阿尔茨海默病的体内模型中进行了测试。与阿尔茨海默病相关的突变体人类淀粉样β蛋白前体(APP)转入基因的过表达，是在大量研究中用作AD疾病模型的转基因小鼠的脑中促进Aβ沉积的最可靠的手段。当它们衰老时，这些突变APP小鼠发展出强烈的淀粉样蛋白病理学和其他AD样特点，包括突触密度降低、反应性神经胶质增生和一些认知缺陷。许多突变APP小鼠模型几乎不显示出明显的神经元丧失和神经原纤维缠结(NFT)病理学的迹象。对于该BRI-Aβ42转入基因半合的小鼠能够存活并可育，具有正常寿命。转基因的BRI-Aβ42mRNA以小鼠朊病毒蛋白启动子特征性的样式表达，检测到的最高的转入基因表达水平是在小脑颗粒细胞和海马中，其次是皮层、脑桥、丘脑和中脑。在转基因融合蛋白中，Aβ1-42融合到BRI蛋白C末端的furin类切割位点处，使得切割导致Aβ1-42有效分泌到细胞腔或细胞外空间中。因此，这些小鼠特异性表达Aβ1-42同种型。半合的BRI-Aβ42小鼠随着衰老积累不可用去污剂溶解的β-淀粉样蛋白，并早在3月龄时就在小脑发生具核蛋白斑。前脑病理学的发生出现较晚，细胞外Aβ蛋白斑直到12月龄时才一致地出现在海马和内嗅/梨状皮质中。淀粉样β-蛋白沉积物(具核蛋白斑)早在3个月时就可以在转基因小鼠小脑的分子层中观察到，并且随着衰老变得更加明显；在6月龄时，在内嗅/梨状皮质和海马中看到了偶发细胞外蛋白斑，但是直到超过12月龄时才能一致地发现。最老的小鼠在小脑、皮层、海马和嗅球中显示出广泛分布的具核和扩散蛋白斑的病理学。细胞外淀粉样蛋白斑块显示出致密的淀粉样蛋白核心，并具有辐射状的纤丝；在这些蛋白斑外周观察到许多束营养不良的轴突。蛋白斑伴有反应性神经胶质增生。
药物处理
转基因Tg(Prnp-ITM2B/APP695*42)A12E mc小鼠(43)从JacksonLaboratory获得(http://jaxmice.jax.org/strain/007002.html)。将所发现的具有最高Aβ42血浆水平的小鼠、BRI-Aβ42A(12e)株系维持在混合的B6C3背景上。成年雄性转基因小鼠可以自由接近食物和水。依照得到批准的研究动物护理和使用委员会议定书(Institutional Animal Care and Use Committee protocol)，将小鼠称重并腹膜内注射或强饲对照溶液(安慰剂)或以不同剂量制备的PXT药物，每日一次，连续进行10到20周。
存活率分析
存活率使用Kaplan-Meier方法进行分析。对于所有两两多重比较测试使用了Holm-Sidak方法(post hoc)。对无关死亡进行审查。所有比较在同窝仔畜之间进行，以限制来自背景株系差异的任何潜在的影响因子。
行为测试
行为测试按照已由几位作者发表的方法(58-61)设计和执行。Morris水迷宫(MWM)中的空间学习和记忆
本实验在直径90cm、由白色塑料制成并装填有乳状有色水的圆形水池中进行。直径8cm的由透明塑料制成的逃离平台浸没在水平面下0.5cm。视觉线索由印刷成A4大小的字母的不同几何形状形式提供，并放置在周围的四个壁上(距离水池50到70cm)。在4天内，每天对每只小鼠进行4次试验(试验之间的间隔为5到7分钟，总共16次试验)。每个试验从四个不同起始点之一进行。小鼠的运动使用Videotrack软件(View Point)监测。确定了找到逃离平台所花费的时间(逃离潜伏期；最高60秒)。在找到平台后，允许小鼠在其上面坐15秒。不能在60秒内发现平台的小鼠被引导到平台，并允许它在其上停留15秒。对于这种情况，在记录中输入60秒的逃离潜伏期。除了第1天的第一次试验之外，对每天的所有四次试验进行平均，用于统计学分析。在第9天(最后一次训练后第5天)，对小鼠进行60秒的探索试验，其中将平台取出并允许小鼠搜寻它。记录每只动物在每个四分之一圆中花费的时间(四分之一圆搜索时间)。使用了3、7、10和12月龄的几组雄性小鼠。
少数小鼠表现出强烈干扰测试的冷淡行为(例如不动地躺在水中并拒绝游泳)，这些动物在数据分析中被排除。
所有行为试验在安静和弱光环境下进行。
辐射臂水迷宫中的工作记忆测试
在由直径100cm、装有水的水池(也用于Morris水迷宫和平台识别任务)中安装铝制插入物以产生6个辐射状分布的游泳臂组成的装置的帮助下，获得了工作记忆的这种基于认知的灵敏性测量。测试包括每天5次1分钟的试验，连续进行9-12天。在每天测试开始时，将透明的被浸没的平台放置在6个游泳臂之一的末端(随机选择，每天改变)。对于前四次习得试验中的每次来说，将动物放置在一个不含平台的臂中(随机顺序)，并允许其搜寻平台。在60秒试验中，每当动物进入另一个不含平台的臂，将其轻轻放回到其起始位置并记录错误。在4次试验后，允许动物休息30分钟，然后进行第5次(记忆力)试验，从最后一个不含平台的游泳臂开始。对于每个试验，记录错误(臂选择不正确)的次数和逃离潜伏期(到达平台的时间，最大60秒)。在圆形平台测试中的空间参考学习和记忆
装置由直径69cm的圆形平台构成，在其外周周围等距离间隔有16个“逃离”孔，在该装置的帮助下进行了该基于认知的任务测试。逃离避难处安装在一个孔的下方，并用黑色幕帘围住平台，幕帘上放置有各种视觉提示。在单一的5分钟试验开始时，将动物放置在平台中央并提供令其厌恶的刺激(亮光、鼓风)。记录错误(头伸入非逃离孔)的总数和逃离潜伏期(到达逃离孔的时间)。
在平台认知测试中的认知能力
该基于认知的搜索任务评估物体分辨和认知能力。靶物体是直径9cm的圆形平台，装有10cm x 40cm黑旗，其位于直径100cm的圆形水池中水表面上方0.8cm处。测试包括每天4次60秒的试验，连续进行4天。在每一天，对于每次试验，将靶物体放置在水池的不同四分之一圆中，对于所有4次试验，在沿着水池外周的相同位置处释放动物。对于每次试验记录总潜伏期(最大60秒)。
修改的Irwin检查
使用了全面的筛选即修改的Irwin方法来确定是否有任何小鼠表现出与其基因型相关的生理、行为或感觉运动缺损。为了调查运动技能、协调性和肌肉强度，将小鼠放置在紧系在两个30cm高的柱子之间的线上，并评估它们在线上的平衡能力。此外，确定了它们用四只爪握紧并悬挂在线上至少5秒钟和爬回到线上的能力。
血管淀粉样蛋白沉积的定量
为了对脑淀粉样蛋白血管病变(CAA)进行定量，将以30μm间隔通过腔壁或小脑皮层软脑膜获得的5μm的石蜡包埋切片，用生物素化的Ab9抗体(抗AJ31-16抗体，1∶500)在4℃下免疫染色过夜(在每个年龄组中每种基因型n＝5-7只小鼠，每只小鼠n＝6个切片)。阳性染色的血管使用修改的Vonsattel’s评分系统(62)进行目测评估。CAA严重性分值通过将CAA血管数量乘以CAA严重性等级进行计算。
组织学：免疫组织化学和免疫荧光
将3到12月龄的Tg和WT小鼠麻醉，并用0.9％NaCl和4％多聚甲醛在0.1mol/L磷酸缓冲盐水(PBS)(pH 7.4)中的溶液，或10％福尔马林和4％多聚甲醛在0.1mol/L PBS(pH 7.4)中的溶液相继进行穿过心脏的灌流。取出脑和脊髓，并储存在4％多聚甲醛中。将一些样品包埋在石蜡中，并在滑动切片机上以10μm的厚度切片。在低温恒温器上切出冷冻切片(14μm)，并固定在铬矾包被的载片上。通过用含有0.3％H2O2的甲醇对切片处理30分钟，淬灭了内源过氧化物酶。将切片在10％马血清中阻断。使用第一抗体，并在4℃下、在1％马血清存在下温育过夜。所有生物素化或荧光素偶联、德克萨斯红偶联和AMCA偶联的第二抗体、荧光染料、ABC试剂盒和作为过氧化物酶活性的发色团的3，3′-二氨基联苯胺都来自Vector Laboratories公司。与第二抗体的温育在室温下进行1小时。所有清洗步骤(3-10分钟)和抗体稀释使用磷酸缓冲盐水(0.1mol/L PBS，pH 7.4)或Tris缓冲盐水(0.01mol/L Tris，0.15mol/L NaCl，pH 7.4)进行。与ABC复合物的温育和用3，3′-二氨基联苯胺的检测按照制造商的手册进行。苏木精复染色按照标准步骤进行。每次测定使用每种基因型、年龄和性别最少三只小鼠(63)。
体内数据的统计学分析
来自所有实验的结果使用STATISTICA 8.0(Statsoft)进行分析。
CAA严重性通过使用带有post hoc Holm-Sidak多重比较检验或双尾Student′st检验的ANOVA进行分析。如果数据组不满足参数检验假定，进行Kruskal-Wallis检验然后进行post hoc Dunn′s多重比较，或进行Mann-Whitney秩和检验。所有的比较在同窝仔畜之间进行。
排除对照(0mg/kg)样品后进行了药物反应模拟。ED50对应于在实验中诱导出最大药物诱导反应的50％所需的剂量(mg/kg)。它使用用于ED50对数的Hill方程模型来计算。
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机译： 化合物，药物组合物，治疗或预防ab相关病症的方法以及需要治疗的患者的阿兹海默氏病的治疗或预防方法
机译： 钙化药物作为治疗和预防阿兹海默氏病，与阿兹海默氏病相关的疾病和唐氏综合症的神经病学的药理学方法
机译： 钙化药物作为治疗和预防阿兹海默氏病，与阿兹海默氏病相关的疾病和唐氏综合症的神经病学的药理学方法
