一种具有抗菌活性的当归地上部分有效部位及其制备方法和其应用

摘要

本发明公开了一种具有抗菌活性的当归地上部分有效部位，它是通过以下方法制备得到：取干燥的当归地上部分，粉粹，加乙醇回流提取，得提取液减压回收溶剂，得浸膏，加水溶解，上大孔树脂进行柱层析，分别用水、浓度40％至95％乙醇进行梯度洗脱，收集浓度为50％至60％乙醇的洗脱部分，浓缩，干燥，得到以酚酸类为主要成分的有效部位。本发明通过对当归地上部分进行系统的化学成分和药理活性研究，得到具有较强抗菌活性的当归地上部分的酚酸类有效部位。本发明在充分利用当归中药资源基础上，变废为宝，开发出当归新的药用资源，所提供的当归地上部分有效部位中有效成分清楚，抗菌活性强，可开发成为新的家畜抗菌药物。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药材，具体涉及一种具有抗菌活性的当归地上部分有效部位及其制备方法和其作为家畜抗菌药物中的应用。

背景技术

当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛、温，归肝、心、脾经，具有补血活血，调经止痛，润肠通便。用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，肠燥便秘，风湿痹痛，跌扑损伤，痈疽疮疡。酒当归活血通经，用于经闭痛经，风湿痹痛，跌扑损伤。当归药材主产于甘肃岷县、武都、成县等地。当归为常用中药材，资源相对比较紧张，临床常用当归的地下部分，即当归的干燥根作为药用，在我国乃至全世界临床使用有几千年的历史，而大量当归地上茎叶在采收时经常被废弃，造成环境污染，现代药学研究主要集中在当归根的研究，当归地上部分的茎叶研究较少，因此为了综合利用当归药材的资源，减少资源的浪费，很有必要对当归地上部分的化学成分及药理活性进行系统的研究，进而扩大当归的药用资源，同时也为当归地上部分效应物质基础的阐明奠定基础。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了充分利用当归资源，减少环境污染，提供一种具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位，本发明另一个目的是提供当归地上部分有效部位的制备方法和其作为家畜抗菌药物中的应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位，它是通过以下方法制备得到的：取干燥的当归地上部分，粉粹，加乙醇回流提取，得提取液减压回收溶剂，得浸膏，将浸膏加水溶解，然后上大孔树脂进行柱层析，分别用水、浓度40％乙醇至浓度95％乙醇进行梯度洗脱，收集浓度为50％至60％乙醇的洗脱部分，浓缩，干燥即得。

以上所述的具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位，通过HPLC-MS等仪器分析，当归地上部分有效部位中的活性成分主要包括金丝桃苷、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、对二羟乙基苯酚和三甲基苯甲酸等酚酸类成分。

以上所述的具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位，将当归地上部分的有效部位和药学上可接受的载体制备成家畜用药所能接受的剂型。

作为优选方案，以上所述的具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位，其特征在于，所述的剂型是片剂、液体制剂、颗粒剂、煎膏剂、丸剂、悬浮剂、分散剂或糖浆剂。

本发明提供的当归地上部分的有效部位在制成片剂时把当归地上部分的有效部位和载体乳糖、玉米淀粉、糊精或微晶纤维素，需要时加入润滑剂硬脂酸镁或滑石粉，混合均匀，然后压片制成片剂。本发明提供的当归地上部分的有效部位制成颗粒剂时，把当归地上部分的有效部位和稀释剂乳糖、玉米淀粉或环糊精等混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。做成糖浆剂时，将当归地上部分的有效部位加蒸馏水溶剂后加入糖浆，调节pH值，即得。

本发明提供的具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)取干燥的当归地上部分，粉碎，加入6至10倍量的浓度为80％至90％的乙醇，加热回流提取2至3次，减压回收溶剂，得浸膏，备用；

(2)取步骤(1)制备得到的浸膏，加水溶解，上大孔树脂进行柱层析，分别用水、浓度为40％至95％乙醇进行梯度洗脱，收集浓度为50％至60％乙醇洗脱部分，浓缩，干燥，得到含有酚酸类成分的有效部位。

作为优选方案，以上所述的具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位的制备方法，大孔树脂的型号为D101或D102型大孔吸附树脂。本发明通过对不同极性和不同型号树脂进行吸附和纯化能力的筛选，确定型号为D101或D102型的大孔吸附树脂吸附和纯化效果最好，同时本发明对50％～95％不同浓度乙醇的洗脱能力进行了优选，以总酚酸类成分的含量作为指标，确定浓度为50％至60％的乙醇的洗脱物中酚酸类总含量最高，且杂质少。

本发明提供的具有抗菌活性的当归地上部分有效部位在制备家畜抗菌药物中的应用。如作为家兔、牛、羊或猪等家畜的抗菌用药。

作为优选方案，以上所述的具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位在制备抗菌药物中的应用，其中所述的抗菌药物为抗猪链球菌和大肠杆菌的药物。即当归地上部分的有效部位在制备家畜的抗猪链球菌和大肠杆菌的药物中的应用。

有益效果：本发明提供的当归地上部分有效部位具有以下优点：

本发明通过对当归地上部分进行系统的化学成分和药理活性研究，得到具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位，并通过高效液相-质谱等现代仪器分析，得出当归地上部分的有效部位的主要活性成分为酚酸类成分；本发明提供的当归地上部分的有效部位，在充分利用当归中药资源基础上，变费为宝，减少对环境的污染，开发出当归新的药用资源，所提供的当归地上部分的有效部位中有效成分清楚，为阐明当归地上部分效应物质基础奠定了基础，且其抗菌活性强，可开发成为新的抗菌药物。且本发明提供的当归地上部分的有效部位可以方便的和药学上可接受的载体制备成各种剂型的药物，方便临床应用。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位制备

(1)取干燥的当归地上部分10千克，粉碎，加入10倍量的浓度为80％乙醇，加热回流提取3次，每次2小时，减压回收溶剂，得浸膏，备用；

(2)取步骤(1)制备得到的浸膏，加水溶解，上D101型大孔吸附树脂进行柱层析，分别用水、浓度为40％至95％乙醇进行梯度洗脱，收集浓度为50％至60％乙醇洗脱部分，浓缩，干燥，得到含有金丝桃苷、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、对二羟乙基苯酚和三甲基苯甲酸等酚酸类成分的当归地上部分有效部位，得率为0.76％。

取以上制备得到的当归地上部分有效部位，加入药用淀粉，再加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

实施例2具有抗菌活性的当归地上部分的有效部位制备

(1)取干燥的当归地上部分10千克，粉碎，加入8倍量的浓度为85％乙醇，加热回流提取2次，每次3小时，减压回收溶剂，得浸膏，备用；

(2)取步骤(1)制备得到的浸膏，加水溶解，上D102型大孔吸附树脂进行柱层析，分别用水、浓度为40％至95％乙醇进行梯度洗脱，收集浓度为55％至60％乙醇洗脱部分，浓缩，干燥，得到含有金丝桃苷、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、对二羟乙基苯酚和三甲基苯甲酸等酚酸类成分的当归地上部分的有效部位，得率为0.85％。

取以上制备得到的当归地上部分的有效部位，加适量糊精、糖粉制软材，制粒机制粒，干燥、包装，即得颗粒剂。或取以上制备得到的当归地上部分有效部位，加入蒸馏水溶解，加入防腐剂和糖浆，即得糖浆剂。

实施例3当归地上部分的有效部位抗菌实验研究

1、实验方法1：将大肠杆菌接种于LB液体培养基，37℃培养6～8h，使其生长浓度达到1×10⁸个/mL，使用时采用LB液体培养基稀释成1×10⁵个/mL，即为待测菌液。取实施例1制备得到的当归地上部分的有效部位加入LB固体培养基中，分别制成含有10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL和50μg/mL的LB固体平板，同时设立空白对照组，即不加当归地上部分的有效部位。取0.1mL待测菌液均匀涂布在各种处理的平板上，37℃培养16～18h后，进行菌落计数，并计算抑菌率。抑菌率＝(空白菌落数-处理菌落数)/空白菌落数。

实验方法2：采用试管二倍稀释法测定当归地上部分有效部位对猪链球菌不同菌株的MIC。将猪链球菌接种于血清LB液体培养基，37℃培养6～8h，使其生长浓度达到1×10⁸个/mL，使用时采用血清LB液体培养基稀释成1×10⁵个/mL，即为待测菌液。分别取11支灭菌试管，加入待测菌液各2mL，在第1管加入2mL实施例1制备得到的当归地上部分有效部位的原液，按照倍比稀释的方法使1～10管药物依次成1∶2，1∶4至1∶1024浓度梯度，第11管作无药生长空白对照，于37℃培养16～18h，以无菌生长的试管中当归地上部分有效部位的最低稀释浓度为其MIC。

2、实验结果：具体实验结果如表1和表2所示：

表1当归地上部分有效部位抑制大肠杆菌活性测试结果

表2当归地上部分有效部位抑制猪链球菌不同菌株活性测试(MIC，μg/mL)

通过以上表1实验结果表明，本发明提供的当归地上部分有效部位具有很好的抑制大肠杆菌活性的作用，且随着当归地上部分有效部位浓度的升高，抑制大肠杆菌活性逐渐增强，呈现较好的量效关系，当归地上部分有效部位对大肠杆菌的MIC为50.0μg/mL；通过表2的实验结果表明，本发明提供的当归地上部分有效部位具有很好的抑制猪链球菌不同菌株的活性，其中对猪链球菌L89菌株的MIC为64.0μg/mL，对猪链球菌329菌株的MIC为64.0μg/mL，对猪链球菌NJ3菌株的MIC为64.0μg/mL。以上抗菌实验结果表明，本发明提供的当归地上部分有效部位具有抗菌活性强，抗菌谱广的优点，可以开发成为新一代的家畜抗菌制剂。

本发明充分利用当归中药材资源，变费为宝，通过对当归地上部分系统的化学成分研究和大量的药理活性实验筛选，去粗存精，制备得到具有较强抗菌活性的当归地上部分有效部位，实验结果表明，本发明提供的当归地上部分有效部位有效成分清楚，抗菌活性强，抗菌谱较广，不良反应少，有望开发成为新的家畜抗菌药物。

以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。