一种降低砷毒性的复方亚砷酸制剂

摘要

一种降低砷毒性的复方亚砷酸制剂，它涉及一种含三氧化二砷的复方亚砷酸制剂。它要解决目前亚砷酸药品毒性大的问题。本发明降低砷毒性的复方亚砷酸制剂由三氧化二砷、升麻素和溶剂组成。本发明降低砷毒性的复方亚砷酸制剂降低了三氧化二砷的毒性，减少了对正常细胞、组织、器官和生物体的损伤；而且不影响亚砷酸对癌细胞的治疗效果。

说明书

技术领域

本发明涉及一种含三氧化二砷的复方亚砷酸制剂。

背景技术

亚砷酸对急性早幼粒细胞白血病(APL)有一定疗效，其作用机制尚不明确。目前的研究显示染色体t易位(15∶17)是急性早幼粒细胞性白血病的重要细胞遗传学特征，该易位导致早幼粒细胞白血病基因PML和维甲酸受体a(RARa)基因融合，表达PML-RARa蛋白，这种融合蛋白的过度表达是APL发病的主要机制之一，过度表达的PML-RARa可抑制细胞的分化凋亡。实验发现三氧化二砷通过调节NB4细胞内PML-RARa的水平，使细胞重又纳入程序化死亡的正常轨道。

三氧化二砷(三氧化二砷溶解于水形成亚砷酸)可显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长，其机制与诱导肝癌细胞发生凋亡有关，且凋亡呈剂量依赖性和时间依赖性。细胞周期分析显示，1μg/mL三氧化二砷作用24～72h，使该细胞生长阻止于G2/M期。经三氧化二砷处理4天的食管癌细胞株EC8712和EC1.71出现显著的凋亡特征，并表现为剂量和时间依赖关系。

虽然现有的亚砷酸对癌细胞具有明显的抑制作用，并促进癌细胞凋亡，但是动物毒性试验表明其砷毒性大，对心脏、肝脏、肾脏、睾丸、红细胞和血红蛋白仍损害严重。因此，根据《医疗用毒性药品管理办法》的规定“亚砷酸注射液”已被列入毒性药品的管理品种。

发明内容

本发明要解决目前亚砷酸药物毒性大的问题，而提供的一种降低砷毒性的复方亚砷酸制剂。

降低砷毒性的复方亚砷酸制剂由三氧化二砷、升麻素和溶剂组成，三氧化二砷浓度为1mg/mL，升麻素与三氧化二砷的质量比为5～12.5∶1。

本发明降低砷毒性的复方亚砷酸制剂降低了三氧化二砷的毒性，减少了对正常细胞、组织、器官和生物体的损伤；而且不影响亚砷酸对癌细胞的治疗效果。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂由三氧化二砷、升麻素和溶剂组成，其中升麻素与三氧化二砷的质量比为5～12.5∶1。

将三氧化二砷和升麻素溶于溶剂即可形成本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂。本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂也可通过现有技术(如冻干、喷雾干燥等方法)将其制成粉剂或片剂等其他剂型。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：溶剂为质量浓度为0.9％的氯化钠溶液。其它与实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同点是：升麻素与三氧化二砷的质量比为10∶1。其它与实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二或三的不同点是：降低砷毒性的复方亚砷酸制剂中三氧化二砷浓度为0.5～1mg/mL。其它与实施方式一、二或三相同。

具体实施方式五：本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂由三氧化二砷、升麻素和质量浓度为0.9％的氯化钠溶液组成，三氧化二砷浓度为0.5～1mg/mL，升麻素与三氧化二砷的质量比为5～12.5∶1。

根据本实施方式配制出升麻素与三氧化二砷的质量比分别为5∶1(A组)、10∶1(B组)、12.5∶1(C组)、15∶1(D组)、20∶1(E组)和100∶1(F组)的六种不同升麻素浓度的亚砷酸溶液，其中三氧化二砷浓度为1mg/mL。

每15g果蝇培养基(购自于青岛海博生物技术有限公司)中分别加入1.5mL上述6种亚砷酸溶液(配制成含量为0.1[As(mg)/培养基(g)]的砷染毒果蝇培养基)，让果蝇自由取食。用哈尔滨伊达药业有限公司生产的亚砷酸注射液(三氧化二砷浓度为1mg/mL)1.5mL加入15g果蝇培养基作为对照组，以1.5mL生理盐水的果蝇培养基作为空白组进行果蝇存活实验。果蝇随机选取，每实验组果蝇60只。果蝇存活实验结果如表1。

表1 果蝇存活率

果蝇存活实验结果说明本实施方式(升麻素与三氧化二砷的质量比为5～12.5∶1)降低砷毒性的复方亚砷酸制剂毒性低，能够有效降低三氧化二砷对果蝇机体的损害，提高其存活率。由于果蝇作为毒性药物筛选常用的模式生物，其存活结果对临床试验具有一定借鉴意义，可以避免急性中毒。实验结果还证明大剂量添加升麻素，虽然在短期(1～2天)内能够提高果蝇的存活率，但之后果蝇大量死亡、存活率大幅降低，说明降毒物质——升麻素在药品中的浓度并非越高越好。

用三组不同升麻素浓度的本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂(三氧化二砷浓度均为500μg/mL，G组升麻素浓度为2500μg/mL、H组升麻素浓度为5000μg/mL、I组升麻素浓度为625μg/mL)对早幼粒白血病NB4细胞进行抑制试验。将100μL、浓度为2×10⁴个/mL的早幼粒白血病NB4细胞接种于96孔板，然后分别加入三组本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂10μL：G组(升麻素与三氧化二砷的质量比5∶1)、H组(升麻素与三氧化二砷的质量比10∶1)和I组(升麻素与三氧化二砷的质量比12.5∶1)；并加入稀释的哈尔滨伊达药业有限公司生产的亚砷酸注射液10μL作为对照组(三氧化二砷浓度为500μg/mL)。

采用CCK-8检测细胞增殖活性，在450nm波长处测定，并以对照组CCK-8值为1，获得各组实验数据如表2所示。

表2 NB4细胞CCK-8细胞增殖活性实验

 G组(5∶1) H组(10∶1) I组(12.5∶1)  对照组  24h 0.957 0.922 0.927  1  48h 0.816 0.785 0.772  1

实验进行48h即可发现本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂对早幼粒白血病NB4细胞生长具有明显的抑制作用，治疗效果基本不受影响，可以替代现有亚砷酸药品用于治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)。

用三组不同升麻素浓度的本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂(三氧化二砷浓度均为500μg/mL，G组升麻素浓度为2500μg/mL、H组升麻素浓度为5000μg/mL、I组升麻素浓度为6250μg/mL)对正常大鼠心肌H9c2细胞进行抑制试验。将100μL、浓度为2×10⁴个/mL的正常大鼠心肌H9c2细胞接种于96孔板，然后分别加入三组本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂10μL：G组(升麻素与三氧化二砷的质量比5∶1)、H组(升麻素与三氧化二砷的质量比10∶1)和I组(升麻素与三氧化二砷的质量比12.5∶1)；并加入稀释的哈尔滨伊达药业有限公司生产的亚砷酸注射液10μL作为对照组(三氧化二砷浓度为500μg/mL)，加入生理盐水10μL作为空白组。

采用CCK-8检测细胞增殖活性，在450nm波长处测定，并以空白组CCK-8值为1，获得各组实验数据如表3所示。

表3 H9c2细胞CCK-8细胞增殖活性实验

 G组(5∶1)  H组(10∶1)  I组(12.5∶1)  对照组  空白组  24h 0.832  0.925  0.909  0.687  1  48h 0.841  0.836  0.840  0.778  1

实验进行48h即可发现本实施方式降低砷毒性的复方亚砷酸制剂对正常大鼠心肌H9c2细胞生长具有明显的保护作用，与对照组相比显著降低亚砷酸的毒性。结合上述NB4细胞抑制实验，发现治疗效果基本不受影响并能保护正常细胞，可以替代现有亚砷酸药品用于治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)。