用作丙型肝炎病毒抑制剂的构象受限的联苯衍生物

摘要

本公开涉及用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、组合物和方法。还涉及包含这种化合物的药用组合物和使用这些化合物治疗HCV感染的方法。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求了2008年2月13日提交的序列号为61/028,266的美国临时申请的权益。

本公开广泛涉及抗病毒化合物，更特别涉及可抑制由丙型肝炎病毒(HCV)编码的NS5A蛋白功能的化合物、包含这种化合物的组合物和抑制NS5A蛋白功能的方法。

HCV为主要的人类病原体，世界上估计有1.7亿人感染HCV，是感染1型人免疫缺陷病毒的人数的约5倍。这些HCV感染的个体的大部分发展为严重的进行性肝病，包括肝硬化和肝细胞癌。

目前，最有效的HCV疗法采用α-干扰素和利巴韦林的组合，对40％的患者持续有效。最近的临床结果表明，当采用单一疗法时，聚乙二醇化α-干扰素优于未修饰的α-干扰素。但是，即使采用聚乙二醇化α-干扰素和利巴韦林组合的实验治疗方案，大部分患者的病毒载量也不能持续降低。因此，发展治疗HCV感染的有效疗法是明确而长期的需要。

HCV为正链RNA病毒。根据推断的氨基酸序列和在5’非翻译区的广泛相似性的比较，HCV被划分为黄病毒科中独立的属。黄病毒科中的所有成员都具有包含通过单个、不间断、开放读码框的翻译编码所有已知病毒特异性蛋白的正链RNA基因组的包膜病毒体。

在HCV基因组的核苷酸和编码的氨基酸序列中发现了大量的异质性。至少已鉴定出6种主要的基因型，已描述了超过50种亚型。HCV主要基因型在世界上的分布不同，尽管对基因型在发病机理和治疗方面的可能影响作了大量研究，但HCV遗传异质性的临床意义仍然令人难以捉摸。

单链HCV RNA基因组长度约为9500个核苷酸，具有编码含约3000个氨基酸的单个大型多蛋白的单个开放读码框(ORF)。在受感染的细胞中，此多蛋白在多个位点被细胞和病毒蛋白酶裂解，产生结构和非结构(NS)蛋白。至于HCV，成熟非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受两种病毒蛋白酶的影响。第一种被认为是金属蛋白酶，在NS2-NS3接头(junction)裂解；第二种为包含在NS3(本文也称为NS3蛋白酶)N-末端区的丝氨酸蛋白酶，介导NS3下游所有随后的裂解，采用顺反两种方式，在NS3-NS4A裂解位点为顺式方式，在其余NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点为反式方式。NS4A蛋白看来似乎具有多种功能，作为NS3蛋白酶的辅因子，或许帮助NS3和其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3蛋白与NS4A的复合物的形成看来对所有位点的加工事件、增强蛋白水解效率是必需的。NS3蛋白也展现出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B(在本文中也称为HCV聚合酶)为与HCV复制有关的RNA-依赖型RNA聚合酶。

需要选择性抑制HCV病毒复制的可有效治疗HCV感染患者的化合物。特别地，需要可有效抑制NS5A蛋白功能的化合物。在如Tan，S.-L.，Katzel，M.G.Virology 2001，284，1-12；和Park，K.-J.；Choi，S.-H，J.Biological Chemistry 2003中描述了HCV NS5A蛋白。

本公开的第一方面提供了式(I)化合物

或其药学可接受盐，其中

u和u’独立为0、1、2或3；

D和E各自为包含1、2、或3个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-元芳环；

每个R¹和R¹’独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、甲酰基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、-NR^aR^b、(NR^aR^b)烷基和(NR^aR^b)羰基；

R²和R²’，与连接它们的碳原子一起形成任选包含1个或2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-至8-元不饱和环；其中所述5-至8-元不饱和环任选被1、2或3个独立选自下列的取代基取代：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷基、芳基磺酰基、羧基、甲酰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、羟基烷基、-NR^aR^b、(NR^aR^b)烷基、(NR^aR^b)羰基、氧代和螺环；

R³和R³’各自独立选自氢、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、芳基烷氧基羰基、羧基、卤代烷基、杂环基烷基、羟基烷基、(NR^aR^b)羰基和三烷基甲硅烷基烷氧基烷基；

R⁴和R⁴’各自独立选自

其中

每个m独立为0、1或2；

每个o独立为1、2或3；

每个s独立为0、1、2、3或4；

每个X独立选自O、S、S(O)、SO₂、CH₂、CHR⁵和C(R⁵)₂；条件是当n为0时，X选自CH₂、CHR⁵和C(R⁵)₂；

每个R⁵独立选自烷氧基、烷基、芳基、卤素、卤代烷基、羟基和-NR^aR^b，其中烷基可任选与相邻碳原子形成稠合3-至6元环，其中所述3-至6-元环任选被1个或2个烷基取代；

每个R⁶独立选自氢和R¹⁰-C(O)-，和

R¹⁰-C(S)-；

R⁷选自氢和烷基；

R⁸和R⁹各自独立选自氢、烯基、烷氧基烷基、烷基、卤代烷基和(NR^aR^b)烷基；或

R⁸和R⁹，与连接它们的碳原子一起形成任选包含1个或2个选自NR^z、O和S的杂原子的5或6元饱和环；其中R^z选自氢和烷基；和

每个R¹⁰独立选自烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷基、烷基羰基烷基、芳基、芳基烯基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基氧基烷基、环烷基、(环烷基)烯基、(环烷基)烷基、环烷基氧基烷基、卤代烷基、杂环基、杂环基烯基、杂环基烷氧基、杂环基烷基、杂环基氧基烷基、羟基烷基、-NR^cR^d、(NR^cR^d)烯基、(NR^cR^d)烷基和(NR^cR^d)羰基。

在本公开的第一个方面的第一个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学可接受盐，其中R⁴和R⁴’各自为

在第一个方面的第二个实施方案中，每个m为1。在第一个方面的第三个实施方案中，每个X为CH₂。

在本公开的第一个方面的第三个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学可接受盐，其中R⁴和R⁴’各自为

和

其中s为0。

在本公开的第一个方面的第四个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学可接受盐，其中R⁴和F⁴’各自为

和

其中每个R⁶为R¹⁰-C(O)-。在第一个方面的第五个实施方案中，每个R¹⁰独立选自芳基烷基、(环烷基)烷基和(NR^cR^d)烷基。

在本公开的第一个方面的第六个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学可接受盐，其中u和u’各自为0。

在本公开的第一个方面的第七个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学可接受盐，其中R³和R³’各自为氢。

在本公开的第一个方面的第八个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学可接受盐，其中R²和R²’与连接它们的原子一起形成任选包含氧或氮原子的5-元环，其中所述环任选被一个或两个独立选自下列的取代基取代：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷基、芳基磺酰基、羧基、甲酰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、羟基烷基、-NR^aR^b、(NR^aR^b)烷基、(NR^aR^b)羰基和氧代。

在本公开的第一个方面的第九个实施方案中，提供了式(I)化合物或其药学可接受盐，其中R²和R²’与连接它们的原子一起形成包含选自氧和氮的杂原子的7-元环，其中所述环任选被1、2、或3个独立选自下列的取代基取代：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷基、芳基磺酰基、羧基、甲酰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基、羟基烷基、-NR^aR^b、(NR^aR^b)烷基、(NR^aR^b)羰基和氧代。

在本公开的第二个方面提供了式(II)的化合物

或其药学可接受盐，其中

A不存在或为CR¹¹R¹²；

G选自CR¹¹R¹²、O和NR¹³；

J不存在或为CR¹¹R¹²；

R³和R⁴各自独立选自氢和R¹⁰-C(O)-；

每个R¹⁰独立选自芳基烷基、(环烷基)烷基和(NR^cR^d)烷基；

每个R¹¹和R¹²独立选自氢、烷基和-NR^aR^b；或

R¹¹和R¹²一起形成氧代基团；或

R¹¹和R¹²与连接它们的碳原子一起形成3-至8-元螺环；和

每个R¹³独立选自氢、烷氧基烷基、烷基和芳基磺酰基。

在本公开的第三个方面提供了包含式(I)化合物或其药学可接受盐和药学可接受载体的组合物。在第三个方面的第一个实施方案中所述组合物还包含一个或两个具有抗HCV活性的另外的化合物。在第三个方面的第二个实施方案中至少一个另外的化合物为干扰素或利巴韦林。在第三个方面的第三个实施方案中所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合干扰素(concensus interferon)、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素(lymphoblastiod interferon)τ。

在本公开的第三个方面的第四个实施方案中，提供了包含式(I)化合物或其药学可接受盐、药学可接受载体和一个或两个具有抗HCV活性的另外的化合物的组合物，其中至少一个另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞响应的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特(Imiqimod)、利巴韦林、肌苷5’-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。

在本公开的第三个方面的第五个实施方案中，提供了包含式(I)化合物或其药学可接受盐、药学可接受载体和一个或两个具有抗HCV活性的另外的化合物的组合物，其中至少一种另外的化合物可有效抑制选自下列的靶的功能用于治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV流出、HCV NS5A蛋白和IMPDH。

在本公开的第四个方面，提供了治疗患者的HCV感染的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学可接受盐。在第四方面的第一个实施方案中，所述方法还包括在式(I)化合物或其药学可接受盐之前、之后或同时给予一种或两种另外的化合物。在第四方面的第二个实施方案中，至少一种另外的化合物为干扰素或利巴韦林。在第四方面的第三个实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化干扰素α、复合干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素τ。

IMPDH用于HCV感染的治疗。

在本公开第四方面的第四个实施方案中，提供了治疗患者HCV感染的方法，所述方法包括在式(I)化合物或其药学可接受盐之前、之后或同时给予所述患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学可接受盐和一种或两种另外的具有抗HCV活性的化合物，其中至少一种另外的化合物选自白介素2、白介素6、白介素12、增强1型辅助T细胞响应的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5’-一磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺。

在本公开第四方面的第五个实施方案中，提供了治疗患者HCV感染的方法，所述方法包括在式(I)化合物或其药学可接受盐之前、之后或同时给予所述患者治疗有效量的式(I)化合物或其药学可接受盐和一种或两种另外的具有抗HCV活性的化合物，其中至少一种另外的化合物可有效抑制选自下列的靶的功能用于治疗HCV感染：HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV装配、HCV流出、HCVNS5A蛋白和IMPDH。

本公开的其它实施方案可包括两种或更多本文公开的实施方案和/或方面的适当组合。

根据下面提供的说明书可明白本公开的再其它的实施方案和方面。

本公开的化合物还可以互变异构体形式存在；因此本公开也包括所有互变异构形式。

本公开的说明应按化学键的法则和原理来理解。在一些情况下，为了适应在任何给定位置的取代基，可能必须除去氢原子。

应了解本公开涵盖的化合物为稳定的适合用作药剂的化合物。

在分子中特定位置的任何取代基或变量(如R¹、R²、R⁵、R⁶等)的定义不依赖于其在那个分子中其它位置的定义。如，当u为2时，两个R¹基团的每个可相同或不同。

说明书中的所有的专利、专利申请和参考文献都通过应用以其整体并入本文。在不一致的情况下，以本公开，包括定义，为准。

如本发明说明书所用，下面的术语具有所示的意义：

除非上下文中明确指出，否则本文所用单数形式“a”、“an”和“the”包括复数(plural reference)。

除非另有说明，本公开的所有芳基、环烷基和杂环基如在每个其各自的定义中所述被取代。例如，芳基烷基的芳基部分可如术语‘芳基’的定义中所述被取代。

本文所用术语“烯基”是指包含至少一个碳-碳双键的2-6个碳原子的直链或支链基团。

本文所用术语“烯基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烯基。

本文所用术语“烯基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烯基氧基。

本文所用术语“烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基。

本文所用术语“烷氧基烷基”是指被一个、两个或三个烷氧基取代的烷基。

本文所用术语“烷氧基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基烷基。

本文所用术语“烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷氧基。

本文所用术语“烷氧基羰基烷基”是指被一个、两个或三个烷氧基羰基取代的烷基。

本文所用术语“烷基”是指衍生自包含1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的基团。在本公开的化合物中，当m为1或2；X为CHR⁵，且R⁵为烷基时，每个烷基可任选与相邻碳原子形成稠合3-至6-元环，提供下面所示的一种结构：

其中z为1、2、3或4，w为0、1或2，R⁵⁰为烷基。当w为2时，两个R⁵⁰烷基可相同或不同。

本文所用术语“烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的烷基。

本文所用术语“烷基羰基烷基”是指被一个、两个或三个烷基羰基取代的烷基。

本文所用术语“烷基羰基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基羰基。

本文所用术语“亚烷基”是指衍生自包含1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的二价基团。

本文所用术语“烷基硫基(sulfanyl)”是指通过硫原子与母体分子部分连接的烷基。

本文所用术语“烷基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的烷基。

本文所用术语“芳基”是指苯基或二环稠合环系，其中一个环为苯基或两个环都为苯基。二环稠合环系包含与4-至6-元芳香性或非芳香性碳环稠合的苯基。本公开的芳基可通过基团中的任何可取代的碳原子与母体分子部分连接。芳基的代表性实例包括但不限于茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。本公开的芳基任选被1、2、3、4或5个独立选自下列的取代基取代：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NR^xR^y、(NR^xR^y)烷基、氧代和-P(O)OR₂，其中每个R独立选自氢和烷基；且其中芳基烷基和杂环基烷基的烷基部分为未取代的，且其中第二芳基、芳基烷基的芳基部分、芳基羰基的芳基部分、杂环基和杂环基烷基和杂环基羰基的杂环基部分任选被1、2或3个独立选自下列的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。

本文所用术语“芳基烯基”是指被1、2、或3个芳基取代的烯基。

本文所用术语“芳基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分连接的芳基。

本文所用术语“芳基烷氧基烷基”是指被1、2、或3个芳基烷氧基取代的烷基。

本文所用术语“芳基烷氧基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷氧基烷基。

本文所用术语“芳基烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷氧基。

本文所用术语“芳基烷基”是指被1、2或3个芳基取代的烷基。所述芳基烷基的烷基部分任选被1个或2个独立选自下列的另外的基团进一步取代：烷氧基、烷基羰基氧基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基和-NR^cR^d，其中所述杂环基任选被1或2个独立选自下列的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、未取代芳基、未取代芳基烷氧基、未取代芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NR^xR^y。

本文所用术语“芳基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基烷基。

本文所用术语“芳基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基。

本文所用术语“芳基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的芳基。

本文所用术语“芳基氧基烷基”是指被1、2或3个芳基氧基取代的烷基。

本文所用术语“芳基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的芳基氧基。

本文所用术语“芳基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的芳基。

本文所用术语“Cap”和“cap”是指置于末端含氮环即式(I)化合物的吡咯烷环的氮原子上的基团。应了解“Cap”或“cap”可指用于将基团加在末端含氮环或终产物片段上的试剂，即“Cap-51”或“在实施例5中发现的Cap-51片段”。

本文所用术语“羰基”是指-C(O)-。

本文所用术语“羧基”是指-CO₂H。

本文所用术语“氰基”是指-CN。

本文所用术语“环烷基”是指具有3-7个碳原子和0个杂原子的饱和单环烃环系。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环戊基和环己基。本公开的环烷基任选被1、2、3、4或5个独立选自下列的取代基取代：烷氧基、烷基、芳基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、杂环基、羟基、羟基烷基、硝基和-NR^xR^y，其中所述芳基和杂环基任选被1、2、或3个独立选自下列的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和硝基。

本文所用术语“(环烷基)烯基”是指被1、2或3个环烷基取代的烯基。

本文所用术语“(环烷基)烷基”是指被1、2或3个环烷基取代的烷基。所述(环烷基)烷基的烷基部分任选被1或2个独立选自羟基和-NR^cR^d的基团进一步取代。

本文所用术语“环烷基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的环烷基。

本文所用术语“环烷基氧基烷基”是指被1、2或3个环烷基氧基取代的烷基。

本文所用术语“环烷基磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的环烷基。

本文所用术语“甲酰基”是指-CHO。

本文所用术语“卤代”和“卤素”是指F、Cl、Br或I。

本文所用术语“卤代烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的卤代烷基。

本文所用术语“卤代烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的卤代烷氧基。

本文所用术语“卤代烷基”是指被1、2、3或4个卤素原子取代的烷基。

本文所用术语“杂环基”是指包含1、2、3或4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-、5-、6-、或7-元环。所述4-元环具有0个双键，5-元环具有0-2个双键，6-和7-元环具有0-3个双键。术语“杂环基”还包括其中杂环基环与另一单环杂环基或4-至6-元芳香性或非芳香性碳环稠合的二环基团；以及桥二环基团如7-氮杂二环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂二环[2.2.2]辛-2-基和2-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基。本公开的杂环基可通过基团中的任何碳原子或氮原子与母体分子部分连接。杂环基的实例包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异噻唑基、异唑基、吗啉基、唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基、硫代吗啉基、7-氮杂二环[2.2.1]庚-7-基、2-氮杂二环[2.2.2]辛-2-基和2-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基。本公开的杂环基任选被1、2、3、4或5个独立选自下列的取代基取代：烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、第二杂环基、杂环基烷基、杂环基羰基、羟基、羟基烷基、硝基、-NR^xR^y、(NR^xR^y)烷基、和氧代，其中芳基烷基和杂环基烷基的烷基部分为未取代的，且其中芳基、芳基烷基的芳基部分、芳基羰基的芳基部分、第二杂环基以及杂环基烷基和杂环基羰基的杂环基部分任选被1、2或3个独立选自下列的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。

本文所用术语“杂环基烯基”是指被1、2或3个杂环基取代的烯基。

本文所用术语“杂环基烷氧基”是指通过烷氧基与母体分子部分连接的杂环基。

本文所用术语“杂环基烷氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基烷氧基。

本文所用术语“杂环基烷基”是指被1、2或3个杂环基取代的烷基。杂环基烷基的烷基部分任选被1或2个独立选自下列的另外的基团进一步取代：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NR^cR^d，其中所述芳基任选被1或2个独立选自下列的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、未取代芳基、未取代芳基烷氧基、未取代芳基烷氧基羰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基、羟基和-NR^xR^y。

本文所用术语“杂环基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基烷基。

本文所用术语“杂环基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基。

本文所用术语“杂环基氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的杂环基。

本文所用术语“杂环基氧基烷基”是指被1、2或3个杂环基氧基取代的烷基。

本文所用术语“杂环基氧基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的杂环基氧基。

本文所用术语“羟基”是指-OH。

本文所用术语“羟基烷基”是指被1、2或3个羟基取代的烷基。

本文所用术语“羟基烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的羟基烷基。

本文所用术语“硝基”是指-NO₂。

本文所用术语“-NR^aR^b”是指两个基团，R^a和R^b，其通过氮原子与母体分子部分连接。R^a和R^b独立选自氢、烯基和烷基。

本文所用术语“(NR^aR^b)烷基”是指被1、2或3个-NR^aR^b基团取代的烷基。

本文所用术语“(NR^aR^b)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NR^aR^b基团。

本文所用术语“-NR^cR^d”是指两个基团，R^c和R^d，其通过氮原子与母体分子部分连接。R^c和R^d独立选自氢、烯基氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺酰基、环烷基、环烷基磺酰基、甲酰基、卤代烷氧基羰基、杂环基、杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基、杂环基氧基羰基、羟基烷基羰基、(NR^eR^f)烷基、(NR^eR^f)烷基羰基、(NR^eR^f)羰基、(NR^eR^f)磺酰基、-C(NCN)OR’和-C(NCN)NR^xR^y，其中R’选自烷基和未取代苯基，且其中芳基烷基、芳基烷基羰基、杂环基烷基和杂环基烷基羰基的烷基部分任选被一个-NR^eR^f基团进一步取代；且其中芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基和芳基磺酰基的芳基部分、杂环基以及杂环基烷氧基羰基、杂环基烷基、杂环基烷基羰基、杂环基羰基和杂环基氧基羰基的杂环基部分任选被1、2或3个独立选自下列的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。

本文所用术语“(NR^cR^d)烯基”是指被1、2或3个-NR^cR^d基团取代的烯基。

本文所用术语“(NR^cR^d)烷基”是指被1、2或3个-NR^cR^d基团取代的烷基。(NR^cR^d)烷基的烷基部分任选被1或2个选自下列的另外的基团进一步取代：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基硫基、芳基烷氧基烷基羰基、羧基、杂环基、杂环基羰基、羟基和(NR^eR^f)羰基；其中所述杂环基任选被1、2、3、4或5个独立选自下列的取代基进一步取代：烷氧基、烷基、氰基、卤素、卤代烷氧基、卤代烷基和硝基。

本文所用术语“(NR^cR^d)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NR^cR^d基团。

本文所用术语“-NR^eR^f”是指两个基团，R^e和R^f，其通过氮原子与母体分子部分连接。R^e和R^f独立选自氢、烷基、未取代芳基、未取代芳基烷基、未取代环烷基、未取代(环烷基)烷基、未取代杂环基、未取代杂环基烷基、(NR^xR^y)烷基和(NR^xR^y)羰基。

本文所用术语“(NR^eR^f)烷基”是指被1、2或3个-NR^eR^f基团取代的烷基。

本文所用术语“(NR^eR^f)烷基羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的(NR^eR^f)烷基。

本文所用术语“(NR^eR^f)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NR^eR^f基团。

本文所用术语“(NR^eR^f)磺酰基”是指通过磺酰基与母体分子部分连接的-NR^eR^f基团。

本文所用术语“-NR^xR^y”是指两个基团，R^x和R^y，其通过氮原子与母体分子部分连接。R^x和R^y独立选自氢、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未取代芳基、未取代芳基烷氧基羰基、未取代芳基烷基、未取代环烷基、未取代杂环基和(NR^x’R^y’)羰基，其中R^x’和R^y’独立选自氢和烷基。

本文所用术语“(NR^xR^y)烷基”是指被1、2或3个-NR^xR^y基团取代的烷基。

本文所用术语“(NR^xR^y)羰基”是指通过羰基与母体分子部分连接的-NR^xR^y基团。

本文所用术语“氧代”是指＝O。

本文所用术语“螺环基”是指亚烷基二基，其每个末端与母体分子部分的同一碳原子连接形成二环部分。

本文所用术语“磺酰基”是指-SO₂-。

本文所用术语“三烷基甲硅烷基”是指-SiR₃，其中R为烷基。R基团可相同或不同。

本文所用术语“三烷基甲硅烷基烷基”是指被1、2或3个三烷基甲硅烷基取代的烷基。

本文所用术语“三烷基甲硅烷基烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的三烷基甲硅烷基烷基。

本文所用术语“三烷基甲硅烷基烷氧基烷基”是指被1、2或3个三烷基甲硅烷基烷氧基取代的烷基。

本公开化合物中存在不对称中心。这些中心由符号“R”或“S”表示，根据手性碳原子周围的取代基的构型。应了解，本公开包括具有抑制NS5A能力的所有立体化学异构形式或其混合物。化合物的个体立体异构体可从包含手性中心的市售起始原料合成制备，或通过制备对映异构产物混合物，然后通过分离，如转化为非对映异构体混合物，然后通过分离或重结晶、色谱技术来制备，或直接在手性色谱柱上分离对映异构体来制备。特定立体化学的起始化合物可购买得到或通过本领域已知技术制备和拆分。

本公开的某些化合物还可以可分离的不同的稳定构象形式存在。由于不对称单键附近的受限旋转，如由于立体阻碍或环张力，扭转不对称使得不同的构象异构体可以分离。本公开包括这些化合物的每个构象异构体及其混合物。

术语″本公开的化合物″及同等的表达，是指包括式(I)化合物及其药学可接受对映异构体、非对映异构体和盐。同样，中间体是指包括上下文中所允许的它们的盐。

本公开的化合物可以药学可接受盐形式存在。本文所用术语“药学可接受盐”表示本公开化合物的盐或两性离子形式，其为水或油溶性或可分散的，其在可靠医学判断范围内，适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或与合理利益/风险比率相称的其它问题或并发症，且对其预期用途有效。所述盐可在化合物的最终分离和纯化期间制备，或者单独将合适的氮原子与合适的酸反应来制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、重硫酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡萄糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐。可用于形成药学可接受加成盐的酸的实例包括无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，和有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。

碱加成盐可在化合物最终分离和纯化期间通过将羧基与合适的碱如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或与氨水或有机伯、仲或叔胺反应来制备。药学可接受盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒季胺阳离子如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺、三丁基胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己基胺、普鲁卡因、二苄基胺、N，N-二苄基苯乙胺和N，N’-二苄基乙二胺。其它用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。

当可能用于治疗时，治疗有效量的式(I)化合物及其药学可接受盐可以化学原料给药，可能将活性成分制成药用组合物。因此，本公开还提供了药用组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学可接受盐，和一种或多种药学可接受载体、稀释剂或赋形剂。术语“治疗有效量”是指足以显示有意义的患者利益如病毒载量降低的每种活性组分的总量。当用于个体的活性成分时，单独给药，所述术语单独指那个成分。当应用于组合时，所述术语是指联合、连续或同时给予达到治疗效果的活性成分的混合量。式(I)化合物及其药学可接受盐如上所述。载体、稀释剂、赋形剂必须为可接受的，可与制剂中的其他成分配伍并对其受者无害。本公开的另一方面还提供了制备药物制剂的方法，所述方法包括将式(I)化合物或其药学可接受盐与一种或多种药学可接受载体、稀释剂或赋形剂混合。术语“药学可接受”是指在可靠医学判断范围内，适用于与患者的组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或与合理利益/风险比率相称的其它问题或并发症，并对其预期用途有效的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

药物制剂可存在于每单位剂量包含预定量的活性成分的单位剂型中。剂量水平在约0.01和约250毫克/公斤(″mg/kg″)体重/天之间，优选在约0.05和约100mg/kg体重/天之间的本公开化合物通常以单一疗法来预防和治疗HCV介导的疾病。通常，本公开的药物组合物每天给药约1-5次，或者进行连续输注。这样的给药可用作慢性或急性治疗。与载体材料混合制备单个剂型的活性成分的量根据所治疗的病症、所述病症的严重性、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄速率、治疗持续时间、患者的年龄、性别、体重和病症而不同。优选的单位剂量制剂包含如上所述的日剂量或分剂量或其适当分数的活性成分。治疗基本上可从小于化合物最佳剂量的小剂量开始。然后，小幅度增加剂量直至达到最佳效果。通常，最希望的化合物给药浓度水平为可提供抗病毒有效结果而不引起有害或有毒的副作用。

当本公开的组合物包含本公开的化合物和一种或多种另外的治疗或预防药物组合时，化合物和另外的药物通常的剂量水平为在单一治疗方案中正常给药剂量的约10-150％，更优选为约10和80％之间。

药物制剂可适用于通过任何适当途径给药，如通过口腔(包括含服或舌下给药)、直肠、鼻腔、局部(包括含服、舌下给药或经皮给药)、阴道、或胃肠外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、膜内、损伤内(intralesional)、静脉内或真皮内注射或输注)途径。这样的制剂可通过药剂学领域中任何方法制备，如将活性成分与载体或赋形剂混合。优选口服给药或注射给药。

适于口服给药的药物制剂可为分离的单位如胶囊或片剂；散剂或颗粒剂；在水或非水液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫或whips；或水包油液体乳剂或油包水乳剂。

例如，用于口服给药的片剂或胶囊，活性药物组分可与口服、无毒药学可接受惰性载体如乙醇、甘油、水等组合。散剂通过将化合物研细为合适的细小尺寸并与同样研细的药用载体如可食用碳水化合物如淀粉或甘露醇混合来制备。也可存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。

可通过制备如上所述的粉末混合物并充填所形成的胶囊壳来制备胶囊。在充填操作之前，可向粉末混合物中加入助流剂和润滑剂如胶体硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以提高胶囊摄入时药物的利用度。

此外，当需要或必需时，还可向混合物中掺入合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成胶乳阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土(betonite)、黄单胞菌胶等。如，通过制备粉末混合物，制粒或预压片，加入润滑剂和崩解剂，压片来制备片剂。通过将适当研细的化合物与稀释剂或如上所述的基质(base)，任选地，与粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶剂或聚乙烯吡咯烷酮、溶液延缓剂如石蜡、再吸收促进剂如四价盐(quaternary salt)和/或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合来制备粉末混合物。粉末混合物可通过与粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯植物胶(acadiamucilage)或纤维素或聚合物材料的溶液湿法制粒，然后加压过筛。作为另一种制粒方法，粉末混合物可运行通过压片机，结果是将不完全成形的预压片打成粒料。可加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油来润滑粒料以防粘在压片冲模(tablet forming dies)上。然后将润滑的混合物压成片剂。本公开的化合物还可与自流惰性载体(freeflowing inert carrier)混合并直接压成片剂无需经过制粒或预压片步骤。可提供由虫胶密封包衣、糖衣或聚合材料和蜡抛光包衣组成的透明或不透明保护包衣。可向这些包衣中加入染料以区别不同的单位剂量。

口服液体如溶液剂、糖浆剂和酏剂可被制成剂量单位形式以使给定数量包含预定量的化合物。糖浆剂可通过将化合物溶解在适当调味的含水溶液中来制备，而酏剂通过采用无毒载体来制备。还可加入增溶剂和乳化剂如乙氧化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇酯、防腐剂、调味添加剂如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人工甜味剂等。

当适当时，用于口服给药的剂量单位制剂可为微胶囊化的。还可通过如包衣或将微粒物质包埋在聚合物、蜡等中来制备延长或持续释放的制剂。

式(I)化合物及其药学可接受盐还可以脂质体递药系统形式给药，如小单室脂质体、大单室脂质体和多室脂质体。可从多种磷脂(phopholipids)如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱(phophatidylcholines)来制备脂质体。

式(I)化合物及其药学可接受盐还可采用化合物分子偶合的单克隆抗体作为个体载体来递送。所述化合物还可与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶合。这种聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺酚(polyhydroxypropylmethacrylamidephenol)、聚羟基乙基天冬酰胺酚(polyhydroxyethylaspartamidephenol)或被palitoyl残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，所述化合物可与一类可有效完成药物的控制释放的生物可降解聚合物偶合，如聚乳酸、聚-ε-己内酯(polepsiloncaprolactone)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。

适于经皮给药的药物制剂可为与受者表皮持续密切接触较长时间的分离的贴剂。例如，活性成分可通过Pharmaceutical Research1986，3(6)，318中广泛描述的离子电渗疗法从贴剂递送。

适于局部给药的药物制剂可被制成软膏、乳膏、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。

适于直肠给药的药物制剂的存在形式可为栓剂或灌肠剂。

其中载体为固体的适于鼻内给药的药物制剂包括粒径为如20-50微米范围的过程粉末，其以从鼻中吸入的形式给药即通过鼻道从靠近鼻子的粉末容器中迅速吸入。其中载体为液体的适于鼻腔喷雾或滴鼻剂给药的制剂包括活性成分的水或油溶液。

适于吸入给药的药物制剂包括细颗粒粉剂或雾，其可通过各种类型的计量、剂量增压气雾剂、喷雾器或吸入器产生。

适于阴道给药的药物制剂可为阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。

适于胃肠外给药的药物制剂包括可包含抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂和使制剂与预期受者的血液等渗的soutes的水和非水无菌注射液；和可包含助悬剂和增稠剂的水和非水无菌混悬液。所述制剂可置于单位剂量或多剂量容器中，如密封的安瓿和管形瓶，可储存在冷冻干燥(冻干)条件下，在临用前仅需加入无菌液体载体如注射用水。可从无菌粉末、颗粒和片剂制备临时注射液和混悬液。

应了解，除上面特别提到的成分外，所述制剂还可包括其它与所讨论制剂类型相关的本领域中的常规试剂，如适于口服的试剂可包括调味剂。

术语″患者″包括人和其它哺乳动物。

术语″治疗″是指：(i)预防疾病、病症或症状在易感染但尚未诊断出疾病、病症和/或病症的患者中的发生；(ii)抑制疾病、病症或症状，即阻止其发展；和(iii)减轻疾病、病症或症状，即，使疾病、病症和/或症状消退。

本公开的化合物还可与环孢霉素如环孢霉素A一起给药。环孢霉素A在临床试验中显示可有效对抗HCV(Hepatology 2003，38，1282；Biochem.Biophys.Res.Commun.2004，313，42；J.Gastroenterol.2003，38，567)。

下面的表1列出了可与本公开化合物一起给药的一些示例性化合物。本公开的化合物可在联合疗法中与其它抗HCV活性化合物共同给药、单独给药或通过将化合物混入组合物给药。

表1

本公开的化合物还可用作实验室试剂。化合物可作为病毒复制测定的设计、动物测定系统和结构生物学研究的验证的研究工具，以进一步增强对HCV疾病机制的了解。此外，本公开的化合物可用于确立或确定其它抗病毒化合物的结合位点，如通过竞争抑制作用。

本公开的化合物还可用于治疗或预防材料的病毒污染，因此可降低接触这些材料如血液、组织、手术器械和服装、实验室仪器和服装，以及采血或输血器械和材料的实验室人员或医务人员或患者感染病毒的风险。

本公开意在涵盖通过合成方法制备的或通过包括人或动物体内(体内)发生的或体外发生的代谢方法得到的式(I)化合物。

本申请所用的缩写，特别包括在下面的示例性方案和实施例中所用的缩写，都是本领域熟练技术人员众所周知的。一些所用的缩写如下：HATU为O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐；NH₄OAc为乙酸铵；Boc或BOC为叔丁氧基羰基；NBS为N-溴代丁二酰亚胺；TFA为三氟乙酸；MeOH为甲醇；DMSO为二甲基亚砜；THF为四氢呋喃；RT为室温或保留时间(根据上下文)；t_R为保留时间；DMAP为4-二甲基氨基吡啶；EDCI为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐；DEA为二乙基胺；DBU为1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯；t-Bu₃P为三叔丁基膦；HMDS为六甲基二硅基叠氮化物(hexamethyldisilazide)；DMF为N，N-二甲基甲酰胺；EtOAc或EtOAC为乙酸乙酯；Me₂S为二甲硫醚；Et₃N或TEA为三乙基胺；LiHMDS为六甲基二硅基重氮锂(lithiumhexamethyldisilazide)；DIBAL为二异丁基氢化铝；TBDMSCl为叔丁基二甲基甲硅烷基氯；iPrOH为异丙醇；Cb z为苄氧羰基；iPr₂EtN或DIPEA或DIEA为二异丙基乙基胺；BnBr为苄基溴；KOAc为乙酸钾；CAN为硝酸高铈铵(ceric ammonium nitrate)；SEM-Cl为(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯；Me₂NH为二甲基胺；TMS为三甲基甲硅烷基；OAc为乙酸酯；PPh₃为三苯基膦；MeI为碘甲基；MeCN为乙腈；n-BuLi为正丁基锂；和TBDMSOTf为叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯。

联系下面举例说明制备本公开的化合物的方法的合成方案，可更好地理解本公开的化合物和方法。起始原料可购买得到或通过本领域熟练技术人员已知的知名文献中的方法制备。本领域普通技术人员很容易明白上面定义的化合物可通过取代下面显示的合成中的适当反应物和试剂而制备。本领域熟练技术人员也很容易明白选择性保护和脱保护步骤，以及这些步骤本身的次序可以不同的次序进行，这取决于可成功完成下面合成的变量的性质。除非另有说明，所述变量如上述定义。

方案1：

二溴化物1可被加工为硼酸酯2，然后采用标准Suzuki-Miayura偶合条件与溴咪唑3偶合Journal of Organic Chemistry 1995，60，7508；Angew Chem.Int.Ed.Engl 2001，40，4544或其变更)。应注意，可用2的硼酸类似物代替酯，至于R²⁰的位置，可采用咪唑3的区域异构体(regioisomers)混合物，这对合成途径的最终结果并不重要。4的吡咯烷基团的脱保护，在当R¹⁴＝叔丁基的情况下，可通过用强酸如HCl或三氟乙酸处理来完成。5的酰化可在标准酰化条件下完成。在这方面，可用偶合试剂如HATU和胺类碱如Hunig’s碱。或者，可将5与异氰酸酯或氨基甲酰氯反应得到其中R¹⁰为胺的式6化合物。吡咯烷5也可与氯甲酸酯反应得到其中R¹⁰为醇的6。

也可通过可替代的路线制备中间体4。溴化物1与咪唑7在钯辅助的亲电芳香取代条件下偶合可得到4(Org.Let.2003，5，4835)。酮-溴化物8与适当取代的酸9进行烷基化可得到酮酯10，通过与NH₄OAc在溶剂如甲苯中在加热或微波加热条件下反应，其可被环化为咪唑11。用类似于从4制备5的方法的方式可完成11至5的转化。

方案2：

采用标准酰胺偶合条件如HATU与胺类碱如Hunig’s碱，吡咯烷5可被转化为可分离的酰胺12和13的混合物。通过采用同样的偶合条件，两种单-衍生化(mono-derivitized)的产物(12或13)可被转化为14，其中在两个吡咯烷部分上R¹⁰的基团可相同或不同。当14的两个R¹⁰基团相同时，其与6是相同的。

方案3：

化合物如18(或其区域异构体19)可从二溴化物1通过钯辅助的亲电芳香取代反应依次(sequential manner)整合两个咪唑并吡咯烷7和17来合成。本领域普通技术人员明白，在进行第二步偶合步骤之前，可能需要分离单偶合产物15和16。当两个R¹⁴基团不同时，可完成18的吡咯烷部分的单-脱保护。当一个R¹⁴＝苄基，另一R¹⁴＝叔丁基时，用氢解条件处理得到20。例如，可在氢气和碱如碳酸钾存在下用Pd/C催化剂。20的酰化可在标准酰化条件下完成。在这方面，可用偶合试剂如HATU和胺类碱如Hunig’s碱。或者，20可与异氰酸酯、氨基甲酰氯或氯甲酸酯反应得到其中R¹⁰为胺或醇的式21的化合物。21的进一步脱保护可通过用强酸如HCl或三氟乙酸处理来完成。可用类似于将20转化为21所用的标准条件从22制备23。在其中每个R¹⁴＝t-Bu的另一实施方案中，可通过用强酸如HCl或三氟乙酸处理将18直接转化为24来完成。24至23的转化用类似于从22制备23所用的方法来完成。但是，在这种情况下，23中的caps将会是相同的。本领域普通技术人员明白，化合物19也可在如对18所述的类似路线下被制备成相应的区域异构终产物。

方案4：

化合物25(25＝6(方案1)其中每个R¹⁰都为-CH(NHBoc)R¹⁸)可通过用强酸如HCl或三氟乙酸处理被转化为26。胺26可在偶合条件如HATU/Hunig’s碱下被酰化得到酰胺27a。分别用适当的氯甲酸酯、异氰酸酯或氨基甲酰氯或磺酰氯处理胺26可得到化合物27b、27c或27d。

方案5：

方案1-4中描述的合成顺序所需的起始原料可按照下面的方法制备。关键中间体33从酮-酰胺36或酮-酯32通过与乙酸铵在加热或微波条件下加热来制备。酮-酰胺36可从35通过与适当的环状或非环状氨基酸在标准酰胺形成条件下缩合来制备。溴化物30可通过与适当的环状或非环状N-保护的氨基酸在碱如Hunig’s碱存在下反应被转化为32。33(或其烷氧基甲基保护的衍生物7)与溴离子源如溴或NBS的溴化作用得到3。特定情况的咪唑33(其中R³＝H)可从适当取代的N-保护的氨基酸通过与乙二醛在氢氧化铵的甲醇溶液中反应来制备。

方案6：

取代的苯基甘氨酸衍生物可通过下面示例的多种方法制备。苯基甘氨酸叔丁酯可与适当的醛和还原剂如氰基硼氢化钠在酸性介质中进行还原烷基化(途径A)。叔丁基酯的水解可用强酸如HCl或三氟乙酸来完成。或者，苯基甘氨酸可与烷基卤化物如碘乙烷和碱如碳酸氢钠或碳酸钾进行烷基化(途径B)。途径C示例了苯基甘氨酸如途径A进行还原烷基化，然后与另一种醛(alternate aldehyde)如甲醛在还原剂和酸存在下进行第二次还原烷基化。途径D示例了通过相应的扁桃酸类似物合成取代的苯基甘氨酸。可用对甲苯磺酰氯来完成仲醇至有活性的离去基团的转化。用适当的胺置换甲苯磺酸酯基团，然后还原除去苄基酯可得到取代的苯基甘氨酸衍生物。在途径E中，可通过与对映异构纯的手性助剂如但不限于(+)-1-苯基乙醇、(-)-1-苯基乙醇、Evan’s唑烷酮(oxazolidinone)或对映异构纯泛内酯的酯化作用来拆分外消旋的取代苯基甘氨酸衍生物。非对映异构体的分离通过色谱法(硅胶、HPLC、重结晶等)完成，然后除去手性助剂得到对映异构纯的苯基甘氨酸衍生物。途径H示例了与途径E交叉的合成顺序，其中前述手性助剂是在胺加成之前加上。或者，可将芳基乙酸酯与溴离子源如溴、N-溴代琥珀酰亚胺或CBr₄进行溴化作用。所得苄基溴化物可与单-或二-取代的胺在叔胺碱如三乙基胺或Hunig’s碱存在下进行置换。用氢氧化锂在低温下或6NHCl在升高的温度下处理甲基酯使其水解，得到取代的苯基甘氨酸衍生物。途径G中显示了另一方法。甘氨酸类似物可用各种芳基卤化物在钯(0)源如双(三丁基膦)钯和碱如磷酸钾存在下被衍生化。然后所得酯可用碱或酸水解。应了解，本领域中还存在其它制备苯基甘氨酸衍生物的众所周知的方法，并可改良得到本说明书中所需的化合物。还应了解最终的苯基甘氨酸衍生物可采用如手性柱通过制备HPLC被纯化为对映异构纯度大于98％ee。本领域普通技术人员明白，合成芳香性甘氨酸衍生物所述的方法同样也可用于合成在C-2含非芳香性基团的甘氨酸衍生物。

方案7：

在本公开的另一实施方案中，酰化甘氨酸衍生物可按照如下所示来制备。其中羧酸被保护为容易除去的酯的甘氨酸衍生物可与酰氯在碱如三乙基胺存在下酰化，得到相应的酰胺(途径A)。途径B示例了起始甘氨酸衍生物与适当的氯甲酸酯的酰化，而途径C显示了与适当的异氰酸酯或氨基甲酰氯的反应。途径A-C中显示的三种中间体都可通过本领域熟练技术人员已知的方法脱保护(即用强碱如HCl或三氟乙酸处理叔丁基酯)。

方案8

氨基-取代的苯基乙酸可通过用过量的胺处理氯甲基苯基乙酸来制备。

化合物分析条件

在偶联有Waters Micromass ZQ MS的Shimadzu LC系统上进行纯度评估和低分辨质谱分析。应注意，不同机器之间保留时间可能会有轻微差异。用于确定保留时间(RT)的LC条件为：

条件1

柱＝Phenomenex-Luna 3.0X 50mm S10

开始％B    ＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

条件2

柱＝Phenomenex-Luna 4.6X50mm S10

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝5mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

条件3

柱＝HPLC XTERRA C183.0x 50mm S7

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

终止时间＝4min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

条件M1

柱：Luna 4.6X 50mm S10

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

终止时间＝4min

流速＝4mL/min

溶剂A：＝95％H₂O∶5％CH₃CN，10mm乙酸铵

溶剂B：＝5％H₂O∶95％CH₃CN；10mm乙酸铵

通用caps的合成

除非另有说明，另外LC条件适用于本部分。

Cond.-MS-W1

柱＝XTERRA 3.0X 50mm S7

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝5mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

Cond.-MS-W2

柱＝XTERRA 3.0X 50mm S7

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

终止时间＝4min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

Cond.-MS-W5

柱＝XTERRA 3.0X 50mm S7

开始％B＝0

结束％B＝30

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝5mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

Cond.-D1

柱＝XTERRA C183.0X 50mm S7

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

终止时间＝4min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

Cond.-D2

柱＝Phenomenex-Luna 4.6X 50mm S10

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

终止时间＝4min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

Cond.-M3

柱＝XTERRA C183.0X 50mm S7

开始％B＝0

结束％B＝40

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝5mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

条件I

柱＝Phenomenex-Luna 3.0X 50mm S10

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

条件II

柱＝Phenomenex-Luna 4.6X 50mm S10

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝5mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

条件III

柱＝XTERRA C183.0x50mm S7

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

终止时间＝4min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝0.1％TFA的10％甲醇/90％H₂O溶液

溶剂B＝0.1％TFA的90％甲醇/10％H₂O溶液

Cap-1

将10％Pd/C(2.0g)的甲醇(10mL)混悬液加入到(R)-2-苯基甘氨酸(10g，66.2mmol)、甲醛(33mL 37％wt.的水溶液)、1N HCl(30mL)和甲醇(30mL)的混合物中，暴露于H₂(60psi)3小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩。所得粗物质从异丙醇中重结晶得到Cap-1的HCl盐，为白色针状物(4.0g)。旋光度：-117.1°[c＝9.95mg/mL的H₂O溶液；λ＝589nm]。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：δ7.43-7.34(m，5H)，4.14(s，1H)，2.43(s，6H)；LC(Cond.I)：RT＝0.25；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₄NO₂180.10；实测值180.17；HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₄NO₂180.1025；实测值180.1017。

将NaBH₃CN(6.22g，94mmol)经几分钟分批加入到冷却的(冰/水)(R)-2-苯基甘氨酸(6.02g，39.8mmol)和甲醇(100mL)混合物中，搅拌5分钟。经10分钟逐滴加入乙醛(10mL)，在同样的冷却温度下继续搅拌45分钟，在室温下搅拌～6.5小时。用冰-水浴再冷却反应混合物，用水(3mL)处理，然后经～45分钟逐滴加入浓HCl猝灭，直至混合物的pH为～1.5-2.0。除去冷却浴，继续搅拌同时加入浓HCl以保持混合物的pH在1.5-2.0附近。将反应混合物搅拌过夜，过滤除去白色悬浮物，滤液真空浓缩。粗物质从乙醇中重结晶，得到Cap-2的HCl盐，为发亮的白色固体，两批(第一批：4.16g；第二批：2.19g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：10.44(1.00，br s，1H)，7.66(m，2H)，7.51(m，3H)，5.30(s，1H)，3.15(br m，2H)，2.98(br m，2H)，1.20(app br s，6H).Crop-1：[α]²⁵-102.21°(c＝0.357，H₂O)；crop-2：[α]²⁵-99.7°(c＝0.357，H₂O).LC(Cond.I)：RT＝0.43min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₈NO₂：208.13；实测值208.26。

将乙醛(5.0mL，89.1mmol)和10％Pd/C(720mg)的甲醇/H₂O(4mL/1mL)混悬液相继加入到冷却的(～15℃)(R)-2-苯基甘氨酸(3.096g，20.48mmol)、1N HCl(30mL)和甲醇(40mL)的混合物中。除去冷却浴，将反应混合物在H₂气球下搅拌17小时。再加入乙醛(10mL，178.2mmol)，继续在H₂下搅拌24小时[注意：在反应过程中根据需要补充H₂]。将反应混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩。将所得粗物质从异丙醇中重结晶得到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸的HCl盐，为发亮白色固体(2.846g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ14.15(br s，1H)，9.55(br s，2H)，7.55-7.48(m，5H)，2.88(br m，1H)，2.73(br m，1H)，1.20(app t，J＝7.2，3H).LC(Cond.I)：RT＝0.39min；＞95％均匀性指数(homogeneity index)；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₄NO₂：180.10；实测值180.18。

将10％Pd/C(536mg)的甲醇/H₂O(3mL/1mL)混悬液加入到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸/HCl(1.492g，6.918mmol)、甲醛(20mL 37％wt.的水溶液)、1N HCl(20mL)和甲醇(23mL)的混合物中。将反应混合物在H₂气球下搅拌～72小时，H₂供应根据需要补充。将反应混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩。所得粗物质从异丙醇(50mL)中重结晶，得到Cap-3的HCl盐，为白色固体(985mg)。¹HNMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ10.48(br s，1H)，7.59-7.51(m，5H)，5.26(s，1H)，3.08(app br s，2H)，2.65(br s，3H)，1.24(br m，3H).LC(Cond.I)：RT＝0.39min；＞95％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₆NO₂：194.12；实测值194.18；HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₆NO₂：194.1180；实测值194.1181。

经6分钟将ClCO₂Me(3.2mL，41.4mmol)加入到冷却的(冰/水)(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯/HCl(9.877g，40.52mmol)和二异丙基乙基胺(14.2mL，81.52mmol)的THF(410mL)半-溶液中，在同样温度下搅拌5.5小时。真空除去挥发性组分，残留物在水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)之间分配。用1N HCl(25mL)和饱和NaHCO₃溶液(30mL)洗涤有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩。所得无色油状物从己烷中研磨，过滤，用己烷(100mL)洗涤，得到(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-苯基乙酸叔丁酯，为白色固体(7.7g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：7.98(d，J＝8.0，1H)，7.37-7.29(m，5H)，5.09(d，J＝8，1H)，3.56(s，3H)，1.33(s，9H).LC(Cond.I)：RT＝1.53min；～90％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+Na]⁺C₁₄H₁₉NN_aO₄：288.12；实测值288.15。

经7分钟将TFA(16mL)逐滴加入到冷却的(冰/水)上述产物的CH₂Cl₂(160mL)溶液中，除去冷却浴，反应混合物搅拌20小时。由于未完全脱保护，再加入TFA(1.0mL)继续再搅拌2小时。真空除去挥发性组分，所得油状残留物用乙醚(15mL)和己烷(12mL)处理得到沉淀。过滤沉淀，用乙醚/己烷(～1∶3比率；30mL)处理，真空干燥，得到Cap-4，为蓬松白色固体(5.57g)。旋光度：-176.9°[c＝3.7mg/mL的H₂O溶液；λ＝589nm]。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.84(br s，1H)，7.96(d，J＝8.3，1H)，7.41-7.29(m，5H)，5.14(d，J＝8.3，1H)，3.55(s，3H).LC(Cond.I)：RT＝1.01min；＞95％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₂NO₄210.08；实测值210.17；HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₂NO₄210.0766；实测值210.0756。

将(R)-2-苯基甘氨酸(1.0g，6.62mmol)、1，4-二溴丁烷(1.57g，7.27mmol)和Na₂CO₃(2.10g，19.8mmol)在乙醇(40mL)中的混合物在100℃下加热21小时。将反应混合物冷至室温，过滤，滤液真空浓缩。残留物溶于乙醇，用1N HCl酸化至pH 3-4，真空除去挥发性组分。所得粗物质用反相HPLC纯化(水/甲醇/TFA)，得到Cap-5的TFA盐，为半-粘稠白色泡沫(1.0g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)δ10.68(br s，1H)，7.51(m，5H)，5.23(s，1H)，3.34(app br s，2H)，3.05(app br s，2H)，1.95(app br s，4H)；RT＝0.30分钟(Cond.I)；＞98％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₂：206.12；实测值206.25。

用制备Cap-5的方法，从(R)-2-苯基甘氨酸和1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷合成Cap-6的TFA盐。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)δ12.20(br s，1H)，7.50(m，5H)，4.92(s，1H)，3.78(app br s，4H)，3.08(app br s，2H)，2.81(app br s，2H)；RT＝0.32分钟(Cond.I)；＞98％；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₃：222.11；实测值222.20；HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₃：222.1130；实测值222.1121。

将对甲苯磺酰氯(8.65g，45.4mmol)的CH₂Cl₂(200mL)溶液逐滴加入到冷却的(-5℃)(S)-2-羟基-2-苯基乙酸苄基酯(10.0g，41.3mmol)、三乙胺(5.75mL，41.3mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.504g，4.13mmol)的CH₂Cl₂(200mL)溶液中，同时保持温度在-5℃和0℃之间。将反应在0℃下搅拌9小时，然后存放入冰箱(-25℃)14小时。使其融化至室温，用水(200mL)、1N HCl(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，得到2-苯基-2-(甲苯磺酰基氧基)乙酸苄基酯，为粘稠油状物，静置后固化(16.5g)。未检测产物的手性完整性(chiral integrity)，该产物不经进一步纯化用于下面的步骤。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)δ7.78(d，J＝8.6，2H)，7.43-7.29(m，10H)，7.20(m，2H)，6.12(s，1H)，5.16(d，J＝12.5，1H)，5.10(d，J＝12.5，1H)，2.39(s，3H).RT＝3.00(Cond.III)；＞90％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₂₂H₂₀NaO₅S：419.09；实测值419.04。

将2-苯基-2-(甲苯磺酰基氧基)乙酸苄基酯(6.0g，15.1mmol)、1-甲基哌嗪(3.36mL，30.3mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(13.2mL，75.8mmol)的THF(75mL)溶液在65℃下加热7小时。将反应冷至室温，真空除去挥发性组分。将残留物在乙酸乙酯和水之间分配，用水和盐水洗涤有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩。所得粗物质用快速色谱法纯化(硅胶，乙酸乙酯)，得到2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苄基酯，为橙褐色粘稠油状物(4.56g)。手性HPLC分析(Chiralcel OD-H)显示样品为比率为38.2-58.7的对映异构体混合物。如下进行对映异构体的分离：将产物溶于120mL乙醇/庚烷(1∶1)，注射到(5mL/注射)手性HPLC柱上(Chiracel OJ，5cm IDx50cm L，20μm，用85∶15庚烷/乙醇以75mL/min洗脱，在220nm下监控。重新得到对映异构体-1(1.474g)和对映异构体-2(2.2149g)，为粘稠油状物。¹H NMR(CDCl₃，δ＝7.26，500MHz)7.44-7.40(m，2H)，7.33-7.24(m，6H)，7.21-7.16(m，2H)，5.13(d，J＝12.5，1H)，5.08(d，J＝12.5，1H)，4.02(s，1H)，2.65-2.38(app br s，8H)，2.25(s，3H).RT＝2.10(Cond.III)；＞98％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₂₀H₂₅N₂O₂：325.19；实测值325.20。

将2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苄基酯(1.0g，3.1mmol)的任一对映异构体甲醇(10mL)溶液加入到10％Pd/C(120mg)的甲醇(5.0mL)混悬液中。在严格监控下将反应混合物暴露于氢气球，反应＜50分钟。反应完成后，立即通过硅藻土过滤催化剂，滤液真空浓缩，得到Cap-7，被苯基乙酸污染，为黄褐色泡沫(867.6mg；质量大于理论产量)。该产物不经进一步纯化用于下面的步骤。¹HNMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)δ7.44-7.37(m，2H)，7.37-7.24(m，3H)，3.92(s，1H)，2.63-2.48(app.br s，2H)，2.48-2.32(m，6H)，2.19(s，3H)；RT＝0.31(Cond.II)；＞90％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₉N₂O₂：235.14；实测值235.15；HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₉N₂O₂：235.1447；实测值235.1440。

根据Cap-7的合成方法和改良的分离各个立体异构中间体的条件，用适当的胺进行SN₂取代步骤(即Cap-8用4-羟基哌啶，Cap-9用(S)-3-氟吡咯烷)，来进行Cap-8和Cap-9的合成，如下所示。

Cap-8

采用下面的条件对中间体2-(4-羟基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸苄基酯进行对映异构分离：将该化合物(500mg)溶于乙醇/庚烷(5mL/45mL)。所得溶液注射到(5mL/注射)手性HPLC柱上(Chiracel OJ，2cmIDx25cm L，10μm)，用80∶20庚烷/乙醇以10mL/min洗脱，在220nm下监控，得到186.3mg对映异构体-1和209.1mg对映异构体-2，为浅黄色粘稠油状物。这些苄基酯按照Cap-7的制备方法氢解得到Cap-8：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)7.40(d，J＝7，2H)，7.28-7.20(m，3H)，3.78(s 1H)，3.46(m，1H)，2.93(m，1H)，2.62(m，1H)，2.20(m，2H)，1.70(m，2H)，1.42(m，2H).RT＝0.28(Cond.II)；＞98％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₃：236.13；实测值236.07；HRMS：计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₃：236.1287；实测值236.1283。

采用下面的条件对中间体2-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-2-苯基乙酸苄基酯进行非对映异构分离：该酯(220mg)在手性HPLC柱上(ChiracelOJ-H，0.46cm IDx25cm L，5μm)分离，用含0.1％TFA 95％CO₂/5％甲醇洗脱，压力为10bar，流速为70mL/min，温度为35℃。浓缩各个立体异构体的HPLC洗脱液，将残留物溶于CH₂Cl₂(20mL)，用水性介质(10mL水+1mL饱和NaHCO₃溶液)洗涤。干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩，得到92.5mg流分-1和59.6mg流分-2。将这些苄基酯按照Cap-7的制备方法氢解，得到Caps 9a和9b。Cap-9a(非对映异构体-1；由于采用H₂O/甲醇/TFA溶剂在反相HPLC上纯化的结果，该样品为TFA盐)：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，400MHz)7.55-7.48(m，5H)，5.38(d of m，J＝53.7，1H)，5.09(br s，1H)，3.84-2.82(br m，4H)，2.31-2.09(m，2H).RT＝0.42(Con d.I)；＞95％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₅FNO₂：224.11；实测值224.14；Cap-9b(非对映异构体-2)：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，400MHz)7.43-7.21(m，5H)，5.19(d of m，J＝55.9，1H)，3.97(s，1H)，2.95-2.43(m，4H)，2.19-1.78(m，2H).RT＝0.44(Cond.I)；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₅FNO₂：224.11；实测值224.14。

向D-脯氨酸(2.0g，17mmol)和甲醛(2.0mL 37％wt.的H₂O溶液)的甲醇(15mL)溶液中加入10％Pd/C(500mg)的甲醇(5mL)混悬液。将混合物在氢气球下搅拌23小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，得到Cap-10，为米色固体(2.15g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)3.42(m，1H)，3.37(dd，J＝9.4，6.1，1H)，2.85-2.78(m，1H)，2.66(s，3H)，2.21-2.13(m，1H)，1.93-1.84(m，2H)，1.75-1.66(m，1H).RT＝0.28(Cond.II)；＞98％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₆H₁₂NO₂：130.09；实测值129.96。

将(2S，4R)-4-氟吡咯烷-2-甲酸(0.50g，3.8mmol)、甲醛(0.5mL37％wt.的H₂O溶液)、12N HCl(0.25mL)和10％Pd/C(50mg)在甲醇(20mL)中的混合物在氢气球下搅拌19小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩。残留物从异丙醇中重结晶，得到Cap-11的HCl盐，为白色固体(337.7mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)5.39(d m，J＝53.7，1H)，4.30(m，1H)，3.90(ddd，J＝31.5，13.5，4.5，1H)，3.33(dd，J＝25.6，13.4，1H)，2.85(s，3H)，2.60-2.51(m，1H)，2.39-2.26(m，1H).RT＝0.28(Cond.II)；＞98％均匀性指数；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₆H₁₁FNO₂：148.08；实测值148.06。

Cap-12(与cap 52相同)

将L-丙氨酸(2.0g，22.5mmol)溶于10％碳酸钠水溶液(50mL)，向其中加入氯甲酸甲酯(4.0mL)的THF(50mL)溶液。将反应混合物在室温条件下搅拌4.5小时，真空浓缩。所得白色固体溶于水，用1N HCl酸化至pH～2-3。所得溶液用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取，干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到无色油状物(2.58g)。将500mg此物质用反相HPLC纯化(H₂O/甲醇/TFA)，得到150mg Cap-12，为无色油状物。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)7.44(d，J＝7.3，0.8H)，7.10(br s，0.2H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d，J＝7.3，3H)。

将L-丙氨酸(2.5g，28mmol)、甲醛(8.4g，37wt.％)、1N HCl(30mL)和10％Pd/C(500mg)在甲醇(30mL)中的混合物在氢气(50psi)下搅拌5小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩，得到Cap-13的HCl盐，为油状物，其在真空中静置后固化(4.4g；该质量大于理论产量)。该产物不经进一步纯化而使用。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5，500MHz)δ12.1(br s，1H)，4.06(q，J＝7.4，1H)，2.76(s，6H)，1.46(d，J＝7.3，3H)。

步骤1：将(R)-(-)-D-苯基甘氨酸叔丁酯(3.00g，12.3mmol)、NaBH₃CN(0.773g，12.3mmol)、KOH(0.690g，12.3mmol)和乙酸(0.352mL，6.15mmol)的混合物在甲醇中在0℃下搅拌。经5分钟向此混合物中逐滴加入戊二醛(2.23mL，12.3mmol)。搅拌反应混合物，使其升至室温，在同样的温度下继续搅拌16小时。然后除去溶剂，残留物用10％NaOH水溶液和乙酸乙酯分配。分离有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩至干，得到澄清油状物。将此物质用反相制备HPLC纯化(Primesphere C-18，30x100mm；CH₃CN-H₂O-0.1％TFA)，得到中间体酯(2.70g，56％)，为澄清油状物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.53-7.44(m，3H)，7.40-7.37(m，2H)，3.87(d，J＝10.9Hz，1H)，3.59(d，J＝10.9Hz，1H)，2.99(t，J＝11.2Hz，1H)，2.59(t，J＝11.4Hz，1H)，2.07-2.02(m，2H)，1.82(d，J＝1.82Hz，3H)，1.40(s，9H).LC/MS：分析计算值C₁₇H₂₅NO₂：275；实测值：276(M+H)⁺。

步骤2：向搅拌的中间体酯(1.12g，2.88mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入TFA(3mL)。反应混合物在室温下搅拌4小时，然后将其浓缩至干，得到浅黄色油状物。将该油状物用反相制备HPLC纯化(Primesphere C-18，30x100mm；CH₃CN-H₂O-0.1％TFA)。合并适当的流分，真空浓缩至干。然后将残留物溶于最小量的甲醇中，加到MCX LP萃取柱(extraction cartridges)(2x6g)上。将该柱用甲醇(40mL)冲洗，然后采用2M氨的甲醇溶液(50mL)洗脱所需化合物。合并含产物的流分，浓缩，残留物用水吸收。冻干此溶液得到标题化合物(0.492g，78％)，为浅黄色固体。¹H NMR(DMSO-d₆)δ7.50(s，5H)，5.13(s，1H)，3.09(br s，2H)，2.92-2.89(m，2H)，1.74(m，4H)，1.48(br s，2H).LC/MS：分析计算值C₁₃H₁₇NO₂：219；实测值：220(M+H)⁺。

步骤1：(S)-1-苯基乙基2-溴-2-苯基乙酸酯：向α-溴苯基乙酸(10.75g，0.050mol)、(S)-(-)-1-苯基乙醇(7.94g，0.065mol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)的无水二氯甲烷(100mL)中的混合物中一次性加入固体EDCI(12.46g，0.065mol)。所得溶液在室温下在Ar下搅拌18小时，然后将其用乙酸乙酯稀释，用(H₂Ox2，盐水)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩，得到淡黄色油状物。将此油状物用快速色谱法纯化(SiO₂/己烷-乙酸乙酯，4∶1)，得到标题化合物(11.64g，73％)，为白色固体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.53-7.17(m，10H)，5.95(q，J＝6.6Hz，0.5H)，5.94(q，J＝6.6Hz，0.5H)，5.41(s，0.5H)，5.39(s，0.5H)，1.58(d，J＝6.6Hz，1.5H)，1.51(d，J＝6.6Hz，1.5H)。

步骤2：(S)-1-苯基乙基(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸酯：向(S)-1-苯基乙基2-溴-2-苯基乙酸酯(0.464g，1.45mmol)的THF(8mL)溶液中加入三乙胺(0.61mL，4.35mmol)，然后加入碘化四丁基铵(0.215g，0.58mmol)。反应混合物在室温下搅拌5分钟，然后加入4-甲基-4-羟基哌啶(0.251g，2.18mmol)的THF(2mL)溶液。所得混合物在室温下搅拌1小时，然后将其在55-60℃(油浴温度)下加热4小时。然后，将冷却的反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，洗涤(H₂Ox2，盐水)，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩。残留物用硅胶色谱法纯化(0-60％乙酸乙酯-己烷)，先得到标题化合物的(S，R)-异构体(0.306g，60％)，为白色固体，然后得到相应的(S，S)-异构体(0.120g，23％)，也为白色固体。(S，R)-异构体：¹H NMR(CD₃OD)δ7.51-7.45(m，2H)，7.41-7.25(m，8H)，5.85(q，J＝6.6Hz，1H)，4.05(s，1H)，2.56-2.45(m，2H)，2.41-2.29(m，2H)，1.71-1.49(m，4H)，1.38(d，J＝6.6Hz，3H)，1.18(s，3H).LCMS：分析计算值C₂₂H₂₇NO₃：353；实测值：354(M+H)⁺.(S，S)-异构体：¹H NMR(CD₃OD)δ7.41-7.30(m，5H)，7.20-7.14(m，3H)，7.06-7.00(m，2H)，5.85(q，J＝6.6Hz，1H)，4.06(s，1H)，2.70-2.60(m，1H)，2.51(dt，J＝6.6，3.3Hz，1H)，2.44-2.31(m，2H)，1.75-1.65(m，1H)，1.65-1.54(m，3H)，1.50(d，J＝6.8Hz，3H)，1.20(s，3H).LCMS：分析计算值C₂₂H₂₇NO₃：353；实测值：354(M+H)⁺。

步骤3：(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(S)-1-苯基乙基(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸酯(0.185g，0.52mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，将混合物在室温下搅拌2小时。然后真空除去挥发物，残留物用反相制备HPLC纯化(Primesphere C-18，20x100mm；CH₃CN-H₂O-0.1％TFA)，得到标题化合物(为TFA盐)，为淡蓝色固体(0，128g，98％)。LCMS：分析计算值C₁₄H₁₉NO₃：249；实测值：250(M+H)⁺。

步骤1：(S)-1-苯基乙基2-(2-氟苯基)乙酸酯：将2-氟苯基乙酸(5.45g，35.4mmol)、(S)-1-苯基乙醇(5.62g，46.0mmol)、EDCI(8.82g，46.0mmol)和DMAP(0.561g，4.60mmol)的CH₂Cl₂(100mL)混合物在室温下搅拌12小时。然后浓缩溶剂，残留物用H₂O-乙酸乙酯分配。分离各相，水层用乙酸乙酯(2x)反萃取。洗涤(H₂O，盐水)合并的有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩。残留物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-20％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物，为无色油状物(8.38g，92％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.32-7.23(m，7H)，7.10-7.04(m，2)，5.85(q，J＝6.5Hz，1H)，3.71(s，2H)，1.48(d，J＝6.5Hz，3H)。

步骤2：(R)-((S)-1-苯基乙基)2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸酯：在0℃下向(S)-1-苯基乙基2-(2-氟苯基)乙酸酯(5.00g，19.4mmol)的THF(1200mL)溶液中加入DBU(6.19g，40.7mmol)，将该溶液升至室温，同时搅拌30分钟。然后将该溶液冷至-78℃，加入CBr₄(13.5g，40.7mmol)的THF(100mL)溶液，所得混合物升温至-10℃，在此温度下搅拌2小时。用饱和aq.NH₄Cl猝灭反应混合物，分离各层。水层用乙酸乙酯(2x)反萃取，洗涤(H₂O，盐水)合并的有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩。向残留物中加入哌啶(5.73mL，58.1mmol)，所得溶液在室温下搅拌24小时。然后真空浓缩挥发物，残留物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-30％乙醚-己烷)，得到非对映异构体的纯混合物(¹H NMR检测比率为2∶1)，为黄色油状物(2.07g，31％)，含有未反应的起始原料(2.53g，51％)。将非对映异构混合物用色谱法进一步纯化(Biotage/0-10％乙醚-甲苯)，得到标题化合物，为无色油状物(0.737g，11％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.52(ddd，J＝9.4，7.6，1.8Hz，1H)，7.33-7.40(m，1)，7.23-7.23(m，4H)，7.02-7.23(m，4H)，5.86(q，J＝6.6Hz，1H)，4.45(s，1H)，2.39-2.45(m，4H)，1.52-1.58(m，4H)，1.40-1.42(m，1H)，1.38(d，J＝6.6Hz，3H).LCMS：分析计算值C₂₁H₂₄FNO₂：341；实测值：342(M+H)⁺。

步骤3：(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸：将(R)-((S)-1-苯基乙基)2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸酯(0.737g，2.16mmol)和20％Pd(OH)₂/C(0.070g)在乙醇(30mL)中的混合物在室温下和大气压力(H₂气球)氢化2小时。然后将溶液用Ar净化，通过硅藻土过滤，真空浓缩。得到标题化合物，为无色固体(0.503g，98％)。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δ7.65(ddd，J＝9.1，7.6，1.5Hz，1H)，7.47-7.53(m，1H)，7.21-7.30(m，2H)，3.07-3.13(m，4H)，1.84(br s，4H)，1.62(br s，2H).LCMS：分析计算值C₁₃H₁₆FNO₂：237；实测值：238(M+H)⁺。

步骤1：(S)-1-苯基乙基(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸酯：向(S)-1-苯基乙基2-溴-2-苯基乙酸酯(1.50g，4.70mmol)的THF(25mL)溶液中加入三乙胺(1.31mL，9.42mmol)，然后加入碘化四丁基铵(0.347g，0.94mmol)。反应混合物在室温下搅拌5分钟，然后加入4-苯基-4-羟基哌啶(1.00g，5.64mmol)的THF(5mL)溶液。将所得混合物搅拌16小时，然后用乙酸乙酯(100mL)稀释，洗涤(H₂Ox2，盐水)，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩。残留物在硅胶柱上纯化(0-60％乙酸乙酯-己烷)，得到约2∶1的非对映异构体混合物，由¹HNMR检测。用超临界流体色谱法(Chiralcel OJ-H，30x250mm；20％乙醇，在CO₂中，在35℃)对这些异构体进行分离，先得到标题化合物的(R)-异构体(0.534g，27％)，为黄色油状物，然后得到相应的(S)-异构体(0.271g，14％)，也为黄色油状物。(S，R)-异构体：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.55-7.47(m，4H)，7.44-7.25(m，10H)，7.25-7.17(m，1H)，5.88(q，J＝6.6Hz，1H)，4.12(s，1H)，2.82-2.72(m，1H)，2.64(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.58-2.52(m，1H)，2.40(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.20(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，2.10(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，1.72-1.57(m，2H)，1.53(d，J＝6.5Hz，3H).LCMS：分析计算值C₂₇H₂₉NO₃：415；实测值：416(M+H)⁺；(S，S)-异构体：H¹NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.55-7.48(m，2H)，7.45-7.39(m，2H)，7.38-7.30(m，5H)，7.25-7.13(m，4H)，7.08-7.00(m，2H)，5.88(q，J＝6.6Hz，1H)，4.12(s，1H)，2.95-2.85(m，1H)，2.68(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.57-2.52(m，1H)，2.42(dt，J＝11.1，2.5Hz，1H)，2.25(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，2.12(dt，J＝12.1，4.6Hz，1H)，1.73(dd，J＝13.6，3.0Hz，1H)，1.64(dd，J＝13.6，3.0Hz，1H)，1.40(d，J＝6.6Hz，3H).LCMS：分析计算值C₂₇H₂₉NO₃：415；实测值：416(M+H)⁺。

用同样的方式制备下面的酯：

用于确定保留时间的手性SFC条件

条件I

柱：Chiralpak AD-H柱，4.62x50mm，5μm

溶剂：含0.1％DEA的90％CO2-10％甲醇

温度：35℃

压力：150bar

流速：2.0mL/min。

UV监控@220nm

注射：1.0mg/3mL甲醇

条件I

柱：Chiralcel OD-H柱，4.62x50mm，5μm

溶剂：含0.1％DEA的90％CO2-10％甲醇

温度：35℃

压力：150bar

流速：2.0mL/min。

UV监控@220nm

注射：1.0mg/mL甲醇

Cap 17，步骤2；(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(S)-1-苯基乙基(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸酯(0.350g，0.84mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，所得混合物在室温下搅拌2小时。然后真空除去挥发物，残留物用反相制备HPLC(Primesphere C-18，20x100mm；CH₃CN-H₂O-0.1％TFA)纯化，得到标题化合物(为TFA盐)，为白色固体(0.230g，88％).LCMS：分析计算值C₁₉H₂₁NO₃：311.15；实测值：312(M+H)⁺。

用同样的方式制备下面羧酸的旋光纯形式：

用于确定保留时间的LCMS条件

条件I

柱：Phenomenex-Luna 4.6X50mm S10

开始％B＝0

结束(Fianl)％B＝100

梯度时间＝4min

流速＝4mL/min

波长＝220

溶剂A＝10％甲醇-90％H₂O-0.1％TFA

溶剂B＝90％甲醇-10％H₂O-0.1％TFA

条件II

柱：Waters-Sunfire 4.6X50mm S5

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

流速＝4mL/min

波长＝220

溶剂A＝10％甲醇-90％H₂O-0.1％TFA

溶剂B＝90％甲醇-10％H₂O-0.1％TFA

条件III

柱：Phenomenex 10μ3.0X50mm

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

流速＝4ml/min

波长＝220

溶剂A＝10％甲醇-90％H₂O-0.1％TFA

溶剂B＝90％甲醇-10％H₂O-0.1％TFA

步骤1；(R，S)-乙基2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸酯：在0℃下在氩气下向4-吡啶基乙酸乙酯(1.00g，6.05mmol)的无水THF(150mL)溶液中加入DBU(0.99mL，6.66mmol)。经30分钟将反应混合物升至室温，然后将其冷至-78℃。向此混合物中加入CBr₄(2.21g，6.66mmol)，继续在-78℃下搅拌2小时。然后用饱和NH₄Cl水溶液猝灭反应混合物，并分离各相。洗涤(盐水)有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩。所得黄色油状物立即用快速色谱法纯化(SiO₂/己烷-乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，(1.40g，95％)，为不太稳定的黄色油状物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.62(dd，J＝4.6，1.8Hz，2H)，7.45(dd，J＝4.6，1.8Hz，2H)，5.24(s，1H)，4.21-4.29(m，2H)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H).LCMS：分析计算值C₉H₁₀BrNO₂：242，244；实测值：243，245(M+H)⁺。

步骤2；(R，S)-乙基2-(4-吡啶基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸酯：在室温下向(R，S)-乙基2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸酯(1.40g，8.48mmol)的DMF(10mL)的溶液中加入二甲基胺(2M的THF溶液，8.5mL，17.0mmol)。反应完全后(用薄层色谱法判断)，真空除去挥发物，残留物用快速色谱法纯化(Biotage，40+M SiO₂柱；50％-100％乙酸乙酯-己烷)，得到标题化合物(0.539g，31％)，为浅黄色油状物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.58(d，J＝6.0Hz，2H)，7.36(d，J＝6.0Hz，2H)，4.17(m，2H)，3.92(s，1H)，2.27(s，6H)，1.22(t，J＝7.0Hz).LCMS：分析计算值C₁₁H₁₆N₂O₂：208；实测值：209(M+H)⁺。

步骤3；(R，S)-2-(4-吡啶基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸：在室温下向(R，S)-乙基2-(4-吡啶基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸酯(0.200g，0.960mmol)的THF-甲醇-H₂O(1∶1∶1，6mL)混合物的溶液中加入粉末LiOH(0.120g，4.99mmol)。所得溶液搅拌3小时，然后用1N HCl将其酸化至pH 6。用乙酸乙酯洗涤水相，然后将其冻干得到标题化合物的二盐酸盐，为黄色固体(含LiCl)。该产物就这样用于后面的步骤。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.49(d，J＝5.7Hz，2H)，7.34(d，J＝5.7Hz，2H)，3.56(s，1H)，2.21(s，6H)。

以同样的方式用上述方法制备下面的实施例；

步骤1；(R，S)-乙基2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)-乙酸酯：将N，N-二甲基氨基乙酸乙酯(0.462g，3.54mmol)、K₃PO₄(1.90g，8.95mmol)、Pd(t-Bu₃P)₂(0.090g，0.176mmol)和甲苯(10mL)的混合物用Ar气流脱气15分钟。然后将反应混合物在100℃下加热12小时，然后将其冷至室温，倒入H₂O。所得混合物用乙酸乙酯(2x)萃取，洗涤(H₂O，盐水)合并的有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩。残留物用反相制备HPLC纯化(Primesphere C-18，30x100mm；CH₃CN-H₂O-5mM NH₄OAc)，然后用快速色谱法纯化(SiO₂/己烷-乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，(0.128g，17％)，为橙色油状物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.90(d，J＝2.0Hz，1H)，8.32(d，J＝2.0Hz，1H)，8.03-8.01(m，2H)，7.77(ddd，J＝8.3，6.8，1.5Hz，1H)，7.62(ddd，J＝8.3，6.8，1.5Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.13(m，2H)，2.22(s，6H)，1.15(t，J＝7.0Hz，3H).LCMS：分析计算值C₁₅H₁₈N₂O₂：258；实测值：259(M+H)⁺。

步骤2；(R，S)2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸：将(R，S)-乙基2-(喹啉-3-基)-2-(N，N-二甲基氨基)乙酸酯(0.122g，0.472mmol)和6M HCl(3mL)的混合物在100℃下加热12小时。真空除去溶剂，得到标题化合物的二盐酸盐(0.169g，＞100％)，为浅黄色泡沫。该未纯化的物质不经进一步纯化用于后面的步骤。LCMS：分析计算值C₁₃H₁₄N₂O₂：230；实测值：231(M+H)⁺。

步骤1；(R)-((S)-1-苯基乙基)2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸酯和(S)-((S)-1-苯基乙基)2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸酯：向(RS)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(2.60g，13.19mmol)、DMAP(0.209g，1.71mmol)和(S)-1-苯基乙醇(2.09g，17.15mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的混合物中加入EDCI(3.29g，17.15mmol)，所得混合物在室温下搅拌12小时。然后真空除去溶剂，残留物用乙酸乙酯-H₂O分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(2x)反萃取，洗涤(H₂O，盐水)合并的有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩。残留物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-50％乙醚-己烷)。然后将所得纯化非对映异构混合物用反相制备HPLC分离(Primesphere C-18，30x 100mm；CH₃CN-H₂O-0.1％TFA)，先得到(S)-1-苯乙基(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸酯(0.501g，13％)，然后得到(S)-1-苯乙基(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)-乙酸酯(0.727g.18％)，均为其TFA盐。(S，R)-异构体：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.65-7.70(m，1H)，7.55-7.60(ddd，J＝9.4，8.1，1.5Hz，1H)，7.36-7.41(m，2H)，7.28-7.34(m，5H)，6.04(q，J＝6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.84(s，6H)，1.43(d，J＝6.5Hz，3H).LCMS：分析计算值C₁₈H₂₀FNO₂：301；实测值：302(M+H)⁺；(S，S)-异构体：¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.58-7.63(m，1H)，7.18-7.31(m，6H)，7.00(dd，J＝8.5，1.5Hz，2H)，6.02(q，J＝6.5Hz，1H)，5.60(s，1H)，2.88(s，6H)，1.54(d，J＝6.5Hz，3H).LCMS：分析计算值C₁₈H₂₀FNO₂：301；实测值：302(M+H)⁺。

步骤2；(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸：将(R)-((S)-1-苯基乙基)2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸酯TFA盐(1.25g，3.01mmol)和20％Pd(OH)₂/C(0.125g)的乙醇(30mL)混合物在室温和大气压力(H₂气球)氢化4小时。然后将溶液用Ar净化，通过硅藻土过滤，真空浓缩。得到标题化合物，为无色固体(0.503g，98％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.53-7.63(m，2H)，7.33-7.38(m，2H)，5.36(s，1H)，2.86(s，6H).LCMS：分析计算值C₁₀H₁₂FNO₂：197；实测值：198(M+H)⁺。

可用同样的方式从(S)-((S)-1-苯基乙基)2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸酯TFA盐得到S-异构体。

将(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(0.300g，1.62mmol)、甲醛(35％水溶液，0.80mL，3.23mmol)和20％Pd(OH)₂/C(0.050g)的混合物在室温和大气压力(H₂气球)下氢化4小时。然后将溶液用Ar净化，通过硅藻土过滤，真空浓缩。残留物用反相制备HPLC纯化(Primesphere C-18，30x100mm；CH₃CN-H₂O-0.1％TFA)，得到标题化合物(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸的TFA盐，为无色油状物(0.290g，55％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.59-7.65(m，2H)，7.45-7.53(m，2H)，5.40(s，1H)，2.87(s，6H).LCMS：分析计算值C₁₀H₁₂ClNO₂：213；实测值：214(M+H)⁺。

向冰-冷的(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(1.00g，5.38mmol)和NaOH(0.862g，21.6mmol)的H₂O(5.5mL)溶液中逐滴加入氯甲酸甲酯(1.00mL，13.5mmol)。所得混合物在0℃下搅拌1小时，然后用浓HCl(2.5mL)酸化。所得混合物用乙酸乙酯(2x)萃取，洗涤(H₂O，盐水)合并的有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩，得到标题化合物(R)-2-(甲氧基羰基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸，为橙黄色泡沫(1.31g，96％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.39-7.43(m，2H)，7.29-7.31(m，2H)，5.69(s，1H)，3.65(s，3H).LCMS：分析计算值C₁₀H₁₀ClNO₄：243；实测值：244(M+H)⁺。

向2-(2-(氯甲基)苯基)乙酸(2.00g，10.8mmol)的THF(20mL)混悬液中加入吗啉(1.89g，21.7mmol)，所得溶液在室温下搅拌3小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H₂O(2x)萃取。冻干水相，残留物用硅胶色谱法纯化(Biotage/0-10％甲醇-CH₂Cl₂)，得到标题化合物2-(2-(吗啉代甲基)苯基)乙酸，为无色固体(2.22g，87％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ7.37-7.44(m，3H)，7.29-7.33(m，1H)，4.24(s，2H)，3.83(br s，4H)，3.68(s，2H)，3.14(br s，4H).LCMS：分析计算值C₁₃H₁₇NO₃：235；实测值：236(M+H)⁺。

用类似于制备Cap-41所述的方法来制备下面的实施例：

将HMDS(1.85mL，8.77mmol)加入到(R)-2-氨基-2-苯基乙酸对甲苯磺酸酯(2.83g，8.77mmol)的CH₂Cl₂(10mL)混悬液中，所得混合物在室温下搅拌30分钟。一次性加入异氰酸甲酯(0.5g，8.77mmol)继续搅拌30分钟。加入H₂O(5mL)猝灭反应，用H₂O和正己烷洗涤，真空干燥。回收(R)-2-(3-甲基脲基)-2-苯基乙酸(1.5g；82％)，为白色固体，其不经进一步纯化而使用。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 2.54(d，J＝4.88Hz，3H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)5.95(q，J＝4.48Hz，1H)6.66(d，J＝7.93Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.67(s，1H).LCMS：分析计算值C₁₀H₁₂N₂O₃ 208.08实测值209.121(M+H)⁺；HPLC Phenomenex C-183.0×46mm，0-100％B经2分钟，1分钟保持时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝1.38min，90％均匀性指数。

按照制备Cap-45a所述的方法制备所需产物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 0.96(t，J＝7.17Hz，3H)2.94-3.05(m，2H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)6.05(t，J＝5.19Hz，1H)6.60(d，J＝7.63Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)12.68(s，1H).LCMS：分析计算值C₁₁H₁₄N₂O₃222.10实测值223.15(M+H)⁺.HPLC XTERRA C-183.0×506mm，0-100％B经2分钟，1分钟保持时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H₃PO₄，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H₃PO₄，RT＝0.87min，90％均匀性指数。

步骤1；(R)-叔丁基2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸酯：经10分钟向搅拌的(R)-叔丁基-2-氨基-2-苯基乙酸酯(1.0g，4.10mmol)和Hunig’s碱(1.79mL，10.25mmol)的DMF(40mL)溶液中逐滴加入二甲基氨甲酰氯(0.38mL，4.18mmol)。在室温下搅拌3小时后，减压浓缩反应，所得残留物溶于乙酸乙酯。用H₂O、1N aq.HCl和盐水洗涤有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，减压浓缩。得到(R)-叔丁基2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸酯，为白色固体(0.86g；75％)，不经进一步纯化而使用。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 1.33(s，9H)2.82(s，6H)5.17(d，J＝7.63Hz，1H)6.55(d，J＝7.32Hz，1H)7.24-7.41(m，5H).LCMS：分析计算值C₁₅H₂₂N₂O₃278.16实测值279.23(M+H)⁺；HPLC Phenomenex LUNA C-184.6×50mm，0-100％B经4分钟，1分钟保持时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.26min，97％均匀性指数。

步骤2；(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸：向搅拌的((R)-叔丁基2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸酯(0.86g，3.10mmol)的CH₂Cl₂(250mL)溶液中逐滴加入TFA(15mL)，所得溶液在室温下搅拌3小时。然后用EtOAC∶己烷(5∶20)混合物从溶液中沉淀出所需化合物，过滤，减压干燥。得到(R)-2-(3，3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸，为白色固体(0.59g，86％)，不经进一步纯化而使用。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 2.82(s，6H)5.22(d，J＝7.32Hz，1H)6.58(d，J＝7.32Hz，1H)7.28(t，J＝7.17Hz，1H)7.33(t，J＝7.32Hz，2H)7.38-7.43(m，2H)12.65(s，1H).LCMS：分析计算值C₁₁H₁₄N₂O₃：222.24；实测值：223.21(M+H)⁺.HPLC XTERRA C-183.0×50mm，0-100％B经2分钟，1分钟保持时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H₃PO₄，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H₃PO₄，RT＝0.75min，93％均匀性指数。

Cap-48

步骤1；(R)-叔丁基2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸酯：经10分钟向搅拌的(R)-2-氨基-2-苯基乙酸盐酸盐(1.0g，4.10mmol)和Hunig’s碱(1.0mL，6.15mmol)的DMF(15mL)的溶液中逐滴加入环戊基异氰酸酯(0.46mL，4.10mmol)。在室温下搅拌3小时后，减压浓缩反应，所得残留物用乙酸乙酯吸收。用H₂O和盐水洗涤有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩，减压浓缩。得到(R)-叔丁基2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸酯，为不透明油状物(1.32g；100％)，不经进一步纯化而使用。¹H NMR(500MHz，CD₃Cl-D)δppm 1.50-1.57(m，2H)1.58-1.66(m，2H)1.87-1.97(m，2H)3.89-3.98(m，1H)5.37(s，1H)7.26-7.38(m，5H).LCMS：分析计算值C₁₈H₂₆N₂O₃318.19实测值319.21(M+H)⁺；HPLC XTERRA C-183.0×50mm，0-100％B经4分钟，1分钟保持时间，A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA，RT＝2.82min，96％均匀性指数。

步骤2；(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸：向搅拌的(R)-叔丁基2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸酯(1.31g，4.10mmol)的CH₂Cl₂(25mL)溶液中逐滴加入TFA(4mL)和三乙基甲硅烷(1.64mL；10.3mmol)，所得溶液在室温下搅拌6小时。减压除去挥发性组分，粗产物在乙酸乙酯/戊烷中重结晶，得到(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸，为白色固体(0.69g，64％)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 1.17-1.35(m，2H)1.42-1.52(m，2H)1.53-1.64(m，2H)1.67-1.80(m，2H)3.75-3.89(m，1H)5.17(d，J＝7.93Hz，1H)6.12(d，J＝7.32Hz，1H)6.48(d，J＝7.93Hz，1H)7.24-7.40(m，5H)12.73(s，1H).LCMS：分析计算值C₁₄H₁₈N₂O₃：262.31；实测值：263.15(M+H)⁺.HPLC XTERRA C-183.0×50mm，0-100％B经2分钟，1分钟保持时间，A＝90％水，10％甲醇，0.2％H₃PO₄，B＝10％水，90％甲醇，0.2％H₃PO₄，RT＝1.24min，100％均匀性指数。

向搅拌的2-(苄基氨基)乙酸(2.0g，12.1mmol)的甲酸(91mL)溶液中加入甲醛(6.94mL，93.2mmol)。在70℃下搅拌5分钟后，将反应混合物减压浓缩至20mL，沉淀出白色固体。过滤后，收集母液，再减压浓缩，得到粗产物。用反相制备HPLC纯化(Xterra 30X100mm，在220nm检测，流速35mL/min，0-35％B经8min；A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA)，得到标题化合物2-(苄基(甲基)-氨基)乙酸的TFA盐(723mg，33％)，为无色蜡状物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm 2.75(s，3H)4.04(s，2H)4.34(s，2H)7.29-7.68(m，5H).LCMS：分析计算值：C₁₀H₁₃NO₂179.09；实测值：180.20(M+H)⁺。

向搅拌的3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸(0.50g，3.81mmol)的水(30mL)溶液中加入K₂CO₃(2.63g，19.1mmol)和苄基氯(1.32g，11.4mmol)。反应混合物在室温下搅拌18小时。用乙酸乙酯(30mLx2)萃取反应混合物，水层减压浓缩，得到粗产物，将其用反相制备HPLC纯化(Xterra 30x100mm，在220nm检测，流速40mL/min，20-80％B经6min；A＝90％水，10％甲醇，0.1％TFA，B＝10％水，90％甲醇，0.1％TFA)，得到2-(苄基(甲基)氨基)-3-甲基丁酸，TFA盐(126mg，19％)，为无色蜡状物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 0.98(d，3H)1.07(d，3H)2.33-2.48(m，1H)2.54-2.78(m，3H)3.69(s，1H)4.24(s，2H)7.29-7.65(m，5H).LCMS：分析计算值：C₁₃H₁₉NO₂221.14；实测值：222.28(M+H)⁺。

将Na₂CO₃(1.83g，17.2mmol)加入到L-缬氨酸(3.9g，33.29mmol)的NaOH(33mL的1M/H₂O溶液，33mmol)溶液中，所得溶液用冰-水浴冷却。经15分钟逐滴加入氯甲酸甲酯(2.8mL，36.1mmol)，除去冷却浴，反应混合物在室温下搅拌3.25小时。用醚(50mL，3x)洗涤反应混合物，水相用冰-水浴冷却，用浓HCl酸化至pH范围为1-2，用CH₂Cl₂(50mL，3x)萃取。干燥(MgSO₄)有机相，真空蒸发，得到Cap-51，为白色固体(6g)。主要旋转异构体的¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：12.54(s，1H)，7.33(d，J＝8.6，1H)，3.84(dd，J＝8.4，6.0，1H)，3.54(s，3H)，2.03(m，1H)，0.87(m，6H).HRMS：Anal.Calcd.for[M+H]⁺C₇H₁₄NO₄：176.0923；实测值176.0922。

Cap-52(与Cap-12相同)

按照合成Cap-51所述的方法从L-丙氨酸合成Cap-52。为了鉴定的目的，用反相HPLC纯化一部分粗物质(H₂O/甲醇/TFA)，得到Cap-52，为无色粘稠油状物。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：12.49(br s，1H)，7.43(d，J＝7.3，0.88H)，7.09(app br s，0.12H)，3.97(m，1H)，3.53(s，3H)，1.25(d，J＝7.3，3H)。

按照合成Cap-51所述的方法从适当的起始原料制备Cap-53至-64，如有更改，见注释。

经5分钟向冷却(冰-水)的Na₂CO₃(0.449g，4.23mmol)、NaOH(8.2mL的1M/H₂O溶液，8.2mmol)和(S)-2-氨基-3-羟基-3-甲基丁酸(1.04g，7.81mmol)混合物中加入氯甲酸甲酯(0.65mL，8.39mmol)。反应混合物搅拌45分钟，然后除去冷却浴，继续再搅拌3.75小时。用CH₂Cl₂洗涤反应混合物，用冰-水浴冷却水相，用浓HCl酸化至pH范围为1-2。真空除去挥发性组分，残留物用2∶1的MeOH/CH₂Cl₂(15mL)混合物吸收，过滤，滤液旋转蒸发，得到Cap-65，为白色半粘稠泡沫(1.236g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ6.94(d，J＝8.5，0.9H)，6.53(br s，0.1H)，3.89(d，J＝8.8，1H)，2.94(s，3H)，1.15(s，3H)，1.13(s，3H)。

通过采用合成Cap-65所述的方法从适当的可购买到的起始原料来制备Cap-66至-67。

¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ12.58(br s，1H)，7.07(d，J＝8.3，0.13H)，6.81(d，J＝8.8，0.67H)，4.10-4.02(m，1.15H)，3.91(dd，J＝9.1，3.5，0.85H)，3.56(s，3H)，1.09(d，J＝6.2，3H)。[注意：仅记录了主要NH信号]。

¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：12.51(br s，1H)，7.25(d，J＝8.4，0.75H)，7.12(br d，J＝0.4，0.05H)，6.86(br s，0.08H)，3.95-3.85(m，2H)，3.54(s，3H)，1.08(d，J＝6.3，3H)。[注意：仅记录了主要NH信号]。

将氯甲酸甲酯(0.38ml，4.9mmol)逐滴加入到1N NaOH(aq)(9.0ml，9.0mmol)、1M NaHCO₃(aq)(9.0ml，9.0mol)、L-天冬氨酸β-苄基酯(1.0g，4.5mmol)和二烷(9ml)的混合物中。反应混合物在室温条件下搅拌3小时，然后用乙酸乙酯(50ml，3x)洗涤。水层用12N HCl酸化至pH～1-2，用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩，得到Cap-68，为浅黄色油状物(1.37g；质量超过理论产量，该产物不经进一步纯化而使用)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：δ12.88(br s，1H)，7.55(d，J＝8.5，1H)，7.40-7.32(m，5H)，5.13(d，J＝12.8，1H)，5.10(d，J＝12.9，1H)，4.42-4.38(m，1H)，3.55(s，3H)，2.87(dd，J＝16.2，5.5，1H)，2.71(dd，J＝16.2，8.3，1H).LC(Cond.2)：RT＝1.90min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₆NO₆：282.10；实测值282.12。

Cap-69a和-69b

将NaCNBH₃(2.416g，36.5mmol)分批加入到冷却的(～15℃)丙氨酸(1.338g，15.0mmol)的水(17mL)/MeOH(10mL)溶液中。几分钟后，经4分钟逐滴加入乙醛(4.0mL，71.3mmol)，除去冷却浴，反应混合物在室温条件下搅拌6小时。再加入乙醛(4.0mL)，将反应搅拌2小时。缓慢加入浓HCl直至pH达到～1.5，所得混合物在40℃加热1小时。真空除去大部分挥发性组分，残留物用50WX8-100离子交换树脂纯化(用水洗涤柱子，用稀NH₄OH洗脱化合物，稀NH₄OH由18ml NH₄OH和282ml水混合制备)，得到Cap-69(2.0g)，为米色柔软吸湿性固体。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ3.44(q，J＝7.1，1H)，2.99-2.90(m，2H)，2.89-2.80(m，2H)，1.23(d，J＝7.1，3H)，1.13(t，J＝7.3，6H)。

Cap-70至-74x按照Cap-69的合成中所述的方法采用适当的起始原料制备。

Cap-75，步骤a

将NaBH₃CN(1.6g，25.5mmol)加入到冷却(冰/水浴)的H-D-Ser-OBzl HCl(2.0g，8.6mmol)的水(25ml)/甲醇(15ml)溶液中。经5分钟逐滴加入乙醛(1.5ml，12.5mmol)，除去冷却浴，反应混合物在室温下搅拌2小时。用12N HCl小心猝灭反应，真空浓缩。将残留物溶于水，用反相HPLC纯化(MeOH/H₂O/TFA)，得到(R)-苄基2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸酯的TFA盐，为无色粘稠油状物(1.9g).¹HNMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：δ9.73(br s，1H)，7.52-7.36(m，5H)，5.32(d，J＝12.2，1H)，5.27(d，J＝12.5，1H)，4.54-4.32(m，1H)，4.05-3.97(m，2H)，3.43-3.21(m，4H)，1.23(t，J＝7.2，6H).LC/MS(Cond.2)：RT＝1.38min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₂₂NO₃：252.16；实测值252.19。

Cap-75

将NaH(0.0727g，1.82mmol，60％)加入到冷却的(冰-水)上面制备的(R)-苄基2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸酯的TFA盐(0.3019g，0.8264mmol)的THF(3.0mL)溶液中，所得混合物搅拌15分钟。加入碘甲烷(56μL，0.90mmol)，继续搅拌18小时，同时使浴融化至室温条件。用水猝灭反应，载上MeOH预处理的MCX(6g)柱，用甲醇洗涤，然后用2N NH₃/甲醇洗脱化合物。真空除去挥发性组分，得到Cap-75，被(R)-2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸污染，为黄色半固体(100mg)。该产物不经进一步纯化而使用。

将NaCNBH₃(1.60g，24.2mmol)分批加入到冷却的(～15℃)(S)-4-氨基-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(2.17g，9.94mmol)的水/MeOH(各12mL)溶液中。几分钟后，经2分钟逐滴加入乙醛(2.7mL，48.1mmol)，除去冷却浴，反应混合物在室温条件下搅拌3.5小时。再加入乙醛(2.7mL，48.1mmol)，将反应搅拌20.5小时。真空除去大部分MeOH组分，剩余的混合物用浓HCl处理，直至其pH达到～1.0，然后在40℃下加热2小时。真空除去挥发性组分，残留物用4MHCl/二噁烷(20mL)处理，在室温条件下搅拌7.5小时。真空除去挥发性组分，残留物用50WX8-100离子交换树脂(用水洗涤柱子，用稀NH₄OH洗脱化合物，稀NH₄OH由18ml NH₄OH和282ml水制备)，得到中间体(S)-2-氨基-4-(二乙基氨基)丁酸，为米色固体(1.73g)。

经11分钟将氯甲酸甲酯(0.36mL，4.65mmol)逐滴加入到冷却的(冰-水)Na₂CO₃(0.243g，2.29mmol)、NaOH(4.6mL1M/H₂O，4.6mmol)和上面产物(802.4mg)的混合物中。反应混合物搅拌55分钟，然后除去冷却浴，再继续搅拌5.25小时。反应混合物用等体积的水稀释，用CH₂Cl₂(30mL，2x)洗涤，水相用冰-水浴冷却，用浓HCl酸化至pH 2。然后真空除去挥发性组分，粗物质用MCX树脂(6.0g；用水洗涤柱子，样品用2.0M NH₃/MeOH洗脱)去碱(free-based)，得到不纯的Cap-76，为米色固体(704mg)。¹H NMR(MeOH-d₄，δ＝3.29ppm，400MHz)：δ3.99(dd，J＝7.5，4.7，1H)，3.62(s，3H)，3.25-3.06(m，6H)，2.18-2.09(m，1H)，2.04-1.96(m，1H)，1.28(t，J＝7.3，6H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₂₁N₂O₄：233.15；实测值233.24。

Cap-77a和-77b

Cap-77的合成按照Cap-7中所述的方法采用7-氮杂二环[2.2.1]庚烷用于SN₂取代步骤来进行，采用下面的条件对中间体2-(7-氮杂二环[2.2.1]庚-7-基)-2-苯基乙酸苄基酯进行对映异构体分离：将中间体(303.7mg)溶于乙醇，所得溶液注射到手性HPLC柱上(ChiracelAD-H柱，30x250mm，5um)，用90％CO₂-10％EtOH以70mL/min洗脱，温度为35℃，得到124.5mg对映异构体-1和133.8mg对映异构体-2。按照Cap-7的制备方法将这些苄基酯氢解，得到Cap-77：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ7.55(m，2H)，7.38-7.30(m，3H)，4.16(s，1H)，3.54(app br s，2H)，2.08-1.88(m，4H)，1.57-1.46(m，4H).LC(Cond.1)：RT＝0.67min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₁₈NO₂：232.13；实测值232.18.HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₁₈NO₂：232.1338；实测值232.1340。

将NaCNBH₃(0.5828g，9.27mmol)加入到(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸盐酸盐(Cap-3合成中的中间体；0.9923mg，4.60mmol)和(1-乙氧基环丙氧基)三甲基甲硅烷(1.640g，9.40mmol)的MeOH(10mL)中的混合物中，将该半-非均质混合物用油浴在50℃下加热20小时。再加入(1-乙氧基环丙氧基)三甲基甲硅烷(150mg，0.86mmol)和NaCNBH₃(52mg，0.827mmol)，将反应混合物再加热3.5小时。然后使其冷至室温，用浓HCl酸化至～pH 2，过滤混合物，滤液旋转蒸发。所得粗物质用i-PrOH(6mL)吸收，加热使其溶解，滤除不溶解部分，真空浓缩滤液。将所得约1/3粗物质用反相HPLC纯化(H₂O/MeOH/TFA)，得到Cap-78的TFA盐，为无色粘稠油状物(353mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz；after D₂Oexchange)：δ7.56-7.49(m，5H)，5.35(S，1H)，3.35(m，1H)，3.06(app brs，1H)，2.66(m，1H)，1.26(t，J＝7.3，3H)，0.92(m，1H)，0.83-0.44(m，3H).LC(Cond.1)：RT＝0.64min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₂：220.13；实测值220.21.HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₈NO₂：220.1338；实测值220.1343。

Cap-79

将臭氧通入冷却的(-78℃)Cap-55(369mg，2.13mmol)的CH₂Cl₂(5.0mL)溶液，直至反应混合物变为蓝色。加入Me₂S(10移液管(pipet)滴)，反应混合物搅拌35分钟。用-10℃浴代替-78℃浴，再继续搅拌30分钟，然后真空除去挥发性组分，得到无色粘稠油状物。

将NaBH₃CN(149mg，2.25mmol)加入到上面粗物质和吗啉(500μL，5.72mmol)的MeOH(5.0mL)溶液中，所得混合物在室温条件下搅拌4小时。将其冷至冰-水温度，用浓HCl处理至pH为～2.0，然后搅拌2.5小时。真空除去挥发性组分，残留物用MCX树脂(MeOH洗涤；2.0N NH₃/MeOH洗脱)和反相HPLC(H₂O/MeOH/TFA)组合纯化，得到Cap-79，含有未知量的吗啉。

为了消耗吗啉污染物，将上面的物质溶于CH₂Cl₂(1.5mL)，用Et₃N(0.27mL，1.94mmol)然后用乙酸酐(0.10mL，1.06mmol)处理，在室温条件下搅拌18小时。加入THF(1.0mL)和H₂O(0.5mL)，继续搅拌1.5小时。真空除去挥发性组分，所得残留物过MCX树脂(MeOH洗涤；2.0N NH₃/MeOH洗脱)，得到不纯的Cap-79，为棕色粘稠油状物，其不经进一步纯化用于下面的步骤。

Cap-80a和-80b

经15分钟将SOCl₂(6.60mL，90.5mmol)逐滴加入到冷却的(冰-水)(S)-3-氨基-4-(苄基氧基)-4-氧代丁酸(10.04g，44.98mmol)和MeOH(300mL)的混合物中，除去冷却浴，反应混合物在室温条件下搅拌29小时。真空除去大部分挥发性组分，残留物在EtOAc(150mL)和饱和NaHCO₃溶液之间小心分配。用EtOAc(150mL，2x)萃取水相，干燥(MgSO₄)合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到(S)-1-苄基4-甲基2-氨基琥珀酸酯，为无色油状物(9.706g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ7.40-7.32(m，5H)，5.11(s，2H)，3.72(app t，J＝6.6，1H)，3.55(s，3H)，2.68(dd，J＝15.9，6.3，1H)，2.58(dd，J＝15.9，6.8，1H)，1.96(s，2H).LC(Cond.1)：RT＝0.90min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₄：238.11；实测值238.22。

经1分钟将Pb(NO₃)₂(6.06g，18.3mmol加入到(S)-1-苄基4-甲基2-氨基琥珀酸酯(4.50g，19.0mmol)、9-溴-9-苯基-9H-芴(6.44g，20.0mmol)和Et₃N(3.0mL，21.5mmol)的CH₂Cl₂(80mL)溶液中，将该非均质混合物在室温条件下搅拌48小时。过滤混合物，滤液用MgSO₄处理，再次过滤，浓缩最终的滤液。将所得粗物质进行Biotage纯化(350g硅胶，CH₂Cl₂洗脱)，得到(S)-1-苄基4-甲基2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸酯，为高度粘稠的无色油状物(7.93g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：δ7.82(m，2H)，7.39-7.13(m，16H)，4.71(d，J＝12.4，1H)，4.51(d，J＝12.6，1H)，3.78(d，J＝9.1，NH)，3.50(s，3H)，2.99(m，1H)，2.50-2.41(m，2H，与溶剂峰部分重叠)。LC(Cond.1)：RT＝2.16min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₃₁H₂₈NO₄：478.20；实测值478.19。

经10分钟将LiHMDS(9.2mL 1.0M/THF，9.2mmol)逐滴加入到冷却的(-78℃)(S)-1-苄基4-甲基2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸酯(3.907g，8.18mmol)的THF(50mL)溶液中，搅拌～1小时。经8分钟向混合物中逐滴加入MeI(0.57mL，9.2mmol)，继续搅拌16.5小时，同时使冷却浴融化至室温。用饱和NH₄Cl溶液(5mL)猝灭后，真空除去大部分有机组分，残留物在CH₂Cl₂(100mL)和水(40mL)之间分配。干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩，所得粗物质用Biotage纯化(350g硅胶；25％EtOAc/己烷)，得到3.65g比率为约～1.0∶0.65的1-苄基4-甲基3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸酯的2S/3S和2S/3R非对映异构混合物(¹H NMR)。此时未检测优势异构体的立体化学，该混合物不经进一步纯化用于下面的步骤。部分¹H NMR数据(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：主要非对映异构体，δ4.39(d，J＝12.3，CH₂的1H)，3.33(s，3H，与H₂O信号重叠)，3.50(d，J＝10.9，NH)，1.13(d，J＝7.1，3H)；次要非对映异构体，δ4.27(d，J＝12.3，CH₂的1H)，3.76(d，J＝10.9，NH)，3.64(s，3H)，0.77(d，J＝7.0，3H).LC(Cond.1)：RT＝2.19min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₃₂H₃₀NO₄：492.22；实测值492.15。

经10分钟将二异丁基氢化铝(20.57ml 1.0M的己烷溶液，20.57mmol)逐滴加入到冷却(-78℃)的上面制备的(2S)-1-苄基4-甲基3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)琥珀酸酯(3.37g，6.86mmol)的THF(120mL)溶液中，在-78℃下搅拌20小时。从冷却浴上移开反应混合物，迅速倒入搅拌的～1M H₃PO₄/H₂O(250mL)中，所得混合物用醚(100mL，2x)萃取。用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩。制备粗物质的硅胶筛，进行色谱法纯化(25％EtOAc/己烷；重力洗脱)，得到1.1g(2S，3S)-苄基4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯，被苄基醇污染，为无色粘稠油状物，和含有(2S，3R)立体异构体杂质的(2S，3R)-苄基4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯。将后面的样品再用同样的柱色谱纯化条件纯化，得到750mg纯物质，为白色泡沫。[注意：在上述条件下(2S，3S)异构体在(2S，3R)异构体之前被洗脱]。(2S，3S)异构体：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：7.81(m，2H)，7.39-7.08(m，16H)，4.67(d，J＝12.3，1H)，4.43(d，J＝12.4，1H)，4.21(app t，J＝5.2，OH)，3.22(d，J＝10.1，NH)，3.17(m，1H)，3.08(m，1H)，～2.5(m，1H，与溶剂信号重叠)，1.58(m，1H)，0.88(d，J＝6.8，3H).LC(Con d.1)：RT＝2.00min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₃₁H₃₀NO₃：464.45；实测值464.22.(2S，3R)异构体：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)：7.81(d，J＝7.5，2H)，7.39-7.10(m，16H)，4.63(d，J＝12.1，1H)，4.50(app t，J＝4.9，1H)，4.32(d，J＝12.1，1H)，3.59-3.53(m，2H)，3.23(m，1H)，2.44(dd，J＝9.0，8.3，1H)，1.70(m，1H)，0.57(d，J＝6.8，3H).LC(Cond.1)：RT＝1.92min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₃₁H₃₀NO₃：464.45；实测值464.52。

以对采用下面的方案从每个异构体制备的内酯衍生物进行的NOE研究为基础来进行DIBAL-还原产物的相对立体化学确定：将LiHMDS(50μL的1.0M/THF溶液，0.05mmol)加入到冷却的(冰-水)(2S，3S)-苄基4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯(62.7mg，0.135mmol)的THF(2.0mL)溶液中，反应混合物在同样温度下搅拌～2小时。真空除去挥发性组分，残留物在CH₂Cl₂(30mL)、水(20mL)和饱和NH₄Cl水溶液(1mL)之间分配。干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩，所得粗物质进行Biotage纯化(40g硅胶；10-15％EtOAc/己烷)，得到(3S，4S)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮，为无色薄膜状固体(28.1mg)。(2S，3R)-苄基4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯同样被加工为(3S，4R)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮。(3S，4S)-内酯异构体：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.83(d，J＝7.5，2H)，7.46-7.17(m，11H)，4.14(app t，J＝8.3，1H)，3.60(d，J＝5.8，NH)，3.45(app t，J＝9.2，1H)，～2.47(m，1H，与溶剂信号部分重叠)，2.16(m，1H)，0.27(d，J＝6.6，3H).LC(Cond.1)：RT＝1.98min；LC/MS：分析计算值[M+Na]⁺C₂₄H₂₁NNaO₂：378.15；实测值378.42.(3S，4R)-内酯异构体：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.89(d，J＝7.6，1H)，7.85(d，J＝7.3，1H)，7.46-7.20(m，11H)，3.95(dd，J＝9.1，4.8，1H)，3.76(d，J＝8.8，1H)，2.96(d，J＝3.0，NH)，2.92(dd，J＝6.8，3，NCH)，1.55(m，1H)，0.97(d，J＝7.0，3H).LC(Cond.1)：RT＝2.03min；LC/MS：分析计算值[M+Na]⁺C₂₄H₂₁NNaO₂：378.15；实测值378.49。

将TBDMS-Cl(48mg，0.312mmol)然后将咪唑(28.8mg，0.423mmol)加入到(2S，3S)-苄基4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯(119.5mg，0.258mmol)的CH₂Cl₂(3ml)溶液中，所得混合物在室温条件下搅拌14.25小时。然后将反应混合物用CH₂Cl₂(30mL)稀释，用水(15mL)洗涤，干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩。所得粗物质用Biotage纯化(40g硅胶；5％EtOAc/己烷)，得到(2S，3S)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯，被TBDMS为基础的杂质污染，为无色粘稠油状物(124.4mg)。同样将(2S，3R)-苄基4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯制备为(2S，3R)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯。(2S，3S)-甲硅烷基醚异构体：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.82(d，J＝4.1，1H)，7.80(d，J＝4.0，1H)，7.38-7.07(m，16H)，4.70(d，J＝12.4，1H)，4.42(d，J＝12.3，1H)，3.28-3.19(m，3H)，2.56(dd，J＝10.1，5.5，1H)，1.61(m，1H)，0.90(d，J＝6.8，3H)，0.70(s，9H)，-0.13(s，3H)，-0.16(s，3H).LC(Cond.1，其中运行时间被延长为4分钟)：RT＝3.26min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₃₇H₄₄NO₃Si：578.31；实测值578.40.(2S，3R)-甲硅烷基醚异构体：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)，7.82(d，J＝3.0，1H)，7.80(d，J＝3.1，1H)，7.39-7.10(m，16H)，4.66(d，J＝12.4，1H)，4.39(d，J＝12.4，1H)，3.61(dd，J＝9.9，5.6，1H)，3.45(d，J＝9.5，1H)，3.41(dd，J＝10，6.2，1H)，2.55(dd，J＝9.5，7.3，1H)，1.74(m，1H)，0.77(s，9H)，0.61(d，J＝7.1，3H)，-0.06(s，3H)，-0.08(s，3H)。

将氢气球与(2S，3S)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯(836mg，1.447mmol)和10％Pd/C(213mg)的EtOAc(16mL)混合物连接，所得混合物在室温下搅拌～21小时，需要时给气球重新充H₂。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，通过硅藻土滤垫过滤，用EtOAc(200mL)，EtOAc/MeOH(1∶1的混合物，200mL)和MeOH(750mL)洗涤滤垫。浓缩合并的有机相，从所得粗物质制备硅胶筛，进行快速色谱法纯化(8∶2∶1的EtOAc/i-PrOH/H₂O混合物)，得到(2S，3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸，为白色蓬松固体(325mg)。同样将(2S，3R)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸酯制备为(2S，3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸。(2S，3S)-氨基酸异构体：¹H NMR(甲醇-d₄，δ＝3.29ppm，400MHz)，3.76(dd，J＝10.5，5.2，1H)，3.73(d，J＝3.0，1H)，3.67(dd，J＝10.5，7.0，1H)，2.37(m，1H)，0.97(d，J＝7.0，3H)，0.92(s，9H)，0.10(s，6H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₂₆NO₃Si：248.17；实测值248.44.(2S，3R)-氨基酸异构体：¹H NMR(甲醇-d₄，δ＝3.29ppm，400MHz)，3.76-3.75(m，2H)，3.60(d，J＝4.1，1H)，2.16(m，1H)，1.06(d，J＝7.3，3H)，0.91(s，9H)，0.09(s，6H).分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₂₆NO₃Si：248.17；实测值248.44。

将水(1mL)和NaOH(0.18mL的1.0M/H₂O溶液，0.18mmol)加入到(2S，3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(41.9mg，0.169mmol)和Na₂CO₃(11.9mg，0.112mmol)的混合物中，超声约1分钟使反应物溶解。然后将混合物用冰-水浴冷却，经30秒加入氯甲酸甲酯(0.02mL，0.259mmol)，在同样温度下继续剧烈搅拌40分钟，然后在室温下剧烈搅拌2.7小时。用水(5mL)稀释反应混合物，用冰-水冷却，逐滴加入1.0N HCl水溶液(～0.23mL)处理。所得混合物再用水(10mL)稀释，用CH₂Cl₂(15mL，2x)萃取。干燥(MgSO₄)合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到Cap-80a，为米色固体。同样将(2S，3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸制备为Cap-80b。Cap-80a：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，400MHz)，12.57(br s，1H)，7.64(d，J＝8.3，0.3H)，7.19(d，J＝8.8，0.7H)，4.44(dd，J＝8.1，4.6，0.3H)，4.23(dd，J＝8.7，4.4，0.7H)，3.56/3.53(两个单峰，3H)，3.48-3.40(m，2H)，2.22-2.10(m，1H)，0.85(s，9H)，～0.84(d，0.9H，与t-Bu信号重叠)，0.79(d，J＝7，2.1H)，0.02/0.01/0.00(三个重叠单峰，6H).LC/MS：分析计算值[M+Na]⁺C₁₃H₂₇NNaO₅Si：328.16；实测值328.46.Cap-80b：¹H NMR(CDCl₃，δ＝7.24ppm，400MHz)，6.00(br d，J＝6.8，1H)，4.36(dd，J＝7.1，3.1，1H)，3.87(dd，J＝10.5，3.0，1H)，3.67(s，3H)，3.58(dd，J＝10.6，4.8，1H)，2.35(m，1H)，1.03(d，J＝7.1，3H)，0.90(s，9H)，0.08(s，6H).LC/MS：分析计算值[M+Na]⁺C₁₃H₂₇NNaO₅Si：328.16；实测值328.53。粗产物不经进一步纯化而使用。

按照Falb et al.Synthetic Communications 1993，23，2839中描述的方案制备。

Cap-82至Cap-85

Cap-82至Cap-85按照Cap-51或Cap-13中所述的方法从适当的起始原料制备。样品展现出与其对映异构体类似的光谱特征(即分别为Cap-4、Cap-13、Cap-51和Cap-52)。

在0℃下向O-甲基-L-苏氨酸(3.0g，22.55mmol)、NaOH(0.902g，22.55mmol)的H₂O(15mL)中的混合物中逐滴加入ClCO₂Me(1.74mL，22.55mmol)。所得混合物搅拌12小时，用1N HCl酸化至pH1。用EtOAc(2x250mL)和10％MeOH的CH₂Cl₂(250mL)溶液萃取水相，真空浓缩合并的有机相，得到无水油状物(4.18g，97％)，其纯度足以用于后面的步骤。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ4.19(s，1H)，3.92-3.97(m，1H)，3.66(s，3H)，1.17(d，J＝7.7Hz，3H).LCMS：分析计算值C₇H₁₃NO₅：191；实测值：190(M-H)^-。

在0℃下向L-高丝氨酸(2.0g，9.79mmol)、Na₂CO₃(2.08g，19.59mmol)的H₂O(15mL)中的混合物中逐滴加入ClCO₂Me(0.76mL，9.79mmol)。所得混合物搅拌48小时，用1N HCl酸化至pH 1。用EtOAc(2X250mL)萃取水相，真空浓缩合并的有机相，得到无色固体(0.719g，28％)，其纯度足以用于后面的步骤。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ4.23(dd，J＝4.5，9.1Hz，1H)，3.66(s，3H)，3.43-3.49(m，2H)，2.08-2.14(m，1H)，1.82-1.89(m，1H).LCMS：分析计算值C₇H₁₃NO₅：191；实测值：192(M+H)⁺。

将L-缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、3-溴吡啶(1.8mL，18.7mmol)、K₂CO₃(2.45g，17.7mmol)和CuI(169mg，0.887mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃下加热12小时。反应混合物冷至室温，倒入H₂O(约150mL)中，用EtOAc(x2)洗涤。有机层用少量H₂O萃取。将合并的水相用6N HCl酸化至约pH 2。将体积减至约1/3，加入20g阳离子交换树脂(Strata)。静置所得浆液20分钟，载上阳离子交换树脂垫(Strata)(约25g)。用H₂O(200mL)、MeOH(200mL)然后用NH₃(3M的MeOH溶液，2X200mL)洗涤所述垫。真空浓缩适当流分，残留物(约1.1g)溶于H₂O，冷冻并冻干。得到泡沫状标题化合物(1.02g，62％)。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.00(s，br，1H)，7.68-7.71(m，1H)，7.01(s，br，1H)，6.88(d，J＝7.5Hz，1H)，5.75(s，br，1H)，3.54(s，1H)，2.04-2.06(m，1H)，0.95(d，J＝6.0Hz，3H)，0.91(d，J＝6.6Hz，3H).LCMS：分析计算值C₁₀H₁₄N₂O₂：194；实测值：195(M+H)⁺。

将L-缬氨酸(1.0g，8.54mmol)、5-溴嘧啶(4.03g，17.0mmol)、K₂CO₃(2.40g，17.4mmol)和CuI(179mg，0.94mmol)在DMSO(10mL)中的混合物在100℃下加热12小时。将反应混合物冷至室温，倒入H₂O(约150mL)中，用EtOAc(x2)洗涤。有机层用少量H₂O萃取，合并的水相用6N HCl酸化至约pH 2。将体积减至约1/3，加入20g阳离子交换树脂(Strata)。所得浆液静置20分钟，载上阳离子交换树脂垫(Strata)(约25g)。用H₂O(200mL)、MeOH(200mL)然后用NH₃(3M的MeOH溶液，2x200mL)洗涤所述垫。真空浓缩适当流分，残留物(约1.1g)溶于H₂O，冷冻并冻干。得到泡沫状标题化合物(1.02g，62％)。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)显示该混合物包含缬氨酸，无法评价其纯度。该物质就这样用于后面的反应。LCMS：分析计算值C₉H₁₃N₃O₂：195；实测值：196(M+H)⁺。

Cap-90按照Cap-1的制备中所述的方法制备。所述粗物质就这样用于后面的步骤。LCMS：分析计算值C₁₁H₁₅NO₂：193；实测值：192(M-H)^-。

除非另有说明，下面的caps按照制备cap 51所用的方法制备：

Cap-117-Cap-123

为了制备Cap-117-Cap-123，从商业来源获得Boc氨基酸，用25％TFA的CH₂Cl₂溶液处理进行脱保护。通过LCMS判断反应完全后，真空除去溶剂，按照Cap-51中所述的方法，用氯甲酸甲酯对相应的氨基酸的TFA盐进行氨甲酰化。

按照Cap-51中所述的方法对L-苏氨酸叔丁酯的盐酸盐进行氨甲酰化。粗反应混合物用1N HCl酸化至pH～1，所得混合物用EtOAc(2X50mL)萃取。真空浓缩合并的有机相，得到无色油状物，其静置后固化。真空浓缩水层，产物和无机盐的所得混合物用EtOAc-CH₂Cl₂-MeOH(1∶1∶0.1)研磨，然后真空浓缩有机相，得到无色油状物，由LCMS显示其为所需产物。两批产物合并得到0.52g固体。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δ4.60(m，1H)，4.04(d，J＝5.0Hz，1H)，1.49(d，J＝6.3Hz，3H).LCMS：分析计算值C₅H₇NO₄：145；实测值：146(M+H)⁺。

向Pd(OH)₂，(20％，100mg)、甲醛水溶液(37％wt，4ml)、乙酸(0.5mL)的甲醇(15mL)混悬液中加入(S)-4-氨基-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(1g，4.48mmol)。反应用氢气净化几次，与氢气球在室温下搅拌过夜。通过硅藻土滤垫过滤反应混合物，真空除去挥发性组分。所得粗物质就这样用于下面的步骤。LC/MS：分析计算值C₁₁H₂₂N₂O₄：246；实测值：247(M+H)⁺。

此方法为用于制备Cap-51的方法的修改。在0℃下向3-甲基-L-组氨酸(0.80g，4.70mmol)的THF(10mL)和H₂O(10mL)的混悬液中加入NaHCO₃(0.88g，10.5mmol)。所得混合物用ClCO₂Me(0.40mL，5.20mmol)处理，并使所述混合物在0℃下搅拌。搅拌约2小时后，LCMS显示无起始原料剩余。将反应用6N HCl酸化至pH 2。

真空除去溶剂，残留物悬浮于20mL 20％MeOH CH₂Cl₂溶液中。过滤混合物，浓缩，得到浅黄色泡沫(1.21g，)。LCMS和¹HNMR显示该物质为甲基酯和所需产物的9∶1的混合物。将此物质用THF(10mL)和H₂O(10mL)吸收，冷至0℃，加入LiOH(249.1mg，10.4mmol)。搅拌约1小时后，LCMS显示无酯剩余。因此将混合物用6N HCl酸化，真空除去溶剂。LCMS和¹H NMR确证无酯存在。得到被无机盐污染的标题化合物的HCl盐(1.91g，＞100％)。该化合物不经进一步纯化就这样用于后面的步骤。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δ8.84，(s，1H)，7.35(s，1H)，4.52(dd，J＝5.0，9.1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(dd，J＝4.5，15.6Hz，1H，部分被溶剂掩盖)，3.12(dd，J＝9.0，15.6Hz，1H).LCMS：分析计算值C₉H₁₃N₃O₄：227.09；实测值：228.09(M+H)⁺。

Cap-127

按照上面制备Cap-126的方法从(S)-2-氨基-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(1.11g，6.56mmol)、NaHCO3(1.21g，14.4mmol)和ClCO₂Me(0.56mL，7.28mmol)制备Cap-127。得到被无机盐污染的标题化合物的HCl盐(1.79g，＞100％)。LCMS和¹H NMR显示存在约5％的甲基酯。该粗混合物不经进一步纯化就这样使用。¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δ8.90(s，1H)，7.35(s，1H)，4.48(dd，J＝5.0，8.6Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.62(s，3H)，3.35(m，1H)，3.08(m，1H)；LCMS：分析计算值C₉H₁₃N₃O₄：227.09；实测值：228(M+H)⁺。

Cap-128的制备

步骤1.(S)-苄基2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸酯(pentynoate)(cj-27b)的制备。

在0℃下向cj-27a(1.01g，4.74mmol)、DMAP(58mg，0.475mmol)和iPr₂NEt(1.7mL，9.8mmol)的CH₂Cl₂(100mL)溶液中加入Cbz-Cl(0.68mL，4.83mmol)。所得溶液在0℃下搅拌4小时，用(1NKHSO₄，盐水)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩。残留物用快速柱色谱法纯化(TLC 6：1hex：EtOAc)，得到标题化合物(1.30g，91％)，为无色油状物。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ7.35(s，5H)，5.35(d，br，J＝8.1Hz，1H)，5.23(d，J＝12.2Hz，1H)，5.17(d，J＝12.2Hz，1H)，4.48-4.53(m，1H)，2.68-2.81(m，2H)，2.00(t，J＝2.5Hz，1H)，1.44(s，9H).LCMS：分析计算值C₁₇H₂₁NO₄：303；实测值：304(M+H)⁺。

步骤2.(S)-苄基3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸酯(cj-28)的制备。

在室温下向(S)-苄基2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-炔酸酯(0.50g，1.65mmol)、抗坏血酸钠(0.036g，0.18mmol)、CuSO₄-5H₂O(0.022g，0.09mmol)和NaN₃(0.13g，2.1mmol)的DMF-H₂O(5mL，4∶1)中的混合物中加入BnBr(0.24mL，2.02mmol)，所得混合物升至65℃。5小时后，LCMS显示转化率较低。再加入一部分NaN₃(100mg)，继续加热12小时。将反应倒入EtOAc和H₂O中并振摇。分离各层，水层用EtOAc萃取3次，合并的有机相用(H₂Ox3，盐水)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。残留物快速纯化(Biotage，40+M 0-5％MeOH的CH₂Cl₂溶液；TLC 3％MeOH的CH₂Cl₂溶液)，得到浅黄色油状物，其静置后固化(748.3mg，104％)。其NMR与所需产物一致，但显示有DMF存在。该物质不经进一步纯化就这样使用。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.84(s，1H)，7.27-7.32(m，10H)，5.54(s，2H)，5.07(s，2H)，4.25(m，1H)，3.16(dd，J＝1.0，5.3Hz，1H)，3.06(dd，J＝5.3，14.7Hz)，2.96(dd，J＝9.1，14.7Hz，1H)，1.31(s，9H)。

LCMS：分析计算值C₂₄H₂₈N₄O₄：436；实测值：437(M+H)⁺。

步骤3.(S)-苄基3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸酯(cj-29)的制备。

向(S)-苄基3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸酯(0.52g，1.15mmol)的CH₂Cl₂溶液中加入TFA(4mL)。混合物在室温下搅拌2小时。所得混合物真空浓缩，得到无色油状物，其静置后固化。将此物质溶于THF-H₂O，冷至0℃。加入固体NaHCO₃(0.25g，3.00mmol)，然后加入ClCO₂Me(0.25mL，3.25mmol)。搅拌1.5小时后，将混合物用6N HCl酸化至pH～2，然后倒入H₂O-EtOAc中。分离各层，用EtOAc萃取水相3次。洗涤(H₂O，盐水)合并的有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，真空浓缩，得到无色油状物(505.8mg，111％，NMR显示有未确定的杂质存在)，其在泵上静置时固化。该物质不经进一步纯化就这样使用。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.87(s，1H)，7.70(d，J＝8.1Hz，1H)，7.27-7.32(m，10H)，5.54(s，2H)，5.10(d，J＝12.7Hz，1H)，5.06(d，J＝12.7Hz，1H)，4.32-4.37(m，1H)，3.49(s，3H)，3.09(dd，J＝5.6，14.7Hz，1H)，2.98(dd，J＝9.6，14.7Hz，1H)。LCMS：分析计算值C₂₁H₂₂N₄O₄：394；实测值：395(M+H)⁺。

步骤4.(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸(Cap-128)的制备。

将(S)-苄基3-(1-苄基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸酯(propanoate)(502mg，1.11mmol)在Pd-C(82mg)的MeOH(5mL)溶液存在下在大气压力下氢化12小时。所得混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩。得到(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-1，2，3-三唑-4-基)丙酸，为无色胶状物(266mg，111％)，其被约10％的甲基酯污染。该物质不经进一步纯化就这样使用。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.78(s，br，1H)，7.59(s，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，1H)，4.19-4.24(m，1H)，3.49(s，3H)，3.12(dd，J＝4.8Hz，14.9Hz，1H)，2.96(dd，J＝9.9，15.0Hz，1H).LCMS：分析计算值C₇H₁₀N₄O₄：214；实测值：215(M+H)⁺。

Cap-129的制备

步骤1.(S)-2-(苄基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(cj-31)的制备。

将(S)-苄基2-氧代氧杂环丁-3-基氨基甲酸酯(0.67g，3.03mmol)和吡唑(0.22g，3.29mmol)的CH₃CN(12mL)混悬液在50℃下加热24小时。所得混合物冷至室温过夜，过滤固体，得到(S)-2-(苄基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(330.1mg)。滤液真空浓缩，然后用少量CH₃CN(约4mL)研磨，得到第二批(43.5mg)。总产量370.4mg(44％)。m.p.165.5-168℃。lit m.p.168.5-169.5[Vederas et al.J.Am.Chem.Soc.1985，107，7105].¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δ7.51(d，J＝2.0，1H)，7.48(s，J＝1.5Hz，1H)，7.24-7.34(m，5H)，6.23m，1H)，5.05(d，12.7H，1H)，5.03(d，J＝12.7Hz，1H)，4.59-4.66(m，2H)，4.42-4.49(m，1H)。LCMS：分析计算值C₁₄H₁₅N₃O₄：289；实测值：290(M+H)⁺。

步骤2.(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(Cap-129)的制备。

将(S)-2-(苄基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(0.20g，0.70mmol)在Pd-C(45mg)的MeOH(5mL)溶液存在下在大气压力下氢化2小时。产物显得在MeOH中不溶，因此将反应混合物用5mLH₂O和几滴6N HCl稀释。所得均匀溶液通过硅藻土过滤，真空除去MeOH。冷冻剩余溶液，冻干得到黄色泡沫(188.9mg)。将此物质悬浮于THF-H₂O(1∶1，10mL)，然后冷至0℃。向冷的混合物中小心加入NaHCO₃(146.0mg，1.74mmol)(放出CO₂)。停止放出气体后(约15min)，逐滴加入ClCO₂Me(0.06mL，0.78mmol)。所得混合物搅拌2小时，用6N HCl酸化至pH～2，倒入EtOAc。分离各层，水相用EtOAC(x5)萃取。洗涤(盐水)合并的有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩，得到标题化合物，为无色固体(117.8mg，79％)。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ13.04(s，1H)，7.63(d，J＝2.6Hz，1H)，7.48(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(d，J＝1.5Hz，1H)，6.19(app t，J＝2.0Hz，1H)，4.47(dd，J＝3.0，12.9Hz，1H)，4.29-4.41(m，2H)，3.48(s，3H).LCMS：分析计算值C₈H₁₁N₃O₄：213；实测值：214(M+H)⁺。

用类似于下面文献中所述的方法通过将购买得到的(R)-苯基甘氨酸酰化来制备Cap-130：Calmes，M.；Daunis，J.；Jacquier，R.；Verducci，J.Tetrahedron，1987，43(10)，2285。

步骤a：将二甲基氨甲酰氯(0.92mL，10mmol)缓慢加入到(S)-苄基2-氨基-3-甲基丁酸酯盐酸盐(2.44g；10mmol)和Hunig’s碱(3.67mL，21mmol)的THF(50mL)溶液中。所得白色混悬液在室温下搅拌过夜(16小时)，减压浓缩。残留物在乙酸乙酯和水之间分配。用盐水洗涤有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，减压浓缩。用快速色谱法纯化所得黄色油状物，用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。收集流分，真空浓缩，得到2.35g(85％)澄清油状物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm 0.84(d，J＝6.95Hz，3H)，0.89(d，J＝6.59Hz，3H)，1.98-2.15(m，1H)，2.80(s，6H)，5.01-5.09(m，J＝12.44Hz，1H)，5.13(d，J＝12.44Hz，1H)，6.22(d，J＝8.05Hz，1H)，7.26-7.42(m，5H).LC(Cond.1)：RT＝1.76min；MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₆H₂₂N₂O₃：279.17；实测值279.03。

步骤b：向上面制备的中间体(2.35g；8.45mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入Pd/C(10％；200mg)，所得黑色混悬液用N₂(3x)冲洗，置于1atm的H₂下。混合物在室温下搅拌过夜，通过微纤维滤器过滤除去催化剂。然后将所得澄清溶液减压浓缩，得到1.43g(89％)白色泡沫状Cap-131，其不经进一步纯化而使用。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 0.87(d，J＝4.27Hz，3H)，0.88(d，J＝3.97Hz，3H)，1.93-2.11(m，1H)，2.80(s，6H)，3.90(dd，J＝8.39，6.87Hz，1H)，5.93(d，J＝8.54Hz，1H)，12.36(s，1H).LC(Cond.1)：RT＝0.33min；MS：分析计算值[M+H]⁺C₈H₁₇N₂O₃：189.12；实测值189.04。

按照Cap-131中描述的方法从(S)-苄基2-氨基丙酸酯盐酸盐制备Cap-132。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 1.27(d，J＝7.32Hz，3H)，2.80(s，6H)，4.06(qt，1H)，6.36(d，J＝7.32Hz，1H)，12.27(s，1H).LC(Cond.1)：RT＝0.15min；MS：分析计算值[M+H]⁺C₆H₁₃N₂O₃：161.09；实测值161.00。

按照Cap-47中描述的方法从(S)-叔丁基2-氨基-3-甲基丁酸酯盐酸盐和氯甲酸2-氟乙基酯制备Cap-133。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 0.87(t，J＝6.71Hz，6H)，1.97-2.10(m，1H)，3.83(dd，J＝8.39，5.95Hz，1H)，4.14-4.18(m，1H)，4.20-4.25(m，1H)，4.50-4.54(m，1H)，4.59-4.65(m，1H)，7.51(d，J＝8.54Hz，1H)，12.54(s，1H)。

按照Cap-51中描述的方法从(S)-二乙基丙氨酸和氯甲酸甲酯制备Cap-134。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 0.72-0.89(m，6H)，1.15-1.38(m，4H)，1.54-1.66(m，1H)，3.46-3.63(m，3H)，4.09(dd，J＝8.85，5.19Hz，1H)，7.24(d，J＝8.85Hz，1H)，12.55(s，1H).LC(Cond.2)：RT＝0.66min；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₉H₁₈NO₄：204.12；实测值204.02。

在25℃下将D-2-氨基-(4-氟苯基)乙酸(338mg，2.00mmol)、1NHCl的乙醚(2.0mL，2.0mmol)溶液和福尔马林(37％，1mL)的甲醇(5mL)溶液用10％钯/碳(60mg)在氢气球下氢化16小时。然后通过硅藻土过滤混合物，得到Cap-135的盐酸盐，为白色泡沫(316mg，80％)。¹H NMR(300MHz，MeOH-d₄)δ7.59(dd，J＝8.80，5.10Hz，2H)，7.29(t，J＝8.6Hz，2H)，5.17(s，1H)，3.05(v br s，3H)，2.63(v br s，3H)；R_t＝0.19min(Cond.-MS-W5)；95％均匀性指数；LRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₃FNO₂：198.09；实测值：198.10。

在氮气下向冷却的(-50℃)1-苄基-1H-咪唑(1.58g，10.0mmol)的无水乙醚(50mL)溶液中逐滴加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，4.0mL，10.0mmol)。在-50℃下搅拌20分钟后，向反应混合物中通入无水二氧化碳(通过Drierite)10分钟，然后将其升至25℃。过滤反应混合物中加入二氧化碳后生成的大量沉淀，得到吸湿性白色固体，将其用水(7mL)吸收，酸化至pH＝3，冷却，刮擦诱导结晶。过滤此沉淀物得到白色固体，将其悬浮于甲醇，用1N HCl/乙醚(4mL)处理，真空浓缩。将残留物从水(5mL)中冻干，得到Cap-136的HCl盐，为白色固体(817mg，40％)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ7.94(d，J＝1.5Hz，1H)，7.71(d，J＝1.5Hz，1H)，7.50-7.31(m，5H)，5.77(s，2H)；R_t＝0.51min(Cond.-MS-W5)；95％均匀性指数；LRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₂N₂O₂：203.08；实测值：203.11。

Cap-137，步骤a

在氮气下将1-氯-3-氰基异喹啉(188mg，1.00mmol；按照WO2003/099274中的方法制备)(188mg，1.00mmol)、氟化铯(303.8mg，2.00mmol)、双(三-叔丁基膦)氯化钯(10mg，0.02mmol)和2-(三丁基锡烷基)呋喃(378μL，1.20mmol)的无水二烷(10mL)混悬液在80℃下加热16小时，然后将其冷至25℃，用饱和氟化钾水溶液在剧烈搅拌下处理1小时。所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配，分离有机相，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。残留物在硅胶上纯化(用0％-30％乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到Cap-137，步骤a，为白色固体，其就这样使用(230mg，105％)。R_t＝1.95min(Cond.-MS-W2)；90％均匀性指数；LRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₈N₂O：221.07；实测值：221.12。

Cap-137

向Cap 137，步骤a，(110mg，0.50mmol)和高碘酸钠(438mg，2.05mmol)的四氯化碳(1mL)、乙腈(1mL)和水(1.5mL)混悬液中加入三氯化钌水合物(2mg，0.011mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。然后在二氯甲烷和水之间分配。分离水层，再用二氯甲烷萃取两次，用Na₂SO₄干燥合并的二氯甲烷萃取液，过滤，浓缩。残留物用己烷研磨，得到Cap-137(55mg，55％)，为浅灰色固体。R_t＝1.10min(Cond.-MS-W2)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₈N₂O₂：200.08；实测值：200.08。

Caps 138-158

合成策略。方法A。

Cap-138，步骤a

向搅拌的5-羟基异喹啉(5-hydroxisoquinoline)(按照WO 2003/099274中的方法制备)(2.0g，13.8mmol)和三苯基膦(4.3g，16.5mmol)的无水四氢呋喃(20mL)混悬液中分批加入无水甲醇(0.8mL)和偶氮二甲酸二乙酯(3.0mL，16.5mmol)。所得混合物在室温下搅拌20小时，然后将其用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。残留物用硅胶预吸附并纯化(用40％乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到Cap-138，步骤a，为浅黄色固体(1.00g，45％)。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ9.19(s，1H)，8.51(d，J＝6.0Hz，1H)，7.99(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52-7.50(m，2H)，7.00-6.99(m，1H)，4.01(s，3H)；R_t＝0.66min(Cond.D2)；95％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₀NO：160.08；实测值160.10。

Cap-138，步骤b

在室温下向搅拌的Cap 138，步骤a(2.34g，14.7mmol)的无水二氯甲烷(5O mL)溶液中一次性加入间氯过氧苯甲酸(77％，3.42g，19.8mmol)。搅拌20小时，加入粉状碳酸钾(2.0g)，所得混合物在室温下搅拌1小时，然后过滤，浓缩，得到Cap-138，步骤b，为淡黄色固体，其纯度足以进行下面的反应(2.15g，83.3％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.73(d，J＝1.5Hz，1H)，8.11(dd，J＝7.3，1.7Hz，1H)，8.04(d，J＝7.1Hz，1H)，7.52(t，J＝8.1Hz，1H)，7.28(d，J＝8.3Hz，1H)，6.91(d，J＝7.8Hz，1H)，4.00(s，3H)；R_t＝0.92min，(Cond.-D1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₀NO₂：176.07；实测值：176.0。

Cap-138，步骤c

在室温下在氮气下向搅拌的Cap 138，步骤b(0.70g，4.00mmol)和三乙胺(1.1mL，8.00mmol)的无水乙腈(20mL)溶液中加入三甲基甲硅烷基氰化物(trimethylsilylcyanide)(1.60mL，12.00mmol)。所得混合物在-75℃下加热20小时，然后将其冷至室温，用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，然后用Na₂SO₄干燥，浓缩溶剂。残留物用硅胶快速色谱法纯化(用5％乙酸乙酯/己烷-25％乙酸乙酯/己烷洗脱)，得到Cap-138，步骤c(498.7mg)，为白色晶状固体，同时从滤液中回收得到223mg另外的Cap-138，步骤c。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ8.63(d，J＝5.5Hz，1H)，8.26(d，J＝5.5Hz，1H)，7.88(d，J＝8.5Hz，1H)，7.69(t，J＝8.0Hz，1H)，7.08(d，J＝7.5Hz，1H)，4.04(s，3H)；R_t＝1.75min，(Cond.-D1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₉N₂O：185.07；实测值：185.10。

将Cap-138，步骤c(0.45g，2.44mmol)用5N氢氧化钠溶液(10mL)处理所得混悬液在85℃下加热4小时，冷至25℃，用二氯甲烷稀释，用1N盐酸酸化。分离有机相，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，浓缩至1/4体积，过滤，得到Cap-138，为黄色固体(0.44g，88.9％)。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ13.6(br s，1H)，8.56(d，J＝6.0Hz，1H)，8.16(d，J＝6.0Hz，1H)，8.06(d，J＝8.8Hz，1H)，7.71-7.67(m，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，4.02(s，3H)；R_t＝0.70min(Cond.-D1)；95％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₀NO₃：204.07；实测值：204.05。

合成策略。方法B(得自Tetrahedron Letters，2001，42，6707)。

Cap-139，步骤a

向含有氩气脱气的1-氯-6-甲氧基异喹啉(1.2g，6.2mmol；按照WO 2003/099274中的方法制备)、氰化钾(0.40g，6.2mmol)、1，5-双(二苯基膦基)戊烷(0.27g，0.62mmol)和乙酸钯(II)(70mg，0.31mmol)的无水甲苯(6mL)混悬液的厚壁、螺纹口管形瓶(screw-top vial)中加入N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(0.29mL，2.48mmol)。密封管形瓶，在150℃下加热22小时，然后冷至25℃。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。残留物用硅胶纯化，用5％乙酸乙酯/己烷-25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到Cap-139，步骤a，为白色固体(669.7mg)。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ8.54(d，J＝6.0Hz，1H)，8.22(d，J＝9.0Hz，1H)，7.76(d，J＝5.5Hz，1H)，7.41-7.39(m，1H)，7.13(d，J＝2.0Hz，1H)，3.98(s，3H)；R_t＝1.66min(Cond.-D1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₉N₂O：185.07；实测值：185.20。

按照制备Cap 138所描述的方法从Cap-139，步骤a与5N NaOH的碱性水解来制备。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ13.63(v br s，1H)，8.60(d，J＝9.3Hz，1H)，8.45(d，J＝5.6Hz，1H)，7.95(d，J＝5.9Hz，1H)，7.49(d，J＝2.2Hz，1H)，7.44(dd，J＝9.3，2.5Hz，1H)，3.95(s，3H)；R_t＝0.64min(Cond.-D1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₀NO₃：204.07；实测值：204.05。

Cap-140，步骤a

在25℃在氮气下向剧烈搅拌的1，3-二氯-5-乙氧基异喹啉(482mg，2.00mmol；按照WO 2005/051410中的方法制备)、乙酸钯(II)(9mg，0.04mmol)、碳酸钠(223mg，2.10mmol)和1，5-双(二苯基膦基)戊烷(35mg，0.08mmol)的无水二甲基乙酰胺(2mL)中的混合物中加入N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(60mL，0.40mmol)。10分钟后，将混合物加热至150℃，然后用注射器泵经18小时以1mL每份加入丙酮合氰化氢的母液(从457μL丙酮合氰化氢的4.34mL DMA溶液制备)。然后将混合物在乙酸乙酯和水之间分配，分离有机层，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。残留物用硅胶纯化，用10％乙酸乙酯/己烷-40％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到Cap-140，步骤a，为黄色固体(160mg，34％)。R_t＝2.46min(Cond.-MS-W2)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₉ClN₂O：233.05；实测值：233.08。

按照下面所述的制备Cap 141的方法通过Cap-140，步骤a与12N HCl的酸性水解来制备Cap-140。R_t＝2.24min(Cond.-MS-W2)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₁ClNO₃：252.04；实测值：252.02。

Cap-141，步骤a

用制备Cap-140，步骤a(见上)所述的方法，从1-溴-3-氟异喹啉(采用J.Med.Chem.1970，13，613中描述的方法从3-氨基-1-溴异喹啉制备)制备Cap-141，步骤a。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.35(d，J＝8.5Hz，1H)，7.93(d，J＝8.5Hz，1H)，7.83(t，J＝7.63Hz，1H)，7.77-7.73(m，1H)，7.55(s，1H)；R_t＝1.60min(Cond.-D1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₆FN₂：173.05；实测值：172.99。

将Cap-141，步骤a(83mg，0.48mmol)用12NHCl(3mL)处理，所得浆液在80℃下加热16小时，然后将其冷至室温，用水(3mL)稀释。所得混合物搅拌10分钟，然后过滤，得到Cap-141，为米色固体(44.1mg，47.8％)。滤液用二氯甲烷稀释，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，浓缩，得到额外的Cap-141，其纯度足以直接用于后面的步骤(29.30mg，31.8％)。¹H NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ14.0(br s，1H)，8.59-8.57(m，1H)，8.10(d，J＝8.5Hz，1H)，7.88-7.85(m，2H)，7.74-7.71(m，1H)；R_t＝1.33min(Cond.-D1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₇FNO₂：192.05；实测值：191.97。

Cap-142，步骤a

用制备Cap-138，步骤b和c所述的两步方法从4-溴异喹啉N-氧化物制备Cap-142，步骤a。R_t＝1.45min(Cond.-MS-W1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₆BrN₂：232.97；实测值：233.00。

Cap-142，步骤b

向氩气脱气的Cap-142，步骤a(116mg，0.50mmol)、磷酸三钾(potassium phosphate tribasic)(170mg，0.80mmol)、乙酸钯(II)(3.4mg，0.015mmol)和2-(二环己基膦基)联苯(11mg，0.03mmol)的无水甲苯(1mL)混悬液中加入吗啉(61μL，0.70mmol)。所得混合物在100℃下搅拌16小时，冷至25℃，通过硅藻土过滤。残留物用硅胶纯化，用10％-70％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到Cap-142，步骤b(38mg，32％)，为黄色固体，其直接用于后面的步骤。R_t＝1.26min(Cond.-MS-W1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₁₄N₃O：240.11；实测值：240.13。

用Cap 138中描述的方法从Cap-142，步骤b与5N氢氧化钠制备Cap-142。R_t＝0.72min(Cond.-MS-W1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₁₅N₂O₃：259.11；实测值：259.08。

Cap-143，步骤a

向搅拌的3-氨基-1-溴异喹啉(444mg，2.00mmol)的无水二甲基甲酰胺(10mL)溶液中一次性加入氢化钠(60％，未洗涤，96mg，2.4mmol)。所得混合物在25℃下搅拌5分钟，然后加入2-溴乙基醚(90％，250μL，2.00mmol)。所得混合物再在25℃下搅拌5小时，在75℃下搅拌72小时，然后将其冷至25℃，用饱和氯化铵溶液猝灭，用乙酸乙酯稀释。分离有机层，用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。残留物用硅胶纯化，用0％-70％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到Cap-143，步骤a，为黄色固体(180mg，31％)。R_t＝1.75min(Cond.-MS-W1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₃H₁₄BrN₂O：293.03；实测值：293.04。

向冷的(-60℃)Cap-143，步骤a(154mg，0.527mmol)的无水四氢呋喃(5mL)溶液中加入正丁基锂的己烷溶液(2.5M，0.25mL，0.633mmol)。10分钟后，向反应混合物中通入无水二氧化碳10分钟，然后将其用1N HCl猝灭，升温至25℃。然后将混合物用二氯甲烷(3x30mL)萃取，真空浓缩合并的有机萃取液。用反相HPLC纯化残留物(MeOH/水/TFA)，得到Cap-143(16mg，12％)。R_t＝1.10min(Cond.-MS-W1)；90％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₁₅N₂O₃：259.11；实测值：259.08。

Cap-144，步骤a

将1，3-二氯异喹啉(2.75g，13.89mmol)小份小份地加入到冷却的(0℃)发烟硝酸(10mL)和浓硫酸(10mL)中。所得混合物在0℃下搅拌0.5小时，然后将其逐渐升温至25℃，搅拌16小时。然后将该混合物倒入含碎冰和水的烧杯中，所得混悬液在0℃下搅拌1小时，然后过滤，得到Cap-144，步骤a(2.73g，81％)，为黄色固体，其可直接使用。R_t＝2.01min.(Cond.-D1)；95％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₉H₅Cl₂N₂O₂：242.97；实测值：242.92。

Cap-144，步骤b

将Cap-144，步骤a(0.30g，1.23mmol)用甲醇(60mL)吸收，用氧化铂(30mg)处理，所得混悬液在7psi H₂下进行Parr氢化作用1.5小时。然后加入福尔马林(5mL)和另一份氧化铂(30mg)，所得混悬液在45psi H₂下再进行Parr氢化作用13小时。然后通过硅藻土抽滤，浓缩减至1/4体积。抽滤所得沉淀物，得到标题化合物，为黄色固体，将其用硅胶快速色谱法纯化，用5％乙酸乙酯的己烷溶液-25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到Cap-144，步骤b(231mg，78％)，为淡黄色固体。R_t＝2.36min(Cond.-D1)；95％均匀性指数；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.02(s，1H)，7.95(d，J＝8.6Hz，1H)，7.57-7.53(m，1H)，7.30(d，J＝7.3Hz，1H)，2.88(s，6H)；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₁Cl₂N₂：241.03；实测值：241.02.HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₁Cl₂N₂：241.0299；实测值：241.0296。

Cap-144，步骤c

按照制备Cap-139，步骤a所述的方法从Cap-144，步骤b制备Cap-144，步骤c。R_t＝2.19min(Cond.-D1)；95％均匀性指数；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₁ClN₃：232.06；实测值：232.03.HRMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₁ClN₃：232.0642；实测值：232.0631。

按照制备Cap-141所述的方法制备Cap-144。R_t＝2.36min(Cond.-D1)；90％；LCMS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₂ClN₂O₂：238.01；实测值：238.09。

Caps-145-162

除非下面另有说明，按照制备Cap-138(方法A)或Cap-139(方法B)所述的方法从适当的1-氯异喹啉制备Caps-145-162。

向2-丁酮酸(1.0g，9.8mmol)的乙醚(25ml)溶液中逐滴加入苯基溴化镁(22ml，1M的THF溶液)。反应在氮气下在～25℃搅拌17.5小时。用1N HCl酸化反应，所得产物用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。用水然后用盐水洗涤合并的有机层，用MgSO₄干燥。真空浓缩后，得到白色固体。该固体从己烷/乙酸乙酯重结晶，得到Cap-163，为白色针状物(883.5mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：12.71(br s，1H)，7.54-7.52(m，2H)，7.34-7.31(m，2H)，7.26-7.23(m，1H)，5.52-5.39(br s，1H)，2.11(m，1H)，1.88(m，1H)，0.79(app t，J＝7.4Hz，3H)。

将2-氨基-2-苯基丁酸(1.5g，8.4mmol)、甲醛(14mL，37％的水溶液)、1N HCl(10mL)和10％Pd/C(0.5mg)的MeOH(40mL)混合物在50psi H₂下在Parr瓶中反应42小时。通过硅藻土过滤反应，真空浓缩，残留物用MeOH(36mL)吸收，所得产物用反相HPLC纯化(MeOH/H₂O/TFA)，得到Cap-164的TFA盐，为白色固体(1.7g)。¹HNMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)7.54-7.47(m，5H)，2.63(m，1H)，2.55(s，6H)，2.31(m，1H)，0.95(app t，J＝7.3Hz，3H)。

Cap-165

向2-氨基-2-茚满甲酸(258.6mg，1.46mmol)和甲酸(0.6ml，15.9mmol)的1，2-二氯乙烷(7ml)中的混合物中加入甲醛(0.6ml，37％的水溶液)。所得混合物在～25℃下搅拌15分钟，然后在70℃下加热8小时。真空除去挥发性组分，残留物溶于DMF(14mL)，用反相HPLC纯化(MeOH/H₂O/TFA)，得到Cap-165的TFA盐，为粘稠油状物(120.2mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：7.29-7.21(m，4H)，3.61(d，J＝17.4Hz，2H)，3.50(d，J＝17.4Hz，2H)，2.75(s，6H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₆NO₂：206.12；实测值：206.07。

Cap-166a和-166b

按照合成Cap-7a和Cap-7b所述的方法从(1S，4S)-(+)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷(2HBr)制备Caps-166a和-166b，只不过苄基酯中间体用半制备Chrialcel OJ柱，20x 250mm，10μm分离，用85∶15庚烷/乙醇混合物以10mL/min洗脱速度洗脱25分钟。Cap-166b：¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)：7.45(d，J＝7.3Hz，2H)，7.27-7.19(m，3H)，4.09(s，1H)，3.34(app br s，1H)，3.16(app br s，1H)，2.83(d，J＝10.1Hz，1H)，2.71(m，2H)，2.46(m，1H)，2.27(s，3H)，1.77(d，J＝9.8Hz，1H)，1.63(d，J＝9.8Hz，1H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₄H₁₉N₂O₂：247.14；实测值：247.11。

Cap-167

将外消旋Boc-1，3-二氢-2H-异吲哚甲酸(1.0g，3.8mmol)的20％TFA/CH₂Cl₂溶液在～25℃下搅拌4小时。真空除去所有挥发性组分。将所得粗物质、甲醛(15mL，37％的水溶液)、1N HCl(10mL)和10％Pd/C(10mg)的MeOH混合物在H₂(40PSI)下在Parr瓶中反应23小时。用硅藻土过滤反应混合物，真空浓缩，得到Cap-167，为黄色泡沫(873.5mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.5ppm，500MHz)7.59-7.38(m，4H)，5.59(s，1H)，4.84(d，J＝14Hz，1H)，4.50(d，J＝14.1Hz，1H)，3.07(s，3H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₀H₁₂NO₂：178.09；实测值：178.65。

按照制备Cap-167所述的方法从外消旋Boc-氨基茚满-1-甲酸制备外消旋Cap-168。所得粗物质就这样使用。

将2-氨基-2-苯基丙酸盐酸盐(5.0g，2.5mmol)、甲醛(15ml，37％的水溶液)、1N HCl(15ml)和10％Pd/C(1.32g)的MeOH(60mL)混合物置于Parr瓶中，在氢气(55PSI)下振摇4天。用硅藻土过滤反应混合物，真空浓缩。残留物用MeOH吸收，用反相制备HPLC纯化(MeOH/水/TFA)，得到Cap-169的TFA盐，为粘稠半固体(2.1g)。¹H NMR(CDCl₃，δ＝7.26ppm，500MHz)：7.58-7.52(m，2H)，7.39-7.33(m，3H)，2.86(br s，3H)，2.47(br s，3H)，1.93(s，3H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₁H₁₆NO₂：194.12；实测值：194.12。

向(S)-2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(505mg；3.18mmol；得自Astatech)的水(15ml)溶液中加入碳酸钠(673mg；6.35mmol)，所得混合物冷至0℃，然后经5分钟逐滴加入氯甲酸甲酯(0.26ml；3.33mmol)。将反应搅拌18小时，同时使浴融化至室温。然后将反应混合物在1N HCl和乙酸乙酯之间分配。移出有机层，水层再用2份乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩，得到Cap-170，为无色残留物。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm 12.65(1H，br s)，7.44(1H，d，J＝8.24Hz)，3.77-3.95(3H，m)，3.54(3H，s)，3.11-3.26(2H，m)，1.82-1.95(1H，m)，1.41-1.55(2H，m)，1.21-1.39(2H，m)；LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₉H₁₆NO₅：218.1；实测值218.1。

将2-(苄基氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-亚基)乙酸甲酯(200mg，0.721mmol；Il Farmaco(2001)，56，609-613)的乙酸乙酯(7ml)和CH₂Cl₂(4.00ml)溶液用氮气脱气10分钟。然后加入二碳酸二甲酯(0.116ml，1.082mmol)和Pd/C(20mg，0.019mmol)，将反应混合物装上氢气球，在室温下搅拌过夜，此时TLC(95：5CH₂Cl₂/MeOH：用染色剂显色，染色剂由1g Ce(NH₄)₂SO₄，6g钼酸铵，6ml硫酸，和100ml水制备)显示转化完全。通过硅藻土过滤反应，浓缩。残留物通过纯化(用二氯甲烷在25装样器(samplet)上装样；在25S柱上用二氯甲烷洗脱3CV，然后0-5％MeOH/二氯甲烷洗脱250ml，然后在5％MeOH/二氯甲烷保持250ml；9ml流分)。收集含所需物质的流分，浓缩，得到120mg(81％)2-(甲氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯，为无色油状物。¹H NMR(500MHz，氯FORM-D)δppm 3.29-3.40(m，J＝6.71Hz，1H)3.70(s，3H)3.74(s，3H)4.55(t，J＝6.41Hz，1H)4.58-4.68(m，2H)4.67-4.78(m，2H)5.31(br s，1H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₈H₁₄NO₅：204.2；实测值204.0。

向2-(甲氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(50mg，0.246mmol)的THF(2mL)和水(0.5mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(10.33mg，0.246mmol)。所得溶液在室温下搅拌过夜(overnite)。TLC(1∶1EA/Hex；Hanessian染料[1g Ce(NH4)₂SO₄，6g钼酸铵，6ml硫酸，和100ml水])显示还有～10％起始原料。再加入3mg LiOH，搅拌过夜，此时TLC显示无起始原料剩余。真空浓缩，置于高度真空下过夜(overnite)，得到55mg 2-(甲氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸锂，为无色固体。¹H NMR(500MHz，MeOD)δppm 3.39-3.47(m，1H)3.67(s，3H)4.28(d，J＝7.93Hz，1H)4.64(t，J＝6.26Hz，1H)4.68(t，J＝7.02Hz，1H)4.73(d，J＝7.63Hz，2H)。

实施例

本公开现在联系某些实施方案来描述，并非为了限制其范围。相反，本公开涵盖可包含在权利要求范围内的所有可替代方案(alternatives)、改进方案和等同方案。因此，下面的实施例，包括特定的实施方案，会举例说明本公开的实践，应了解所述实施例是为了举例说明某些实施方案的目的，也是为了提供其方法和概念方面的据信为最有效并最容易理解的描述。

溶液百分数表示重量对体积关系，溶液比率表示体积对体积关系，除非另有说明。核磁共振(NMR)光谱在Bruker 300、400或500MHz光谱仪上记录；化学位移(δ)以百万分率记录。快速色谱法在硅胶(SiO₂)上按照Still’s快速色谱技术进行(J.Org.Chem.1978，43，2923)。

纯度评价和低分辨质谱分析在配有Waters Micromass ZQ MS系统的Shimadzu LC系统上进行。应注意，不同机器间保留时间会略有不同。用于测定保留时间(RT)的LC条件为：

保留时间按照下面的LC/MS条件测定：

条件I

柱：Phenomenex-Luna 4.6X50mm S10

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝4min

流速＝4mL/min

波长＝220

溶剂A＝10％CH₃OH-90％H₂O-0.1％TFA

溶剂B＝90％CH₃OH-10％H₂O-0.1％TFA

条件II

柱：Phenomenex-Luna 3.0X50mm S10

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

流速＝4mL/min

波长＝220

溶剂A＝10％CH₃OH-90％H₂O-0.1％TFA

溶剂B＝90％CH₃OH-10％H₂O-0.1％TFA

条件III

柱：Xbridge C184.6X50mm S5

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

流速＝4mL/min

波长＝220

溶剂A＝H₂O：ACN 95％：5％10mm乙酸铵

溶剂B＝H₂O：ACN 5％：95％10mm乙酸铵

条件IV

柱：Phenomenex C18 10u 4.6X30mm

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

流速＝4mL/Min

波长＝220

溶剂A＝10％CH₃OH-90％H₂O-0.1％TFA

溶剂B＝90％CH₃OH-10％H₂O-0.1％TFA

条件V

柱：Phenomenex C1810u 4.6X30mm

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝10min

流速＝4mL/Min

波长＝220

溶剂A＝H₂O：ACN 95％：5％10mm乙酸铵

溶剂B＝H₂O：ACN 5％：95％10mm乙酸铵

条件VI

柱：Phenomenex 10u 3.0X50mm

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝3min

流速＝4mL/Min

波长＝220

溶剂A＝10％CH₃OH-90％H₂O-0.1％TFA

溶剂B＝90％CH₃OH-10％H₂O-0.1％TFA

条件VII

开始％B＝0

结束％B＝100

梯度时间＝2min

终止时间＝3min

流速＝4mL/min

波长＝220nm

溶剂A＝10％CH₃OH/90％H₂O/0.1％TFA

溶剂B＝90％CH₃OH/10％H₂O/0.1％TFA

柱2＝Phenomenex-Luna 3.0x50mm S10

实施例1

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-氧代-9H-芴-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

实施例1，步骤a

经11分钟将乙二醛(2.0mL 40％水溶液)逐滴加入到NH₄OH(32mL)和(S)-Boc-prolinal(8.564g，42.98mmol)的CH₃OH溶液中，在室温下搅拌19小时。真空除去挥发性组分，残留物用快速色谱法纯化(硅胶，EtOAc)，然后重结晶(EtOAc，室温)，得到咪唑1a，为白色蓬松固体(4.43g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：11.68/11.59(br s，1H)，6.94(s，1H)，6.76(s，1H)，4.76(m，1H)，3.48(m，1H)，3.35-3.29(m，1H)，2.23-1.73(m，4H)，1.39/1.15(s，9H)。

LC(Cond.VII)：RT＝0.87min；＞95％均匀性指数

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₂₀N₃O₂238.16；实测值238.22

当在下述手性HPLC条件下测定时，咪唑1a的ee值为98.9％。

柱：Chiralpak AD，10um，4.6x50mm

溶剂：1.7％乙醇/庚烷(isocratic)

流速：1ml/min

波长：220或256nm

相对保留时间：3.25min(R)，5.78分钟(S)

实施例1，步骤b

经15分钟，将N-溴琥珀酰亚胺(838.4mg，4.71mmol)分批加入到冷却的(冰/水)咪唑1a(1.0689g，4.504mmol)的CH₂Cl₂(20mL)溶液中，在同样的温度下搅拌75分钟。真空除去挥发性组分，粗物质用反相HPLC系统纯化(H₂O/CH₃OH/TFA)以从其二溴-类似物和未消耗掉的起始原料中分离出溴化物1b。用过量的NH₃/CH₃OH(2.0M)中和HPLC洗脱液，真空除去挥发性组分。残留物在CH₂Cl₂和水之间分配，水层用CH₂Cl₂萃取。干燥(MgSO₄)合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到1b，为白色固体(374mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：12.12(br s，1H)，7.10(m，1H)，4.70(m，1H)，3.31(m，1H；与水的信号重叠)，2.25-1.73(m，4H)，1.39/1.17(s，3.8H+5.2H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.10min；＞95％均匀性指数

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₂H₁₉BrN₃O₂316.07；实测值316.10

实施例1，步骤c

将Pd(Ph₃P)₄(750mg，0.649mmol)加入到含2，7-二溴-9H-芴-9-酮(5.124g，15.16mmol)、双(频那醇(pinacolato))二硼(15.03g，59.19mmol)和KOAc(3.526g，35.92mmol)的二烷(60mL)混合物的压力管(pressure tube)中。将反应容器用氮气冲洗，盖上盖子，在90℃下加热～16小时。将反应混合物冷至室温，真空除去挥发性组分，粗物质在CH₂Cl₂(150mL)和50％饱和NaHCO₃溶液(60mL)之间分配。干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩。所得半固体油状物从己烷(100mL)中研磨，过滤所得黄色固体，用己烷(100mL)洗涤，得到不纯的双-硼酸酯1c(5.011g)。该产物不经进一步纯化用于偶合步骤。¹H NMR(CDCl₃，δ＝7.24，400MHz)：8.11(s，2H)，7.93(dd，J＝7.3，1.0，2H)，7.54(d，J＝7.6，2H)，1.33(S，24H)。

实施例1，步骤d

将Pd(Ph₃P)₄(93.3mg，0.081mmol)加入到含双-硼酸酯1c(508.7mg，1.177mmol)、溴咪唑1b(714mg，2.26mmol)、NaHCO₃(635.6mg，7.566mmol)的DME(18mL)和水(6mL)溶液的压力管中。用氮气净化该压力管，盖上盖子，在80℃下加热～30小时，然后冷至室温条件。真空除去挥发性组分，残留物在CH₂Cl₂和水之间分配。干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩，用纯化(硅胶；EtOAc)，然后用反相HPLC纯化(CH₃OH/H₂O/TFA)。用过量的NH₃/CH₃OH(2.0N)中和HPLC洗脱液，真空除去挥发性组分。残留物在CH₂Cl₂和～3％饱和NaHCO₃溶液之间分配。干燥(MgSO4)有机层，过滤，真空浓缩，得到氨基甲酸酯1d，为深红色半固体(145mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：12.26-11.94(three br s，2H)，7.97-7.41(m，8H)，4.85-4.77(m，2H)，3.55(m，2H)，3.37(m，2H)，2.30-1.79(m，8H)，1.40(s，7.5H)，1.16(s，10.5H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.37min；＞95％均匀性指数

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₃₇H₄₃N₆O₅651.33；实测值651.26

实施例1，步骤e

将氨基甲酸酯1d(184mg，0.283mmol)用25％TFA/CH₂Cl₂(4.0mL)处理，反应混合物在室温条件下搅拌6小时。真空除去挥发性组分，残留物用MCX(2g；CH₃OH洗涤；2.0M NH₃/CH₃OH洗脱)除去碱(free-based)，得到吡咯烷1e，为红色泡沫(129.8mg；高于理论产量～3mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：11.91(br s，2H)，7.96-7.94(m，4H)，7.69(d，J＝8.1，J＝8.1，2H)，7.61(s，2H)，4.16(m，2H)，2.99-2.93(m，2H)，2.89-2.83(m，2H)，2.10-2.01(m，2H)，1.94-1.86(m，2H)，1.82-1.66(m，4H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.01min；＞95％均匀性指数

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₂₇H₂₇N₆O 451.22；实测值451.27。

实施例1

将HATU(216.3mg，0.569mmol)一次性加入到吡咯烷1e(126mg，0.280mmol)、(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(109.6mg，0.626mmol)和i-Pr₂EtN(0.12mL，0.689mmol)的DMF(4.0mL)溶液中，所得混合物在室温条件下搅拌～6小时。真空除去挥发性组分，残留物先用MCX纯化(甲醇洗涤；2.0M NH₃/甲醇洗脱)，然后用反相HPLC系统纯化(H₂O/甲醇/TFA)，得到实施例1的TFA盐，为红橙色泡沫(208.9mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：8.18-7.99(m，8H)，7.33(d，J＝8.5，2H)，5.53(m，0.16H)，5.13(m，1.84H)，4.12(m，2H)，3.91-3.80(m，4H)，2.42-2.33(m，2H)，2.25-1.94(m，8H)，0.91-0.79(m，12H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.26min；＞95％均匀性指数

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₁H₄₉N₈O₇765.37；实测值765.39。

HRMS：分析计算值[M+H]⁺765.3724；实测值765.3723

实施例2

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(9-羟基-7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9H-芴-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

将NaBH4(41mg，1.08mmol)加入到冷却的(冰/水)实施例1的TFA盐(165mg，0.166mmol)的CH₃OH(3mL)溶液中，搅拌25分钟。直接将反应混合物过MCX柱(6g；用50％H₂O/CH₃OH洗涤，然后用CH₃OH洗涤；用2.0N NH₃/CH₃OH洗脱)，然后用反相HPLC纯化(CAN/H₂O/NH₄OAc)，得到实施例2，包含约～2当量的乙酸，为浅褐色泡沫(91mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：7.97/7.92(两个br s，2H)，7.76-7.65(m，4H)，7.52/7.45(两个br s，2H)，7.29(d，J＝8.3，～2H)，5.48/5.46(两个s，1H)，5.26(m，0.26H)，5.09(m，1.74H)，4.07(m，2H)，3.81/3.54-3.45(m，10H)，2.23-1.89(10H)，0.9(d，J＝6.8，6H)，0.85(d，J＝6.5，6H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.21min；＞95％均匀性指数

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₁H₅₁N₈O₇767.39；实测值767.26

实施例3

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(9-(二甲基氨基)-7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9H-芴-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

实施例3，步骤a

将2，7-二溴-9H-芴(4.98g，15.37mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(2.77g，15.56mmol)的非均相混合物回流～5.5小时。再加入另一份N-溴琥珀酰亚胺(0.41g，2.30mmol)，继续回流1小时。将反应混合物冷至室温，真空除去挥发性组分。

经10分钟将一份上述粗物质(～5.1g)加入到冷却的(冰/水)二甲基胺(30mL 2.0M)的THF溶液中，除去冷却浴，将该非均相混合物搅拌2小时。真空除去挥发性组分，残留物在CH₂Cl₂和水之间分配，干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩。所得物质用Biotage纯化(0-5％CH₃OH/CH₂Cl₂)，得到胺3a，为深黄色粘稠油状物，慢慢得到密实的固体(1.327)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：7.83(d，J＝8.4，2H)，7.73(app br s，2H)，7.61(dd，J＝8.1，1.3，2H)，4.98(s，1H)，2.22(s，6H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.32min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₅H₁₄Br₂N：367.95；实测值367.81(对优势同位素)

实施例3

实施例3(TFA盐)从胺3a开始按照从2，7-二溴-9H-芴-9-酮合成实施例1所述的方法制备。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：8.27-7.99(m，8H)，7.33(d，J＝8.3，1.88H)，6.91(br s，0.12H)，5.92(br s，～1H)，0.12(br s，0.12H)，5.17(m，1.88H)，4.12(m，1.88H)，3.91-3.79(m，4H)，3.55(s，～6H)，2.75(app br s，6H)，2.43-2.35(m，2H)，2.24-1.95(m，8H)，0.91-0.78(m，12H).[注意：未鉴定次要旋转异构体的一些化学位移，这就是一些积分以近似值给出的部分原因]。

LC(Cond.VII)：RT＝1.09分钟，＞95％均匀性指数

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₃H₅₆N₉O₆：794.43；实测值794.29。

实施例4

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9H-芴-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

实施例4，步骤a

将NaH(243mg，60％，6.08mmol)一次性加入到咪唑1a(1.228g，5.17mmol)的DMF(15mL)半溶液中，搅拌75分钟。经7分钟逐滴加入SEM-Cl(1.0mL，5.65mmol)，反应混合物再搅拌3.5小时。真空除去挥发性组分，包括溶剂，残留物在CH₂Cl₂和水之间分配。干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩。所得物质用纯化(100g硅胶；60-100％EtOAc/己烷)，得到咪唑1a，为无色粘稠油状物(1.649g)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：7.16/7.13(重叠的单峰，1H)，6.80/6.78(重叠的单峰，1H)，5.61(d，J＝10.8，0.41H)，5.38(d，J＝11.1，0.59H)，5.26(d，J＝11.4，1H)，4.95-4.85(m，1H)，3.51-3.33(m，4H)，2.25-2.00(m，2H)，1.90-1.77(m，2H)，1.35(s，3.79H)，1.12(s，5.21H)，0.91-0.76(m，2H)，-0.04(s，9H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₈H₃₄N₃O₃Si：368.24；实测值368.23。

实施例4，步骤b

经8分钟将NBS(573mg，3.22mmol)的CH₃CN(6mL)溶液逐滴加入到冷却的(冰/水)胺4a的CH₃CN(10mL)溶液中，搅拌95分钟。除去冷却浴，继续搅拌35分钟。真空除去挥发性组分，所得粗物质直接进行纯化(100g硅胶；40-50％EtOAc/己烷)，得到溴化物4b，为浅黄色粘稠油状物(0.895g)。根据¹H NMR，产物表现为区域异构体(regioisomers)的混合物(比率为7.1∶1.0)，其就这样用于下面的步骤。

LC(Cond.VII)：RT＝1.77min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₈H₃₃BrN₃O₃Si：446.15；实测值446.07

实施例4，步骤c

氨基甲酸酯4c从2，7-二溴-9H-芴-9-酮和溴化物4b，通过Suzuki偶合，按照合成氨基甲酸酯1d所述的方法制备。上述对主要产物的SEM区域化学确定以NOE研究为基础，虽然其对当前的目的来说并不重要。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，500MHz)：8.04-8.02(m，2H)，7.74-7.70(m，2H)，7.56-7.49(m，2H)，7.06(br s，2H)，5.62-5.60(m，0.82H)，5.43-5.41(m，1.18H)，5.27(m，2H)，5.09(m，0.86H)，1.14(m，1.14H)，4.02(s，2H)，3.63-3.38(m，8H)，2.33-2.09(m，4H)，2.01-1.84(m，4H)，1.39(s，7.56H)，1.18(s，10.44H)，0.92-0.81(m，4H)，-0.04(s，18H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.92min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₉H₇₃N₆O₆Si₂：897.51；实测值897.37

实施例4，步骤d

将HCl(3mL，4.0N，12mmol)的二烷溶液加入到化合物4c(133mg，0.148mmol)中，所得非均相反应混合物搅拌～14小时，然后加入CH₃OH(1.0mL)，继续再搅拌～4.5小时。真空除去挥发性组分，高度真空下干燥，不经进一步纯化用于下面的步骤。

实施例4

按照合成实施例1所述的方案将吡咯烷4d加工为实施例4的TFA盐，只不过值得注意的是采用了6mol当量的i-Pr₂EtN。¹HNMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：8.11-7.82(m，8H)，7.34(d，J＝8.3，1.89H)，6.92(app br s，0.11H)，5.55(m，0.14H)，5.16-5.13(m，1.86H)，4.14-3.74(m，8H)，3.55/3.35(两个s，6H)，2.45-2.34(m，2H)，2.20-1.74(m，8H)，0.91-0.78(m，12H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.28min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₁H₅₁N₈O₆：751.39；实测值751.24

实施例5

((1S，2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9H-芴-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯

实施例5的TFA盐从吡咯烷4d和适当的酸按照实施例4所述的方法制备。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：8.11-7.82(m，8H)，7.23(d，J＝8.3，1.87H)，6.75(app br s，0.13H)，5.65(m，0.17H)，5.17-5.13(m，1.83H)，4.33-4.22(m，2H)，4.09(s，2H)，3.93-3.72(m，4H)，3.61-3.19(m，14H)，2.44-2.33(m，2H)，2.21-1.72(m，6H)，1.10(d，J＝6.3，0.58H)，5.42(d，J＝6.0，5.42H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.17min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₁H₅₁N₈O₈：783.38；实测值783.23

实施例6-7

将MeNH₂(4.9mL，9.87mmol)和Na₂CO₃(0.349g，3.29mmol)加入到4，4′-二溴-2，2′-双(溴甲基)联苯(0.328g，0.658mmol)的THF(6.5mL)溶液中，反应混合物回流3小时。真空除去挥发性组分，将残留物通过MCX(CH₃OH洗涤；2.0M NH₃/CH₃OH洗脱)，得到3，9-二溴-6-甲基-6，7-二氢-5H-二苯并[c，e]氮杂为白色固体(0.24g)。¹HNMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，500MHz)：2.31(s，3H)，3.24(s，4H)，7.47(d，J＝7.9，2H)，7.55-7.82(m，4H)。

LC(Cond.III)：RT＝2.42min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₅H₁₄Br₂N：367.95；实测值368.17(对优势同位素)

实施例6-7从3，9-二溴-6-甲基-6，7-二氢-5H-二苯并[c，e]氮杂开始，采用从2，7-二溴-9H-芴-9-酮合成实施例4所述的方法制备。

实施例8-12

将HBr(11mL，97mmol)加入到(4，4′-二溴联苯-2，2′-二基)二甲醇(其制备参见：Tetrahedron Letters 2004，45，2801；1.3g，3.49mmol)的THF(10mL)溶液中，所得混合物回流6小时，然后冷至室温。旋转蒸发除去大部分有机组分，残留物用CH₂Cl₂(10mL，3x)萃取。干燥(MgSO₄)合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到棕色油状物，将其溶于5mL丙酮，在室温条件下静置1小时，得到沉淀物。过滤，真空干燥，得到3，9-二溴-5，7-二氢二苯并[c，e]氧杂环庚三烯(oxepine)，为白色固体(0.628g，51％产率)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，500MHz)：4.23-4.29(m，4H)，7.53-7.60(m，2H)，7.74(dd，J＝7.9，2.1，2H)7.79(d，J＝2.1，2H)。

实施例8-12从3，9-二溴-5，7-二氢二苯并[c，e]氧杂环庚三烯开始，采用从2，7-二溴-9H-芴-9-酮合成实施例4所述的方法和适当的底物制备。

实施例13

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(9-(二甲基氨基)-7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-甲基-9H-芴-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

实施例13，步骤a

经2分钟将NaN(TMS)₂(3.40ml的1.0M/THF溶液，3.4mmol)逐滴加入到胺3a(1.14g，3.10mmol)的THF溶液中，搅拌20分钟。然后经3分钟逐滴加入MeI(0.27mL，4.33mmol)，继续搅拌～65min分钟。用过量的CH₃OH处理反应，真空除去所有挥发性组分。所得粗物质用快速色谱法纯化(10％EtOAc/己烷)，得到胺13a，为米色固体(793mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：7.80(d，J＝8.0，2H)，7.67(d，J＝1.7，2H)，7.58(dd，J＝8.1，1.8，2H)，2.06(s，6H)，1.58(s，3H).LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₁₆H₁₆Br₂N：381.96；实测值381.90(对优势同位素)。

实施例13，步骤b

将Pd(OAc)₂(5.3mg，0.024mmol)加入到二溴化物13a(101.8mg，0.267mmol)、咪唑13a(145.6mg，0.396mmol)、Ph₃P(12.5mg，0.048mmol)和K₂CO₃(116mg，0.839mmol)的二烷(2.5mL)中的混合物中，通入氮气1分钟，然后在140℃(微波)下加热3小时。用CH₃OH(2mL)处理混合物，通过棉花塞过滤，真空除去挥发性组分。粗物质用反相HPLC系统纯化(H₂O/CH₃OH/TFA)，HPLC洗脱液用过量NH₃/CH₃OH中和，真空除去挥发性组分。所得物质在CH₂Cl₂和水之间分配，用CH₂Cl₂萃取水层。干燥(MgSO₄)合并的有机相，过滤，真空浓缩，得到13b，为白色泡沫(56.1mg)。未确定构成13b的区域化学(regiochemical)，因为其对于当前的目的来说并不重要。LC/MS：分析计算值[M-SEM+H]⁺C₄₆H₆₆N₇O₅Si：824.49；实测值824.34。

实施例13

实施例13的TFA盐从化合物13b开始采用从中间体4c合成实施例4所述的方法制备，只不过用于最后步骤的相应吡咯烷前体用MCX除碱(free-based)，且在HATU-偶合步骤中只用2mol当量的i-Pr₂EtN。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：8.24-7.96(m，8H)，7.32(m，1.89H)，6.89(app br s，0.11H)，5.52(app br s，0.12H)，5.17-5.14(m，1.88H)，4.13-4.09(m，2H)，3.85(m，2H)，3.54/3.36(两个s，6H)，2.63(app br s，6H)，2.43-1.93(m，13H)，0.91-0.78(m，12H)。

LC(Con d.VII)：RT＝1.14min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₄H₅₈N₉O₆：808.45；实测值808.32

实施例14

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9，9-二甲基-9H-芴-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

实施例14，步骤a

经1分钟将粉末KOH(0.970g，17.3mmol)分批加入到2，7-二溴-9H-芴(1.30g，4.01mmol)和MeI(0.560mL，9.00mmol)的DMSO(10mL)中的非均相混合物中，在室温条件下搅拌～17.5小时。所得混合物用水(100mL)稀释，用己烷(100mL)萃取。用水(20mL)洗涤有机层，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩。所得粗物质用快速色谱法纯化(以硅胶筛装样；己烷)，得到14a(728mg)，被相应的单-甲基中间体污染，比率为12∶1(¹H NMR)。

将NaN(TMS)₂(0.5mL的1.0M/THF溶液，0.50mmol)加入到上述混合物(702mg)的THF(4.0mL)溶液中，搅拌10分钟。然后经几分钟逐滴加入MeI(0.15mL，2.41mmol)，搅拌75分钟。然后用CH₃OH(10mL)猝灭反应，真空除去挥发性组分。残留物在CH₂Cl₂和水之间分配，干燥(MgSO₄)有机层，过滤，真空浓缩，得到14a，为浅黄色固体，没有单-甲基化杂质。该粗物质不经进一步纯化直接用于下面的步骤。¹H NMR(CDCl₃，δ＝7.24，400MHz)：7.53(d，J＝7.8，2H)，7.53(d，J＝2，2H)7.45(dd，J＝8.1，1.8，2H)，1.45(s，6H)。

实施例14，步骤b

化合物14b从二溴化物14a按照从二溴化物6a合成13b的方法制备。LC/MS：分析计算值[M-SEM+H]⁺C₄₅H₆₃N₆O₅Si：795.46；实测值795.33。

实施例14，步骤c

将HCl/二烷(5mL，4N，20mmol)加入到化合物14b(124.5mg，0.135mmol)中，搅拌至全部溶解。所得溶液用冰/水浴冷却，经2分钟逐滴加入1mL 33％浓HCl溶液处理。然后除去冷却浴，将反应混合物搅拌～22.5小时。真空除去挥发性组分，残留物先用MCX除碱(2g；CH₃OH洗涤；2.0N NH₃/CH₃OH洗脱)，然后用反相HPLC纯化(CH₃OH/H₂O/TFA)。浓缩HPLC洗脱液，所得产物用如上所述的MCX除碱，得到吡咯烷14c，为红橙色泡沫，被未鉴定出的杂质污染(38.7mg)。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：1.83(s，2H)，7.74-7.69(m，4H)，7.49(app br s，2H)，4.24-4.20(m，2H)，3.04-2.98(m，2H)，2.93-2.87(m，2H)，2.13-2.05(m，2H)，1.95-1.70(6H)，1.48(s，6H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.03min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₂₉H₃₃N₆：465.28，实测值465.21。

实施例14

实施例14的TFA盐从14c开始，按照从中间体1e合成实施例1所述的方法制备。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：8.13(s，2H)，8.06-8.01(m，2H)，7.85-7.79(m，2H)，7.39-7.33(m，1.89H)，6.93(m，0.11H)，5.61(m，0.14H)，5.17-5.14(m，1.86H)，4.15-4.06(m，2H)，3.91-3.80(m，4H)，3.54/3.33(两个s，6H)，2.46-2.38(m，2H)，2.22-1.99(m，8H)，1.53(s，6H)，0.92-0.78(m，12H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.37min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₃H₅₅N₈O₆：779.42；实测值779.23

实施例15

((9，9-二甲基-9H-芴-2，7-二基)双(1H-咪唑-5，2-二基(2S)-2，1-吡咯烷二基((1S)-1-环丙基-2-氧代-2，1-乙烷二基)))二氨基甲酸二甲酯

实施例15(TFA盐)按照实施例14所述的方案，最终步骤采用适当的酸来制备。¹H NMR(DMSO-d₆，δ＝2.50，400MHz)：8.11-8.01(m，6H)，7.83-7.79(2H)，(d，J＝7.8，1.84H)，7.47(m，0.16H)，5.46(m，0.19H)，5.18-5.15(m，1.81H)，3.89-3.72(m，6H)，3.55/3.33(两个s，6H)，2.45-2.34(m，2H)，2.23-1.95(m，6H)，1.54(s，6H)，1.21-1.04(m，2H)，0.51-0.23(m，8H)。

LC(Cond.VII)：RT＝1.25min

LC/MS：分析计算值[M+H]⁺C₄₃H₅₁N₈O₆：775.39；实测值775.36

实施例16-17

经1分钟将粉末KOH(983mg，17.5mmol)分批加入到2，7-二溴-9H-芴(1.31g，4.04mmol)和1，3-二溴丙烷(837mg，4.15mmol)的DMSO(20mL)中的非均相混合物中，在室温条件下搅拌～5天。所得混合物用水(200mL)稀释，用10％CH₂Cl₂/己烷(100mL，2x)萃取。干燥(MgSO₄)合并的有机相，过滤，真空浓缩。所得粗物质用柱色谱法纯化(以硅胶筛装样；己烷，重力洗脱)，得到2′，7′-二溴螺[环丁烷-1，9′-芴]，为白色蓬松固体(600mg)。¹H NMR(CDCl₃，δ＝7.24，400MHz)：7.86(d，J 1.8，2H)，7.48(d，J＝8.0，2H)，7.44(dd，J＝8.1，1.8，2H)，2.61(app t，J＝8.1，4H)，2.42-2.34(m，2H)。

实施例16-17(TFA盐)从2′，7′-二溴螺[环丁烷-1，9′-芴]开始，用从二溴化物14a合成实施例14所述的方法制备。

实施例18-21

实施例18-21从3，7-二溴二苯并[b，d]呋喃(其依次按照Eur.J.Med.Chem.1999，34，205制备)开始，采用从二溴化物14a合成实施例14所述的方法制备。

实施例22

((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-甲基-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯

实施例22，步骤a

在-78℃下经10分钟向搅拌的2，7-二溴-9-甲基-9H-咔唑(1.52g，4.47mmol)的无水THF(150mL)溶液中加入n-BuLi(1.06M的己烷溶液，12.6mL，13.4mmol)。所得混悬液在-78℃下搅拌6小时，然后加入N-甲基-N-甲氧基乙酰胺(1.43mL，13.4mmol)。继续搅拌，经18小时将反应混合物升至室温。然后用2N NaH₂PO₄猝灭混合物，用乙酸乙酯萃取，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干。残留物用柱色谱法纯化(Horizon system/2-55％乙酸乙酯-己烷)，得到22a(0.560g，47％)，为黄色固体。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.35(d，J＝8.09Hz，2H)，8.27(s，2H)，7.86(m，1H)，7.84(m，1H)，4.05(s，3H)，2.72(s，6H).LC/MS：分析计算值C₁₇H₁₅NO₂：265；实测值：266(M+H)⁺。

实施例22，步骤b

向冰-冷的22a(0.661g，2.49mmol)的甲苯(20mL)混悬液中加入三乙胺(1.39mL，9.96mmol)，然后加入三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯(1.72mL，7.47mmol)。在0℃下继续搅拌10分钟，然后将反应混合物升至室温。3小时后，将反应混合物用EtOAc-H₂O分配，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干，得到22b，基本上为定量产量，为浅棕色固体。此物质不经进一步处理就这样用于下面的步骤。

实施例22，步骤c

在0℃下向搅拌的22b的无水THF(25mL)溶液中一次性加入N-溴琥珀酰亚胺(0.709g，3.98mmol)。继续在0℃下再搅拌30分钟，过滤所得混悬液。滤饼风干，得到22c(1.05g，100％)，为黄色固体。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.41(d，J＝8.59Hz，2H)，8.37(s，2H)，7.89(m，2H)，5.10(s，4H)，4.07(s，3H).LC/MS：分析计算值C₁₇H₁₃Br₂NO₂：421；实测值：422(M+H)⁺。

实施例22，步骤d

将22c(1.05g，2.49mmol)、Boc-L-脯氨酸(1.07g，4.98mmol)和DIEA(0.867mL，4.98mmol)的乙腈(20mL)中的混合物在密封管中在85℃下加热2小时。然后将冷却的混合物浓缩至干，得到固体残留物。将此物质和NH₄OAc(1.92g，0.025mol)的甲苯(32mL)中的混合物在密封管中在120℃下加热2.5小时，然后将冷却的反应混合物用EtOAc-盐水分配。干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩，残留物用制备HPLC纯化(C18/CH₃CN-H₂O+0.1％TFA)，得到22d的TFA盐(0.840g，34％总体)，为黄色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.28(m，2H)，7.95(m，4H)，7.60(m，2H)，5.14(m，2H)，4.03(s，3H)，2.56(m，2H)，2.09(m，6H)，1.93(m，2H)，1.48(s，8H)，1.30(s，10H).LC/MS：分析计算值C₃₇H₄₅N₇O₄：651；实测值：652(M+H).⁺

实施例22，步骤e

向22d的TFA盐(0.840g，0.845mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入TFA(15mL)，所得混合物在室温下搅拌3小时。然后将混合物浓缩至干，残留物溶于CH₃OH，并应用于MCX萃取凝胶塞(plug)(12g，用CH₃OH-二氯甲烷，1∶1预处理)。将塞用CH₃OH-二氯甲烷(1∶1)洗脱，然后用2N NH₃的CH₃OH溶液洗脱，合并含产物的流分，浓缩，得到22e，为黄色固体(定量产量)。此物质就这样用于后面的步骤。

实施例22

向(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸(0.022g，0.150mmol)和HATU(0.057g，0.150mmol)的DMF(1mL)中的混合物中加入DIEA(0.104mL，0.60mmol)，将混合物在室温下搅拌15分钟。然后加入22e(0.034g，0.075mmol)的DMF(2.5mL)溶液，继续在室温下搅拌2小时。然后用乙酸乙酯-水(1∶1)分配混合物，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干。将残留物用制备HPLC纯化(C-18/MeCN-H₂O+0.1％TFA)，将含产物的流分浓缩至干。残留物从CH₃CN-H₂O(1∶1)冻干，得到实施例22的TFA盐(0.0064g，8％)，为黄色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.25(d，J＝8.08Hz，2H)，7.93(m，4H)，7.58(d，J＝8.08Hz，2H)，5.30(m，2H)，4.49(quart，J＝7.07Hz，2H)，4.20-3.98(m，1.5H)，4.00(s，3H)，3.88(m，2H)，3.65(s，6H)，2.55(m，2H)，2.23(m，6H)，1.34(d，J＝7.07Hz，6H).LC/MS：分析计算值C₃₇H₄₅N₇O₄：709；实测值：710(M+H)⁺。

实施例23-24

实施例23-24按照实施例22中描述的通用方法，通过采用适当的酸制备。

实施例25

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-甲基-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

按照实施例22中描述的通用方法，采用(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(0.024g，0.138mmol)和9-甲基-2，7-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-9H-咔唑(0.021g，0.046mmol)，得到粗产物，用制备HPLC纯化(C-18/MeCN-H₂O-NH₄OAc)，得到实施例25(0.0207g，59％)，为白色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ7.98(m，3H)，7.82(m，0.6H)，7.74(m，2.4H)，7.53(d，J＝7.07Hz，0.5H)，7.64(m，2.5H)，7.39(m，0.6H)，7.34(m，2.4H)，5.34(m，0.6H)，5.20(dd，J＝5.31，7.83Hz，2.4H)，4.24(d，J＝7.07Hz，2H)，4.01(m，2H)，3.65(s，6H)，2.37-2.19(m，6H)，2.09-2.02(m，4H)，0.94(m，12H).LC/MS：分析计算值C₄₁H₅₁N₉O₆：765；实测值：766(M+H)⁺。

实施例26

((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-(苯基磺酰基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯

实施例26，步骤a

将新鲜粉碎的KOH(1.31g，23.4mmol)的DMSO(28mL)中的混合物在室温下剧烈搅拌10分钟，然后一次性加入固体2，7-二溴咔唑(1.90g，5.85mmol)。所得混合物搅拌1小时，然后加入苯磺酰氯(1.49mL，11.7mmol)继续搅拌18小时。然后用水(150mL)稀释混合物，滤出所得沉淀物，滤饼用水洗涤，风干。所得浅褐色粉末用二氯甲烷-己烷研磨，过滤，真空干燥，得到26a(2.10g，77％)，为浅褐色固体。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ8.47(d，J＝1.52Hz，2H)，7.83(d，J＝8.59Hz，2H)，7.72(d，J＝8.59Hz，2H)，7.50(m，3H)，7.40(t，J＝8.08Hz，2H).LC/MS：分析计算值C₁₈H₁₁Br₂NO₂S：463；实测值：464(M+H).⁺

实施例26，步骤b

在-78℃下在氩气下向26a(2.086g，4.48mmol)的无水THF(60mL)溶液中经5分钟逐滴加入n-BuLi(1.29M的己烷溶液，10.4mL，13.4mmol)。所得混合物在-78℃下搅拌70分钟，然后加入N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1.43mL，13.45mmol)，经18小时将冷却浴升至室温。然后用2N NaH₂PO₄猝灭反应，用EtOAc萃取。干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干，得到黄褐色固体。此固体用己烷-乙腈研磨，过滤所得沉淀物，真空干燥，得到26b(1.16g，66％)，为浅褐色固体。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.79(s，2H)，8.40(d，J＝8.08Hz，2H)，8.10(d，J＝8.08Hz，2H)，7.85(d，J＝7.07Hz，2H)，7.64(m，2H)，7.50(m，3H)，2.74(s，6H).LC/MS：分析计算值C₂₂H₁₇NO₄S：391；实测值：392(M+H)⁺。

实施例26，步骤c

向冰-冷的26b(1.16g，2.96mmol)和三乙胺(1.65mL，11.8mmol)的甲苯(50mL)混悬液中加入TBDMSOTf(2.04mL，8.88mmol)，所得混合物在0℃下搅拌2小时，然后经18小时将其升至室温。然后用EtOAc-水分配混合物，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩，得到26c，为定量产率的橙色油状物。此物质不经进一步纯化就这样用于下面的步骤。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ8.60(d，J＝1.52Hz，2H)，7.79(m，4H)，7.62(dd，J＝1.52，8.59Hz，2H)，7.44(m，1H)，7.29(m，2H)，7.17(m，1H)，5.03(d，J＝2.02Hz，2H)，4.53(d，J＝2.02Hz，2H)，1.07(s，18H)，0.27(s，12H).LC/MS：分析计算值C₃₄H₄₅NO₄SSi₂：619；实测值：620(M+H)⁺。

实施例26，步骤d

向26c(2.96mmol)的THF(40mL)溶液中加入NBS(0.948g，5.34mmol)，所得混合物在室温下搅拌24小时。然后将深琥珀色反应混合物浓缩至接近干燥，加入己烷直至形成棕色沉淀。过滤混合物，得到(真空干燥后)26d，为定量产率的棕色固体。此物质不经进一步纯化就这样用于下面的步骤。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.84(s，2H)，8.44(d，J＝8.08Hz，2H)，8.14(d，J＝8.59Hz，2H)，7.93(d，J＝7.07Hz，2H)，7.65(m，1H)，7.51(m，2H)，5.13(s，4H)。

实施例26，步骤e

将26d(2.96mmol)、N-BOC-L-脯氨酸(1.27g，5.92mmol)和DIEA(1.03mL，5.92mmol)的乙腈(40mL)溶液在密封管中在约85℃下加热2小时。冷至室温后，将混合物浓缩至干，得到棕色油状物。

将上面得到的粗油状物和NH₄OAc(2.28g，29.6mmol)的甲苯(40mL)中的混合物在密封管中在125℃下加热3小时。用EtOAc-水分配冷却的混合物，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干。残留物用柱色谱法纯化(Horizon系统/0-10％甲醇-二氯甲烷)，得到26e(1.09g，47％)，为棕色固体。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ8.57(br s，1H)，7.80(d，J＝7.58Hz，6H)，7.39(m，3H)，7.28(m，2H)，5.01(m，2H)，3.55-3.43(m，5H)，3.06(br s，2H)，2.19(m，4H)，1.99(m，3H)，1.51(s，18H)。LC/MS：分析计算值C₄₂H₄₇N₇O₆S：777；实测值：778(M+H)⁺。

实施例26，步骤f

向26f(0.868g，1.12mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TFA(5mL)，所得混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩至干。残留物用CH₃OH吸收，并应用于预处理(CH₃OH)的SCX萃取凝胶垫(3cmx3cm)。将垫用CH₃OH洗涤，然后用2M NH₃的CH₃OH溶液洗脱。将含产物的流分浓缩，得到9-(苯基磺酰基)-2，7-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-9H-咔唑(0.582g，90％.)为深琥珀色固体，其被立即用于下面的步骤。

实施例26

向(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸(0.061g，0.412mmol)和HATU(0.157g，0.412mmol)的DMF(5mL)溶液中加入DIEA(0.359mL，2.06mmol)，所得混合物在室温下搅拌10分钟。向此溶液中加入粗26f(0.119g，0.206mmol)，继续搅拌2小时。然后将反应混合物用EtOAc-水(1∶1)分配，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干。所得残留物用制备HPLC纯化(C-18/CH₃CN-H₂O-NH₄OAc)，将含产物的流分浓缩至干。残留物从H₂O-CH₃CN(7∶3)冻干，得到实施例26(0.122g，66％)，为白色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.64(s，0.5H)，8.59(s，1.5H)，7.89(m，4H)，7.74(d，J＝8.08Hz，0.5H)，7.66(d，J＝8.08Hz，1.5H)，7.48(m，1.5H)，7.36(m，3.5H)，5.25(m，2H)，4.50(quart，J＝6.91Hz，1.5H)，4.27(m，0.5H)，3.89(t，J＝6.57Hz，3H)，3.59(m，6H)，2.48-1.99(m，9H)，1.36(m，6H).LC/MS：分析计算值C₄₂H₄₅N₉O₈S：835；实测值：836(M+H)⁺。

实施例27

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-(苯基磺酰基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

向(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(0.045g，0.256mmol)和HATU(0.097g，0.256mmol)的DMF(1mL)溶液中加入DIEA(0.223mL，1.28mmol)，所得混合物在室温下搅拌10分钟。向此混合物中加入26f(0.074g，0.128mmol)的DMF(2mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌5小时，然后加入水(5mL)，所得混合物真空浓缩至干。残留物用制备HPLC纯化(C-18/CH₃CN-H₂O+0.1％TFA)，将含产物的流分浓缩至干，再用制备HPLC纯化(C-18/CH₃CN-H₂O-NH₄OAc)，得到实施例27(0.0591g，52％)，为浅褐色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.63(s，0.5H)，8.58(s，1.5H)，7.90(m，4H)，7.74(m，0.5H)，7.67(m，1.5H)，7.48(m，1.5H)，7.36(m，3.5H)，5.22(dd，J＝5.05，7.58Hz，2H)，4.25(d，J＝7.58Hz，2H)，4.02(m，2H)，3.92(m，2H)，3.65(s，5H)，3.47(s，1H)，2.41-2.20(m，5.5H)，2.12-2.04(m，4.5H)，0.96(m，12H).LC/MS：分析计算值C₄₆H₅₃N₉O₈S：891；实测值：892(M+H)⁺。

实施例28

((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-高丝氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-(苯基磺酰基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯

向(S)-4-甲氧基-2-(甲氧基羰基氨基)丁酸(0.076g，0.398mmol)和HATU(0.151g，0.398mmol)的DMF(5mL)溶液中加入DIEA(0.348mL，1.99mmol)，所得混合物在室温下搅拌10分钟。向此混合物中加入26f(0.115g，0.199mmol)，继续搅拌2小时，然后将反应混合物用EtOAc-盐水(1∶1)分配。干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干。残留物用制备HPLC纯化(C-18/CH₃CN-H₂O-NH₄OAc)，将含产物的流分冻干，得到实施例28(0.122g，66％)，为白色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.64(s，0.5H)，8.59(s，1.5H)，7.90(m，4H)，7.68(m，2H)，7.49(m，1.5H)，7.37(m，3.5H)，5.40(m，0.5H)，5.25(dd，J＝4.04，8.08Hz，1.5H)，4.61(m，1.5H)，4.40(m，0.5H)，3.93(m，3H)，3.65(s，4.5H)，3.54(s，1.5H)，3.49(m，4H)，3.34(m，2H)，2.49(m，1H)，2.38-2.32(m，2H)，2.27-2.08(m，8H)，2.04-1.80(6H).LC/MS：分析计算值C₄₆H₅₃N₉O₁₀S：923；实测值：463[(M/2)+H)⁺。

实施例29

rac-((1R，2S)-2-甲氧基-1-(((2R)-2-(5-(7-(2-((2R)-1-(N-(甲氧基羰基)-O-甲基-D-苏氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-(苯基磺酰基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯

按照实施例28所述的方法制备实施例29，分离为白色固体(0.083g，44％)。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.63(s，0.5H)，8.58(s，1.5H)，7.89(m，4H)，7.72(m，0.5H)，7.66(m，1.5H)，7.47(m，1.5H)，7.37(m，3.5H)，5.56(m，0.4H)，5.25(dd，J＝4.80，7.83Hz，1.6H)，4.47(d，J＝5.56Hz，1.5H)，4.35(m，0.5H)，3.94(m，3H)，3.83(m，1H)，3.73-3.69(m，1.3H)，3.66(s，6H)，3.61-3.56(m，0.7H)，2.40-2.22(m，6H)，2.07(m，3H)，1.21(d，J＝6.06Hz，6H).LC/MS：分析计算值C₄₆H₅₃N₉O₁₀S：923；实测值：463[(M/2)+H]⁺。

实施例30

((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯

向实施例26(0.033g，0.039mmol)和Na₂HPO₄(0.022g，0.051mmol)的无水EtOH(2mL)中的混合物中加入新鲜粉碎的6％钠汞齐(0.079g)。所得混悬液在室温下搅拌6小时，然后将其用0.45μM注射器式滤器过滤。滤液真空浓缩，残留物用CH₃OH(2mL)吸收，用制备HPLC纯化(C-18/CH₃CN-H₂O-NH₄OAc)。将含产物的流分浓缩至干，残留物从H₂O-CH₃CN(7∶3)中冻干，得到实施例30(0.014g，53％)，为浅褐色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ7.98(m，2H)，7.79(s，0.5H)，7.71(s，1.5H)，7.52(m，0.5H)，7.44(d，J＝8.08Hz，1.5H)，7.37(s，0.5H)，7.28(s，1.5H)，5.21(dd，J＝4.29，7.83Hz，2H)，4.48(quart，J＝7.07Hz，1.5H)，4.27(m，0.5H)，3.87(t，J＝6.32Hz，3H)，3.64(s，4H)，3.57(s，2H)，2.48-1.92(m，9H)，1.33(d，J＝7.07Hz，6H).LC/MS：分析计算值C₃₆H₄₁N₉O₆：695；实测值：696(M+H)⁺。

实施例31-32

采用合成实施例30所述的方法，从各个磺酰胺前体制备实施例31-32。

实施例33

((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-(2-甲氧基乙基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯

实施例33，步骤a

向冰-冷却的NaH(60％油溶液，0.201g，5.02mmol；事先在Ar下用3x5mL己烷洗涤)的DMF(5mL)混悬液中加入2，7-二溴-9H-咔唑(1.419g，4.37mmol)的DMF(25mL)溶液。所得混合物在0℃下搅拌5分钟，然后加入2-氯乙基甲基醚(1.40mL，15.3mmol)，将反应混合物升至60℃搅拌40分钟。然后将冷却的混合物导入冰水中(300mL)，滤出所得白色沉淀物，真空干燥，得到33a(1.54g，92％)，为白色固体，其不经进一步纯化而使用。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ7.87(d，J＝8.08Hz，2H)，7.59(s，2H)，7.34(dd，J＝8.34，1.77Hz，2H)，4.37(t，J＝5.81Hz，2H)，3.74(t，J＝5.81Hz，2H)，3.29(s，3H).LC/MS：分析计算值C₁₅H₁₃Br₂NO：381；实测值：382(M+H)⁺。

实施例33，步骤b

在-78℃下在Ar下经5分钟向搅拌的粗33a(1.577g，4.12mmol)的无水THF(40mL)溶液中逐滴加入n-BuLi(1.29M的己烷溶液，9.53mL，12.3mmol)。继续在同样温度下搅拌2小时，然后加入N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1.31mL，12.3mmol)，经18小时将冷却浴升至室温。然后用2N Na₂HPO₄猝灭反应混合物，用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。干燥(MgSO₄)有机相，过滤，真空浓缩至干，得到琥珀色油状物，将其用柱色谱法纯化(Biotage，40+M柱/10-60％乙酸乙酯-己烷)。合并含产物的流分，过滤，浓缩，得到33b(0.967g，76％)，为黄色固体。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ8.11(m，3H)，7.83(dd，J＝8.34，1.26Hz，1H)，7.55-7.47(m，2H)，7.28-7.24(m，1H)，4.52(t，J＝5.81Hz，2H)，3.78(t，J＝5.81Hz，2H)，3.29(s，3H)，2.73(s，3H).LC/MS：分析计算值C₁₉H₁₉NO₃：309；实测值：310(M+H)⁺。

实施例33，步骤c

向冰-冷的33b(0.967g，3.12mmol)和三乙胺(1.74mL，12.5mmol)的甲苯(50mL)混悬液中加入TBDMSOTf(2.15mL，9.38mmol)，所得混合物在0℃下搅拌20分钟，然后经24小时将其升至室温。所得混合物用EtOAc-水分配，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩，得到油状33c，定量产量。此物质对¹HNMR或LC/MS测定不稳定，其不经进一步纯化就这样用于下面的步骤。

实施例33，步骤d

向33c(3.12mmol)的THF(20mL)溶液中加入NBS(1.00g，5.62mmol)，所得混合物在室温下搅拌45分钟。过滤所得黄色浆液，滤饼用最少体积的THF洗涤，真空干燥所得固体，得到33d(0.66g，45％)，为黄色固体。此物质不经进一步纯化就这样用于下面的步骤。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.40(m，4H)，7.88(dd，J＝8.34，1.26Hz，2H)，5.08(s，4H)，4.77(t，J＝5.31Hz，2H)，3.77(t，J＝5.31Hz，2H)，3.18(s，3H).LCMS：分析计算值C₁₉H₁₇Br₂NO₃：465；实测值：466(M+H)⁺。

实施例33，步骤e

将33d(0.662g，1.42mmol)。N-BOC-L-脯氨酸(0.611g，2.84mmol)和DIEA(0.495mL，2.84mmol)的乙腈(20mL)溶液在密封管中在约85℃下加热2.5小时。冷至室温后，将混合物浓缩至干，得到黄色固体。LC/MS：分析计算值C₃₉H₄₉N₃O₁₁：735；实测值：736(M+H)⁺。

将上述固体和NH₄OAc(1.09g，14.2mmol)的甲苯(20mL)中的混合物在密封管中在125℃下加热3小时。减压浓缩冷却的混合物，用EtOAc-盐水分配，然后干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干。残留物用制备HPLC纯化(C-18/MeCN-H2O+0.1％TFA)，得到33e(0.810g，82％)，为浅褐色固体。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.31(d，J＝8.08Hz，2H)，8.20(m，1H)，8.14(m，1H)，8.08(s，2H)，7.66(d，J＝8.59Hz，2H)，5.06(m，2H)，4.63(t，J＝5.31Hz，2H)，3.80(m，2.5H)，3.64-3.58(m，2.5H)，3.48-3.39(m，2.5H)，3.18(s，3H)，2.45-2.40(m，2H)，2.11-1.94(m，7.5H)，1.79(m，1H)，1.41(s，8H)，1.19(s，10H).LC/MS：分析计算值C₃₆H₄₁N₉O₆：695；实测值：696(M+H)⁺。

实施例33，步骤f

向33e(0.810g，1.16mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TFA(8mL)，所得混合物在室温下搅拌24小时，然后浓缩至干。残留物用CH₃OH吸收，并应用于预处理(CH₃OH)的SCX萃取凝胶(3cm x5cm)垫。用CH₃OH洗涤垫，然后用2M NH₃的CH₃OH溶液洗脱。浓缩含产物的流分，得到33f(0.380g，66％.)，为橙色固体，其就这样用于下面的步骤。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.01(d，J＝8.08Hz，2H)，7.86(s，2H)，7.54(dd，J＝8.34，1.26Hz，2H)，7.49(s，2H)，4.68(t，J＝8.08Hz，2H)，4.57(t，J＝5.56Hz，2H)，3.83(t，J＝5.56Hz，2H)，3.43-3.36(m，2H)，3.33-3.28(m，2H)，3.26(s，3H)，2.48-2.05(m，8H).LC/MS：分析计算值C₂₉H₃₃N₇O：495；实测值：496(M+H)⁺。

实施例33

向(S)-2-(甲氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(0.051g，0.29mmol)和HATU(0.110g，0，29mmol)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(0.252mL，1.45mmol)，所得混合物在室温下搅拌10分钟。向此溶液中加入33f(0.072g，0.145mmol)，继续搅拌4小时。然后将反应混合物用EtOAc-盐水(1∶1)分配，干燥(MgSO₄)有机相，过滤，浓缩至干。所得残留物用制备HPLC纯化(C-18/CH₃CN-H₂O+0.1％TFA)，将含产物的流分浓缩至干。得到实施例33(0.055g，37％)的TFA盐，为黄色固体。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.25(d，J＝8.08Hz，2H)，7.96(s，2H)，7.94(s，2H)，7.58(d，J＝8.08Hz，2H)，5.28(t，J＝7.33Hz，2H)，4.67(t，J＝5.05Hz，2H)，4.24(d，J＝7.58Hz，2H)，4.14-4.09(m，2H)，3.93-3.86(m，4H)，3.65(s，6H)，3.25(s，3H)，2.62-2.57(m，2H)，2.31-2.04(m，8H)，0.94(d，J＝6.57Hz，6H)，0.90(d，J＝7.07Hz，6H).LC/MS：分析计算值C₄₃H₅₅N₉O₇：809；实测值：810(M+H)⁺。

实施例34

((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-L-丙氨酰)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-(2-甲氧基乙基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯

实施例34的TFA盐按照实施例33中描述的方法制备，回收得到黄色固体(0.0387g，27％)。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ8.26(d，J＝8.08Hz，2H)，7.96(s，2H)，7.92(s，2H)，7.58(dd，J＝8.08，1.52Hz，2H)，5.29(m，2H)，4.68(m，2H)，4.49(m，2H)，4.00(m，2H)，3.88(m，4H)，3.65(s，6H)，3.25(s，3H)，2.61-2.53(m，2H)，2.26-2.18(m，6H)，1.34(d，J＝7.07Hz，6H).LC/MS：分析计算值C₃₉H₄₇N₉O₇：753；实测值：754(M+H)⁺。

实施例35

((1S，2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧基羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-9-(2-甲氧基乙基)-9H-咔唑-2-基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯

实施例35的TFA盐按照实施例33中描述的方法制备。此物质用制备HPLC再纯化(C-18/MeCN-H₂O-NH₄OAc)，得到游离碱，为浅褐色固体(0.031g，25％)。¹HNMR(400MHz，CH₃OH-d₄)δ7.99(m，2H)，7.86(m，0.5H)，7.80(s，1.5H)，7.54(d，J＝8.59Hz，0.5H)，7.47(d，J＝8.08Hz，1.5H)，7.41(m，0.5H)，7.36(s，1.5H)，5.54(m，0.5H)，5.23(dd，J＝7.83，4.8Hz，1.5H)，4.60-4.54(m，2H)，4.46(d，J＝5.05Hz，1.5H)，4.35(d，J＝5.05Hz，0.5H)，4.00-3.82(m，6H)，3.70-3.63(m，7H)，3.49(s，1H)，3.37(s，2H)，3.28(m，7H)，2.39-2.02(m，8H)，1.18(d，J＝6.06Hz，6H).LC/MS：分析计算值C₄₃H₅₅N₉O₇：841；实测值：842(M+H)⁺。

生物活性

本公开中采用了HCV复制子测定，并按照共有的PCT/US2006/022197和O’Boyle et.al.Antimicrob Agents Chemother.2005 Apr；49(4)：1346-53中描述的方法制备、进行和验证。

HCV 1b-377-新复制子细胞被用来测试目前描述的化合物系列以及在NS5A含Y2065H突变的对化合物A耐药的细胞(申请PCT/US2006/022197中描述)。试验化合物被测出对含突变的细胞的抑制活性比野生型细胞小10倍以上，这表明两种化合物系列之间的作用机制有相关性。因此，本公开的化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白的功能，并可理解为在组合中有效，如之前在申请PCT/US2006/022197中和共有的WO/O4014852中所描述。此外，本公开的化合物可有效对抗HCV 1b基因型。应了解，本公开的化合物可抑制HCV的多种基因型。表2显示了本公开代表性化合物对抗HCV 1b基因型的EC50值。在一个实施方案中，本公开的化合物可有效对抗1a、1b、2a、2b、3a、4a和5a基因型。对抗HCV 1b的EC50范围如下：A＝＞100nM；B＝1-99nM；C＝101-999pM；和D＝1-100pM。

本公开的化合物可通过除NS5A之外或与NS5A不同的机制抑制HCV。在一个实施方案中，本公开的化合物抑制HCV复制子，在另一实施方案中，本公开的化合物抑制NS5A。

表2

本领域熟练技术人员明白本公开并不限于前面示例的实施例，也可用其它特定形式来体现而不偏离其本质属性。因此，理想的是所述实施例在所有方面都要被理解为是说明性的而非限制性的，参考文献的引用针对的是所附的权利要求而非针对之前的实施例，在权利要求等同方案的意义和范围内的所有变化都因此包含在其中。

本公开的化合物可通过除NS5A抑制以外的机制或与NS5A抑制不同的机制来抑制HCV。在一个实施方案中，本公开的化合物抑制HCV复制子，在另一实施方案中，本公开的化合物抑制NS5A。本公开的化合物可抑制多种基因型的HCV。