以土大黄提取物为有效成份的抗焦虑药物及其制备方法和应用

摘要

以土大黄提取物或有效部位为主要有效成份制备的药物，以中药材土大黄为主要有效成份制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液等口服给药剂型，可加入其它成份和辅料组成复方制剂，具有显著的抗焦虑效果，可用于焦虑症的保健和治疗。此外，还提供以土大黄提取物和食品添加剂组合成的保健食品，药物和食品的制备方法。

说明书

技术领域：

本发明属于药物技术领域，具体地，涉及一种以传统中药土大黄为主要有效成份制备的药物制剂或保健食品，其制备方法及其在抗焦虑药物和食品中的应用。

背景技术：

焦虑症同抑郁症一样是一类严重危害人们生活质量的精神系统疾病，且影响面较抑郁症更加广泛。焦虑症的发生与社会节奏加快、竞争更加激烈明显相关，因此随着社会发展，焦虑症的发病率在提高。据统计，我国城市人口中焦虑症的发病率约为1-2％，而发达国家近10％，且仍呈增长趋势。据Decision Resources的一项最新研究，目前世界7个主要医药市场(美国，法国，德国，意大利，西班牙，英国和日本)上有8700多万焦虑症病人。公众对焦虑症，包括广泛性焦虑症、惊恐症、强迫症、社交焦虑症和恐怖症的认识日益提高，且敢于面对焦虑而不回避，加上医学诊断水平的提高，将促进对焦虑症的诊断、治疗和这一市场药物的使用。目前临床应用的抗焦虑药种类繁多，概括起来主要有：(1)苯二氮卓类药物(BDZs)，该类药物的优点是起效快(1-2周)，能迅速缓解躯体性焦虑，而且疗效肯定，但也有过度镇静、协调功能减退、警觉性下降和认知功能损害等缺点，长期使用容易成瘾。(2)选择性5-羟色胺再摄取抑制剂，如氟西汀，该类药物通过降低突触前自身受体敏感性，减少对5-HT神经元的抑制，增加5-HT释放及阻断5-HT回吸收，提高突触间隙内5-HT水平，从而治疗焦虑症。但该类药物主要缺点是起效慢，达到最大疗效所需时间较长。(3)单胺氧化酶抑制剂，包括可逆性单胺氧化酶抑制剂和不可逆性单胺氧化酶抑制剂。该类药物副反应发生率较高，比如性欲减退、早泄、眩晕、失眠、便秘、尿潴留等。(4)肾上腺素受体阻滞剂，这类药物可以选择性的阻断β受体，从而减轻心悸、脸红、出汗等症状。被用于减轻局限性社交焦虑障碍患者中与表现场合(例如公众演讲，音乐演奏等)相关的生理症状，局限性较大，并且对有支气管哮喘者、心力衰竭者以及糖尿病者均有使用禁忌。(5)阿扎哌隆类，属非BDZs抗焦虑药，如丁螺环酮、坦度螺酮、伊沙毗隆和吉毗隆等。盐酸丁螺环酮能够激动海马和杏仁核突触后膜的5-HT1A受体，从而产生抗焦虑作用。丁螺环酮与苯二氮卓类抗焦虑药也一样都具有良好的疗效，而且盐酸丁螺环酮不良反应发生率明显小于苯二氮卓类抗焦虑药，长期使用也无明显的依赖性。但是就目前对本药的研究结果看，大都是关于本药对广泛性焦虑障碍的研究，而对于本药对于社交焦虑障碍的研究资料尚不充分，有待于进一步研究总结。(6)抗惊厥药，这类药物大都具有较强的稳定情绪的作用，临床常被作为心境稳定剂用来治疗躁狂及预防复发等。有报导抗癫痫药加巴喷丁、拉莫三嗪对社交焦虑障碍的疗效优于安慰剂，但这方面资料有限，疗效尚不肯定，故没有足够证据证明该类药物在社交焦虑障碍的治疗中能发挥作用。焦虑症的普遍性与现有药物的局限性形成明显对比，因此临床上迫切需要研发疗效高、毒副作用少的新型抗焦虑药物。

由于精神系统疾病的市场需求增加，抗焦虑药物成为世界多个制药公司的关注。研发中所关注的主要靶点集中在γ-氨基丁酸受体(γ-GABA)、外周苯二氮卓受体、5-HT受体、神经类固醇、胆囊收缩素受体(CCKB)、促肾上腺皮质激素释放因子受体(CFR)、组胺H受体、NMDA受体和胆碱能离子通道等几个方面。已有的研究表明以这些靶点为模型用来发现和开发抗焦虑剂是可以成功的。理想的抗焦虑剂应该是发现与这些焦虑靶点相关的高选择性配体。抗焦虑的动物模型多种多样，但主要分为两大类：条件反应性实验(conditionedresponse tests)和非条件反应性实验(unconditioned responsetests)，前者包括冲突实验和其他条件反应性实验，测试动物在某些实验条件下的诱发行为；后者种类较多，包括：探究实验、群体实验、抗天敌实验和其他非条件反应性实验，测试动物自发的、本能的行为。高架十字迷宫是基于动物自发的、本能的探究实验，Vogel饮水冲突实验是Vogel等人1971年在大鼠饮水动机与它同时所遭受的足电击惩罚使大鼠处在冲突状态的一种简便、快速条件反应性实验。因为焦虑的发病与紧张、恐惧等精神因素密切相关，而上述两种实验分别代表了抗焦虑实验非条件反应和条件反应性两大类模型，并且不需要长期训练动物，加上对抗焦虑药物特异性好，因此上述模型成为发现抗焦虑药物的经典模型，因此在筛选抗焦虑药物研究中被广泛采用。

中医药自古有安神剂、定惊药、补阳药、补肾药、理气药等，这些药物的功效与焦虑症的发病病因有相似之处，因此某些安神剂等在临床上治疗焦虑症是有效的。也因此借鉴中医药智慧，从中寻找有效的抗焦虑药物是可能的。酸模属为蓼科一个大属，我国该属植物资源极为丰富，羊蹄Rumex japonicus Houtt.、皱叶酸模Rumex crispusL.、巴天酸模Rumex patientia L.、尼泊尔酸模或牛耳大黄Rumexnepalensis Spreng均称为土大黄，它们含有共性的化学成分如蒽醌、二苯乙烯和萘类等。尼泊尔酸模在我国民间以止血和治疗疥癣著称，沿用已久。日本学者小谷功等从其根中分得酸模素，该化合物具有较强的抗真菌作用和抗氧化作用。迄今为止，未发现关于尼泊尔酸模提取物具有抗焦虑作用的报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种抗焦虑药物或保健食品、其制备方法和以土大黄提取物为主要有效成份制成的片剂、胶囊剂等口服剂型；另一目的在于提供其提取物在制备抗焦虑药物组合物或保健食品中的应用。

本发明的上述目的是通过下述的技术方案加以实现的：

土大黄提取物，由下述方法提取而得：

乙醇提取：取土大黄，干燥、粉碎，用乙醇冷浸、温浸提取或加热回流提取，过滤取滤液，回收乙醇并浓缩得浸膏；其中，所述乙醇冷浸、温浸提取是采用乙醇浓度10～95％，乙醇加入量为土大黄药材质量的2～10倍，冷浸时间1～10天；温浸时间1～2小时，温度40～60℃，提取1～3次；所述加热回流提取是每次提取20分钟～4小时，提取1～3次；

水提取：取土大黄，干燥、粉碎，用水冷浸、温浸提取或加热煎煮提取，过滤取滤液，浓缩得浸膏；其中，所述水冷浸、温浸提取是：采用水的加入量为土大黄药材质量的2～10倍，冷浸时间1～10天；温浸时间1～2小时，温度40～60℃，提取1～3次；所述加热煎煮提取是每次加热20分钟～4小时，提取1～3次；

正丁醇提取：由上述步骤的乙醇或水提取物浓缩后用水适当稀释，用等体积的乙酸乙酯萃取1～6次，水层用正丁醇萃取1～6次，并浓缩得正丁醇浸膏。

土大黄大孔树脂洗脱物，用下述方法制成：权利要求1所述的乙醇或水提取物浓缩后用D101大孔树脂吸附，然后用水，30％，50％，70％乙醇依次洗脱，每个梯度溶剂用量为3个柱体积，收集50％乙醇洗脱部分。

所述的土大黄提取物，其中乙醇冷浸、温浸提取是采用乙醇浓度70～95％，乙醇加入量为土大黄药材质量的5～8倍，冷浸时间5～8天；温浸时间1～2小时，温度40～60℃，提取1～3次；加热回流提取是每次提取20分钟～2小时，提取3次。

土大黄提取物的制备方法，包括下述步骤：

乙醇提取：取土大黄，干燥、粉碎，用乙醇冷浸、温浸提取或加热回流提取，过滤取滤液，回收乙醇并浓缩得浸膏；其中，所述乙醇冷浸、温浸提取是采用乙醇浓度70～95％，乙醇加入量为土大黄药材质量的5～8倍，冷浸时间5～8天；温浸时间1～2小时，温度40～60℃，提取1～3次；所述加热回流提取是每次提取20分钟～2小时，提取3次；

水提取：取土大黄，干燥、粉碎，用水冷浸、温浸提取或加热煎煮提取，过滤取滤液，浓缩得浸膏；其中，所述水冷浸、温浸提取是：采用水的加入量为土大黄药材质量的2～10倍，冷浸时间1～10天；温浸时间1～2小时，温度40～60℃，提取1～3次；所述加热煎煮提取是每次加热20分钟～4小时，提取1～3次；

正丁醇提取：由上述步骤的乙醇或水提取物浓缩后用水适当稀释，用等体积的乙酸乙酯萃取1～6次，水层用正丁醇萃取1～6次，并浓缩得正丁醇浸膏。

上述方法中所用的土大黄为酸模属Rumex植物。优选尼泊尔酸模Rumex nepalensis植物。

抗焦虑药物组合物，其中含有治疗有效量的上述的土大黄提取物或洗脱物和药学上可接受的载体。

保健食品，其中含有土大黄提取物或洗脱物和食品常用添加剂。

土大黄提取物或洗脱物在制备抗焦虑药物中的应用。

土大黄提取物或洗脱物在制备抗焦虑保健食品中的应用。

本发明采用的土大黄为尼泊尔酸模Rumex nepalensis Spreng，属蓼科酸模属植物。尼泊尔酸模在我国分布较广，资源量极为丰富。本发明对其提取物和部位进行了抗焦虑研究。动物药效学研究证明了尼泊尔酸模具有明确的药效。同时对其萃取部位包括石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位进行了NMDA受体拮抗活性的筛选，发现正丁醇部位活性最好。因此尼泊尔酸模抗焦虑的作用机理基本是和NMDA受体拮抗活性相关。本发明的土大黄提取物，其提取物中的化学成分特征为：主要成分为萘类衍生物，而最大程度上避免了具有泄泻作用的蒽醌类成分的存在。

本发明提取物所采用的制备方法其特征之一在于有效成份中所含有的化学成分包括萘类结构类似物，因此以萘类化合物为参照法，也可采用其它手段富集到总萘类有效部位。

本发明提取物可以单独直接应用，可以相互组合应用，也可以与其它药物包括植物提取物组成复方的形式使用，可以使用不同的药用辅料，制成多种固体制剂或液体制剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服形式给药。使用量可根据给药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化进行一次或多次使用。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

实施例1：

将干燥的土大黄(尼泊尔酸模Rumex nepalensis Spreng)粉碎成粉，称取1000g置于容器内，用95％乙醇回流提取3次，每次40分钟，每次6倍体积乙醇，过滤取滤液，回收乙醇并减压浓缩得干燥浸膏450g。

实施例2：

将干燥的土大黄(尼泊尔酸模Rumex nepalensis Spreng)粉碎成粉，称取500g取置于容器内，用8倍水加热煎煮提取2次，每次1小时，过滤取滤液，减压浓缩得干燥浸膏160g。

实施例3：

取实施例1中乙醇提取物150g，用适量水(800mL)混悬，依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，减压浓缩得正丁醇干燥萃取物60g。

实施例4：

取实施例1中乙醇提取物150g，用适量水(800mL)混悬，将样品上柱体积规格为8.5cm×110cm(i.d.)的D101大孔树脂柱，依次用水、30％、50％、70％乙醇洗脱，每个梯度溶剂用量为3个柱体积。收集50％乙醇洗脱部位，减压浓缩得干燥浸膏为21g。

实施例5：

将干燥的土大黄(尼泊尔酸模Rumex nepalensis Spreng)粉碎成粉，称取1000g置于容器内，用土大黄8倍体积75％乙醇冷浸5天，过滤取滤液，减压浓缩得干燥浸膏370g。

实施例6：

将干燥土大黄(尼泊尔酸模Rumex nepalensis Spreng)粉碎成粉，称取1000g置于容器内，用土大黄7倍体积85％乙醇温浸，每次2小时，温度50℃，提取3次，过滤取滤液，减压浓缩得干燥浸膏420g。

实施例7：

片剂：取实施例1～6的方法制得的提取物为活性成分50mg、乳糖140mg、淀粉55mg、硬脂酸镁5mg。

制备方法：将活性成分、乳糖和淀粉混合，用水均匀湿润，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，活性成分含量为50mg。

实施例8：

胶囊剂：取实施例1～6的方法制得的提取物为活性成分50mg、乳糖147mg、硬脂酸镁3mg。

制备方法：将活性成分与助剂混合，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，活性成分含量为50mg。

实施例9：

取实施例1～6的方法制得的提取物1份，20份聚合度为300的醋酸乙烯酯树脂，2份邻苯二甲酸丁酯，3份巴西棕蜡和20份麦芽糖，在捏机中于50℃混合3分钟，再加入50份砂糖，1份薄荷，混炼均匀后在50℃恒温下，从挤出机中挤出口香糖，切割成规定厚度。

实施例10：

本发明提取物及其与药用辅料组成的药物或保健品组合物的抗焦虑作用：小鼠高架十字迷宫。

(1)实验原理：啮齿类动物有探究新环境的特性，但又厌恶强光和开阔地。1985年Pellow等人根据这一特性设计了高架十字迷宫，并漆成黑色。它包括两个50cm×10cm的相对开臂(open arms)和两个50cm×10cm×40cm的相对闭臂(closed arms)，闭臂上部是敞开的。迷宫中央有一10cm×10cm的开阔部，迷宫离地面50cm，以增加动物进入开臂时的恐惧。抗焦虑剂增加开臂探究活动，致焦虑剂则相反。高架十字迷宫是筛选抗焦虑剂的经典模型。

(2)实验方法：小鼠每天称重，抚摸1分钟，连续3天。随机分组，正常组、药物组和阳性对照组，正常灌胃给药，每天一次，连续5天，给药组设低、中、高3个剂量，分别给予各受试样品，地西泮作为阳性对照药(4mg/kg)，正常组给等剂量生理盐水。末次给药30分钟后，将小鼠置于迷宫中央开阔部，头朝闭臂。启动摄像监视系统，记录5分钟内小鼠进入开臂和闭臂的次数以及在两臂停留的时间。(进出臂标准应严格界定，以四肢全部入臂或两只前爪出臂为准)。计算小鼠进入开臂的次数和时间分别占总次数(两臂次数之和)和总时间(在两臂滞留时间之和)的百分比。以此作为评价焦虑的指标。

(3)实验结果：开臂次数和开臂滞留时间分别占总次数(两臂次数之和)和总时间(在两臂滞留时间之和)的百分比如下表所示，由实施例1所得的乙醇提取物为TDH-EtOH；实施例3所得的正丁醇萃取部位为TDH-BuOH；实施例4所得的大孔树脂洗脱部位为TDH-D101。

TDH-EtOH小鼠高架十字迷宫实验(X±S)

^**P＜0.01，^*P＜0.05vs正常组

TDH-BuOH小鼠高架十字迷宫实验(X±S)

^**P＜0.01，^*P＜0.05vs正常组

TDH-D101小鼠高架十字迷宫实验(X±S)

^**P＜0.01，^*P＜0.05vs正常组

实施例11：

本发明提取物及其与药用辅料组成的药物或保健品组合物的抗焦虑作用：Vogel饮水冲突实验。

(1)实验原理：禁水大鼠的饮水动机与它同时所遭受的足电击惩罚形成矛盾冲突状态，抗焦虑剂增加冲突反应(冲突期舔水次数增多)，致焦虑剂则使冲突反应降低。本实验采取这一原理进行。

(2)实验方法：Model-102型焦虑仪(Anxio-meter)(美国Lafayetteinstrument or宁波安莱科技)，由自动计数器、电刺激器和有机玻璃操作箱三部分组成。操作箱(45cm×24cm×21cm)，底部为不锈钢栅栏，顶部加一网眼状不锈钢盖，瓶盖一端插入一个带有不锈钢嘴的水瓶，瓶嘴伸入箱内6cm，距离底部栅栏12cm，并与底部栅栏一起通过导线与刺激器相连。瓶嘴外套一绝缘胶皮，以防大鼠触及瓶嘴但未舔水时遭受电击。动物适应环境3天，并分组灌胃给药5天。之后实验分两阶段进行，第一阶段，于给药后第3天进行非惩罚饮水训练：称重，禁水，24小时后单个置于操作箱内，让其自由探究，大鼠发现瓶嘴后立即开始舔水，计数器自动记录大鼠3分钟内的舔水次数，淘汰舔水少于300次的大鼠。第二阶段，于第4天后进行惩罚实验：上述未被淘汰的大鼠继续禁水24小时(共48小时)，第5天末次给药30分钟后置于操作箱。大鼠能很快找到瓶嘴并开始舔水，舔够20次仪器自动开始计时并给予一次电击(舔水与电击次数之比为20∶1)，电击强度为0.3mA，持续2s，但大鼠如脱离瓶嘴，则电击终止。大鼠据此可控制遭受电击时间的长短。计数器自动记录惩罚期(3分钟)大鼠的舔水次数。

(3)实验结果：由实施例1所得的乙醇提取物为TDH-EtOH；实施例3所得的正丁醇萃取部位为TDH-BuOH；实施例4所得的大孔树脂洗脱部位为TDH-D101。各组非惩罚条件下饮水次数几无差别，给予电击刺激后，给药组、阳性药组与正常组的差别如下表所示：

TDH-EtOH大鼠Vogel饮水冲突实验(X±S)

^*P＜0.05vs正常组

TDH-BuOH大鼠Vogel饮水冲突实验(X±S)

^*P＜0.05vs正常组

TDH-D101大鼠Vogel饮水冲突实验(X±S)

^*P＜0.05vs正常组

由上述试验可以证明：本发明制成的提取物及其制剂具有显著的抗焦虑作用，对焦虑症具有较好的疗效。