治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂及制备方法

摘要

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂及制备方法属于治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂及制备方法。涂搽剂的原料和按干物质基础的重量份比配方为：瑞香狼毒∶连翘＝1.5～3.5∶1.0；按提取物全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物∶连翘水醇提取物＝1.5～3.5∶1.0。涂搽剂的制备方法，包括水提、醇沉、浓缩制备瑞香狼毒的水醇提取液，水提、醇提、两种提取液体混和、浓缩制备连翘的水醇提取液；混合两种水醇提取液获得涂搽剂。涂搽剂优点：施药时对动物机体刺激性小，毒性小，动能舔食不会中毒，对毛癣治疗痊愈率达到94.6％，远远优于传统毛癣药物灰黄霉素痊愈率的66.7％。

说明书

技术领域

本发明属于治疗动物皮肤病的中药复方组合物，特别是治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂及制备方法。

背景技术

动物毛癣病是由毛癣菌属(Trichophyton)或小孢霉菌属(Microsporum)的小孢霉(Syzygites Ehrenberg或Sporodinia Lk.)的真菌(Fungus)感染皮肤表面及毛囊、毛干等附属结构所引起的人、畜、禽共患皮肤传染病。该病临床表现是感染皮肤呈不规则的块状或圆形结痂、脱毛、断毛及皮肤炎症。发病一般从皮肤较薄的嘴和眼周围开始。患病动物不停用嘴啃、脚抓，使其迅速扩大到嘴、脚、背及腹部皮肤，病变部出现淡黄色的圆形脓泡或结有灰白色圆形皮屑、灰白色或黄色痂屑，有时可见皮肤出现环行的覆盖珍珠灰(闪光鳞屑)的秃毛斑，痂块下皮肤呈鲜红色，部分有红色点状小疙瘩，皮肤粗糙，患部的结痂变硬，痂皮脱落后形成小溃疡，造成毛根和毛囊的破坏；继而脚爪上产生白色皮屑和血痂，食欲减退，动物迅速消瘦，重者衰竭死亡。目前常采用复方苯甲酸搽剂、克霉唑癣药水、达克宁霜、灰黄霉素等外用和部分抗生素添加剂进行预防和治疗，其有效率和治愈率较低。

发明内容

本发明是提供一种治疗动物毛癣病的有效率很高和治愈率很高，只有瑞香狼毒和连翘的偶方中药提取物组成的外用涂搽剂及制备方法。

本发明所指的动物毛癣病是由毛癣菌属(Trichophyton)或小孢霉菌属(Microsporum)的小孢霉(Syzygites Ehrenberg或Sporodinia Lk.)的真菌(Fungus)感染皮肤表面及毛囊、毛干等附属结构所引起的人、畜、禽共患皮肤传染病。

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，其涂搽剂的原料，按干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒∶连翘＝1.5～3.5∶1.0。

优选本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，其涂搽剂的原料，按干物质基础的重量份比配方为：瑞香狼毒∶连翘＝2.0～3.2∶1.0。

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，按提取物全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物∶连翘水醇提取物＝1.5～3.5∶1.0。

优选本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，按提取物全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物∶连翘水醇提取物＝2.0～3.2∶1.0。

瑞香狼毒和连翘配合治疗动物毛癣病的机理：主要是两者间有协同作用，且对混有葡萄球菌、链球菌感染，效果更佳，另外减少各自的药量，同时瑞香狼毒与连翘连用可以降低了各药的毒性，降低成本。

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂的制备方法，包括以下步骤：

A、制备瑞香狼毒水提醇沉液：

a、水提：常温常压下将瑞香狼毒根饮片用清洁水浸没浸泡0.5--2.0h后，用武火加热煮沸，改文火煮20～30min，过滤，药渣再重复水提二次，合并3次滤液，在50℃～75℃，低压(0.6-0.9个标准大气压)下浓缩至膏或粥状物(0.5～1.0g/mL)备用；

b、醇沉：常温常压下将膏或粥状物与无水乙醇混均过夜，过滤的滤液备用；膏或粥状物体积∶无水乙醇积体＝1.0∶1.5～3.0进行醇沉；离心除杂，留上清液备用；

c、浓缩：将上清液在负压为0.6～0.9个标准大气压，温度为50～60℃的条件下，负压回收乙醇至无乙醇味，剩余液体为浓缩药液，该浓缩药液是瑞香狼毒水提醇沉液；测定瑞香狼毒水提醇沉液中的全干物质量备用；

B、制备连翘的水醇提取液：

a、水提：常温常压下将连翘用清洁水浸没浸泡0.6～1.0小时，用武火加热煮沸，改文火煮20～30min，过滤，药渣再重复水提二次，合并3次滤液备用；其加水量为，连翘重量∶清洁水重量＝1.0∶1.0～5.0；获得水提的上清滤液和药渣；

b、醇提：常温常压下将药渣与无水乙醇混均过夜后，过滤的滤液备用；药渣重量∶无水乙醇重量＝1.0∶2.0～6.0进行醇提；获取醇提的上清液备用；

c、浓缩：混和水提上清滤液、醇提上清液的两种滤液，在负压为0.6～0.9个标准大气压，温度为50～60℃的条件下，负压回收乙醇和去水，至无乙醇味，获得连翘的水醇提取液，测定连翘的水醇提取液的全干物质量备用；

C、本发明涂搽剂的制备：按全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物重量∶连翘的水醇提取物重量＝1.5～3.5∶1.0；混合瑞香狼毒水提醇沉物和连翘的水醇提取物制得涂搽剂。按临床应用浓度配制，分装，灭菌。临床试用浓度为：瑞香狼毒水提醇沉物重量和连翘的水醇提取物重量占水的重量比为10％～30％。

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂可治疗的动物毛癣病病的临床表现：感染皮肤呈不规则的块状或圆形结痂、脱毛、断毛及皮肤炎症。发病一般从皮肤较薄的嘴和眼周围开始。患病动物不停用嘴啃、脚抓，使其迅速扩大到嘴、脚、背及腹部皮肤，病变部出现淡黄色的圆形脓泡或结有灰白色圆形皮屑、灰白色或黄色痂屑，有时可见皮肤出现环行的覆盖珍珠灰(闪光鳞屑)的秃毛斑，痂块下皮肤呈鲜红色，部分有红色点状小疙瘩，皮肤粗糙，患部的结痂变硬，痂皮脱落后形成小溃疡，造成毛根和毛囊的破坏；继而脚爪上产生白色皮屑和血痂，食欲减退，动物迅速消瘦，重者衰竭死亡的病症。

各病症治疗后的症状评判和诊断标准：

无效：病症无明显改善；

有效：结痂脱落，但皮肤炎症现象及红色的小疙瘩仍在，灰白色的皮屑及皮肤炎症现象消失，未见新毛或毛茬生长；

痊愈：结痂脱落，红色的小疙瘩、灰白色的皮屑及皮肤炎症现象消失，皮肤呈粉红色，见新毛或毛茬生长，被毛开始恢复。

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂使用方法：按照毛癣病患兔病变部位的进行涂搽，每天1次，隔日1次，连用3～5次为1疗程。

疗效：患病部位外用药进行外涂搽后第3～5天开始见效，见效者患病的爪部、耳部有结痂皮肤痂屑软化脱落，3～5天结痂消失，患病部位灰白色转变成粉红色的健康皮肤，并长出小毛茬。未结痂的患病部位比结痂部位早1～2天就基本恢复。其有效率100％，治愈率94.6％，未见复发，未见毒性反应。

本发明的疗效试验：

材料、方法与结果：

选购90只1月龄白色家兔，人工感染毛癣病(须癣毛癣菌)，实验设3组，1组空白对照组(即涂搽生理盐水或水搽洗)；2组本发明药治疗组，皮肤患部涂擦本发明的涂搽剂，根据患病部位进行涂搽，每天给药1次，隔日1次，连用3～5次。；3组阳性对照组，按每公斤体重15毫克灰黄霉素添加在饲料中混饲，连续给药20天。停药后观察30天。结果见表1。

表1：毛癣病用药疗效果对比统计表

本发明药组涂搽剂家兔的患病部位，外用第3天开始见效，结痂脱落，患病的爪部、耳部有结痂皮肤痂屑软化脱落，5天时患病部位灰白色转变成粉红色的健康皮肤，并长出小毛茬。未结痂的患病部位比结痂部位早1～2天就基本恢复。其有效率100％，治愈率94.6％，未见复发，未见毒性反应。

灰黄霉素组连续给药20天，给药的第6日患病爪部、耳部有结痂皮肤痂屑软化脱落，第8天结痂消失，患病部位山灰白色转变成粉红色的健康皮肤。未结痂的患病部位第11天就基本恢复。其有效率100％，治愈率66.7％。

用药疗效果对比统计表明：本发明药组涂搽剂对家免毛癣病的治疗效果明显优于口服灰黄霉素对家免毛癣病的治疗效果。

本发明涂搽剂的毒性试验：

利用小鼠骨髓细胞微核试验对瑞香狼毒根部水醇提物的遗传毒理效应进行测定，为评价其对遗传物质的是否有潜在危害提供实验依据。

试验材料与试验方法：

SPF级昆明种小鼠，由华西实验动物中心提供，批准号为鄂医动管字第19-007号；受试药(由西南民族大学药理实验室自行制备)；环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H32020857)；Giemsa染剂(南京建成科技有限公司，编号D011)；新鲜小牛血清低温冰箱保存。

试验方法：

急性毒性试验：昆明种小鼠60只，体重22～25g，雌雄各半。设有对照组以及5个不同剂量组，按体重计算灌胃剂量，为0.1ml/10g，灌胃前禁食12h，不禁水。剂量组组间距按1∶0.9，分为每kg体重4020、3618、3256、2930、2637mg体重5个剂量组，同时对照组灌胃等容量生理盐水，观察14d。根据寇氏法公式计算半数致死量(LD50)为每kg体重3253.87mg。

微核试验：小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验取健康昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重为23～25g。将小鼠随机分成五组：阴性对照，给予生理盐水；阳性对照，给予环磷酰胺50mg/kg腹腔注射；实验组分别给予该发明制剂高、中、低剂量组分别是1626.93mg/kg、813.47mg/kg、406.74mg/kg灌胃0.1ml/10g。连续给药2次，给药前禁食4～6小时.第二次给药后48小时处死小鼠，取出双铡股骨置于装有2毫升生理盐水的离心管中，夹碎，使其成为细胞悬液后.以1000r/分钟离心6分钟，弃去上清液，沉淀加入2滴已灭活的小牛血清，混匀涂片，晾干后用甲醇固定10分钟，用新鲜配置的Giemsa(姬姆萨)应用液染色30分钟.冲洗干净后晾干，在油镜下选择细胞分散好，形态完整，染色良好的部位，按一定顺序进行计数。计数嗜多染红细胞(PCE为蓝灰色，微核为紫红色，处于细胞质中)及带微核细胞的(MN-PCE)，微核的形态多数是单个圆形、边缘光滑整齐，偶有肾形、环形、马蹄形、椭圆形的微核出现；嗜色性与有核细胞的胞核相似；微核大小约占细胞1/20～1/4。共1000个，每只小鼠计数微核的千分率。试验结果与分析：

本发明涂搽剂，大剂量(1626.93mg/kg)、中剂量(813.47mg/kg)和低剂量(406.74mg/kg)组均无致突变作用，与阴性对照组无显著性差异(P＞0.05)所有剂量组与阳性对照组间均有极显著性差异(P＜0.01)。阳性对照组用环磷酰胺，每公斤体重50毫克/腹腔注射。结果见表2。

表2        微核试验结果

在小鼠急性毒性试验中测的本发明的涂搽剂半至死量为每kg体重3253.87mg。同时在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中未见该发明对小鼠有遗传毒性，均表明狼连涂擦剂在临床上使用安全性良好。

采用白化豚鼠30只和10只大耳白家兔，进行了皮肤刺激性实验和过敏性实验研究，实验结果表明：该制剂符合国家2005年药典对外用药的要求。

本发明药理作用的实验室研究

电泳实验研究蛋白质变化：利用SDS-PAGE电泳技术，研究本发明的涂搽剂对毛癣菌蛋白质的影响，结果显示：取涂搽剂进行涂搽前，和涂搽后5天的毛癣菌蛋白质进行电泳分析，观察到蛋白质分子量为2KDa、16KDa、35KDa、50KDa处的蛋白质条带，明显涂搽5天后的蛋白质条带显色弱于涂搽前的蛋白质条带，且在实验的分组中，随涂搽剂中药物剂量浓度的增加，条分子量条带的颜色逐渐变淡。电泳研究结果表明：本发明的涂搽剂可抑制毛癣菌蛋白质的合成。

紫外分光光度实验研究DNA变化：取涂搽剂进行涂搽前，和涂搽后的毛癣菌DNA，观察在260nm的吸光度都的区别，结果显示：在1-7天时间内，随着涂搽时间的增长，各试验组的吸光度的值越来越低，说明时间越长，毛癣菌DNA越少。分光光度研究结果表明：本发明的涂搽剂有对毛癣菌细胞膜有损坏作用，并对毛癣菌DNA合成有抑制作用。

本发明的优点：本发明的涂搽剂具有见效快，施药时对动物机体刺激性小，毒性小，动能舔食不会中毒，对毛癣治疗痊愈率达到94.6％，远远优于传统毛癣药物灰黄霉素痊愈率的66.7％。同时发现本发明的涂搽剂对患有葡萄球菌、链球菌的混合感染的个别患兔也具有治疗作用。本发明的涂搽剂对动物安全性好，长期存放的品质稳定，药效性能稳定。本发明外用涂搽临床给药非常简单，减少给药工作量，适用性非常强。最终药品性质稳定，不加任何辅料在常温下保存两年质量不变。

本发明的涂搽剂用于家兔，在獭兔、猫、狗身上的试验结果同于家兔。

本发明的涂搽剂制作方法的优点是：配方简单，制备工艺操作不易出现错误，制备过程中不会出现挥发、腐败等损坏品质的现象。

具体实施方式

实施例1、涂搽剂的原料配方

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，其涂搽剂的原料，按干物质基础的重量份比配方为：瑞香狼毒∶连翘＝1.5∶1.0。

实施例2、涂搽剂的原料配方

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，其涂搽剂的原料，按干物质基础的重量份比配方为：瑞香狼毒∶连翘＝3.5∶1.0。

实施例3、优选涂搽剂的原料配方

优选本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，其涂搽剂的原料，按干

物质基础的重量份比配方为：瑞香狼毒∶连翘＝2.0∶1.0。

实施例4、优选涂搽剂的原料配方

优选本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，其涂搽剂的原料，按干

物质基础的重量份比配方为：瑞香狼毒∶连翘＝3.2∶1.0。

实施例5、涂搽剂的配方

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，按提取物全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物∶连翘水醇提取物＝1.5∶1.0，临床试用浓度为：瑞香狼毒水提醇沉物重量和连翘的水醇提取物重量占水的重量比为30％。

实施例6、涂搽剂的配方

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，按提取物全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物∶连翘水醇提取物＝3.5∶1.0，临床试用浓度为：瑞香狼毒水提醇沉物重量和连翘的水醇提取物重量占水的重量比为25％。

实施例7、涂搽剂的配方

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，按提取物全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物∶连翘水醇提取物＝2.0∶1.0，临床试用浓度为：瑞香狼毒水提醇沉物重量和连翘的水醇提取物重量占水的重量比为20％。

实施例8、涂搽剂的配方

本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂，按提取物全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物∶连翘水醇提取物＝＝3.2∶1.0，临床试用浓度为：瑞香狼毒水提醇沉物重量和连翘的水醇提取物重量占水的重量比为10％。

实施例9、治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂的制备方法

治疗动物毛癣病的瑞香狼毒复方外用涂搽剂的制备方法，包括以下步骤：

A、制备瑞香狼毒水提醇沉液：

a、水提：常温常压下将瑞香狼毒根饮片用清洁水浸没浸泡0.5--2.0h后，用武火加热煮沸，改文火煮20～30min，过滤，药渣再重复水提二次，合并3次滤液，在50℃～75℃，低压(0.6-0.9个标准大气压)下浓缩至膏或粥状物(0.5～1.0g/mL)备用；

b、醇沉：常温常压下将膏或粥状物与无水乙醇混均过夜，过滤的滤液备用；膏或粥状物体积∶无水乙醇积体＝1.0∶1.5～3.0进行醇沉；离心除杂，留上清液备用；

c、浓缩：将上清液在负压为0.6～0.9个标准大气压，温度为50～60℃的条件下，负压回收乙醇至无乙醇味，剩余液体为浓缩药液，该浓缩药液是瑞香狼毒水提醇沉液；测定瑞香狼毒水提醇沉液中的全干物质量备用；

B、制备连翘的水醇提取液：

a、水提：常温常压下将连翘用清洁水浸没浸泡0.6～1.0小时，用武火加热煮沸，改文火煮20～30min，过滤，药渣再重复水提二次，合并3次滤液备用；其加水量为，连翘重量∶清洁水重量＝1.0∶1.0～5.0；获得水提的滤液和药渣；

b、醇提：常温常压下将药渣与无水乙醇混均过夜后，过滤的滤液备用；药渣重量∶无水乙醇重量＝1.0∶2.0～6.0进行醇提；获取醇提的上清液备用；

c、浓缩：混和水提滤液、醇提上清液，在负压为0.6～0.9个标准大气压，温度为50～60℃的条件下，负压回收乙醇和去水，至无乙醇味，获得连翘的水醇提取液，测定连翘的水醇提取液的全干物质量备用；

C、本发明涂搽剂的制备：按全干基础的重量份比配方为：瑞香狼毒水提醇沉物重量∶连翘的水醇提取物重量＝1.5～3.5∶1.0；混合瑞香狼毒水提醇沉物和连翘的水醇提取物制得涂搽剂。按临床应用浓度配制，分装，灭菌。临床试用浓度为：瑞香狼毒水提醇沉物重量和连翘的水醇提取物重量占水的重量比为10％～30％。