一种有效抑制曼地亚红豆杉细胞生物合成C-14位氧化紫杉烷的方法

摘要

本发明涉及一种有效降低曼地亚红豆杉(Taxus x media)细胞合成C-14位氧化紫杉烷(C-14 oxygenated taxoids)的方法，属于基因工程的技术领域，是通过根癌农杆菌介导的双元载体转化系统将针对红豆杉紫杉烷14β羟基化酶基因(简称14OH)片段构建的反义基因表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus x media)培养细胞中。利用优化的转化方法成功地获得了转基因细胞。PCR-Southern杂交、RT-PCR基因表达分析和化学成分检测结果显示：曼地亚红豆杉细胞转基因试验取得成功，转基因细胞系中14OH基因mRNA表达水平发生显著地下降。本发明显著抑制了曼地亚红豆杉细胞向C-14位氧化紫杉烷的流向，有望使代谢流向包括抗癌药物紫杉醇(taxol)和及其前体巴可亭III(baccatin III)在内的C-13位氧化紫杉烷(C-13oxygenated taxoids)，从而为提高紫杉醇的生物合成产量提供一条新方法。