通过来自胰腺酶原粒的糖蛋白2(GP2)的免疫反应检测体液中抗体的方法用于诊断炎症性肠病和慢性胰腺炎

摘要

本发明涉及一种通过与来自胰腺酶原粒的GP2、免疫反应性序列或其类似物(但不包括组织切片)进行的免疫反应来检测体液中抗体的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过来自胰腺酶原粒的GP2、免疫反应性序列或其类似物(但不包括组织切片)进行的免疫反应来检测体液中抗体的方法。

该方法可以用于诊断或治疗控制与GP2和类似物质的免疫反应有关的疾病。因此更具体地说，本发明是针对GP2、免疫反应性序列或其类似物在诊断或治疗控制慢性炎症或自身免疫性疾病的应用，特别是针对克罗恩氏病(Crohn′s disease，CD)和慢性胰腺炎(chronic pancreatitis，CP)的应用。

背景技术

本发明是建立在发现GP2是炎症性肠病(inflammatory bowel diseases，IBD)，特别是CD和CP的免疫过程中的自身免疫性抗原，从而代表了与疾病有关的抗体的表位的基础上的。

GP2是胰腺的腺泡细胞的膜糖蛋白，具有78kDa的表观分子量。此外，GP2在肠的刷状边缘细胞(brush-border cell)中被检测到，并作为溶酶体或胰液中的游离的、未结合膜的肽的成分。由于GP2组成了全部膜蛋白的30-45％，因此它是酶原粒膜的主要成分。GP2与酶原粒分泌的其它胰蛋白(例如微管成束蛋白(syncollin)、凝集素ZG16p、小突触泡蛋白2和其他硫酸基质蛋白聚糖)一起是颗粒膜的脂筏(lipid raft)的成分，而微管成束蛋白与GP2发生互相作用。这些复合物(还包括其他蛋白质，例如ZG46p)形成了部分膜性的基底(submembranous matrix)。

GP2通过磷脂酰肌醇锚状物结合到胰腺腺泡细胞的酶原粒膜上，并可以通过例如蜡状芽孢杆菌(B.cereus)的磷脂酶C而被除去。酶原粒是胰腺腺泡细胞内的消化酶(例如，淀粉酶)的储存器。在腺泡细胞进行神经刺激或激素刺激之后，消化酶被分泌进入胰管。GP2不仅仅被局限在酶原粒膜上，还在高尔基体和胰液腺泡的管腔内被结合到其基质上。此外，GP2还被发现是溶酶体的成分从而参与了细胞内吞作用。

在胰分泌物的刺激过程中，GP2被转移到腺泡细胞的顶端膜表面，被切割并释放进入腺泡的管腔中。鉴于胰液中有相当多的GP2，猜想存在另一种能分泌GP2的细胞池(cellular pool)。与消化酶通过蛋白质水解而在肠内被活化相反的是，GP2已经通过切割在腺泡细胞内被修饰。据推测，GP2在细胞内发生顺序的蛋白水解对其功能具有影响。

急性胰腺炎和慢性胰腺炎中增加的GP2血清水平引起了对GP2作为这种实体的血清诊断学的标记物是否合适的讨论。在大鼠模型中，已经证实GP2的血清浓度与炎症性肠病的严重程度有关。

对于人类细胞系，这种关系还没有得到毫无疑问的确定；可以通过自身抗体检测到的GP2水平表现出极大的个体差异性。

尽管有这种不足，大量的用来开发诊断方法的途径依赖于针对抗GP2的抗体的产生和检测，从而通过抗体反应来确定炎症性肠病的严重程度。

CD和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)代表了炎症性肠病中最重要的两种。它们的特征在于慢性的、使消化系统内破坏组织的炎症过程复发。迄今为止，仍然不清楚CD和UC的病因学和发病机理。

虽然UC炎症主要出现在结肠和直肠的粘膜和粘膜下层，而CD是以整个胃肠道的壁穿透的肉芽肿性的炎症过程为特征。

基因和环境因素在IBD的发展中似乎发挥了关键作用。在一些分组(cohort)中认为NOD2基因中的突变和CD表观之间的联系是必然确定的。类似地，认为与CD在回肠末端中的表观有明确的关联。到目前为止，还没有在任何的治疗方法(包括抗肿瘤坏死因子(anti-TNF)治疗)中建立遗传标记和治疗过程之间的关系。

CD在欧洲的发生率约为每100000人每年5.6人。CD在德国的患病率已确定为1/500至1/800。

平均来说，CD的首发症状(first symptoms)相对早地发生在30岁。接下来，由于相应的社会-经济学效应，CD患者在其工作寿命内受到影响。以与UC相似的方式，随着克罗恩氏结肠炎(Crohn′s colitis)和病程持续多年，CD患者发生癌症的几率增加。

临床现象包括腹痛、腹泻、吸收不良、脓肿、瘘(fistula)、胆结石并发症、肾结石以及与之有关的并发症。

CD患者可以伴随胰腺炎出现出许多肠外表现(总计3.5％)，在CD患者中这是相对罕见的事件。然而，能在8-17％的患者中观察到不具有急性肠炎症状的高淀粉酶血症(hyperamylasemia)和高脂肪酶血症(hyperlipasemia)，这显示了无症状胰腺炎(silent pancreatitis)发病率的增加。胰管中发生的改变以及对胰腺功能的限制已经在一些病例中进行了描述。高淀粉酶血症和高脂肪酶血症的水平与CD活性有关。在4.6％的CD的患者的胆管和胰管内发现，同时发生了与原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis)患者相似方式的改变。然而，CD患者中的慢性胰腺炎通常与UC患者中的慢性胰腺炎不同，其中，胆管的参与、体重的减少以及胰管狭窄(pancreatic duct stenoses)更常见于UC患者中的慢性胰腺炎。已对与CD有关的特发性慢性胰腺炎的存在进行了讨论。和与UC有关的慢性胰腺炎相反的是，CD患者的肠内症状经常表现先于胰腺症状的发现。常见于CD的胰腺外分泌机能不全(Exocrine pancreaticinsufficiency)能被简单地归因于与薄壁组织(parenchyma)中密集的炎性浸润(inflammatory infiltrates)有关的显著腺泡变性。

虽然多种研究已经指出由于5-氨基水杨酸这种活性物质仅达到了有限的效果或完全没有效果而存在有显著不足，但仍推荐使用5-氨基水杨酸进行给药治疗。然而从获得的数据考虑，当不发生效力的情况下及时地改变治疗时，其在患者中使发病的严重程度减轻至适中的使用似乎是有效的。在不发生并发症的严重发病的情况下，应该考虑给用等量的泼尼松龙(prednisolone)。如果发作频繁(≥2次/年)，可以添加用硫唑嘌呤或6-巯基嘌呤进行给药。

在德国，CD患者的全部花费估计为每年每病例20000欧元。在德国，CD患者所花费的开销(包括间接费用)估计为2兆(billion)欧元，而在美国对两种IBD的社会-经济花费报道为2.6兆(billion)美元。

抗肿瘤坏死因子α制剂对CD(包括慢性病的缓和)是有效的。然而，这些制剂由于它们的副作用仍然是不适宜的，这就是为什么这些制剂仅可能使用为后备药(reserve medications)的原因，这取决于临床表现。只有患有肠外并发症的活跃性脊椎关节病的CD患者的两种临床现象反应他们似乎由抗肿瘤坏死因子α疗法受益。

清楚的诊断是用于充分治疗和随访这些患者所必需的。然而，这存在许多可观的不足，由于到目前为止还没有毫无疑义的测试因此必须对CD的进行临床诊断，该临床诊断涉及使用对回结肠镜检段(ileocolonoscopic segmental)进行活检作为必要组成，后者也是进行选择性的肠道手术所需要的。然而，这在病程中的任何急性症状综合症中，或在进行新的抗炎症治疗之前不是完全必需的。在诊断基本诊断过程中，在每位病人中应该进行上部内窥镜检查诊断。

高度复杂且相对成本密集型的粘膜活检的组织学研究组成了诊断范围的另一个重要的元素。为此目的，而对活检进行收集，特别是来自具有宏观显著性和不显著的区域。然而，为了有效地利用组织病理学差异诊断，需要收集来自从回肠末端和上部胃肠道的整个结肠(包括直肠)中至少五个不同的解剖学部分的活检。

使用作为成像法的经腹超声作为灵敏度方法来检测肠壁以及CD患者中发生脓肿、瘘和狭窄的炎症变化。在肠系膜动脉和肠壁中可以检测到的血流的增加与急性炎症的存在相关。已经认识到小骨盆的直肠内超声和磁共振体层摄影术(magnetic resonance tomography，MRT)是对肛门直肠瘘和脓肿进行诊断和分类的具有相同灵敏度的方法。

由于不存在毫无疑义的测试，因此收集了大量的CD的实验室诊断学参数。对C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、血小板、血红蛋白(Hb)/红细胞压积和白细胞的测定代表了基础性诊断。其他的参数，例如另外还使用了血球分类计数(differential blood count)和白蛋白。在急性时相CD中，许多患者中的上述参数(例如CPR、白细胞数目和急性时相蛋白(acute-phaseproteins))增加，因而这些参数在随后(follow up)的病程中是被推荐使用的。

在急性时相中，肠道通透性、粪便中α-1-抗胰蛋白酶的清除率、和钙卫蛋白分泌升高。

然而，许多临床和组织病理学数据无法在CD和UC之间做出明显区分。这一不足经常导致做出不确定性大肠炎(indeterminate colitis，IC)的结论。此外，肠道感染和功能性疾病可能表现出相似的症状，因此更加难以做出鉴别诊断。在10-15％的IBD患者中，由活检数据而将其划分为UC或CD是极度困难的，并且这也是由于在结肠区域的临床症状上存在一定的重叠所导致的。其后的外科手术，似乎IC的患者比UC患者更易于患有长期的并发症和吻合口功能不全(anastomotic insufficiency)。然而，预后时期中的IC患者是否将沿CD或UC方向进行分化对预后和病程以及在选择药物治疗的选择和进行手术时间具有重大影响。在疾病病程过程中稍晚的时间点处，通常仅能基于额外的临床数据进行确定。例如，CD和UC之间的分化是确定能否在患者内进行回肠肛管囊吻合术(ileoanal pouch anastomosis)的基础。在患有显著的结肠感染(克罗恩氏结肠炎)的患者中对这种外科手术几乎不具有指示性，而UC对该方法具有更高的指示性。CD患者的吻合口功能不全几率要高得多，因此任何的外科手术都需要进行全面的考虑。

许多与内源性抗原和食物抗原反应的抗体已经在对IBD诊断进行区分的内容中进行了描述。这些抗体的缺点在于，它们似乎不起到任何的致病性作用并不能反映疾病的活性。尽管如此，血清抗体用作诊断的关键辅助手段，并反映了治疗决定的基础，特别是对于不确定性肠炎的情况。

针对细胞骨架蛋白的自身抗体已经在通过活检确定的CD患者中得到了描述(马耶特等人(Mayet et al.，1990))。已经在其他的蛋白中发现了针对细胞角蛋白18、肌动蛋白、波形蛋白、结蛋白和原肌球蛋白的自身抗体。虽然已经发现细胞角蛋白18自身抗体与疾病的活性相关，但是可能由于它们的低特异性，它们在IBD常规诊断中是不被允许的。

对于CD患者，已经将针对胰腺外分泌组织的自身抗体(PAK)和针对来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的甘露聚糖的抗体(ASCA(抗酿酒酵母抗体))识别为病症(斯多克等人，1987(et al.，1987)；梅恩等人，1988(Main et al.，1988))。在UC患者中发现了针对人中性粒细胞的自身抗体(ANCA(抗中性粒细胞胞浆抗体))和杯状细胞(BAK)。

对PAK、ANCA和ASCA的测定被认为在诊断IC中是有用的。

然而，即使在今天，由于引起免疫反应的自身抗原是未知的，针对胰腺组织、杯状细胞和人中性粒细胞的IBD特异性自身抗体仍然利用免疫荧光技术(IFT)来测定。因此，通过使用上述技术，已经在27-39％的在CD患者内发现了针对胰腺抗原的自身抗体。超过半数的患有肠外并发症的CD患者(68％)可能具有PAK。然而，在实践中，发现该技术由于不能被自动化从而成本密集且耗时而存在不足。

相反地，在酶免疫分析法(enzyme immunoassay，EIA)中对同样特异性地用于CD的ASCA进行检测的水平增加，这是由于该方法在评价上具有较少的主观性并且可以被自动化。

现在，认为分离抗体的测定太不敏感而不能用于CD的血清学诊断。与不同抗体特异性进行结合可以高度地改善IBD鉴别诊断的诊断灵敏度或特异性并且允许对IC进行预后。

通常的技术平台(例如EIA)在参数的结合上格外地具有优势。但是，这样的一个前提是要知道被不同物种的胰腺组织切片的PAK特异性识别的PAK自身抗原。

过去发现了各种方法来识别CD中的自身抗原，并且由于以上提及的具有相对高灵敏度的PAK，对此的关注集中在胰腺抗原上。已经通过免疫荧光技术(IFT)的方法使用不同物种(人、大鼠、猴子)的组织切片对PAK进行了检测。从种系发生的方面考虑，反映了由PAK识别的保守表位(conservedepitopes)。弗里克(Fricke)等人已经描述了由多个亚基组成的分子量(m.w.)大于800kDa的蛋白复合体，该蛋白复合体与PAK进行反应(弗里克等人，1999).然而，作者既不能进行测序以识别相应的蛋白质也不能识别免疫印迹中与PAK反应的m.w.为16kDa、18kDa、19kDa、24kDa、27kDa、29kDa、31kDa和34kDa的亚基。已经假定由PAK识别的蛋白质应该是包括大量亚群的大蛋白复合体。基于使用了各种不同的糖蛋白的抑制实验，已经排除了PAK与公认的自身抗原的糖链(carbohydrate chains)的反应。

赛博(Seibold)等人已经描述了PAK与提纯自胰液的m.w.为10⁶Da(1000kDa)以上的大分子抗原的反应性，当用胰蛋白进行处理时该大分子抗原丧失其PAK反应性。在使用了各种不同的胰腺蛋白(例如淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶A和磷脂酶C、肠激酶、羧肽酶A和羧肽酶B、糜蛋白酶A和糜蛋白酶B、糜蛋白酶原、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胰蛋白酶抑制剂、乳铁蛋白和调血管激素(callecrein)的酶联免疫吸附测定(ELISA)中没有检测到与PAK的反应性。

虽然根据许多作者所称，GP2的水平和IBD的严重程度是相关的，但其在生理学上的因果关系是未知的。正如在敲除基因的小鼠模型中所证实的，GP2的缺失既不是胰腺外分泌进行分泌所必需的，也不是酶原粒的形成所必需的。此外，对GP2的两种已知亚型的生理功能也不清楚(福冈(Fukuoca，2000))。除了长度为380个氨基酸的短亚型β-GP2之外，还存在有长度为530个氨基酸的α-GP2。在人胰腺中均能检测到肽的这两种亚型，在其他亚型中，小β-GP2亚型存在的效价比大α-GP2要大得多。而且，对这两种型在胰腺组织中的转录进行的检测反应了β-GP2与α-GP2相比具有较强的表达。

还不清楚不同亚型的作用。据说具有与大α-GP2亚型高度相似的序列的肽是导致胰腺肿瘤形成的原理。想要将作为分析物和标记物的对GP2的抗体用于诊断胰腺癌，而将肽及其核酸序列用于癌性胰腺病的免疫治疗中(WO01/94409)。发现了对小β-GP2亚型的抗体作为胰腺炎的标记物的用途(WO96/17873)。据说β-GP2浓度的增加指示了该疾病的发生。

已经对必要的(仍然待发现)胰腺的自身抗体的鉴别做出了详细的参考以阐明自身免疫性过程在CD发病机理中的地位，并通过适当的实验室诊断来支持对不清楚的IBD病例进行区分。

从使用随机噬菌体展示文库(randomized phage display libraries)来得到肽的现有技术中已知悉所作出的努力，所述肽已被用于对CD特异性抗体进行检测。检测到四种不同的九聚物，这些九聚物在用于EIA(酶免疫测定)时，对56.5％的CD患者的血清给出阳性检出。在此病例中对照组(UC、十二指肠溃疡、健康)不产生应答或仅产生6％的应答。然而，无法从已知的九聚物的肽序列获知对天然的CD自身抗原的结论。

但是，到目前为止也没有成功地鉴别相应的胰腺抗原(博苏伊特，2006)。因此，还不存在用于诊断克罗恩氏病和慢性胰腺炎并将后者与溃疡性结肠炎进行区分的非侵入式、特异性的、定量的、迅速、简单和廉价可行的检测分析方法。

发明内容

本发明解决了上述问题。基于GP2作为CD和相关的慢性胰腺炎的自身抗原的令人惊讶的表征，开发了根据权利要求所述的使用GP2来诊断或治疗控制IBD的方法，从从属权利要求可以推知本发明的有利的实施方式。

因此，本发明涉及一种在自身免疫性疾病的预防、诊断、治疗或病后调护(aftercare)中，通过与GP2、免疫反应性序列或其类似物(特别是根据序列识别号1(SEQ ID NO.1))的免疫反应对来自粪便和/或体液(特别是血液和/或血清)的抗体进行检测的方法，所述SEQ ID NO.1为：

根据本发明，所述体液的定义还包括人的血液、血清、尿液、纯胰液或十二指肠液。

现有技术没有考虑也没有提及在对CD或慢性胰腺炎的血清学诊断中，对GP2的自身抗体的确定或其作为固相抗原用于ELISA的用途。

本发明做出了GP2(特别是与SEQ ID NO.1一致的序列)或编码相同序列的核苷酸能用于检测和治疗自身免疫性疾病(特别是炎症性肠病，更优选为克罗恩氏病、慢性胰腺炎和溃疡性结肠炎)的令人惊讶的教导。

在另一方面，本发明涉及一种方法，其中检测到人免疫球蛋白A(IgA)、IgM和/或IgG的抗体自身免疫性疾病。

根据本发明的方法的一种优选的实施方式中，GP2的来源为人类、动物、重组体或合成物质。GP2表示了高度保守的肽，因此只要其序列与根据本发明的序列在功能上相似，任意来源的GP2能被有利地用来进行检测。作为抗原的GP2和自身抗体之间的高结合亲和性被保持。

根据本发明的方法的另一种优选的实施方式中，在免疫测定中对自身抗体进行检测，优选具有反应物与标记物质直接或间接的结合。这使本发明对不同的实验室及其实验诊断设备的潜力和要求具有方法的灵活的适应性。

在一种有利的实施方式中，在免疫测定中对IBD特异性抗体进行检测，其中，所述抗体溶解于液相中而存在，优选在本领域技术人员公知的常规的缓冲溶液或未被稀释的体液中被稀释。根据本发明，使用粪便样品来进行检测也能有效果。

在另一种有利的实施方式中，所述免疫测定用来对抗体进行检测，预期在所述抗体的端部进行与SEQ ID NO.1一致的GP2抗原与固相的结合。随着样品溶液的增加，包含其内的患者的抗体与GP2抗原结合。随后利用标记试剂对通过例如患者的血清或粪便获得并与GP2结合的抗体进行检测和任选的定量。该方法是本领域技术人员已知的“直接测定”，其中，抗原与固相结合。

因此，根据本发明该方法中通过使用根据公知的ELISA(酶联免疫吸附测定)技术的标记试剂能实现对抗体进行检测。因而根据本发明的标记包括酶催化化学反应，该化学反应能通过光学方法(特别是通过生色底物(chromogenicsubstrates)、化学荧光法或荧光染料的手段)测得。

在另一种优选的实施方式中，在放射性免疫测定(radioimmunoassays，RIA)中通过用弱放射性物质的标记来检测所述自身抗体，其中，对所产生的放射性进行测量。

在本发明的另一种优选的实施方式中，可溶的或固相结合的GP2分子被用来与抗体结合。在第二反应步骤中，使用了优选选自由抗人类IgA、抗人类IgM和/或抗人类IgG的抗体所组成的组中的抗人类免疫球蛋白，所述抗人类免疫球蛋白优选可检测地对能与任意的常规的标记酶(特别是发色底物和/或化学荧光底物，优选与辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶)进行结合的两种成分的结合物进行标记。本实施方式的优点在于，ELISA技术的使用通常在实验室设施条件下即可实现，从而根据本发明进行的检测可以以成本有效的方式来进行。

在本发明的另一种优选的实施方式中，与GP2结合的抗体与抗人类免疫球蛋白反应，所述抗人类免疫球蛋白优选选自由抗人类IgA、抗人类IgM和/或抗人类IgG的抗体所组成的组，且可检测地与异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)偶联。与以上描述的ELISA非常相似地，FITC技术代表了在许多地方都可以利用的系统，并从而允许在实验室路线下顺利而低成本地建立本发明的检测。

本发明还涉及用来治疗炎症性肠病的方法，该方法包括以下步骤：

a)提供其上偶联有GP2的柱；

b)在允许GP2有效地结合患者血浆内的抗体的条件下，使所述患者的血浆通过所述柱，从而将大量的抗体从所述患者的血浆中除去；以及

c)使由此得到的血浆返回患者。

根据本发明的上述方法的优选的实施方式中，与SEQ ID NO.1一致的GP2对直接针对肠道组织的抗体进行识别。该实施方式具有的有益效果是，无须频繁介入患者体内(这会使患者产生压力)而通过体液或粪便就能轻松实现对IBD的诊断。

本发明的另一种优选的实施方式中，与SEQ ID NO.1一致的GP2结合到固体相上。能通过间隔物(spacer)将与SEQ ID NO.1一致的GP2结合到固定相上。可以使用所有具有用于间隔物的适当的结构前提和功能前提的化学化合物作为间隔物，只要它们不会以不利地影响与SEQ ID NO.1一致的GP2自身抗体的结合的方式改变结合行为。

本发明的方法和用途允许对克罗恩氏病进行诊断或治疗控制，这是因为GP2抗原(优选与SEQ ID NO.1一致)通过与GP2、免疫反应性序列或其类似物的免疫反应，意外地允许对来自粪便和/或体液的自身抗体进行检测，不需要使用动物或人组织的组织切片即可进行所述免疫反应。

在上述检测方法的一种优选的变体中，优选利用反应物与标记物质的直接或间接结合来对所述自身抗体进行检测。

根据本发明，还优选在固相上进行上述的检测方法，在该情况下，肽的储存能力得到有利地提高，这是GP2抗原与固相之间令人惊讶的稳定的连接所导致的。

本发明的目的还在于与SEQ ID NO.1一致的GP2分子在生产用于自身免疫性疾病的预防、诊断、治疗和/或病后调护的药物中的用途。在实践中，根据本发明的用途具有的有益效果是，许多情况下可以省去更多的基于例如活检、实验室诊断和临床介入的复杂且不可靠的过程，或者鉴于前述检测，上述测量能在执行过程中被极大地最优化。

在本发明的一种优选实施方式中，自身免疫性疾病为选自由炎症性肠病(IBD)和/或自身免疫性肝病所组成的组中，能利用GP2自身抗原有利地以特异性的、可再现且成本有效的方式进行对其进行有效的检测。

在本发明的方法的另一种更优选的实施方式中，所述炎症性肠病为克罗恩氏病、慢性胰腺炎和/或溃疡性结肠炎。迄今为止，仅能以有限的成功率或付出极大努力才能上述疾病进行的检测或区分。现在，上述优选的实施方式能够容易地进行对克罗恩氏病和慢性胰腺炎的检测，甚至通过鉴别诊断的手段与溃疡性结肠炎进行区分。

具体实施方式

克罗恩氏病属于慢性炎症性肠病组。据推测，它是可能出现于整个胃肠道(即，从口腔下至肛门)的自身攻击性的(autoaggressive)、慢性肉芽肿性炎症。感染主要位于下部小肠(回肠末端，感染率约40％)和结肠，在食道和口腔中鲜少发生。克罗恩氏病以肠粘膜的不连续的、分段感染(所谓的“跳跃性病灶(skip lesions)”)为特征，即，该疾病可以同时存在于被健康部分分隔的多个肠道部分中。该疾病的其他名字为局限性肠炎、回肠末端炎、局限性小肠结肠炎和硬化性慢性肠炎(sclerosing chronic enteritis)，或缩写为CD(克罗恩氏病)和IBD(炎症性肠病)的通用术语。因此，克罗恩氏病在本发明中的意思是指宏观地以下列变化为特征的任意的病况：

·花园胶水管现象(Garden hose phenomenon)：由于纤维化导致的分段狭窄。

·鹅卵石现象(Cobble stone phenomenon)：发炎的粘膜具有交替的深度溃疡从而产生像鹅卵石的外观。

·炎症性砾岩状肿瘤：许多肠道部分发生彼此粘附。

从组织病理学上说，这主要是在发炎的肠道组织的活检中被识别的淋巴细胞(嗜酸性)、粒细胞和组织细胞的积累造成。在其周围的淋巴结的大小通常会增加。经常会形成肉芽肿，该肉芽肿可以被分化为两种类型：上皮样细胞肉芽肿和微肉芽肿(microgranulomas)(更小且没有中心性坏死)。

然而，本发明所指的克罗恩氏病还以诊断的方式为特征。在此情况下，本发明所指的克罗恩氏病是可以检测到至少一种的以下特征的病况：

·阑尾炎：在右下腹处迅速地发生痛感。在直肠和腋窝之间测得的温度差通常＞1℃。

·憩室炎：位于下腹部(通常在左侧)的可触知的肿块(palpable resistance)、疼痛。

·耶尔森氏菌病：从粪便或活检材料检测到病原体，抗体效价提高。

·肠结核：目前在中欧地区非常罕见。肠结核通常具有肺结核。在活检材料中发现“干酪状的”上皮样细胞肉芽肿。

·任何其他的扩散传染性结肠炎(沙门氏菌肠病、假膜性结肠炎等)

本发明所指的胰腺炎是指胰腺的炎症，该炎症可以为急性的或者具有慢性病程。

胰腺炎通常由胰酶在器官内的活化所引发。这些酶的作用是消化蛋白质和脂肪从而引起了对该器官的自身消化。自身消化导致了胰腺的炎症。在严重的情况下，可能发生出血、严重的组织损伤、感染和囊肿。发炎的腺体(gland)可能导致酶进入血流进而到达肺、心脏和肾脏，从而可能引起进一步的损伤。当胰腺突然发炎时产生急性胰腺炎，但是会恢复。一些患者会多次遭受急性胰腺炎，但每次都能完全痊愈。急性胰腺炎发生得突然并且可以是严重的、对生命产生威胁的疾病，它导致了大量的并发症，但是患者通常能由急性胰腺炎恢复。其发生概率约为每100000位居民中每年约有5-10个新生病例。

有两种类型的病程：

1、水肿性胰腺炎：具有器官肿胀的温和病程，并且在周围的脂肪组织中鲜少发生坏死。

2、出血性坏死胰腺炎：胰腺中发生大规模的坏死和出血并进入周围区域；通常由于其暴发性症状而被称为胰腺卒中(pancreatic apoplexy)。

当使用增强造影剂的计算机X射线断层术时，对胰腺的形态评价，特别是对水肿性胰腺炎和坏死性胰腺炎之间进行区别是最成功的。发现巴尔萨泽评分(Balthazar socre)(0-10分)在严重程度分类中是有利的。

急性胰腺炎具有多种病因。最普遍的是胆石在胆管通向十二指肠的管口(也是胰管的管口)发生临时性阻塞或长时间阻塞(约45％的急性胰腺炎)。具有相似普遍程度的原因是长期的酒精滥用(约35％)。在约15％的感染个体中，没有检测到独特的触发引资，而且这些病例被称为特发性起源。此外，存在例如以下的更罕见的原因：

·药物(例如，天门冬酰胺酶、巯唑嘌呤(azathioprin)、呋塞米(furosemide)、糖皮质激素(glucocorticoids)、抗生素(四环素类、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)、甲氧苄啶(trimethoprim))、镇痉剂(2-丙基戊酸钠、卡马西平(carbamazepine)))、异丙酚(propofol)等的副作用。

·传染病，例如腮腺炎、柯萨奇病毒、肝炎、HIV、巨细胞病毒

·升高的血钙值，例如，在甲状旁腺功能亢进下

·剧烈升高的血脂(甘油三酸酯)

·经内镜逆行胰胆管造影术(ERCP)中由医生治疗引起的

·遗传：囊性纤维化

开始时，急性胰腺炎由位于(整体偏左)的上腹部(胃外区)处的疼痛而表现出来，该疼痛向胸部发射并在数天后蔓延。该疼痛通常是剧烈、并有时候持续很长时间。该疼痛可以是突然而集中的，或始于轻度疼痛，但随着食物的摄入这种轻度疼痛将加重(这是合成用于消化食物的胰酶过程中对胰腺的刺激所造成的)。腹部可以发生肿胀并高度敏感。腹部对触摸的疼痛和由腹中积气和(中度)保卫(guarding)造成的被称为橡皮肚(rubber abdomen)在体格检查中被表征。相似地，胸椎的下部区域也能产生疼痛。开始的时候，这种疼痛与轻度的腰痛类似，但是随后越来越发展为背部向腹侧的胰腺的顶部区域“被穿刺”的感觉。

患有急性胰腺炎的患者通常看起来病得很严重并且实际上具有生病的感觉。其它的症状为，例如，恶心、呕吐、便秘、发烧、脉搏加速。在严重病例中，还出现黄疸(黄疸)(jaundice(icterus)(在胆管发生阻塞的情况下)，腹部水肿(腹水)(门静脉系统发生阻塞的情况下)、胸腔积液、休克和脓毒症迹象。

在实验室诊断中，检测到增加的白细胞计数(白细胞增多)和胰酶(例如，胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)浓度的增加。而且，血液中的钙、镁、钠、钾、碳酸氢盐、糖或脂肪的值可以升高。

约20％的急性胰腺炎病例是严重的。患者可能发生脱水并发生低血压。有时候发生心力衰竭、肺衰竭或肾衰竭。最严重的急性胰腺炎导致出血、休克甚至有时候导致死亡。

根据现行的亚特兰大分类(Atlanta classification)，对温和急性胰腺炎和严重急性胰腺炎做出了分类。

已废弃的分类将期分为水肿形式(早期)、具有局部或整体出血的出血性形式和急性坏死性形式。

慢性胰腺炎具有多种病因，但是它们中的70-80％可以被归因于长期的酒精滥用。比起女性，慢性胰腺炎更普遍地发生在男性中，并出现于30-40岁之间。如果炎症源头没有被消除或者输出管受到损害，慢性胰腺炎还可以由急性炎症所导致。

一些慢性胰腺炎具有遗传病因。它们建立在由胰岛素形成的酶的异常性的基础上，并导致了组织损伤。其它形式的疾病是由诸如吸烟等外因造成的。

在胰腺炎的早期阶段，内科医生通常无法确定这是急性形式或慢性形式的。它们的症状可以是相同的。

慢性胰腺炎通常引起长期的疼痛。在一些慢性胰腺炎的病例中，随着疾病的发展疼痛减轻。这也引起胰腺的功能减退，致使体重下降以及消化能力受到干扰。不充分的消化和吸收导致脂肪和蛋白质通过粪便被排泄。如果胰腺内的内分泌细胞(胰岛)受损，则会发生糖尿病。

难以对慢性胰腺炎进行诊断；然而，可以使用一些高度发展的医疗技术。胰腺功能验血可以协助确定胰腺是否能够产生足够的消化酶。然而，在实践中它们难以获得认可。

也可以通过使用超声波检查法、内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)和计算机X射线断层术来发现胰腺的异常。

在其中发现产生了糖尿病和吸收障碍的慢性胰腺炎的更高级的阶段，内科医生还可以对血液、尿液和分别进行试验以用于诊断。

慢性胰腺炎的治疗涉及开用镇痛药处方以及饮食上的改变。患者可以通过服用含有胰酶的药物来减少脂肪和蛋白质的损失。这样的结果将改善营养摄取并且体重增加。有时候也可以开用胰岛素或其他药物处方以控制血糖水平。

在一些慢性胰腺炎的病例中，进行手术来消除扩大并充血的胰管处的紧张从而减轻疼痛。

本发明的另一种优选的实施方式中，使用GP2来检测肝病、原发性硬化性胆管炎和/或自身免疫性肠炎(enteritides)。出人意料地，GP2自身抗原不仅适用于对IBD的特异性的检测，还能用于各种肝病的检测。

本发明中的胆管炎指的是肝内胆管的炎症。它可以由各种病因引起，包括(其它事物中的)胆石阻塞胆管、狭窄、肿瘤或受到寄生虫侵袭。它分为急性化脓性胆管炎、非化脓性破坏性胆管炎和慢性硬化性胆管炎。

急性化脓性胆管炎：急性胆管炎通常由细菌定植过程中的感染所发展而来的，所述细菌主要为大肠杆菌(Escherichia coli)、肠道球菌(Enterococcus)或克雷白氏杆菌(Klebsiella)种。表现症状为上腹部的单侧疼痛、发烧和寒颤。此外，严重的化脓性胆管炎使休克病况、中枢神经系统紊乱和肾功能不全发生。治疗使用了内窥镜介入胆管，例如内镜逆行胰胆管造影术(endoscopicretrograde cholangiopancreatography，ERCP)或经皮肝穿胆道引流术(percutaneous transhepatic cholangiodrainage，PTCD)，这些方法恢复了胆汁流动并通常具有抗菌作用。

非化脓性破坏性胆管炎：这种形式的胆管炎表现为慢性病程，并且也被称为原发性胆汁性肝硬化。95％的受染个体为女性，并且发病高峰为40-60岁之间。诊断方面，在绝大多数环中的血液中发现了抗线粒体抗体(antimitochondrial antibodies，AMA)，因此推测是自身免疫性起源的。从临床上来说，患者以瘙痒、黄疸和血胆脂醇过多为特征。在进一步的病程中，仅能通过肝移植的手段来帮助患者。

慢性硬化性胆管炎：慢性硬化性胆管炎是最罕见的胆管炎症，并被分为原发性硬化形式和继发性硬化形式。原发形式通过存在已有的基因排列(检测到与HLA-B8抗原关联)中的感染而发展产生，并且感染的男性是女性的两倍。在高达90％的病例中发现了p-ANCA。继发性形式是建立在已有的免疫缺陷综合症的基础上发展产生的。与破坏性胆管炎相似地，肝移植在最终阶段是必要的。

本发明中的自身免疫性肠炎涉及任意形式的肠炎，特别是由慢性炎症性肠病导致的。而且，本发明中的自身免疫性肠炎还涉及那些由沙门氏菌(salmonella)、大肠杆菌、霍乱或斑疹伤寒病原体、或者由真菌、原生动物、有毒物质所引起的，还包括任意的过敏性肠炎或任意形式的光化性肠炎(actinic enteritis)、耶尔森氏菌肠炎或细菌性痢疾。

本发明的另一种优选的实施方式中，GP2肽的至少60％，优选70％，更优选80％，特别优选90％的氨基酸序列与SEQ ID NO.1的序列同源。也就是说，本发明涉及全部这样的肽，优选所述肽的60％、70％、80％的，特别优选90％的序列与SEQ ID NO.1的序列同源。可以理解的是，这些同源物可以通过缺失、增加、取代、易位、倒位和/或插入而被修饰。更具体地说，这种修饰涉及具有功能相似性的同源肽。当与上述疾病有关的自身抗体发生互相反应时，本发明中的肽在功能上相似。

因此，本发明的目的在于公开了多肽和能以功能类似的方式使用的同源物。考虑到同源/功能相似，本领域技术人员可以理解的能通过增加、缺失或取代进行修饰而不需要实质性地改变多肽。如果被修饰的氨基酸序列以基本相似的方式实现了与SEQ ID NO.1的序列相同的功能，获得相同的结果，则被修饰的氨基酸并没有发生实质性的改变。

例如说，在功能上类似的肽可以为SEQ ID NO.2：

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或SEQ ID NO.3：

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或SEQ ID NO.4

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NLVLRNCYATPTEDKADLVKYFIIRNSCSNQRDSTIHVEENGQSSESRFSVQMFMFAGHYD

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或SEQ ID NO.5

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CRQDLNSSDVHSLQPQLDCGPREIKVKVDKCLLGGLGLGEEVIAYLRDPNCSSILQTEERN

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更具体地说，上述肽要求用来对以上描述的免疫疾病进行诊断。上述序列以与SEQ ID NO.1基本相同的方式实现了基本相同的功能并且得到了基本相同的结果。因此，它们包括在根据本发明所给出的教导中，即，GP2分子作为药物，特别是在炎症性肠病的预防、诊断、治疗和/或病后调护中的用途。

因此，氨基酸序列(即，本发明中的肽)可以包括大量的额外的氨基酸、间隔物或其他的使它们适于与自身抗体互相作用的结构，优选以它们反映了对后者的表位的方式。因此，根据本发明的序列不限于与抗体表位相关的肽，还指的是特异性地与自身抗体以能够对炎症性肠病进行诊断的方式进行特异性互相作用的分子及其所有片段。因此在优选实施方式中，术语表位、肽和氨基酸序列在本发明的内容中意思相同。

各种不同的制备在功能上相似的肽的方法已经在现有技术中公开了。所设计的肽以本发明的的肽为起始利用了根据本发明的教导所包括的方法。比如说，一种产生在功能上相似的肽的方式已经在美国国家科学院院刊1998，10.31，9521，12179-84(PNAS USA 1998，Oct.13，9521，12179-84)；WO 99/6293和/或WO 02/38592；上述教导与本发明的公开内容结合于此。也就是说，当含有使用以上所提及的方法——以本发明的肽为起始——而产生的肽的所有的肽、肽的片段或结构实现了本发明的目的，且更具体地说，与病原性自身抗体互相作用时，它们是根据本发明的肽。例如，这些自身抗体可以为竞争性自身抗体活化受体。

在本发明的另一种优选的实施方式中，所述分子包括选自由α-氨基羧酸及其同质低聚体(homooligomer)和异质低聚体(heterooligomer)、α，ω-氨基羧酸及其支链化的同质低聚体或异质低聚体、其它的氨基酸及其直链和支链的同质低聚体或异质低聚体；氨基-寡烷氧基烷基胺(amino-oligoalkoxyalkylamines)；顺丁烯二酰亚胺羧酸(maleinimidocarboxylic acid)衍生物；烷基胺低聚体；4-烷基苯基衍生物；4-寡烷氧基苯基(4-oligoalkoxyphenyl)衍生物或4-寡烷氧基苯氧基(4-oligoalkoxyphenoxy)衍生物；4-寡烷基巯基苯基(4-oligoalkylmercaptophenyl)衍生物或4-寡烷基巯基苯氧基(4-oligoalkylmercaptophenoxy)衍生物；4-寡烷基氨基苯基衍生物或4-寡烷基氨基苯氧基衍生物；(寡烷基苄基)苯基((oligoalkylbenzyl)phenyl)衍生物或4-(寡烷基苄基)苯氧基衍生物，以及4-(寡烷氧基苄基)苯基衍生物或4-(寡烷氧基苄基)苯氧基衍生物；三苯甲基(trityl)衍生物；苄氧基芳基(benzyloxyaryl)衍生物或苄氧基烷基衍生物；呫吨-3-基氧基烷基(xanthen-3-yloxyalkyl)衍生物；(4-烷基苯基)链烷酸衍生物或ω-(4-烷基苯氧基)链烷酸衍生物；寡烷基苯氧基烷基衍生物或寡烷氧基苯氧基烷基衍生物；氨基甲酸酯衍生物；胺；三烷基甲基硅烷(trialkylsilyl)衍生物或二烷基烷氧基甲基硅烷(dialkylalkoxysilyl)衍生物；烷基或芳基衍生物，或它们的组合所组成的组的连接体或间隔物。

在本发明的另一种优选的实施方式中，所述GP2分子用作可溶的或结合固相的抗原，以对粪便和/或体液(特别是血液和/或血清)中的自身抗原进行检测，其中，发现与SEQ ID NO.1一致的GP2分子特别有利。

在本发明的另一种优选的实施方式中，根据本申请的序列，或者由该序列产生的肽被固定化。更具体地说，固相结合的与SEQ ID NO.1一致的GP2分子与有机聚合物、无机聚合物、合成聚合物和/或混合的聚合物(优选为琼脂糖、纤维素、硅胶、聚酰胺和/或聚乙烯醇)结合。固定化在本发明的内容中指的是将肽固定在特定载体上的各种不同的方法和技术，例如，根据WO99/56126或WO 02/26292所记载的。例如，固定化可以起到稳定肽的作用，因此肽的活性不会降低或由于生物学接触、化学接触或物理接触而受到不利的修饰，特别是在储存过程中或者以单批使用时。肽的固定化允许了在技术或临床常规条件下进行重复使用；此外，样品(优选为血液成分)能以连续的方式与至少一种根据本发明的肽进行反应。更具体地说，这可以通过各种不同的固定化技术来实现，通过将肽结合到其他的肽或分子或载体上以此方式继续下去，使得相应分子(特别是所述的肽)的三维结构(特别是介导与自身抗体的互相作用的活性中心)不会被改变。有利的是，这种固定化的结果是没有损失对患者的自身抗体的特异性。在本发明的内容中，可以使用三种基本方法来进行固定化：

i)交联法：在交联法中，肽被彼此固定而不会对其活性产生不利影响。有利的是，这种交联的结果使得它们不再是可溶的。

ii)与载体结合：与载体的结合通过例如吸附、离子结合或共价结合而进行。这种结合也可以发生在微生物细胞内，或脂质体或其他膜状、封闭或开放的结构中。有利的是，通过这种固定，肽不会受到不利的影响。比如，多次或连续使用结合载体的肽能具有临床诊断或治疗的优势。

iii)内包法：本发明内容中的内包法尤其发生于凝胶、原纤维或纤维形式的半永久性膜中。有利的是，被封装的肽以仍然能够与自身抗体或其片段发生相互作用的方式通过半永久性膜与周围的样品溶液分离。可以使用各种不同的方法进行固定化，例如吸附在惰性的或带点的无机或有机载体上。例如，这种载体可以为多孔凝胶、氧化铝、膨润土、琼脂糖、淀粉、尼龙或聚丙烯酰胺。通过物理约束力进行的固定化通常涉及疏水性互相作用和离子结合。有利的是，这种方法易于操作并且对肽的构造几乎不产生影响。有利地，在肽和载体的带点基团之间的静电约束力可以提高结合，例如通过离子交换剂，特别是塞法戴克斯(Sephadex)。

另一种方法是与载体物质共价结合。此外，载体可以具有与氨基酸侧链形成同极键的反应基团。肽上合适的基团为羧基、羟基和硫基(sulfide group)，特别是赖氨酸的末端氨基。芳香基提供了重氮偶联的可能性。微观多孔的玻璃颗粒可以通过硅烷处理而被活化并随后于肽进行反应。例如，天然聚合物的羟基可以被溴化氰活化并且随后与肽进行偶联。有利的是，大量的肽可以直接与聚丙烯酰胺树脂共价结合。三维网络中的内包法涉及将肽内包进离子移变凝胶(ionotropic gel)或其他本领域技术人员公知的结构中。更具体地说，基质的孔是天然的因此肽被保持，允许了与靶分子的互相作用。在交联法中，肽通过与双功能试剂进行交联而被转化成聚合物团聚体。这种结构式凝胶状的，易变形且，特别适用于各种反应。通过在交联法中加入其它无活性成分(例如凝胶)，能够有力的改进机械特性和结合特性。在微囊化中，肽的反应量受到了膜的限制。例如，微囊化可以界面聚合的形式来进行。由于微囊化过程进行了固定化，被固定的肽变得不可溶并因此可以被再利用。在本发明的内容中，固定的肽是所有处于能够允许对其进行再利用的条件的肽。通过化学的、生物学的或物理手段来限制肽的移动性和溶解性能有力地使工艺成本降低，特别是在从血液成分中除去自身抗体时。

在本发明的另一种优选的实施方式中，除了使用可溶的或固相结合的根据SEQ ID NO.1的GP2分子之外，还可以使用选自由A蛋白、G蛋白、抗人类免疫球蛋白或L-色氨酸所组成的组的非特异性的吸附剂分子。

在本发明的另一种优选实施方式中，与SEQ ID NO.1一致的GP2分子选自由以下所组成的组：

a)具有充分的与SEQ ID NO.1的GP2分子同源的氨基酸序列的分子以与其在功能上相似；

b)根据所述a)的分子，该分子通过缺失、增加、取代、易位、倒位和/或插入而被修饰，并且与根据所述a)的分子在功能上相似。

惊人的是，同源物和被修饰的与SEQ ID NO.1一致的GP2分子的使用产生了许多优势。实际上，发现根据b)做出的改变允许得到具有提高的稳定性的分子，因此在实验室日常程序中产生有益效果。

在本发明的另一种优选的实施方式中，所述b)描述的分子与所述a)描述的分子具有至少40％的同源性。在实验室日常程序中，所述40％的同源物具有惊人的效果，它不仅比根据a)的分子能储存更久，而且具有提高的耐受温度波动的能力。

在本发明的另一种优选实施方式中，所述b)描述的分子与所述a)描述的分子具有至少60％、优选70％，更优选80％，特别优选90％的同源性。考虑到根据所述b)的全部分子，这种变体的优势在于完全出人意料的具有最长的储存期的特性。

在本发明的另一种优选的实施方式中，与SEQ ID NO.1一致的GP2分子为线性形式或环状形式，通过酰胺环化作用或者当存在两个半胱氨酸时通过二硫桥键进行肽的环化或通过这些可能方式的组合而进行肽的环化，所述酰胺环化可选择地通过侧链、C末端和N末端进行。上述方法中，这种GP2分子的变体可以提高GP2分子在各种变性缓冲液的存在时的稳定性。

本发明的另一方涉及与SEQ ID NO.1一致的GP2在制备偶联有所述GP2的用来治疗炎症性肠病，特别是克罗恩氏病、慢性胰腺炎和/或溃疡性结肠炎的柱的过程中的用途，所述治疗包括选择在允许将患者血浆内的免疫性球蛋白有效地结合GP2的条件下，使所述患者的血浆通过所述柱，从而将大量的免疫性球蛋白从所述患者的血浆中除去，并使由此得到的血浆返回患者。上述用途具有的有益效果是，能够非常迅速地从IBD急性病例患者的血液中除去免疫性球蛋白。

本发明的另一方面涉及GP2、免疫反应性序列或其类似物的免疫原性试剂在制备用于诊断或治疗控制疾病的药物中的用途，所述疾病与针对这些物质的免疫反应有关。令人惊奇的是，以上描述的GP2的序列也能生产易于处理的药物，患者可以遵照内科医生知道服用或使用所述药物，因此住院治疗不是必须的。

在一种优选的实施方式中，本发明的目的在于对慢性炎症或自身免疫性疾病(特别是炎症性肠病，例如克罗恩氏病、慢性胰腺炎和/或溃疡性结肠炎)进行诊断或治疗控制中利用上述免疫试剂。这种实施方式的优势在于，即使这些几乎不具有到达诊断和治疗中心的能力的患有自身免疫性炎症性肠病的患者能获得易于处理的医疗并且在家庭医生的监督下使用。

在一种优选的方式中，使用根据本申请的GP2、免疫反应性序列及其类似物或片段的SEQ ID NO.1序列作为医疗生产中的治疗活性物质，并应用于与针对这些物质的免疫反应有关的疾病的口服治疗中。本发明内容中的用作治疗活性物质表示的是将氨基酸序列或可以由该氨基酸序列形成的肽用于整个医学领域。有利的是，GP2是足够稳定并且可被吸收的肽，因此它能作为药物而向患者给药，即使是口服途径。

本发明还涉及一种药用组合物，该药用组合物包括至少一种与SEQ ID NO.1一致的GP2分子，任选还包括药用可接受载体，以治疗慢性炎症或自身免疫性疾病，特别是炎症性肠病，例如克罗恩氏病、慢性胰腺炎和/或溃疡性结肠炎。

更具体地，所述药用组合物可以用作药物。为此目的，例如，能够通过环化作用或其他本领域技术人员公知的方法对肽或全部氨基酸序列进行修饰，从而防止通过内源性的分解肽的结构(例如，血清蛋白酶)。通过使用根据本发明的肽或蛋白质(SEQ ID NO.1)，自身抗体能够在体内或离体中性化。在体内中性化过程中，直接向患者给药，在离体中性化的过程中，将血液导出人体(例如通过回路，例如以管状循环的方式)，随后与药物接触，自身抗体发生中性化后，将血液循环回有机体(即，患者)。本发明内容中的药物是用于治疗和预防目的的组合物，和药用组合物一起可以用作诊断试剂。

根据本发明，药物或药用组合物(同义地用于本文)是通过在人体上或体内的应用来治愈、减缓或避免疾病、病症、身体缺陷或病理学感染的物质的组成和制剂。根据本发明，医学佐剂用来制备药物的活性成分。药用技术佐剂起到稳定配制药物或药用组合物的作用，并且当仅在生产过程中需要时，它们甚至可以随后被除去，或者它们可以为药用组合物的一部分作为药用可接受载体。药用可接受载体的实施例将在下文给出。药物的配置或药用组合物的配置可选择地受到药用可接受载体和/或稀释剂的结合的影响。合适的药用可接受载体的实施例是本领域技术人员所公知的，并且包括例如磷酸缓冲生理盐水、水、乳液例如油/水乳液，各种类型的洗涤剂、无菌溶液以及等等。能够通过工资的常规方法配制含有这种载体的药物或药用组合物。这些药物或药用组合物可以以合适的剂量向个体给药，例如，每位患者1μg至10g的肽或蛋白质/天。1mg至1g的剂量是优选的。优选情况下，给药物量数量上尽可能小和低，优选为单剂量。给药可以通过各种路径实现，例如，静脉内给药、腹膜内给药、直肠内(intrarectal)给药、胃肠道内(intragastrointestinal)给药、结内(intranodal)给药、肌内给药、局部给药，还包括在皮肤上或通过粘膜的皮下给药、皮内给药。对编码根据本发明的肽的核算的给药也能以基因治疗的方式进行，例如通过病毒载体。剂量的种类给药路径可以由主治内科医生根据临床实践来确定。本领与技术人员所熟知的，剂量的种类将依赖于各种不同的因素，例如患者的体积、体表面积、年龄、性别或通常健康状况，还依赖于所使用的具体的试剂，实践周期和给药类型，并依赖于可能同时进行给药的其它药物。本领域技术人员对以下事实也是熟悉的，可以首先使用根据本发明的肽来诊断自身抗体的浓度，以确定所需的药物浓度。

更具体地说，药用组合物或药物包括药理学物质，所述药理学物质包括为合适的溶液形式或给药形式的一种或多种根据本发明的肽或蛋白质或/和编码所述肽或蛋白质的核酸分子。对上述物质的给药可以单独进行或与适当的所述与药物或药用组合物相连系的佐剂一起，或者与一种或多种佐剂结合来进行，所述佐剂为例如，QS-21、GPI-0100或其他皂角苷、水-油乳液例如蒙塔里德佐剂(Montanide adjuvants)、聚赖氨酸、聚丝氨酸化合物、DNA化合物例如CpG Detox、细菌疫苗例如伤寒疫苗或BCG疫苗，盐例如磷酸钙和/或增强药效的其他合适的物质，优选为免疫刺激性分子例如白介素，例如IL-2、IL-12、IL-4和/或生长因子例如粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。根据公知的方法将它们与肽或本发明的识别分子混合，并以合适的剂型和剂量进行给药。

显然地，所述药用组合物或药物还可以为两种或两种以上的本发明的药用组合物或药物的结合，以及与其他药物的组合，例如抗体疗法、化学疗法或放射性疗法中同时或间隔一定时间地给药或施用。药物或药用组合物的生产根据本身公知的方法来进行。

如本发明一种优选的实施方式所设想的，用于药用试剂的药用载体选自由填料、崩解剂、粘结剂、保湿剂(humectants)、稀释剂、缓溶剂(dissolutionretarder)、吸收增强剂、润湿剂(wetting agent)、吸收剂和/或润滑剂所组成的组。惊人的是，实践中有利地发现大量的药用载体适合于GP2从而药物的给药形式可以很大程度地适应患者的需要。

本发明还涉及一种用来检测自身免疫性疾病的诊断试剂盒，该试剂盒包括与SEQ ID NO.1一致的GP2分子。所述诊断试剂盒可选择地包括说明书，该说明书关系到将试剂盒的内容物进行结合和/或提供用来检测炎症性肠病的制剂，特别是克罗恩氏病、慢性胰腺炎和/或溃疡性结肠炎。比如说，说明书可以为指导性传单或其他向使用者提供方法类型信息的媒介，其中使用了所提及的物质。显然地，这种信息不是必须为指导性传单的形式，并且这种信息可以通过诸如网络的方法传播。对于患者而言，这种试剂盒的有益效果是，例如他或她不需要直接造访内科医生(甚至在旅途过程中)就能够测定疾病的实际状态，从而能够据此可选择地调节饮食和活动。

本发明还涉及一种用于色谱法(特别是用于血浆分离置换法(apheresis))的设备，该设备包括与SEQ ID NO.1一致的GP2分子以治疗炎症性肠病，特别是克罗恩氏病、慢性胰腺炎和/或溃疡性结肠炎。通常，传统的对急性炎症的治疗需要使用药物治疗来尽快控制肠内炎症。根据本发明的色谱设备的优势在于，不需要对患者进行给药，作为替换地，在血浆分离置换柱上将患者的血液从抗体中进行提纯，从而防止了炎症中心扩张从而避免了药物互相作用和对器官的损害。

在优选的实施方式中，与SEQ ID NO.1一致的GP2分子结合到所述色谱系统内的固相上。GP2分子对抗体具有惊人的高亲和性，并在固相上表现出了良好的固定性，从而根据本发明的设备能用来从患者体液中排除抗体或使自身抗体中性化。该方法是免疫吸附和血浆分离置换治疗领域的技术人员已知的。在免疫吸附的协助下，从患者血液中除去了免疫球蛋白。

有利的是，这种免疫吸附治疗可以作为住院治疗和流动性治疗而进行。可以预计到的是，该设备，特别是所谓的吸附器是体外血液循环的一部分。维持目的，血液连续地或不连续地从患者的主动脉(更具体地为手臂静脉)中获取，并通过过滤或离心分离而被分离成单一成分，例如细胞成分和体液成分。具体来说，通过此方式获得的一种必要的血液成分为血浆。有利的是，血浆可以流经本发明的设备，并当自身抗体被吸附后返回患者，更具体地说，是通过手臂或腿的另一条静脉，与先前分离的血液成分(特别是细胞成分)。可以预期到的是所述肽被固定在琼脂糖基质上。所述基质可以置于体积为10-400ml的容器中。随后，可以使患者的血流流经所述基质，其中自身抗体将被结合从而允许将其从血浆中除去。

本领与技术人员将熟知提供这种固相固定的肽的各种不同的方式，例如为以下形式(i)可再生的吸收柱，(ii)双柱和(iii)一次性柱。使治疗具有高效性的不同的清洗和洗提溶液可以通过本领与技术人员使用常规的方法简单地进行测定。通过提供根据本发明的教导，向本领域技术人员更具体地公开了本发明的肽，在体内、离体(ex vivo)和体外使用所述肽的各种方式来对由感冒引起的、自身抗原介导的疾病进行预防、诊断、治疗和病后调护(aftercare)。

-根据本申请的教导以以下突出的特征性：

-与常规技术的脱离

-新的问题领域

-存在长期未令人满意的、紧急的需求来解决由本发明所解决的问题

-迄今为止本领域中未作出努力

-解决的简单性表示了本发明的活跃性，特别是它代替了更多的复杂技术

-科学技术在不同的方向上进行发展

-实现了发展的成就

-本领域在解决争论问题上的错误观点(偏见)

-技术的进步，例如，提高、性能增强、降低开销、节约时间、材料、公主步骤、成本或原料难以获得、增强的可靠性、除去了缺点、更优越的质量、维护自由、更高的效率、更高的产量、技术领域的扩展、其他手段的提供、创造第二途径、开拓新领域、第一时间解决问题、保守装置、轮替性、实现、自动化或小型化的范围，或可用药物范围的扩大

-幸运的选择(各种可能之外，选择一个结果是不可预知的，这就使其成为能作为专利的幸运选择)

-现有技术文件中的错误

-新的技术领域

-发明的结合，即，结合了多种已知要素来实现意想不到的效果

-许可问题

-本领域的赞扬

-经济上的成功

这些特性特别适用于本发明的优选实施方式。

将结合实施例对本发明进行更具体的解释，这种解释不用于限制本发明。

方法

将GP2从大鼠胰腺中提纯

获得酶原粒(ZG)和对ZG膜提纯

以下所有的工作步骤在冰浴中或者在冷却至4℃下进行。四只成年Wistar大鼠胰腺(组织约重2.4g)通过机械方法减小其尺寸在波特(POTTER)均质器(1000rpm下2冲程和1300rpm下2冲程)内的10倍体积的冰-冷的0.3M蔗糖溶液中浸渍。将被浸渍的材料随后在薄纱布上过滤。细胞碎片和细胞核通过进行10分钟的500g的离心分离而除去。进行10分钟的3000g的离心分离，酶原粒(下部，白色固体小球)和线粒体(上覆层，松散的褐色小球)从上清液中发生沉积。用缓冲液A(10mM的吗啉基丙磺酸(morpholinopropanesulfonicacid，MOPS)，pH 6.8)小心地冲洗去线粒体，并使用涡旋机器将酶原粒重悬浮于2ml的0.1M的碳酸钠溶液和1mM的二异丙基氟磷酸酯(diisopropylfluorophosphate，DFP)中。颗粒在冰浴中裂解1个小时。将裂解的批次在不连续的蔗糖梯度(0.3M/1M)上进行分层，并在200000g进行离心分离90分钟。膜部分累积为密度分界处的带。该带被吸收并将得到的溶液至0.3M的溴化钠调整。通过200000g的离心分离60分钟将膜进行沉淀。

GP2的增溶作用

使用超声将得到的膜小球在0.5mL的缓冲液B(20mM的吗啉基乙基磺酸(morpholinoethanesulfonic acid，MES，pH 7.0；80mM的KCl；45g/ml的皂角苷)进行再悬浮，然后加入磷脂酰肌醇特异性的磷脂酶C(蜡状芽孢杆菌)后，通过在37℃下孵育1小时来将GP2从膜中除去。膜通过离心分离(200,000g，60min)被形成丸状，并将含有可溶的GP2的上清液利用超滤浓缩至约为1∶5。

酶联免疫吸附测定(ELISA)以检测GP2抗体

用在包被缓冲液(100mM的碳酸钠，pH 9.6)10μg/ml的大鼠GP2在4℃下以50μl/孔的量对微量滴定板(麦克斯索伯，能肯，罗斯基勒郡(Maxisorb，Nunc，Roskilde))进行包被并放置过夜。用洗涤缓冲液(10mM的磷酸钠，150mM的NaCl，0.1％的吐温20(Tween 20)，pH 7.4)对微量滴定板进行洗涤后，用300μl的封闭溶液(洗涤缓冲液，1％的牛血清白蛋白(BSA)，pH 7.4)在室温下(RT)对孔孵育30分钟。随后，用洗涤缓冲液对孔进行三次洗涤，、每孔50μl的人血清样品，在稀释缓冲液(10mM磷酸钠，150mM的NaCl，1％的鼠血清白蛋白(RSA))中以1∶100稀释，在室温(RT)下孵育60分钟。用稀释缓冲液洗涤三次后，将孔填充50μl的结合物溶液(抗人类IgG过氧化物酶，羊，1μg/ml，稀释溶液)，在RT下孵育30分钟。随后再将孔洗涤3次，并将50μl的底物溶液(四甲基联苯胺)分配到每孔。在RT下孵育10分钟后，通过加入50μl的淬灭溶液(0.3M的硫酸)中止底物反应。微量滴定板在450nm和620nm下对每孔内溶液的光密度进行两次色谱测量，接着使用EIAstar软件程序进行基于计算机的分析。

对于胰腺抗原抗体检测的间接免疫荧光法(IIF)

使用商购得到的猴子胰腺切片(欧蒙，吕贝克(Euroimmun，Lubeck))通过IIF的方法来测定胰腺抗原抗体。用稀释缓冲液将血清样品按1∶40、1∶80和1∶160进行稀释。25μl的稀释的血清被吸取在试剂载体的反应板上，并与具有组织切片的显微镜载玻片在RT下孵育30分钟。然后，将载玻片用磷酸缓冲液清洗1分钟。将20μl的标记的抗血清(抗人类IgG FITC)吸取在清洗过的试剂载体的各个板上，并与载玻片上的组织切片在RT下孵育30分钟。用磷酸缓冲液再清洗1分钟后，在封固剂(mounting medium)的协助下将盖玻片置于载玻片上。使用荧光显微法进行荧光评价。

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