骨靶向抗炎药物合成方法及其应用

摘要

本发明公开了一种骨靶向抗炎药物、合成方法及其应用，具体为式(II)结构的化合物，其中，R1或R2分别独立地为氢或C1～8的酰基；R3为阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛或双氯芬酸的羧基残基；n为1～10的整数。本发明的化合物具有在制备骨靶向抗炎药物方面，尤其是在制备治疗骨关节炎或风湿性关节炎药物方面的用途。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一类蒽醌类骨靶向抗炎药、制备方法以及用途。

背景技术

骨关节炎是临床常见的难治性慢性退行性病变。世界上，60岁以上的老年人中，约有9.6％男性和18.0％女性出现骨关节炎症状。80％的骨关节炎患者活动受限，25％骨关节炎患者不能自主完成主要日常活动，给家庭和社会带来沉重的负担。而类风湿性关节炎是一种侵犯关节滑膜为主的全身性疾病，在自身免疫性疾病中发病率为1％-2％，如不能早期诊断，有效治疗，往往出行骨质破坏、关节畸形等，严重影响患者生活治疗。传统治疗关节炎的药物主要是止痛药和非甾类抗炎药(NASIDs)；但长期应用可引起严重的胃十二指肠和肾脏损害，某些NASIDs药物还具有破坏软骨作用。

关节炎药物治疗过程中，由于骨组织硬度大、渗透性差和生理生化过程特殊，一般的给药途径很难使药物转运至有效部位，而且有些药物常需全身给药，才能在骨组织中达到有效的治疗浓度。这样不仅降低了药物的治疗指数，而且也会对病人的非骨组织或器官造成不必要的毒副作用。因此，研制骨靶向药物，特别是能特异性地将药物转运至骨组织从而减小其在非骨组织的分布和结合的载体分子具有非常重要的意义。

自1986年首次提出“骨靶向”的概念以来，骨靶向药物的发展也取得了较大的进展。要实现骨靶向给药必需克服以下难题：1)由于骨具有排列细胞组成的膜，形成了骨髓一血屏障，限制了外源性大分子到达骨表面。因此，一些较大的分子载体如脂质体可能就不适用于骨靶向给药；2)骨组织中具有生物结合性并有组织特异性的生物分子如酶、受体或抗体表达很少，这使得利用生物结合特性实现骨靶向也十分困难。

大黄酸是中药大黄等中的游离性蒽醌成分。大黄为蓼科多年生草本植物掌叶大黄(Rheum palmatum L.)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf)或药用大黄(Rheumofficinale Baill.)的根或根茎。

大黄临床广泛用于抗菌、消炎、抗病毒、抗肿瘤和抗衰老等，具有广泛的药理作用。近期研究表明，大黄酸能抑制内毒素诱生的大鼠巨噬细胞IL-12mRNA过度表达，影响巨噬细胞脂类炎性介质的活化，从而达到抗炎的作用。

双醋瑞因(安必丁)是临床上用于治疗骨关节炎的药物，其活性二乙酰衍生物大黄酸是一种具蒽醌结构的化合物，能抑制白介素-1(IL-1)的活性，从而降低关节软骨中胶原酶的产生。大黄酸剂量依赖性地抑制过氧化阴离子的形成，抑制白细胞趋化性及其吞噬作用和巨噬细胞的迁移和吞噬作用。骨关节炎患者的软骨细胞中发现有大量的IL-1受体和尿激酶受体。在骨关节炎的动物模型中由于使用双醋瑞因而降低了关节软骨的损伤。双醋瑞因不改变肾脏和血小板的环加氧酶活性，因此前列腺素依赖性肾功能障碍患者可以耐受。在≤6个月的临床实验中，骨关节炎患者每天2次口服双醋瑞因50mg，有57％～85％的患者症状改善，与使用安慰剂者比较，疼痛评分和关节功能的测得值通常降低。

近年研究表明，从大黄中分离出的蒽醌类化合物大黄酸、大黄素、大黄酚和芦荟大黄素等，有类似四环素的结构，实验表明该类蒽醌类化合物也具有趋骨性。近期有文献报道如：Ying Wang et.al Chin Chem Lett 17(2006)310；Hong Chen et.al Chin Chem Lett 18(2007)141；CN100368426C等指出大黄素、大黄酚等作为趋骨基团，携带抗肿瘤药物，体外实验表明可以和羟基磷灰石有很好的结合效果，具有良好的骨靶向性能。这些文献均未包括或覆盖本发明所涉及的新型结构及合成方法和用途。

在开发新药的过程，有一些确有良好疗效的药物，由于它们的理化性质不符合要求(如溶解度太小)或稳定性和吸收不够理想，或有不良气味，毒副作用等，以至于无法用于临床，或临床适用范围受到限制。从药物设计的角度来考虑，这些不足之处可以借助于生物(改变给药途径)，物理(剂型设计)和化学的方法来改善。其中，可进行结构改造的化学方法具有很大的潜力。

本发明中的大黄酸因为溶解度小等问题，影响了药物吸收，从而限制了其临床应用。大黄酸的溶解性差，这与其共轭结构及该结构上直接连接的羧基关系密切。此外，大黄酸及一些临床常见的非甾体抗炎药的结构中羧基的强酸性是其引起其胃黏膜损伤的主要原因之一。在前药原理和拼合原理的指导下，本发明将大黄酸非甾体抗炎药通过不同聚合度乙二醇间隔基(酯基)连接，由此达到改善溶解性能，提高生物利用度，避免羧基对胃黏膜的损伤，增强药理作用，协同完成治疗过程的目的。被吸收达到骨靶向部位后，在酯酶的作用下，迅速分解释放出活性成分，发挥治疗作用。

发明内容

本发明的目的是为解决上述骨部位炎症定向治疗问题，提供一类能够在到达骨部位后酯键水解、释放出抗炎药物、协调发挥抗炎效果的化合物。该类化合物保护了非甾体抗炎药物的羧基，降低了该类药物对胃肠道的刺激作用，并有效的改善大黄酸的溶解性能。

本发明的目的还在于提供上述化合物的合成方法。

本发明的另一目的是提供上述化合物在制备骨靶向抗炎药物方面，尤其是在制备治疗骨关节炎或风湿性关节炎药物方面的用途。

为了研制治疗效果和选择性更好，副作用小的化合物，本发明合成了以蒽醌类结构作为靶向载体的新型骨靶向药物，该化合物可以用以下简式表示：

B-L-R

R代表含有羧基的不同的常用于临床的抗炎药物，例如，布洛芬、萘普生、双氯芬酸、水杨酸和吲哚美辛的羧基残基等；

L代表1～10个不同聚合度的乙二醇基间隔；

B代表大黄酸等含有羧基官能团的蒽醌类结构。

具体结构如式(II)如示：

其中，

R₁或R₂分别独立地为氢或C1～8的酰基；R₃为氢或阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛或双氯芬酸的羧基残基；n为1～10的整数。

在上述化合物中R₁或R₂分别独立地优选为氢或C1～6的酰基，最优选H、CHO、COCH₃、COCH₂CH₃、COCH₂CH₂CH₃或COCH₂CH₂CH₂CH₃；R₃为氢或阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛或双氯芬酸的羧基残基；n优选为1～6的整数，最优选为1～4的整数。

本发明的化合物大体可以由如下两种方法合成：

法一：大黄酸与酰化试剂反应生成化合物(A)，再与不同聚合度的乙二醇反应制备化合物(I)，最后化合物(I)与阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛或双氯芬酸酰化得到的酰氯活化酸酯反应制备化合物(II)，其反应路线如下：

其中各基团的定义如上1所述，且R₁或R₂不为氢。

其中将化合物(II)在碱性条件下水解，得到式(III)化合物，

首先，在适当的有机溶剂中，大黄酸与酰化试剂反应，通过酯键取代羟基，反应过程中也可以加少量的浓盐酸、浓硫酸等催化反应；有机溶剂可以为甲醇、乙醇、四氢呋喃、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、石油醚、二氧六环等；上述的大黄酸与酰化试剂的摩尔比1:0.1～10；反应在0～100℃进行0.5～24小时。

化合物(A)与不同聚合度的乙二醇反应，制的第一类目标化合物I。制备过程中可以通过DCC制备活化酸酯或通过制备酰氯的方法活化羧基，其中酰氯可以通过二氯亚砜、草酰氯等方法；化合物与聚乙二醇的摩尔比为0.1～10；反应在0～100℃进行0.5～24小时。

临床上常用的抗炎药如阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛和双氯芬酸等制成酰氯或制备活化酸酯，其中可以通过DCC制备活化酸酯或通过通过二氯亚砜、草酰氯制备酰氯的方法活化羧基；化合物I与新制的酰氯反应，得到第二类目标化合物II；上述两个反应物的摩尔比为0.1～10；反应在0～80℃进行0.5～24小时。

第二类目标产物II在碱性条件下水解，脱去蒽醌环上的羟基保护基，得到第三类目标化合物III；该反应的碱为碳酸氢钠、氢氧化钠、三乙胺、吡啶等常用的无机碱或有机碱。

法二：大黄酸与酰化试剂反应生成化合物(A)，而阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛或双氯芬酸酰化得到的酰氯或活化酸酯与不同聚合度的乙二醇发生酯化反应后，与化合物(A)反应，生成化合物(II)，其反应路线如下：

其中各基团的定义如权利要求1所述，且R₁或R₂不为氢。

其中将化合物(II)在碱性条件下水解，得到式(III)化合物，

首先，在适当的有机溶剂中，大黄酸与酰化试剂反应，通过酯键取代羟基，反应过程中也可以加少量的浓盐酸、浓硫酸等催化反应；有机溶剂可以为甲醇、乙醇、四氢呋喃、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、石油醚、二氧六环等；上述的大黄酸与酰化试剂的摩尔比1:0.1～10；反应在0～100℃进行0.5～24小时。

临床上常用的抗炎药如阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛和双氯芬酸等制成酰氯或制备活化酸酯，其中可以通过DCC制备活化酸酯或通过通过二氯亚砜、草酰氯制备酰氯的方法活化羧基；化合物与乙二醇的摩尔比为0.1～10；反应在0～100℃进行0.5～24小时。

化合物(A)与上步制成的抗炎药的聚乙二醇酯反应，制的II类化合物。制备过程中可以通过DCC制备活化酸酯或通过制备酰氯的方法活化羧基，其中酰氯可以通过二氯亚砜、草酰氯等方法；上述两个反应物的摩尔比为0.1～10；反应在0～80℃进行0.5～24小时。

第二类目标产物II在碱性条件下水解，脱去蒽醌环上的羟基保护基，得到第三类目标化合物III；该反应的碱为碳酸氢钠、氢氧化钠、三乙胺、吡啶等常用的无机碱或有机碱。

本发明利用蒽醌类结构化合物和具有良好的抗炎效果的药物布洛芬、萘普生、双氯芬酸、水杨酸和吲哚美辛等通过不同聚合度的乙二醇桥联连接，设计了一类大黄酸-抗炎药拼合物，希望得到副作用小的骨靶向性的治疗骨关节炎及风湿性关节炎的理想化合物。经实验发现，该类化合物具有制备骨靶向抗炎药物，尤其是制备治疗骨关节炎或风湿性关节炎药物方面的作用。该大类化合物具有独特的趋骨性，在到达骨部位以后能释放出抗炎药物和大黄酸类蒽醌化合物，发挥协同作用，而成为靶向性治疗这种疾病的有效药物。

本发明也保护制备式(II)化合物的中间体式(I)化合物，其结构如下，

其中，R₁或R₂分别独立地为氢或C1～8的酰基；n为1～10的整数。

上述反应中所述的临床常用的抗炎药物结构式如下所示：

其中1为布洛芬，2为阿司匹林，3为双氯芬酸，4为萘普生，5为吲哚美辛。而本发明中所述的阿司匹林、布洛芬、萘普生、吲哚美辛或双氯芬酸的羧基残基是指上述化合物中不含羧基的剩余的基团。

通过半月板切除的方法建立骨关节炎(OA)的大耳白兔模型，以临床上用于治疗骨关节炎的双醋瑞因为阳性对照药，评价新化合物的抗炎作用。空白对照组(A组)为正常大耳白兔，与实验组一同按体重腹腔注射；骨关节炎模型构建完成后，模型组(B组)仅按体重腹腔注射蒸馏水；阳性对照药组(C组)和化合物组(D组)均按体重腹腔注射对应化合物，每天给药一次，连续4周后，抽取静脉血5mL，血液凝固后分离血清，将血清置于-20℃冰箱内保存；处死动物后，迅速打开关节腔，取出关节软骨，称重，用研钵研碎后加入无菌生理盐水制成10％的组织匀浆，放入冰箱冷冻保存。

实验结果表明：化合物组能明显改善骨关节炎造成的软骨表面粗糙，局部菲薄及浅表溃疡面形成等症状；对炎症相关因子SOD的含量测定表明，化合物组可显著提高血清、关节软骨中SOD含量；提示在改善骨关节炎软骨表面症状和提高骨关节炎兔血清、关节软骨中SOD含量方面，化合物组均优于或相当于双醋瑞因组。

具体实施方式

实施例1：4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-羟基乙酯(I-1)的合成；(4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-羟基乙酯)

a步：于100ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷50ml，DCC2.0g(9.693mmol)及干燥的DMF10滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入双乙酰大黄酸2g(5.435mmol)，于30℃下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。b步：于250ml三颈瓶中，加入干燥的乙二醇50ml，干燥的三乙胺1.3ml(9.250mmol)。将上步制得的酰氯溶于约150ml干燥的二氧六环中，于室温条件下，缓慢滴加入三颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：于反应液中加入约2～3ml水停止反应，减压蒸馏去大部分的二氧六环。将剩余反应液倒入约100ml冰水中，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。石油醚/乙酸乙酯重结晶，即得黄色固体1.91g，收率85％。mp200～203℃。

MS(ESI)：[M+Na]⁺435.0，[M+K]⁺451.0

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：2.45，2.46(s，3Heach，OCOCH₃)，4.00～4.02(t，2H，CH₂CH₂OH)，4.52～4.54(m，2H，CH₂CH₂OH)，7.43～7.45(dd，1H，Ar-H)，8.05～8.05(d，1H，Ar-H，J＝1.68)，8.24～8.25(dd，1H，Ar-H，J＝1.04)，8.83～8.83(d，1H，Ar-H，J＝1.7)

实施例2：4，5-二乙酰基--蒽醌-2-酸-2’-(2-羟基乙氧基)乙酯(I-2)的合成

a步：于100ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷50ml，DCC20.0g(96.93mmol)及干燥的DMF10滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入双乙酰大黄酸2g(5.435mmol)，于30℃下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。b步：于250ml三颈瓶中，加入干燥的二聚乙二醇50ml，干燥的吡啶1.5ml。将上步制得的酰氯溶于约150ml干燥的二氧六环中，于室温条件下，缓慢滴加入三颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约100ml冰水中，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。石油醚/乙酸乙酯重结晶，即得黄色晶体2.01g，收率81％。mp153～155℃。

MS(ESI)：[M+Na]⁺479.1

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：1.89(s，1H，CH₂CH₂OH)2.44，2.45，2.46(s，3Heach，OCOCH₃)，3.65～3.68(t，2H，CH₂CH₂OH)，3.76～3.79(t，2H，CH₂CH₂OH)，3.86～3.89(t，2H，COOCH₂CH₂O)，4.55～4.58(t，2H，COOCH₂CH₂O)，7.26～7.47(7.42～7.45(dd，1H，Ar-H)，7.77～7.82(t，1H，Ar-H)，8.04～8.05(d，1H，Ar-H，)，8.23～8.26(dd，1H，Ar-H)，8.84-8.84(d，1H，Ar-H)

实施例3：4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙酯(I-3)的合成

a步：于100ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷10ml，DCC2.0g(9.693mmol)及干燥的DMF10滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入双乙酰大黄酸2g(5.435mmol)，于90℃下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。b步：于250ml三颈瓶中，加入干燥的三聚乙二醇50ml，干燥的吡啶1.5ml。将上步制得的酰氯溶于约50ml干燥的THF中，于室温条件下，缓慢滴加入三颈瓶中，滴毕，室温搅拌2.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约100ml冰水中，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。石油醚/乙酸乙酯重结晶，即得黄色固体2.26g，收率83％。mp96～97℃。

MS(ESI)：[M+Na]⁺523.1，[M+NH₄]⁺518.0

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：1.17(s，1H，CH₂CH₂OH)2.45，2.46(d，6HeachOCOCH₃)，3.16～3.64(t，2H，CH₂CH₂OH)3.64～3.74(m，6Heach，CH₂CH₂OCH₂CH₂OH)，3.85～3.89((m，2H，COOCH₂CH₂O)，4.55～4.58(m，2H，COOCH₂CH₂O)，.42～7.45(dd，1H，Ar-H)，7.77～7.82(t，1H，Ar-H)，8.06～8.07(d，1H，Ar-H，)，8.23～8.26(dd，1H，Ar-H)，8.84-8.85(d，1H，Ar-H)

实施例4：4，5-二羟基-蒽醌-2-酸-2’-羟基乙酯(I-4)的合成

于100ml茄形瓶中，依次加入大黄酸0.5g(1.759mmol)，乙二醇40ml，浓硫酸2ml。于85℃下，搅拌反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入约150ml冰水后，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。二氯甲烷/甲醇重结晶(活性炭脱色)，即得橙黄色固体0.53g，收率92％。mp155～157℃。

MS(ESI)：[M-H]⁺327.21

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：4.01～4.03(m，2H，CH₂CH₂OH)，4.53～4.54(m，2H，CH₂CH₂OH)，7.33～7.35(dd，1H，Ar-H，J＝1.10)，7.72～7.75(m，1H，Ar-H)，7.87～7.88(dd，1H，Ar-H，J＝1.07)，7.95～7.96(d，1H，Ar-H，J＝1.61)，11.95，12.01(s，1H each，OH)

实施例5：4，5-二羟基-蒽醌-2-酸-2’-(2-羟基乙氧基)乙酯(I-5)的合成

于100ml茄形瓶中，依次加入大黄酸0.5g(1.759mmol)，二聚乙二醇10ml，浓硫酸2ml。于35℃下，搅拌反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入约150ml冰水后，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。二氯甲烷/甲醇重结晶(活性炭脱色)，即得橙黄色固体0.57g，收率88％。mp 139～141℃。

MS(ESI)：[M-H]⁺371.3

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：1.84(s，1H，CH₂CH2OH)，3.68～3.72(m，2H，CH₂CH₂OH)，3.80～3.83(m，2H，CH₂CH₂OH)，3.90～3.92(m，2H，COOCH₂CH₂O)，4.57～4.60(m，2H，COOCH₂CH₂O)，7.28～7.37(m，1H，Ar-H)，7.75～7.78(m，1H，Ar-H)，7.89～7.97(m，1H，Ar-H)，7.97(s，1H，Ar-H)8.45～8.45(d，1H，Ar-H)，11.97，12.04(s，1H each，OH)

实施例6：4，5-羟基-蒽醌-2-酸-2’-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙酯(I-6)的合成

于100ml茄形瓶中，依次加入大黄酸0.5g(1.759mmol)，三聚乙二醇40ml，浓硫酸2ml。于85℃下，搅拌反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入约150ml冰水后，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。二氯甲烷/甲醇重结晶(活性炭脱色)，即得橙黄色固体0.63g，收率86％。mp 100～101℃。

MS(ESI)：[M-H]⁺415.1

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：1.99(s，1H，CH₂CH₂OH)，3.62～3.64(m，2H，CH₂CH₂OH)，3.65～3.87(m，6Heach，CH₂CH₂OCH₂CH₂OH)，3.88～3.89(m，2H，COOCH₂CH₂O)，4.54～4.56(m，2H，COOCH₂CH₂O)，7.33～7.35(m，1H，Ar-H)，7.71～7.75(m，1H，Ar-H)，7.87～7.97(m，1H，Ar-H)，7.98(s，1H，Ar-H)8.44～8.44(d，1H，Ar-H)，11.96，12.02(s，1Heach，OH)

实施例7：4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-[2”-(4”’-异丁基苯基)]丙酰氧基乙酯(II-1)的合成

a步：于50ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷25ml，草酰氯4.6ml(53.53mmol)及干燥的DMF3～4滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入布洛芬0.75g(3.636mmol)，于室温下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。b步：于100ml两颈瓶中，加入(I-1)0.5g(1.213mmol)，干燥的二氯甲烷50ml及无水碳酸氢钠10g。将上步制得的酰氯溶于约20ml干燥的二氯甲烷中，于室温条件下，缓慢滴加入两颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约150ml冰水中，用稀盐酸溶液调至PH＝6，二氯甲烷提取，饱和NaHCO₃水溶液洗，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。隔夜后，抽虑，滤液减压蒸馏至干，石油醚洗得到较纯固体。石油醚乙酸乙酯混合溶液重结晶，得淡黄色固体0.6g，收率83％。mp 129～130℃。

MS(ESI)：[M+NH₄]⁺618.2，[M+Na]⁺623.1，[M+K]⁺639.0

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：0.82～0.83(d，3Heach，CH(CH₃)₂，J＝6.62)，1.50～1.52(t，3H，CH₂CH₃)，1.76(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.35～2.36(d，2H，CH₂CH(CH₃)₂，J＝7.18)，2.46～2.48(m，3Heach，OCOCH₃)，3.74～3.75(m，1H，CHCH₃)，4.43～4.55(m，4H，CH₂CH₂)，7.01～7.03(d，2H，Ar-H，J＝8.11)，7.18～7.19(d，2H，Ar-H，J＝8.07)，7.98～7.98(d，1H，Ar-H，J＝1.72)

实施例8：4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-(2”-乙酰基苯酰氧基)乙酯(II-2)的合成

a步：于100ml茄形瓶中，依次加入阿司匹林2.64g(14.65mmol)，乙二醇40ml，浓硫酸2ml。于85℃下，搅拌反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入约150ml冰水后，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。二氯甲烷/甲醇重结晶(活性炭脱色)，即得无色固体；b步：于100ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷50ml，草酰氯0.83ml(9.659mmol)及干燥的DMF10滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入双乙酰大黄酸2g(5.435mmol)，于30℃下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。c步：于250ml三颈瓶中，加入干燥的二氯甲烷50ml，加入a步制得的化合物1.5g(5.5mmol)，干燥的三乙胺1.3ml(9.250mmol)。将b步制得的酰氯溶于约150ml干燥的丙酮中，于室温条件下，缓慢滴加入三颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约150ml冰水中，二氯甲烷提取，饱和NaHCO₃水溶液洗，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。隔夜后，过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5：2)，得淡黄色固体2.4g，收率87％。mp 198～200℃。

MS(ESI)：[M+NH₄]⁺592.3，[M+Na]⁺597.3，[M+K]⁺613.2

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：2.33(s，3H，OCOCH₃)，2.45～2.46(m，3Heach，OCOCH₃)，4.63～4.72(m，4H，CH₂CH₂)，7.09～8.88(m，9H，Ar-H)

实施例9：4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-{2”-[邻-(2”’，6”’-二氯苯胺)苯]乙酰氧基}乙酯(II-3)的合成

于250ml茄形瓶中，依次加入双氯芬酸4.3g(14.522mmol)，(I-1)2.0g(4.850mmol)，DCC3.0g(14.539mmol)，DMAP少量，二氯甲烷约150ml，室温搅拌1.5小时，即可。加入20ml水停止反应，搅拌过夜。过滤，滤液以饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得淡黄色固体1.5g，收率46％。mp 149～151℃。

MS(ESI)：[M+H]⁺690.3，[M+K]⁺728.3

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：2.46，2.46(s，3Heach，OCOCH₃)，3.88(s，2H，OCOCH₂)，4.52～4.64(m，4H，CH₂CH₂)，6.47～8.79(m，12H，Ar-H)

实施例10：4，5-二乙酰基-蒽醌-2酸-2’-[2”-(2”’-甲氧基-6”’-萘基)丙酰氧基]乙酯(II-4)的合成

a步：于100ml茄形瓶中，依次加入萘普生0.84g(3.648mmol)，乙二醇40ml，浓硫酸2ml。于85℃下，搅拌反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入约150ml冰水后，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。二氯甲烷/甲醇重结晶(活性炭脱色)，即得淡黄色固体；b步：于100ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷50ml，DCC2.0g(9.693mmol)，室温下搅拌0.5小时。之后，加入双乙酰大黄酸2g(5.435mmol)，于30℃下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。c步：于250ml三颈瓶中，加入干燥的二氯甲烷50ml，加入a步制得的化合物1.75g(5.5mmol)，干燥的三乙胺1.3ml(9.250mmol)。将b步制得的酰氯溶于约150ml干燥的二氯甲烷中，于室温条件下，缓慢滴加入三颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约150ml冰水中，用稀盐酸溶液调至PH＝6，二氯甲烷提取，饱和NaHCO₃水溶液洗，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。隔夜后，过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5：2)，得橘黄色固体0.6g，收率81％。mp 134～137℃。

MS(ESI)：[M+Na]⁺647.2

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：1.55～1.58(d，3H，CHCH₃，J＝7.14)，2.46，2.47(s，3Heach，OCOCH₃)，3.70(s，3H，OCH₃)，3.86～3.88(m，1H，CHCH₃)，4.41～4.57(m，4H，CH₂CH₂)，6.84～8.42(m，11H，Ar-H)

实施例11：4，5-二乙酰基-蒽醌-2酸-2’-{2”-[2”’-甲基-1”’-(4””-氯苯甲酰基)-5”’-甲氧基-1H-吲哚-3”’]乙酰氧基}乙酯(II-5)的合成

a步：于50ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷30ml，草酰氯0.46ml(5.353mmol)及干燥的DMF3～4滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入吲哚美辛1.3g(3.633mmol)，于室温下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。b步：于100ml两颈瓶中，加入(I-1)0.5g(1.213mmol)，干燥的二氯甲烷50ml及干燥的三乙胺1ml(7.115mmol)。将上步制得的酰氯溶于约20ml干燥的二氯甲烷中，于室温条件下，缓慢滴加入两颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约150ml冰水中，用稀盐酸溶液调至PH＝6，二氯甲烷提取，饱和NaHCO₃水溶液洗，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。隔夜后，过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝7：3)，得橘黄色固体0.71g，收率79％。mp 108～110℃。

MS(ESI)：[M+H]⁺752.14

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：2.37(s，3H，CH₃)，2.46，2.46(s，3Heach，OCOCH₃)，3.70(s，2H，CH2)，3.74(s，3H，OCH₃)，6.49～8.65(m，12H，Ar-H)

实施例12：4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-{2”-(4”’-异丁基苯基)]丙酰氧基}乙氧基乙酯(II-6)的合成

a步：于50ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷25ml，二氯亚砜0.64g(5.378mmol)及干燥的DMF3～4滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入布洛芬0.75g(3.636mmol)，于室温下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。b步：于100ml两颈瓶中，加入(I-2)0.5g(1.096mmol)，干燥的二氯甲烷50ml及干燥的吡啶1ml。将上步制得的酰氯溶于约20ml干燥的二氯甲烷中，于室温条件下，缓慢滴加入两颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约150ml冰水中，用稀盐酸溶液调至PH＝6，二氯甲烷提取，饱和NaHCO₃水溶液洗，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。隔夜后，抽虑，滤液减压蒸馏至干，石油醚洗得到较纯固体。石油醚乙酸乙酯混合溶液重结晶，得淡黄色固体0.57g，收率80.9％。mp 73～75℃。

MS(ESI)：[M+Na]⁺667.3

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：0.87～0.88(d，3Heach，CH(CH₃)₂，)，1.47～1.49(t，3H，CH₂CH₃)，1.81～1.84(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.39～2.41(d，2H，CH₂CH(CH₃)₂)，2.46～2.48(m，3Heach，OCOCH₃)，3.59～3.61，3.65～3.68，4.34～4.37，4.51～4.54(m，9HCH₂CH₂)，7.02～7.03(d，2H，Ar-H)，7.18～7.20(d，2H，Ar-H)，7.42～7.44，7.77～7.79，8.07～8.08，8.24～8.27，8.84～8.84(m，1H each，Ar-H)

实施例13：4，5-二乙酰基-蒽醌-2-酸-2’-{2”-(4”’-异丁基苯基)]丙酰氧基}乙氧基-乙氧基乙酯(II-7)的合成

a步：于50ml茄形瓶中，加入干燥的二氯甲烷25ml，二氯亚砜0.64g(5.378mmol)及干燥的DMF3～4滴，室温下搅拌0.5小时。之后，加入布洛芬0.75g(3.636mmol)，于室温下搅拌反应1小时，然后减压蒸馏去全部溶剂，即制得酰氯。b步：于100ml两颈瓶中，加入(I-3)0.5g(1.000mmol)，干燥的二氯甲烷50ml及干燥的三乙胺1ml(7.115mmol)。将上步制得的酰氯溶于约20ml干燥的二氯甲烷中，于室温条件下，缓慢滴加入两颈瓶中，滴毕，室温搅拌0.5小时，即可。

后处理：将反应液倒入约150ml冰水中，用稀盐酸溶液调至PH＝6，二氯甲烷提取，饱和NaHCO₃水溶液洗，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥。隔夜后，抽虑，滤液减压蒸馏至干，石油醚洗得到较纯固体。石油醚乙酸乙酯混合溶液重结晶，得淡黄色固体0.55g，收率79.9％。mp 46～49℃。

MS(ESI)：[M+Na]⁺711.2

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：0.87～0.89(d，3Heach，CH(CH₃)₂)，1.47～1.49(t，3H，CH₂CH₃)，1.78～1.85(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.41～2.44(d，2H，CH₂CH(CH₃)₂，J＝7.18)，2.45～2.46(m，3Heach，OCOCH₃)，3.57～3.58，3.62～3.64，3.65～3.84，4.22～4.24，4.51～4.54(m，13HCH₂CH₂)，7.05～7.08(d，2H，Ar-H)，7.18～7.21(d，2H，Ar-H)，7.42～7.45，7.77～7.78，8.04～8.05，8.23～8.26，8.83～8.84(m，1Heach，Ar-H)

实施例14：4，5-二羟基-蒽醌-2-酸-2’-[2”-(4”’-异丁基苯基)]丙酰氧基乙酯(III-1)的合成

于50ml茄形瓶中，依次加入(II-1)0.5g(0.832mmol)，丙酮30ml，水2ml，三乙胺3ml。50℃下反应10小时后，蒸去部分溶剂，倒入水中，调PH值至6，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝8：1)，得红色固体0.33g，收率76％。mp85～87℃。

MS(ESI)：[M+H]⁺517.2，[M+Na]⁺539.1

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：0.82～0.84(d，3Heach，CH(CH₃)₂，J＝6.61)，1.50～1.52(d，3H，CHCH₃，J＝7.18)，1.72～1.81(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.35～2.37(d，2H，C_H2CH(CH₃)₂，J＝7.16)，3.71～3.78(q，1H，CHCH₃)，4.42～4.56(m，4H，CH₂CH₂)，7.02～8.37(m，9H，Ar-H)，8.37，8.37(s，1H each，OH)

实施例15：4，5-二羟基-蒽醌-2-酸-2’-(2”-乙酰基苯酰氧基)乙酯(III-2)的合成于50ml茄形瓶中，依次加入(II-2)0.5g(0.870mmol)，丙酮30ml，水2ml，三乙胺3ml。50℃下反应6小时后，蒸去部分溶剂，倒入水中，调PH值至6，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝3：1)，得橘黄色固体0.35g，收率81％。mp 132～135℃。

MS：[M-H]⁺489.1

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：2.35(s，3H，OCOCH₃)，4.64～4.72(m，4H，CH₂CH₂)，7.10～8.45(m，9H，Ar-H)，11.97，12.04(s，1H each，OH)

实施例16：4，5-二羟基-蒽醌-2-酸-2’-{2”-[邻-(2”’，6”’-二氯苯胺)苯]乙酰氧基}乙酯(III-3)的合成

于50ml茄形瓶中，依次加入(II-3)0.5g(0.724mmol)，丙酮30ml，水2ml，三乙胺3ml。50℃下反应5小时后，蒸去部分溶剂，倒入水中，调PH值至6，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5：1)，得橘黄色固体0.34g，收率77％。mp 164～166℃。

MS：[M+H]⁺606.0

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：3.88(s，2H，COCH₂)，4.52～4.63(m，4H，CH₂CH₂)，6.75(br，1H，NH)，6.49～8.37(m，12H，Ar-H)，11.93，11.96(s，1H each，OH)

实施例17：4，5-二羟基-蒽醌-2-酸-2’-[2”-(2”’-甲氧基-6”’-萘基)丙酰氧基]乙酯(III-4)的合成

于50ml茄形瓶中，依次加入(II-4)0.5g(0.801mmol)，丙酮30ml，水2ml，三乙胺3ml。50℃下反应12小时后，蒸去部分溶剂，倒入水中，调PH值至6，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5：1)，得红色固体0.31g，收率72％。mp 122～124℃。

MS：[M-H]⁺539.1

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：1.54～1.57(m，3H，CHCH₃，)，3.67(s，3H，OCH₃)，3.85～3.88(q，IH，CHCH₃)，4.37～4.62(m，4H，CH₂CH₂)，6.74～8.00(m，11H，Ar-H)，11.90，12.00(s，1H each，OH)

实施例18：4，5-二羟基-蒽醌-2-酸-2’-{2”-(4”’-异丁基苯基)]丙酰氧基}乙氧基乙酯(III-5)的合成于50ml茄形瓶中，依次加入(II-6)0.5g(0.776mmol)，丙酮30ml，水2ml，三乙胺3ml。50℃下反应10小时后，蒸去部分溶剂，倒入水中，调PH值至6，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5：1)，得红色固体0.29g，收率66.7％。mp 89～91℃。

MS(ESI)：[M-H]⁺559.3

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：0.87～0.88(d，3Heach，CH(CH₃)₂，)，1.47～1.49(t，3H，CH₂CH₃)，1.81～1.83(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.40～2.43(d，2H，CH₂CH(CH₃)₂)，3.57～3.61，3.65～3.68，4.34～4.36，4.50～4.55(m，9HCH₂CH₂)，7.02～7.04(d，2H，Ar-H)，7.18～7.20(d，2H，Ar-H)，7.44～7.46，7.72～7.75，8.05～8.06，8.24～8.27，8.84～8.85(m，1Heach，Ar-H)，10.12，10.33(s，1H each，OH)

实施例19：4，5-羟基-蒽醌-2-酸-2’-{2”-(4”’-异丁基苯基)]丙酰氧基}乙氧基-乙氧基乙酯(III-6)的合成

于50ml茄形瓶中，依次加入(II-7)0.5g(0.727mmol)，丙酮30ml，水2ml，三乙胺3ml。50℃下反应24小时后，蒸去部分溶剂，倒入水中，调PH值至6，二氯甲烷提取，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5：1)，得红色固体0.30g，收率68.3％。mp 62～65℃。

MS(ESI)：[M+Na]⁺627.1

¹HNMR(300MHz，CDCl₃)，δ_H，ppm：0.87～0.88(d，3Heach，CH(CH₃)₂)，1.48～1.49(t，3H，CH₂CH₃)，1.78～1.85(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.43～2.45(d，2H，CH₂CH(CH₃)₂，J＝7.18)，3.57～3.57，3.62～3.65，3.63～3.80，4.25～4.26，4.51～4.54(m，13HCH₂CH₂)，7.05～7.08(d，2H，Ar-H)，7.20～7.23(d，2H，Ar-H)，7.42～7.44，7.77～7.77，8.04～8.05，8.23～8.26，8.83～8.84(m，1Heach，Ar-H)11.26，11.33(s，1H each，OH)

化合物抗骨关节炎药效学实验

通过大耳白兔半月板切除的方式制备骨关节炎动物模型，以临床上用于治疗骨关节炎的双醋瑞因为阳性对照品，评价新化合物的抗骨关节炎的作用。

方法：

1、新西兰大耳白兔，雌雄兼用，体重2.5～3.5kg，由东南大学动物实验中心提供。分为空白对照组(A)、模型组(B)、阳性对照药组(c)、化合物组(D)。

2、B、C、D组的动物麻醉后仰卧于手术台上，无菌条件下取膝关节内侧纵切口，切断内侧副韧带，显露膝关节，然后切断前后交叉韧带，完整切除内侧半月板，保留关节软骨面。造模成功后，彻底止血，冲洗关节腔，逐层缝合，术后不固定伤肢，自由活动，适当给予青霉素(20万U/kg)预防感染，治疗一周，空白对照组不做任何手术处理。动物手术后7d驱赶动物，每日30min，驱赶动物4周后即得明显的OA模型。

3、模型建立完成，随机分组，按体重以0.02mmol/Kg体重腹腔注射被试化合物，空白对照及模型组仅给予蒸馏水；动物每周称一次体重以调整给药剂量；每日给药一次，连续4周后，抽取静脉血5mL，血液凝固后分离血清，将血清置于-20℃冰箱内保存；处死动物后，迅速打开关节腔，取出关节软骨，称重，用研钵研碎后加入无菌生理盐水制成10％的组织匀浆，放入冰箱冷冻保存。

实验结果

1、肉眼观察：

打开关节腔后见A组关节软骨表面光滑，呈极淡蓝色，B、C组关节软骨表面无光泽，颜色较A组变淡，为淡黄色，表面粗糙，局部菲薄，有骨唇及溃疡形成，C组稍优于B组。D组中II和III类的化合物组软骨光滑度优于C组，I类化合物组的软骨光滑度与C组相当。

2、血清、关节软骨中SOD的含量测定

各血清及关节软骨的SOD含量变化按SOD测试盒说明书方法操作。骨性关节炎时，血清、关节软骨中SOD含量均降低，模型组与正常组相比有显著性差异(P<0.05)。化合物组可显著提高血清、关节软骨中SOD含量。提示在提高骨关节炎兔血清、关节软骨中SOD含量方面，化合物组均优于或相当于双醋瑞因组。具体数据见下表所示。

表1-1

表1-2

表1-3

表1-4